LABORATORIO N 9 PROTEINAS Y ACTIVIDAD ENZIMTICA

Las protenas son biopolmeros, es decir, macromolculas de elevado peso molculas formadas por el encadenamiento de unidades moleculares o monmeros diferentes, llamados aminocidos, cada uno de los cuales (20) presenta caractersticas particulares. Las protenas son las molculas fundamentales en la organizacin celular, no solo por su abundancia, sino tambin por la enorme variedad de funciones que desempean. Las mltiples combinaciones posibles que pueden realizarse con los 20 aminocidos permite la fabricacin de una enorme variedad de estructuras tridimensionales dotadas todas ellas de funciones distintas; de ah el nombre de protenas, alusivo al dios griego Proteo, que tena el don de cambiar de forma.

ACTIVIDAD N 1: RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS. Test de Biuret. La reaccin o prueba de Biuret es un mtodo que detecta la presencia de compuestos con dos o ms enlaces peptdicos y, por tanto, sirve para todas las protenas y pptidos cortos. La reaccin del Biuret es un mtodo que se puede utilizar para determinar la cantidad de protena soluble en una solucin. El reactivo del Biuret (sulfato de cobre en una base fuerte) reacciona con los enlaces del pptido dando un color violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu 2+ y los pares de electrones no compartidos del Nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos. El espectrofotmetro se puede entonces utilizar para medir la intensidad del color que se produjo. Mientras ms cantidad de protena est presente en la solucin, ms oscuro es el color. Este test especfico es para reconocer enlaces peptdicos, por lo tanto requiere de la presencia de al menos un tetrapptido para que de positivo. Los reactivos utilizados son NaOH o KOH y CuSO4x5H2O. Opera a travs del in Cu2+ el que en reaccin alcalina interacciona con los iones de N3- de los grupos amino formando un complejo color violeta. Cada in de Cu 2+ reacciona con dos tomos de N y establece una resonancia de electrones con otros dos N formando un complejo color violeta (Fig. 1).

Figura 1: Formacin de un compuesto color violeta, debido a la formacin de un

complejo entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos.

Materiales Reactivo de Biuret. NaOH 20% Solucin de Albmina. Tubo de ensayo, gradilla y pipetas Pasteur plsticas desechables.

Procedimiento 1. Prepare los siguientes tubos de ensayo. REACTIVO / n tubo 1 1 1 1 2 1 1 1

AGUA DESTILADA (ml) ALBMINA (ml) NaOH 20% (ml) REACTIVO DE BIURET (ml)

2. Agite fuertemente, dibuje y pinte lo observado. 3. Espere 10 minutos, luego de los cuales vuelva a dibujar y pintar. 4. Anota tus observaciones.

Preguntas 1. Cul es el tubo control? 2. Explique porqu no se coloca a bao Mara los tubos de ensayo. 3. Cmo podramos saber que una sustancia desconocida es una protena?

ACTIVIDAD N 2: DESNATURALIZACIN DE PROTEINAS. Las variaciones de pH, temperatura o concentracin salina, pueden destruir los enlaces dbiles (hidrgeno, electrostticos, hidrofbicos y fuerzas de Van der Walls), que determinan las distintas estructuras de las protenas. De esta forma, las protenas pierden su conformacin y caractersticas, y se dice que se desnaturaliza. Materiales Solucin de Albmina. Acido Clorhdrico (HCl) 10%.

Procedimiento. Tubo 1. 2 ml solucin de albmina. Colocar al bao Mara (60oC) observe, dibuje y anote lo que ocurre. Tubo 2. 2 ml solucin de albmina + 12 gotas de HCl 10%.

 Observa, dibuja y anota lo que ocurre.

Preguntas 4. Una protena desnaturalizada podra dar la reaccin del Biuret positiva?. Explique. 5. Si se realiza la reaccin del Biuret sobre una solucin de Arginina es positiva o negativa? Por qu?