Regulación genética

Código: MBIO2102-1
Departamento de Ciencias Biológicas
 Términos
• Policistrónico
• Inducible - no inducible – constitutivo
• Reprimible
• Elementos de DNA cis y trans
• Gen regulador
• Promotor, operador
• Regulación negativa, positiva
• Represor, activador (proteínas)
• Inductor, corepresor (en gral, otras moléculas)
• Genes estructurales
• Transcripción basal
Expresión genética diferencial
 Expresión genética: gen de la
tirosín-aminotransferasa

La tirosina aminotransferasa tiene niveles de expresión

diferente en los tipos de tejidos evaluados.

Es decir que los genes pueden variar su nivel de expresión.

 Expresión genética: gen de la
actina

La actina tiene niveles de expresión (transcripción)

similar en todos los tipos de tejidos
Por qué no es uniforme en toda la secuencia?
 Regulación genética
• Los genes se expresan de manera diferente:
tiempo, condición o tejido
• El control de la expresión genética es
fundamental para cualquier célula
• La célula toma decisiones a cada instante
Regulación genética:
decisiones
Regulación genética

Alberts. Essential cell biology 2014

 Regulación genética
• Las decisiones se toman por señales del medio
• Los genes son controlados por señales extracelulares
• Esto resulta en la unión de proteínas a regiones
controladoras de la expresión de un gen
– Reguladores positivos o Activadores
– Reguladores negativos o Represores
 Regulación genética
• En procariotas la mayoría de
activadores y represores
actúan controlando la
transcripción

• ¿De qué está hecho un

activador y un represor?

• En procariotas ¿Un activador

y/o un represor para cada
gen?
 Regulación genética
Proteínas de unión al ADN

Principalmente por
interacciones
secuencia-específicas

Interacción puede bloquear o promover la transcripción

https://en.wikipedia.org/wiki/DNA-binding_protein
 Regulación genética
o Células necesitan responder rápidamente a
cambios en el ambiente
• Si tienen suficiente de un producto, necesitan
detener la producción del mismo
• Porqué? Es un gasto de energía producir más.
• Cómo? Deteniendo la producción de enzimas para la
síntesis.
• Si encuentran una nueva fuente de
energía/comida, necesitarán usarla rápidamente
• Porqué? Metabolismo, crecimiento y reproducción.
• Cómo? Iniciando la producción de enzimas para la
digestión
Regulación genética: Operones
• Operón: Segmento continuo de DNA que codifica
para varias secuencias de proteínas- regulado por un
solo promotor

• Los operones producen mRNAs policistrónicos

 Operón lac
• El operón lac se puede
prender o apagar
• Esto depende de los
azucares disponibles en
el medio en E. coli
• Si tiene ambos (glucosa
y lactosa) primero usa
glucosa (mono) y luego
usa lactosa (di)
• Modelo del operón lac
también conocido como
el modelo Jacob-Monod
 Operón lac
• E. coli tiene preferencia por la glucosa como fuente de
energía
• Si no hay glucosa, entonces puede metabolizar lactosa,
arabinosa, galactosa y maltosa

• ¿E. coli necesita estar produciendo constantemente

beta-galactosidasa (LacZ)?
 Operón lac: Regulacion
negativa
• Operón lac codifica tres enzimas requeridas para
el metabolismo de lactosa: LacZ, LacY y LacA
• El operón lac está regulado por un represor:
Regulación negativa

doi:10/1038nrg1087
 Operón lac: Regulacion
negativa
• Operón lac codifica tres enzimas requeridas para
el metabolismo de lactosa: LacZ, LacY y LacA
• El operón lac está regulado por un represor:
Regulación negativa
Nearpod
 Operón lac
• Para la transcripción del operón lac se
requiere la interacción entre:
– Sitios reguladores en el DNA (corriente arriba de
secuencias codificante para enzimas LacZ, LacY y LacA).
– Proteínas activadoras.
– Proteínas represoras.
– RNA polimerasa+ sigma (70).
 Regiones reguladoras en operón lac

• la región CAP está corriente arriba del promotor

• Promotor
• La región operadora está corriente abajo del
promotor
• Todo esto está corriente arriba de los genes a
controlar
 Proteínas regulatorias en Operón lac

Represor lac (Ejemplo de regulación negativa)

Proteína activadora del catabolito - CAP

Veamos cada aspecto de forma independiente…

 Operón lac – lacI (LacI= represor)
lacI: gen LacI: proteína

• LacI se produce constitutivamente (en bajo nivel)

• El gen lacI tiene su propio promotor
• Está corriente arriba del operón lac
• LacI es el represor del operón lac
 Operón lac: LacI

David Swigon et al. PNAS 2006;103:9879-9884

Estructura del represor LacI unido a dos

regiones del DNA: región operadora O1 y O3
 Operón lac: LacI

NO LACTOSA

LacI (represor) se une a lacO (Operador) bloqueando la

transcripción del operón lac
Operón lac: Represor vs. Inductor
Inducir que??

