Fisiopatología

de la fecundación
Fecundación y gestación
CONTENIDO
1. Objetivos

2. Factores que intervienen en las alteraciones

de la fecundación

3. Polispermia

4. Fallos en la activación del ovocito

5. Androgénesis, diandria, diginia y ginogénesis

6. Gemelos dicigóticos y monocigóticos

7. Híbridos interespecíficos e intraespecíficos

8. Quimeras

9. Bibliografía

Objetivos
• Conocer las diferentes alteraciones que se producen
durante la fecundación y si existen soluciones.
• Determinar las consecuencias de una fecundación
anómala en las diferentes especies de mamíferos.
Factores que intervienen
en las alteraciones de la
fecundación
A lo largo de las diferentes etapas del proceso de
fecundación es necesario la interacción entre distintas
moléculas, en especial proteínas o glicoproteínas,
presentes en el ovocito y espermatozoide. Algunas de
estas moléculas tienen un papel clave en la unión a la
zona pelúcida, la fusión de las membranas, la activación
del ovocito o la descondensación de la cromatina
espermática, por lo que la ausencia o mutación de dichas
moléculas puede causar desde un fallo o alteración en la
fecundación hasta impedir que el ovocito sea fecundado
y se forme el futuro embrión.
Procesos como la criopreservación espermática,
además de reducir la vida media y calidad de los
espermatozoides, pueden producir la pérdida de
proteínas espermáticas con un papel esencial en
la capacitación y fecundación, e incluso provocar
cambios en la distribución de ciertas proteínas con
la consiguiente pérdida de su función biológica (1).
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En otros casos, la ausencia o mutación de determinadas
proteínas tanto en el ovocito como en el espermatozoide
puede ser de origen congénito o deberse a la presencia
de ciertas sustancias en el organismo del animal que
generen citotoxicidad en los gametos.
Por otro lado, es importante que la integridad tanto de
la cromatina del espermatozoide como del ovocito
se mantenga hasta la fecundación, ya que cualquier
alteración puede conllevar desde alteraciones genéticas
como epigenéticas en el embrión o incluso impedir la
correcta descondensación de las cromatinas, la cual es
necesaria para la formación de los pronúcleos.
En relación con los pronúcleos femenino y masculino, su
formación debe ocurrir de manera casi paralela para que
pueda producirse su fusión en el tiempo óptimo, ya que
cualquier asincronía puede provocar la degeneración del
primer pronúcleo formado. Los fallos en la activación del
ovocito, ya sea por inactivación o activación prematura,
suelen ser los principales responsables de dicho fracaso
reproductivo, puesto que es necesario que se reanude la
meiosis II y el ovocito salga de la metafase II para que
se produzca la formación del pronúcleo femenino y la
descondensación de la cromatina espermática.
Errores en la meiosis ovocitaria o en las divisiones
mitóticas del embrión también pueden producir
alteraciones cromosómicas que afectarán al embrión
(aneuploidias) o darán lugar a abortos espontáneos e
incluso malformaciones (2).

