UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SAN LUISPOTOSI

FACULTAD DE ESTUDIOS PROFESIONALES

ZONA HUASTECA

Proyecto de investigfacion
Determinacion del control biologico
para el gusano cogollero (Diatraea
saccharalis)
en caña de azucar en la zona productora
de la Huasteca Potosina.
Autor: Marcela Zamora Perez
 Introducción
La caña de azúcar es un cultivo importante a nivel mundial, y México es uno de
los principales productores en América Latina. Sin embargo, enfrenta un
problema grave con la plaga del gusano cogollero, que causa daños considerables
en la producción y calidad de la caña. Esta plaga puede reducir la producción
hasta en un 50%, lo que genera pérdidas económicas para los productores.
Para controlar el gusano cogollero, se ha explorado el uso de control biológico
con hongos entomopatógenos. Estos hongos se aplican en las plantas o
directamente en la plaga y causan su muerte en pocos días. Algunos hongos
efectivos en este control son Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae,
Paecilomyces spp. y Lecanicillium lecanii.
El control biológico tiene ventajas sobre los métodos químicos convencionales, ya
que es seguro para el medio ambiente y no afecta la salud humana ni animal.
Además, es compatible con sistemas agrícolas ecológicos y orgánicos, lo que lo
hace adecuado para la producción sostenible de alimentos. (INIFAP, 2017).
 Justificación
La caña de azúcar es un cultivo importante para la economía mexicana,
ocupando el séptimo lugar en la producción mundial en 2020. Sin embargo,
la presencia del gusano cogollero representa un problema, causando
pérdidas significativas en la producción. El control de esta plaga se realiza
principalmente con pesticidas químicos, pero su uso excesivo tiene efectos
negativos. Por ello, se investiga el control biológico como una alternativa
más sostenible y respetuosa con el medio ambiente. Estudios en Brasil y
México han demostrado que el control biológico puede aumentar la
producción y reducir los costos asociados con los pesticidas químicos.
Investigaciones adicionales en la zona productora de la huasteca potosina
en México podrían proporcionar información valiosa sobre la eficacia y
rentabilidad de este método, promoviendo prácticas agrícolas más
sostenibles en la producción de caña de azúcar. (Pereira et al., 2018)
Objetivo general
Aislar y caracterizar hongos entomopatogenos en caña de azucar
que

sean
saccharalis).
efectivos contra el gusano cogollero (Diatraea

Objetivos especificos
1. Aislar hongos entomopatogenos de cultivos de caña de azucar.

2. Identificar taxonomicamente los hongos entomopatogenos por

tecnicas microbiologicas y moleculares.
3. Evaluar la actividad bioplaguisida de los hongos in vitro.
4. Evaluar la efectividad de los hongos entomopatogenos en cultivo
de caña de azucar.
 Hipótesis
Los hongos entomopatógenos de cultivos de
caña de azúcar podrían utilizarse como
control biológico del gusano cogollero, los
cuales podrían reducir la población del
gusano cogollero y mejorar la producción del
azúcar.

Aislamiento de hongos entomopatógenos:
Se colectarán muestras de
suelo y hojas de caña de
azúcar
Vertido y solidificación del
medio: Se vierte el medio
esterilizado en placas de
Petri estériles
Metodología
Preparación de medios
selectivos para el
aislamiento de hongos
Selección del medio:
entomopatógenos medios como el agar
Sabouraud o el agar PDA
(papa dextrosa agar)
Preparación del medio: se disuelve
el polvo del medio en agua Adición de agentes selectivos: Para
Algunos agentes comunes incluyen
destilada y ajustar el pH si es inhibir el crecimiento de
antibióticos como la cloranfenicolina
necesario. Luego, esteriliza el y la tetraciclina, y fungicidas como el microorganismos no deseados,
medio mediante autoclave. cloranfenicolina y el benomilo. añade agentes selectivos al medio.
 Aislamiento
mediante técnicas
de dilución seriada
y siembra en medios Preparación de diluciones Se hacen diluciones seriadas de Siembra en medios selectivos: Se
selectivos. seriadas: se toma tejido de caña la muestra, transfiriendo una preparan placas de Petri con los
de azúcar. Luego, se agrega la cantidad conocida de la medios selectivos previamente
muestra a un tubo de dilución dilución anterior a una nueva preparados. Se toma una alícuota de
que contiene un medio líquido dilución. Para obtener una cada dilución y siembra en las placas
estéril, como solución salina dilución de 1:10. Se repite este utilizando la técnica de siembra en
tamponada (PBS). proceso para obtener diluciones espiral o la técnica de siembra en
adicionales. línea.