NO LACTOSA

• ¿Quién produce la alolactosa (Inductor)? LacZ (expresion

basal)
Operon lac: Inductor (Alolactosa)
Operón lac: Inductor (Alolactosa)

Genes

Proteínas
Resumen represor lacI - LacI
Alolactosa es un inductor, que
interactúa con el represor

Sencillo, no??
.
.
.
Pues no!
Hay más factores
implicados
Operón lac (por qué no puede ser simple y ya??)
• La alolactosa se une al represor (LacI) y modifica su
estructura permitiendo la transcripción por la RNA pol.
• Sin embargo las tasas de transcripción son bajas
cuando hay presencia de lactosa y de glucosa.
• ¿Porqué son bajas? ¿a quién necesita para aumentar la
transcripción?
 Operón lac - Activador
Baja afinidad de la RNA polimerasa por su promotor

Activador ayuda a fijar más eficientemente a

la RNA polimerasa con su promotor
 Operón lac: CAP
• CAP (Catabolite Activating Protein) se une al sitio CAP
y recluta más eficientemente la RNA polimerasa.
• CAP es un activador transcripcional!!
• La sola presencia de CAP no es suficiente para
favorecer la transcripción.
• Para que CAP se una a su sitio requiere cAMP.
 Operón lac: CAP-cAMP
Glucose

cAMP permite la unión de CAP al DNA

Es una señal de “hambre”
• CAP depende de cAMP para su correcta unión al
DNA (sitio CAP)
• La glucosa bloquea la enzima adenilato-ciclasa.
• Adenilato-ciclasa produce cAMP a partir de ATP.
• Alta glucosaè bajo cAMP y viceversa
 Operón lac: CAP
• La ausencia de glucosa permite el aumento de los niveles
de cAMP.
• El cAMP modifica estructuralmente a CAP (catabolic
activating protein) permitiendo su unión al sitio CAP (DNA).
• CAP aumenta la afinidad de la RNA pol y conlleva al
aumento en la tasa de transcripción.

Recordar concentración
glucosa vs. cAMP
Resumen activación por CAP

Ahora sí veamos
todo junto…
Operón lac
 Efecto de las diferentes mutaciones es
lógico, de acuerdo con su papel

Is Superrepressor. Constantly bound to Operator

Aconsejo no aprendérselo de memoria, sino por lógica (por lo que cada componente
hace para funcionamiento del operon)
 Efecto de las diferentes mutaciones es
lógico, de acuerdo con su papel

Is Superrepressor. Constantly bound to Operator

 Ahora usando merodiploides
• Artificial… hacer diploides en bacteria pero solo de un
pedacito del genoma (en este caso, del operon lac)
• Para qué? Para ver cómo actúan. Esto sirvió para descubrir el
papel de todos los componentes hace algunos años
 Aplicaciones biotecnológicas
• La lactosa es un inductor pero también un
sustrato
– Inductor: alolactosa
– Sustrato: lactosa

• En biología molecular se pueden sintetizar

moléculas que funcionan como SOLO
inductores o SOLO sustrato
– IPTG: inductor pero no sustrato
– X-gal: sustrato pero no inductor
 LacO actúa en cis

Operador actúa en “cis”: Si yo lo pongo lejos, (no

justo al lado del operon), no funciona
 LacI actúa en trans

Lac I actúa en “trans”: Póngalo donde lo ponga, mientras

esté en la misma célula, funcionará
Cis vs trans: usando merodiploides

Operador actúa en “cis”: Si yo lo pongo lejos, (no justo al lado del

operon), no funciona

Lac I actúa en “trans”: Póngalo donde lo ponga, mientras esté en la

misma célula, funcionará
Efecto de las diferentes mutaciones y su lógica

Mutación en el LacO

Expresión inducible del

operon lac

Expresión constitutiva del operon

lac

http://www.discoveryandinnovation.com/BIOL202/notes/lecture17.html
Efecto de las diferentes mutaciones y su lógica

Mutación en el LacO

Dos copias del operon lac

(las dos son wt o silvestres)

http://www.discoveryandinnovation.com/BIOL202/notes/lecture17.html
Efecto de las diferentes mutaciones y su lógica

Z-

Mutación en el LacO

Y-
O+

Dos copias del operon lac

(Una con Z+ y otra Z-)

Dos copias del operon lac

(una silvestre otra mutante)

Operador actúa en “cis”: Si yo lo pongo lejos, (no

justo al lado del operon), no funciona
http://www.discoveryandinnovation.com/BIOL202/notes/lecture17.html
Efecto de las diferentes mutaciones y su lógica

Mutacion en LacI

I- O+

Dos copias del operon lac

(una silvestre otra mutante)

Lac I actúa en “trans”: Póngalo donde lo ponga,

mientras esté en la misma célula, funcionará
http://www.discoveryandinnovation.com/BIOL202/notes/lecture17.html
Efecto de las diferentes mutaciones y su lógica
I- Z-

Mutacion en LacI

Y-

Dos copias del operon lac

(una silvestre otra mutante)