Para evitar que se produzca la extinción de cualquier
especie o subespecie, existen distintos mecanismos en
el ovocito que solo permiten la unión del espermatozoide
y el ovocito de la misma especie o subespecie. Un
ejemplo es el distinto patrón de glicosilación que
poseen las glicoproteínas de la zona pelúcida del
ovocito, lo que crea una marca de identidad que solo
es reconocida por los espermatozoides de la misma
especie. No obstante, a lo largo de este tema se verá
cómo estos mecanismos son sorteados en algunas
especies y las consecuencias de ello.
También existen otros mecanismos que impiden que
más de un espermatozoide fecunde al mismo ovocito
evitando así la formación de un embrión con una dotación
cromosómica anómala como se verá a continuación.
Polispermia
La polispermia ocurre cuando varios espermatozoides
penetran un mismo ovocito durante el proceso de
fecundación. El resultado es la formación de un embrión
triploide o incluso tetraploide, es decir, con dotación
cromosómica 3n o 4n en vez de 2n (diploide) por la
fusión de dos pronúcleos masculinos con el pronúcleo
femenino. La mayoría de los embriones triploides/
tetraploides mueren durante la embriogénesis temprana
ocasionando un aborto espontáneo. Si la gestación
continua, se produce un sobrecrecimiento de la placenta
con numerosos quistes y se compromete el desarrollo
fetal, llevando a la muerte del mismo, siendo necesario
realizar una intervención quirúrgica para la extracción
de dicho material y así evitar posibles infecciones en la
hembra (3). En otras ocasiones la gestación puede llegar
a término dando lugar a malformaciones en la cría.
Normalmente, el porcentaje de polispermia es bajo en la
mayoría de los mamíferos cuando la fecundación ocurre
de manera fisiológica, aumentando considerablemente
durante la fecundación in vitro (FIV). El motivo de estas
diferencias se debe a que en la fecundación in vivo
existen más mecanismos que previenen la polispermia.
En condiciones fisiológicas, tras su depósito, los
espermatozoides deben recorrer el aparato reproductor
femenino para llegar al oviducto, pero no todos lo logran
gracias a que las distintas partes del tracto reproductor
femenino actúan como barreras selectivas, permitiendo
que un número reducido de espermatozoides viables
y capacitados contacte con el ovocito. Este primer
mecanismo que previene la polispermia no está
presente en condiciones in vitro, por lo que a la hora de
realizar la FIV es importante emplear una concentración
de espermatozoides adecuada para cada especie, ya
que, además de esto, todos los espermatozoide se
capacitan a la vez, lo que aumenta las probabilidades de
polispermia.
Fisiopatología de la fecundación | 4
Por otra parte, cuando se realizan inseminaciones,
dependiendo de la parte del aparato reproductor
donde se depositen los espermatozoides se eludirán
una o más barreras de selección, pudiendo llegar
más espermatozoides al lugar de fecundación,
lo que promueve la polispermia. Por tanto, es
importante optimizar la concentración espermática
en las inseminaciones, teniendo en cuenta el lugar
de depósito y de si se va a utilizar semen fresco,
refrigerado o congelado. Además, en conejos se ha
visto que la administración de progesterona en la
hembra junto con inseminaciones tardías aumenta la
polispermia (4). En general, la monta o inseminación
tardía tras la ovulación, así como la presencia de una
alta concentración de espermatozoides en el lugar de
fecundación aumenta las posibilidades de polispermia
en casi todos los mamíferos.
Una vez que contactan con el ovocito, este posee
uno o dos mecanismos para bloquear la polispermia
dependiendo de la especie, estos son la reacción cortical
y el bloqueo de membrana. Tal y como se ha visto, la
reacción cortical impide que tras penetrar el primer
espermatozoide otros puedan atravesar la zona pelúcida
al producirse la degradación de los receptores de unión
espermática (las glicoproteínas) y endurecerse dicha
membrana (zona hardening). Para que se produzca
esta reacción es necesario la activación del ovocito
y el aumento de la concentración citosólica de Ca2+
gracias a la liberación de factores espermáticos como
la fosfolipasa c zeta (PLCζ), por lo que la ausencia de
esta proteína en los espermatozoides aumentará la
incidencia de polispermia al no desencadenarse la
reacción cortical. Esta reacción ocurre en ovejas, cabras,
caballos y perros.
En otras especies, como los conejos y murciélagos,
se produce el bloqueo de la membrana del ovocito, de
manera que tras penetrar el primer espermatozoide,
el resto de espermatozoides que atraviesan la zona
pelúcida quedan retenidos en el espacio perivitelino.
En el caso de los gatos, cerdos, vacuno, hurones,
humanos y roedores ocurren ambos mecanismos, ya
que se ha visto que algunos espermatozoides logran
penetrar la zona pelúcida, quedando bloqueados en
el espacio perivitelino gracias al segundo bloqueo,
el de membrana (3). El momento en el que se reduce
la receptividad de la membrana del ovocito hacia los
espermatozoides varía un poco según la especie,
aunque en términos generales, comienza a ser evidente
tras los 40 minutos de la monta o inseminación,
momento en el que se ha observado una disminución
progresiva de la penetración espermática. Además,
suele ocurrir de manera casi paralela a la reacción
cortical. El bloqueo de la membrana se debe a la
reorganización de las microvellosidades de esta y a la
pérdida de proteínas de la membrana implicadas en la
unión con el espermatozoide como CD9 y JUNO.

