AO DE LA CONSOLIDACIN ECONMICA Y SOCIAL DEL PER

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE CIENCIAS DEPARTAMENTO ACADMICO DE CIENCIAS BIOLGICAS

INFORME DE PRCTICA ACCIN DE LOS MICROORGANISMOS SOBRE DISTINTOS COMPUESTOS

Curso

Microbiologa General.

Alumno

Elas Lamadrid Carlo E.

Docente

Blga. Rosa Patricia Glvez Carrillo.

INTRODUCCIN

La identificacin de un aislamiento bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de caractersticas y diferentes criterios en la evaluacin de similitudes. Los ensayos bioqumicos tradicionalmente utilizados, llamadas pruebas bioqumicas convencionales, generalmente determinan la actividad de una va metablica (conjunto de reacciones qumicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no. Existen diferentes sistemas que facilitan la realizacin de tales ensayos, porque proponen el mejor conjunto de pruebas bioqumicas para la identificacin de un grupo bacteriano, porque simplifican la interpretacin de un resultado utilizando un valor numrico, porque proveen los reactivos prontos para su uso o porque son totalmente automatizables. Las pruebas o ensayos bioqumicos, son pruebas simples que se han desarrollado para demostrar en forma clara una determinada caracterstica bioqumica como presencia o ausencia de una determinada actividad enzimtica, grupo de enzimas o determinada va metablica, crecimiento a una determinada temperatura, crecimiento en presencia de inhibidores, etc. No significan de ninguna manera un estudio profundo del metabolismo bacteriano. Los objetivos de la prctica fueron: Interpretar pruebas bioqumicas de uso ms comn en un campo laboral de microbiologa y reconocer las reacciones Octubre de 2010 de los microorganismos o bacterias ante pruebas bioqumicas tales como la hidrlisis de almidn, fermentacin de azcares, prueba de cido sulfhdrico, VRPM, indol, hidrlisis de la rea, catalasa y citrato.

MATERIAL Y MTODOS

Hidrlisis del almidn: Inocule los cultivos en caja de petri con agar-almidn e incube a 30C durante 2 das. Al cabo de este tiempo, cubra las cajas con solucin de lugol. Observe el color que toma el medio. Produccin de cido sulfhdrico: Inocule los cultivo d los microorganismos en caldo nutritivo. Incube los tubos a 37C durante 7 das. Inserta una tira de papel de acetato de plomo en el tubo y examine el ennegrecimiento del papel. Produccin de indol: Inocule los cultivos en tubos con caldo nutritivo. Incube a 37C por 48 horas. Al cabo de este tiempo, aada en los tubos 0.5 ml del reactivo de Kovacs. Mezcle bien por rotacin del tubo entre las manos y examine despus de un minuto. Produccin de ureasa: Incube en los tubos con medio SSR, que contiene urea. Incube a temperatura ambiente y observe los cambios de color durante 7 dias. Produccin de Catalasa: Coloque una azada de crecimiento (clula) de cada uno de los cultivos sobre portaobjetos. Agregue 2 3 gotas de perxido de hidrgeno (H2O2) observe la formacin o no de burbujas. Octubre de 2010

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RESULTADOS

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DISCUSIN

Los polisacridos, como el almidn son demasiados largos para ser transportados al interior de la clula. Los microorganismos excretan amilasas que hidrolizan esos polmeros hasta oligo o monosacridos que pueden usarse como sustratos para crecer. La hidrlisis de almidn es analizada en medios conteniendo almidn en placa. Despus de incubar se inundan las placas con lugol que al unirse con el almidn intacto forma un complejo prpura. Las bacterias anaerobias o anaerbicas facultativas a menudo fermentan carbohidratos a cidos orgnicos y gas (H2 o CO2). Estos pueden detectarse incluyendo en el medio un indicador de pH y una campana Durham. Se pueden ensayar diferentes azcares como sustrato para diferenciar especies sobre todo bacterias entricas. Se inocula la bacteria en un medio conteniendo una pequea cantidad de peptona, un indicador de pH y una fuente de carbono fermentable al 1-2 % y se coloca dentro de los tubos una campana Durham. Muchas bacterias producen sulfuro de hidrgeno a partir de aminocidos azufrados (cistena o metionina) o tiosulfato. La fermentacin de sulfhdrico puede ser detectada incluyendo hierro reducido en el medio para formar un precipitado negro de Fe. Se inocula un medio de agar nutritivo conteniendo tiosulfato metionina y sulfato ferroso. El indeol es uno de los test del IMVIC utilizado para diferenciar enterobacterias. Existen bacterias que producen triptofanasa que convierte el Octubre de 2010 triptfano en indol. La bacteria se crece en medios que contienen triptfano (caldo de triptoma). La presencia de indol se ensaya aadiendo

dimetilaminobenzaldehdo.

La ureasa hidroliza la urea (H2N-CO-NH2) y origina amonio lo que producir un incremento del pH que puede detectarse con un indicador. Las bacterias se inoculan en un medio con glucosa-peptona y urea al 2%. Como indicador de pH se utiliza rojo fenol La catalasa es una enzima que proteje a las clulas frente al perxido de hidrgeno producido en el metabolismo del oxgeno. Cataliza la formacin de agua y oxgeno a partir del perxido de hidrgeno. Es util para distinguir Streptococcus (negativa) de Staphylococcus (positiva) y Clostridium (negativa) de Bacillus (positiva). La actividad catalasa se detecta aadiendo unas gotas de perxido de hidrgeno sobre las colonias en placa que no sea de agar sangre (dara falsos positivos). La produccin de burbujas indica la presencia del enzima. El citrato es uno de los test del IMVIC usado para diferenciar enterobacterias. El crecimiento consume el cido y como consecuencia se produce un incremento de pH en el medio y el indicador tira de verde a azul. El citrato es la nica fuente de carbono y se realiza sembrando la bacteria en la superficie de un agar de Simmon's inclinando el tubo

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CONCLUSIONES

Se demostr que el almidn es hidrolizado por la enzima amilasa. Se estudi algunas bacterias que son capaces de utilizar una serie de carbohidratos con produccin de cidos y gas. Se demostr que el cido sulfhdrico producido por reacciones

catablicas, como la descomposicin de compuestos de azufre orgnico y la reduccin de compuestos orgnicos de azufre, puede ser detectado cuando en el medio se forma una sal de metal pesado. Se observ la presencia de acetil-metil carbinol a partir de glucosa. Se estudi algunos microorganismos que degradan compuestos proteicos hasta el aminocido triptfano, con produccin de indol. Se demostr que algunos microorganismos elaboran la enzima ureasa y que sta hidroliza la rea hasta convertirla en amoniaco.

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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Garca, J y J Picazo. 1996. Microbiologa Mdica: Clnica. Edit. Elsevier Espaa. Lpez, L y C Torres. 2006. Microbiologa General. Universidad Nacional del Nordeste. Disponible en URL. http://www.biologia.edu.ar

Torres, D. 2006. Manual de Prcticas de Laboratorio - Microbiologa General. Universidad Nacional de Piura. Piura - Per.

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