Identificación preliminar de los
hongos entomopatógenos mediante
observación microscópica de las
estructuras fúngicas.
Selección de colonias fúngicas: Después de
la incubación, examina las placas de Petri
en busca de colonias fúngicas que
presenten características similares a las de
los hongos entomopatógenos de interés.
Incubación: Coloca las placas de Petri
en una incubadora a una temperatura
adecuada para el crecimiento de
hongos, generalmente alrededor de 25-
28°C.
 Identificación taxonómica

A nivel molecular mediante

Extracción de ADN: Extrae
la técnica de PCR. el ADN de las colonias
fúngicas puras utilizando
un kit de extracción de
ADN adecuado.
Diseño de cebadores: Se diseñan cebadores específicos para
amplificar una región genómica conservada en el grupo
taxonómico de interés. Se utilizan bases de datos y
herramientas bioinformáticas para identificar las
secuencias genéticas conservadas y diseñar los cebadores
correspondientes.

Luego, se tiñe el gel con un Análisis de los productos de PCR: Se

colorante de ADN y se visualizan
las bandas utilizando una fuente
de luz ultravioleta. Se comparan
los resultados obtenidos con
marcadores de peso molecular esto
permitirá estimar el tamaño de
las bandas amplificadas.
analizan los productos de PCR
utilizando técnicas de electroforesis
en gel de agarosa. Se cargan los
productos de PCR en un gel de
agarosa y separa las bandas de
acuerdo a su tamaño mediante la
aplicación de una corriente eléctrica.
Amplificación del ADN: Se realiza la
amplificación del ADN mediante
ciclos de desnaturalización,
annealing y elongación en un
termociclador. Los ciclos se repiten
varias veces para amplificar la
región objetivo.
Preparación de la reacción de PCR: Se
prepara la reacción de PCR en tubos
de reacción. La reacción debe
contener ADN genómico, cebadores
específicos, nucleótidos, enzimas de
polimerasa y un tampón de reacción
adecuado.

Secuenciación del ADN: Si es necesario, se
realiza la secuenciación del ADN
amplificado para una identificación más
precisa y detallada.
Observación y evaluación:
Durante el período de
incubación, se observa y registra
el crecimiento de los hongos,
incluyendo la velocidad de
crecimiento, la formación de
estructuras reproductivas
Actividad bioplaguicida
Preparación de los cultivos
in vitro
Análisis bioinformático: Se analizan
las secuencias obtenidas utilizando
herramientas bioinformáticas y
bases de datos de secuencias
genómicas. Selección del medio de cultivo: Se selecciona un
medio de cultivo adecuado para el crecimiento de
los hongos entomopatógenos. Puede ser un medio
sintético como el agar PDA (papa dextrosa agar)
Siembra de los hongos
Incubación: Se coloca las placas de entomopatógenos: Se Toma una
Petri o frascos en una incubadora porción del cultivo puro de los
a una temperatura adecuada para Preparación del medio de cultivo: Esto implica
hongos entomopatógenos y
disolver los ingredientes en agua destilada,
el crecimiento de los hongos transfiérelo asépticamente al
ajustar el pH si es necesario y esterilizar el
entomopatógenos, generalmente medio de cultivo en placas de
medio mediante autoclave o filtración.
alrededor de 25-28°C. Petri
 Formulación de los hongos entomopatógenos
seleccionados

Obtención del inóculo: Cuando los hongos
entomopatógenos hayan crecido y desarrollado
esporas o conidios, se retíran cuidadosamente del
medio de cultivo utilizando una asa estéril
Preparación de la suspensión: Se transfieren los
conidios o esporas recolectados a un recipiente estéril,
como un matraz de vidrio o una botella de plástico. Se
añade un volumen adecuado de agua estéril o una
solución salina estéril
Homogeneización: Se mezcla bien la suspensión
de hongos entomopatógenos y el vehículo
mediante agitación suave o utilizando un
agitador magnético para asegurar una
distribución uniforme de las esporas o conidios
en el líquido.

Ajuste de la concentración: Si es
Aplicación sobre las plantas de necesario, ajusta la Filtrado (opcional): Si es necesario,
caña de azúcar infestadas: concentración de la suspensión filtra la suspensión utilizando un
Utiliza un método de aplicación de hongos entomopatógenos de filtro estéril para eliminar
adecuado. acuerdo con la dosis requerida cualquier contaminante o
para la aplicación. agregados grandes.
 Referencias
INIFAP. (2017). Plagas del cultivo de la caña de azúcar: Diatraea saccharalis.
Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Recuperado
de https://www.gob.mx/inifap/documentos/plagas-del-cultivo-de-la-cana-de-
azucar-diatraea-saccharalis
Pereira, R. M., Zanetti, R., Nava, D. E., & Ribeiro, P. R. (2018). Biological control
reduces pesticide use and increases sugar cane yield. Agronomy for Sustainable
Development, 38(1), 1-10.
Gracias