Con el envejecimiento o aumento de la edad del ovocito
(aged oocytes) la incidencia de la polispermia aumenta.
Esto se debe a que el mecanismo de exocitosis de
los gránulos corticales, es decir, la reacción cortical,
se ve afectada con el envejecimiento del ovocito,
probablemente por la reducción de la actividad
enzimática de las enzimas que se liberan y actúan
sobre la zona pelúcida (4). Por otro lado, gracias a la
microscopía de luz polarizada se ha detectado que si la
zona pelúcida presenta una estructura anómala aumenta
la probabilidad de polispermia.
Aunque la polispermia suele ser baja en la mayoría de los
mamíferos existen especies en las que la polispermia
es más frecuente, como en los cerdos y jabalíes (10
% en condiciones in vivo, hasta 65 % en condiciones
in vitro). En esta especie (sus scrofa), se cree que el
porcentaje de polispermia es mayor in vitro debido al
retraso en la reacción cortical o a que la liberación del
contenido de los gránulos corticales es incompleta. La
adición de fluido oviductal o de células epiteliales del
oviducto al medio de FIV se ha propuesto como solución
para reducir dicho problema gracias a la presencia de
moléculas que interaccionan con el ovocito facilitando
la sincronía de la reacción cortical, así como con el
espermatozoide lo que regula su motilidad.
Fallos en la activación
del ovocito
La activación del ovocito es un paso esencial en la
fecundación ya que permite:
1. Que se produzca la reacción cortical y el bloqueo de
la polispermia.
2. La reorganización del citoplasma, de sus orgánulos
y del citoesqueleto.
3. Cambios de ARN, síntesis y modificaciones post
traduccionales de proteínas maternas necesarias
para la fecundación o para el embrión.
4. Reanudación y finalización de la meiosis II.
Estos cambios en el ovocito permitirán la formación del
pronúcleo femenino, la degradación de las estructuras
espermáticas no necesarias para el proceso de
fecundación (el flagelo y las mitocondrias) y los cambios
en el núcleo espermático (rotura de la envoltura nuclear,
descondensación de la cromatina espermática y
formación del pronúcleo masculino).
Fisiopatología de la fecundación | 5
Los fallos en la activación del ovocito pueden deberse
a una activación prematura, un retraso en la activación,
una activación incompleta o a una falta de activación del
ovocito, lo que puede conllevar desde la incapacidad de
formación de uno o dos pronúcleos con el consiguiente
bloqueo de la fecundación hasta la asincronía en la
formación de los pronúcleos o polispermia cuyas
consecuencias serán visibles sobre el embrión en forma
de aneuploidías o dotaciones cromosómicas anómalas
que pueden terminar con la vida del mismo (5).
Tal y como se ha visto, la liberación de ciertas proteínas
espermáticas, como la fosfolipasa C zeta (PLCζ), en
el citoplasma del ovocito aumenta la concentración
citosólica de Ca2+ lo que produce la activación del
ovocito. Por tanto, los menores niveles o la ausencia
o mutación de esta proteína en el espermatozoide
reducen considerablemente la fertilidad a la vez que
aumentan la polispermia al producir una activación
incompleta del ovocito. Cabe recalcar que diferentes
estudios han demostrado que estos espermatozoides
no son completamente infértiles, lo que sugiere la
existencia de otros mecanismos no conocidos para
asegurar el éxito reproductivo, concretamente la
participación de otras proteínas espermáticas que
promueven el aumento de calcio (6).
La inmadurez del ovocito puede provocar desde una
activación incompleta a una falta de activación del ovocito
por no presentar la maquinaria molecular necesaria para
este proceso, mientras que el envejecimiento del ovocito
conlleva a un retraso en la activación debido a la menor
funcionalidad del mismo y a sufrir cierta degradación
algunos de sus componentes.
Gracias a las biotecnologías reproductivas se puede
conseguir la activación in vitro de los ovocitos, siendo
de especial utilidad para aquellos animales de gran
interés económico, así como para el ser humano. Entre
los activadores artificiales del ovocito destacan los
ionoforos de Ca2+ como la calcimicina e ionomicina.
Se trata de agentes químicos que aumentan la
permeabilidad de la membrana plasmática del ovocito
al Ca2+. No obstante, las oscilaciones de calcio que
se generan con estos agentes son diferente a las
oscilaciones que ocurren en condiciones fisiológicas.
Además, algunos de estos agentes pueden provocar
alteraciones cromosómicas en el embrión o
malformaciones congénitas en los fetos (6). Por este
motivo, otra opción para activar al ovocito y conseguir
un efecto similar a lo que ocurriría in vivo consiste en
una microinyección con una PLCζ recombinante.
En los casos en los que el problema de la activación del
ovocito no se deba a una alteración en la fosfolipaca C del
espermatozoide sino a una incapacidad del mismo para
atravesar el resto de las capas más exteriores (células
del cúmulus, zona pelúcida y membrana plasmática del
ovocito) por sufrir daño en la membrana plasmática o
en el acrosoma, la inyección intracitoplasmática de
espermatozoides o ICSI es la opción más factible para
obtener embriones (7).