Lac I actúa en “trans”: Póngalo donde lo ponga,

mientras esté en la misma célula, funcionará
http://www.discoveryandinnovation.com/BIOL202/notes/lecture17.html
• Operador actúa en “cis”: Si yo lo pongo lejos,
(no justo al lado del operon), no funciona
• LacI actúa en “trans”: Póngalo donde lo
ponga, mientras esté en la misma célula,
funcionará
 Operón lac

https://www.youtube.com/watch?v=HbDpKdaGMjQ
Y una simuacion más cercana a lo que pasa en la vida real:
https://phet.colorado.edu/en/simulations/gene-machine-lac-
operon
Ver estas animaciones para repasar
https://www.life.illinois.edu/mcb/150/private/le
ctures/lac_operon.html

Explican todo operon lac, hay preguntas de

práctica y además explican después el por qué.
Solo funciona con flash player L
Operón trp: Regulación positiva
Operón trp: Regulación positiva
 Regulación de la transcripción
operón trp

• Síntesis de trp de novo en la bacteria

• Importación de trp del medio
Regulación ocurre en dos puntos:
- Impidiendo que se inicie la transcripción:
Sistema On-Off por represor
- Impidiendo que se complete la transcripción: Atenuación
 Regulación de la transcripción
operón trp (por represor)

Operador se sobrelapa con el Promotor!

Regulación de la transcripción
operón trp (por represor)

https://www.khanacademy.org/science/biology/gene-regulation/gene-regulation-in-bacteria/a/the-trp-operon
 Regulación de la transcripción
operón trp (por represor)

https://www.labxchange.org/library/items/lb:LabXchange:
6d81ca25:lx_simulation:1
 Regulación de la transcripción
operón trp (por represor)

• Existe un cambio conformacional del represor al unirse a

triptófano….. Se une al operador e inhibe transcripción
• Pero la célula también debe medir los tRNA-Trp
Regulación de la transcripción
operón trp (Atenuación)
- .
Regulación de la transcripción
operón trp
Dos mecanismos de control:

• Típico control negativo tipo lacI

• Atenuación de mRNA
(Regulación impide que se complete
la transcripción)

Segundo nivel de control del

operón
 Regulación de la transcripción
operón trp (Atenuación)
- Para que este operón se regule por atenuación es importante
tener en cuenta:
- (1) RNA tiene estructuras secundarias que pueden
cambiar.
 Regulación de la transcripción
operón trp (Atenuación)
- Para que este operón se regule por atenuación es importante
tener en cuenta:
- (1) RNA tiene estructuras secundarias que pueden
cambiar.

Es el mismo mRNA!!
 Regulación de la transcripción
operón trp (Atenuación)
- Para que este operón se regule por atenuación es importante
tener en cuenta:
- (2) Transcripción y traducción pueden ocurrir de
forma simultánea en procariotas.
 Regulación de la transcripción
operón trp (Atenuación)
- Analicemos el operón trp en detalle…
 Regulación de la transcripción
operón trp (Atenuación)
Por qué? Un caso en el cual la transcripción se influencia por la
traducción que va detrás
Regulación de la transcripción
operón trp (Atenuación)
Señal de
terminación

Señal de anti-
terminación
 Regulación de la transcripción
operón trp (Atenuación)

Velocidad del ribosoma (Traduccion) favorece cambio de

conformación estructural del mRNA:
Formación de señales de terminación y anti-terminación de la
transcripción
 Regulación de la transcripción
operón trp (Atenuación)
Mucho Poco
triptofano triptofano

Ribosoma Ribosoma
rápido lento

Señal de Señal Anti-

Terminación terminación

Se detiene la Transcripción
transcripción continua

Velocidad del ribosoma favorece cambio de conformación

estructural del mRNA:
Formación de señales de terminación y anti-terminación
 Por qué al haber mucho tRNA-Trp se
para la transcripción???
Mucho Poco
triptofano triptofano

Ribosoma Ribosoma
rápido lento

Señal de Señal Anti-

Terminación terminación

Se detiene la Transcripción
transcripción continua

Sí Trp (Sí tRNA-Trp) No Trp (No tRNA-Trp)

Lewin. Genes XI. 2013

Regulación de la transcripción
operón trp
Dos mecanismos de control:

• Típico control negativo tipo lacI

• Atenuación de mRNA
 Videos atenuación
• Sencillo:
• https://www.youtube.com/watch?v=YAr18UR
2dos

• Más detallado (explica 2-3 y 3-4 bien, hacia el

final)
https://www.youtube.com/watch?v=CeE83RyQF
Ro
Los circuitos de transcripción (para regulación
génica) permiten realizar operaciones lógicas
para la célula

Estos sistemas se pueden modelar y simular

 Cuál es un operon inducible y cuál un
reprimible?
• Lac o trp
• Tiene sentido?
 Términos
• Policistronico
• Inducible - no inducible – constitutivo
• Reprimible
• Elementos de DNA cis y trans
• Gen regulador
• Promotor, operador
• Regulación negativa, positiva
• Represor, activador (proteínas)
• Inductor, corepresor (en gral, otras moléculas)
• Genes estructurales
• Transcripción basal
Extras