Androgénesis, diandria,
diginia y ginogénesis
La formación de los dos pronúcleos, uno masculino y
otro femenino, y su fusión es esencial para la formación
del nuevo individuo. Para evitar que se produzcan
errores en la embriogénesis estos pronúcleos deben ser
siempre haploides, es decir, contener solo un conjunto
de cromosomas (n). La unión de ambos pronúcleos
y el consiguiente intercambio de material genético y
epigenético materno y paterno da lugar a la formación
de una célula diploide denominada cigoto. Se trata de
una célula con un solo núcleo que contiene dos juegos
de cromosomas (2n), uno de cada progenitor.
Sin embargo, hay circunstancias en las que o uno de los
pronúcleos desaparece o se produce una alteración en
la dotación cromosómica de alguno de ellos, lo que se
conoce como aneuploidía. A su vez, las aneuploidías de
los gametos pueden ser transferidas al nuevo individuo
durante la fecundación teniendo consecuencias graves.
En la androgénesis se degrada el pronúcleo femenino
tras la fecundación y se desarrolla un cigoto con
cromosomas exclusivamente paternos. En la
ginogénesis, el ovocito es activado gracias a la
presencia de los espermatozoides, pero tras la
fecundación se degrada o inactiva el pronúcleo
masculino desarrollándose un cigoto con cromosomas
exclusivamente maternos. En ambos casos el cigoto
formado será haploide y los cromosomas derivarán de
un solo progenitor.
Fisiopatología de la fecundación | 6
Por su parte, la diandria ocurre cuando dos
espermatozoides fecundan al ovocito o un
espermatozoide diploide fecunda a un ovocito haploide
(este segundo caso es muy raro). La diginia ocurre
cuando un espermatozoide haploide fecunda a un
ovocito diploide. La diploidia anómala del ovocito se
debe a que el segundo corpúsculo polar se incorpora en
el núcleo del ovocito, formándose un pronúcleo 2n. Tanto
la diandria como la diginia dan lugar a un cigoto triploide.
A excepción del ser humano, estas anomalías
cromosómicas son poco frecuentes en los animales y en
caso de aparecer suelen acabar en abortos espontáneos
durante el desarrollo embrionario temprano en la
mayoría de los casos, aunque pueden acabar también
provocando malformaciones congénitas en el feto si la
gestación continua lo que llevará a su muerte (8).
Gemelos dicigóticos
y monocigóticos
Los gemelos dicigóticos se forman a partir de la
fecundación de dos ovocitos distintos en una misma
gestación, por lo que se trata de crías genéticamente
distintas. Los gemelos monocigóticos son aquellos
individuos que comparten el mismo material genético
(crías genéticamente idénticas). Son el resultado de
la fecundación de un único ovocito que se escinde en
dos embriones.

En condiciones fisiológicas, la producción de gemelos
monocigóticos es poco frecuente en la mayoría
de animales mamíferos domésticos. No obstante,
se han reportado algunos casos en vacas, cerdas,
ovejas, yeguas, perras, ballenas, conejas, roedores y
chimpancés. Con la producción in vitro de embriones
y su posterior transferencia, el porcentaje de gemelos
monocigóticos en rumiantes, caballos y roedores ha
aumentado considerablemente.
La generación artificial de gemelos monocigóticos
permite mejorar los programas de recría al brindar la
oportunidad de obtener más progenie con un genotipo
y/o fenotipo deseado y también permite estudiar
mejor los cambios moleculares que ocurren en la
embriogénesis. En ratones y ratas la generación de
gemelos monocigóticos in vitro constituye un método
más rentable para producir más rápidamente cepas de
ratón idénticas en las que poder llevar a cabo diferentes
ensayos de laboratorio, reduciendo así la intervariabilidad
(9). Desgraciadamente en condiciones fisiológicas la
tasa de supervivencia de ambos embriones suele ser baja
produciéndose la pérdida de uno o los dos embriones
durante la embriogénesis (aborto espontáneo) o la
muerte y momificación de un feto e incluso en algunas
ocasiones de ambos. Estas tasas pueden variar según la
especie, siendo mayores en los caballos y cerdos (10).
Por otro lado, la producción de gemelos dicigóticos es
más frecuente y en algunos casos pueden proceder
de diferentes padres si ambos ovocitos han sido
fecundados por espermatozoides pertenecientes a
distintos machos (fecundación hetero-paternal) tal y
como ocurre con los chimpancés y lémures. En el vacuno
y los équidos, especies que suelen tener solo una cría, ha
ido aumentando la tasa de gemelos dicigóticos debido
a la mayor frecuencia de ovulación múltiple por los
programas de sincronización de celo y por el aumento de
las transferencias de embriones. Sin embargo, el parto
gemelar en vacas lecheras y en yeguas no es deseable
debido a los efectos negativos que produce tanto en las
madres (distocias o desordenes metabólicos) como
sobre los recién nacidos (peso reducido o muerte
neonatal) lo que provoca grandes pérdidas económicas.
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Híbridos interespecíficos
e intraespecíficos
La hibridación intraespecífica e interespecífica en
animales ocurre cuando se aparean individuos de
distinto sexo pertenecientes a diferentes subespecies
o especies de la misma familia, respectivamente (ej.,
cérvidos, bóvidos). En los mamíferos, la hibridación
frecuentemente se produce entre la especie doméstica y
sus parientes silvestres (ej., cerdos y jabalíes).
La hibridación ofrece la ventaja de aumentar la
variabilidad genética, lo que resulta en cambios
genotípicos y fenotípicos y la consiguiente aparición de
nuevas especies o subespecies (11). En la ganadería
suele emplearse para mejorar los parámetros productivos
y reproductivos de los animales.
Sin embargo, también puede provocar la extinción
de especies o subespecies existentes (pérdida de
biodiversidad) al ser sustituidas por híbridos más
prolíficos o conducir a una mutación genética en
la descendencia híbrida que puede tener graves
consecuencias como la fertilidad reducida o esterilidad
(12). Un ejemplo de híbridos frecuentemente estériles
son las mulas, obtenidas del cruzamiento de una yegua
con un burro. La esterilidad puede ocurrir debido a una
incompatibilidad genética por diferencias genéticas y/o
en el número de cromosomas. En el primer caso puede
afectar al desarrollo de testículos u ovarios.
La disminución de poblaciones por deforestación o
caza, el aislamiento demográfico de algunas especies
y la expansión de otras conlleva a la proximidad entre
especies y subespecies al compartir casi los mismos
hábitats y promueve la hibridación (12).
Quimeras
La quimera se define típicamente como un individuo
compuesto por una mezcla de diferentes poblaciones
de células que derivan de más de un cigoto. Se suelen
generar durante las primeras etapas de la embriogénesis
al combinar los blastómeros aislados de un mínimo
de dos embriones, agregando dos o más embriones
seccionados o inyectando células madre embrionarias
en un blastocisto.

Las quimeras son distintas de los híbridos (descendencia
resultante de la reproducción entre diferentes especies)
y de los mosaicos (animales que portan células
genéticamente diferentes, pero se originaron en un
mismo cigoto). Se pueden clasificar como intraespecies
o interespecies, dependiendo de si los derivados
celulares de los dos cigotos son de la misma especie o
de especies diferentes.
La producción de quimeras interespecies requiere unas
especies donantes y una especie huésped. Las especies
donantes proporcionan las células de origen embrionario.
La especie huésped proporciona el entorno fisiológico
y el soporte vital para el desarrollo de los animales
quiméricos embrionarios. La creación de quimeras en el
laboratorio ha sido fundamental para los avances en el
campo de las células madre, al proporcionar un método
más fiable con el que evaluar la pluripotencia de nuevos
tipos de células madre (13). Además, la producción de
quimeras permite estudiar la organogénesis, generar
órganos humanos para trasplantes en ganado (ej., en
el cerdo) y desarrollar terapias contra enfermedades en
un solo tejido o región. En la investigación con células
madre, la generación de una quimera interespecies a
menudo implica el trasplante de células madre multi- o
pluripotentes (PS) del donante a un receptor animal en
etapas embrionarias, fetales o posnatales de desarrollo.
En los últimos años, varios informes han demostrado que,
tras la manipulación genética del huésped, es posible
generar tejidos y órganos completos casi derivados
enteramente de las células del donante.
Por otro lado, no siempre es posible crear quimeras al
combinar células embrionarias de diferentes especies
debido a la existencia de barreras interespecie como
las incompatibilidades materno-embrionarias por
falta de receptores o señales específicas de especie
lo que impide un correcto reconocimiento del embrión
quimérico y su implantación.
Pese a los avances en la generación de quimeras en
laboratorio, aún quedan muchas cuestiones que resolver
como las diferencias en la duración de la gestación
entre humanos y otras especies; si las células, tejidos y
órganos humanos xenogenerados serían funcionalmente
compatibles con la fisiología humana; y si es posible
generar células humanas que puedan competir por igual
con las células huésped.
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