Un microscopio compuesto tiene mas de un lente objetivo. Los microscopios
‘compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en
‘aminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imagenes
de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio éptico comin est
conformado por tres sistemas:
El sistema mecénico esté constituido por una palanca que sirve para sostener,
elevar y detener los instrumentos a observar.
EI sistema de iluminacién comprende un conjunto de instrumentos, dispuestas de
tal manera que producen las ranuras de luz.
El sistema éptico comprende las partes del microscopio que permiten un aumento
de los objetos que se pretenden observar mediante filtros llamados “de antigel
subsecuente",
TECNICAS DE MICROSCOPIA.
Optica: se trabaja sobre el microscopio.
© Fijaci6n: tratamiento quimico para matar a las células de modo que quedan como eran in vivo, y
ue las moléculas queden fijadas, que no se eliminen/ laven en manipulaciones posteriores,
* Seccionado: se corta el tejido muy fino, de forma que lo atraviese la luz. Para ello se emplean
los microtomos, estos pueden ser:
‘+ Demano: la muestra debe incluirse en un medio, la médula de saiico (de sauce, Salix),
* De parafina: incluir la muestra en parafina, una especie de cera. Antes la muestra tiene que pasar
lun proceso: deshidratacién, se impregna con disolvente Xilol/Xileno) de parafina, este junto ala
arafina, y parafina tinicamente.
* De congelacién: la muestra se impregna de nitrégeno liquido
acero. Es el procedimiento mas répido.
® Tincién: si el tejido es casi transparente hay que afiadirle colorantes para permitir la visién.
Normalmente se emplean més de un colorante de diferente color y también quimicamente distintos.
Esta es una sustancia quimica que reacciona con unas moléculas determinadas del tejido,
quedindose fijado, ast se obtiene el contraste.
* Montaje de Ia preparacién: se montan los diferentes cortes en el portaobjetos. Habitualmente se
emplea el cubreobjetos, entre porta y cubre no debe haber aire. Dependiendo de la duracién, la
preparacién puede ser:
© Temporales: se emplea agua y otras substancias.
© Permanentes: indefinidas, se emplean blsamo de Canada y resinas.
Elorden entre montaje de a preparacién y tincién, puede variar,
Electronica: se trabaja sobre fotografias.
‘ Fijacién: tiene mucha importancia. Se sigue el mismo proceso que en la microscopia éptica.
+ ¥ luego se corta con cuchilla de
impulsado por (3 CamScanner «© Seccionado: los cortes, muy finos, son atravesados por electrones (muy poco poder de
penetracién). Se usan los ultramicrotomos, para poder emplearlos se debe incluir la muestra en una
resina muy dura (polimerizada). La resinapasa por dos estados:
‘* Como monémeros (unidades): moléculas muy grandes. La sustancia es fluida, pero viscosa,
debido al choque y unin de estas grandes moléculas. La inclusién de la muestra, se produce en este
estado.
MONOMEROS POLIMEROS
‘* Como polimeros (unién de unidades): son monémeros unidos fuertemente. Tiene estado s6tido,
‘muy duro. Cuando, se impregna con disolvente de resina, este junto a la resina, y resina
linicamente. Cuando Ia resina esté en este estado se puede cortar.
RESINA FLUIDA CONEL ACELERADOR
DELA POLIMERIZACION
CAPSULA DE GELATINA
TEJDO
‘Se emplean cuchillas de vidrio o de diamante. Los cortes se recogen en una minipiscina
CUCHILLLA ‘PISCINA
# Montaje de Ia preparaci6n: en una rejilla de cobre, que actisa como red en la mini piscina, La
rejilla es el portaobjetos. Se usa cobre porque los tejidos se adhieren bien .
impulsado por CamScanner Jn colorantes. En este caso se emplean metales pesados, ya que
tras que los &tomos ligeros no lo hacen. Y
N,,0...). Estos metales pesados se
te con las moléculas de
‘© Tincién: se tite siempre, aunque si
‘estos étomos pesados desvian a los electrones,
porque la materia viva esté formada por étomos ligeros (C,
ntroducen formando parte de sustancias quimicas, reaccionan selectivament
una célula.
«* Osmio (Tetréxido de Os): es un fijador y un colorante, pone negra la muestra en un principio.
Reacciona con: lipidos, proteinas y polisacédridos. Fija a: membranas (lipidos y proteinas),
citoplasma (proteinas), granos de glucégeno (animal), granos de almidén (vegetal).
+ Plomo (Citrato de Pb): refuerza la accion del osmio.
‘© Uranio (Acetato de Uranio): reacciona con los dcido nucleicos.
PODER DE RESOLUCION DE UN MICROSCOPIO.
Distancia minima a la que pueden estar dos estructuras, para verse como dos distintas.
Unidades:
4mm = 1.000 ° (micras)( m. éptico)= 19 nm (nanémetro)( longitud de onda/ fotosintesis)
= 10 A (émstrongs)(m. electronico).
Sptico:
-Poder de resolucién: ~ 0°25 +
-Aumento comin: 2.000 x
.000 x
Electrénico:
1 ~ 5-10 A
-Aumentos: 200.000-300.000 x
3
El haz luminoso procedente de la lémpara pasa directamente a través del diafragma al
ma de lentes que posee el condensador, la luz es
in a observar. El haz de luz penetra en el objetivo y sigue
condensador. Gracias al siste
donde es captado por el ojo del observador.
concentrada sobre la preparaci
por el tubo hasta llegar al ocular,
Propiedades del microscopio
impulsado por (3 CamScanner Poder separador. También llamado a veces poder de resolucién, es una cualidad
del microscopio, y se define como la distancia minima entre dos puntos proximos que
Pueden verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando
Su distancia es menor a una décima de milimetro. En el microscopio viene limitado por
la longitud de onda de la radiacién empleada; en el microscopio éptico, el poder
‘separador maximo conseguido es de 0,2 décimas de micrémetro (la mitad de la
longitud de onda de Ia luz azul), y en el microscopio electrénico, el poder ‘separador
llega hasta 10 A.
Poder de definicién. Se refiere a la nitidez de las im4genes obtenidas, sobre todo
respecto a sus contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la correccién de
las aberraciones de las lentes utilizadas,
Ampiiacién del microscopio. En términos generales se define como la relacién
entre el diémetro aparente de la imagen y el diémetro o longitud del objeto. Esto
quiere decir que si el microscopio aumenta 100 diémetros un objeto, la imagen que
‘estamos viendo es 100 veces mayor linealmente que el tamafio real del objeto (la
‘superficie de la imagen sera 100”, es decir 10.000 veces mayor). Para calcular el
aumento que est proporcionando un microscopio, basta multiplicar los aumentos
respectivos debidos al objetivo y el ocular empleados. Por ejemplo, si estamos
utilizando un objetivo de 45X y un ocular de 10X, la ampliacién con que estamos
viendo la muestra sera: 45X x 10X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del
‘objeto esta ampliada 450 veces, también expresado como 450 diametros.:
*_ Mantenimiento del microscopio
EI microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que
Pudieran dajiarlo. Mientras no esté en uso debe guardarse en un estuche o
gabinete, o bien cubrirlo con una bolsa plastica o campana de vidrio.
Las partes mecanicas deben limpiarse con un pafio suave; en algunos casos, éste
se puede humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de grasa, aceite de
cedro, parafina, etc. Que hayan caido sobre las citadas partes.
La limpieza de las partes dpticas requiere precauciones especiales. Para ello debe
emplearse papel de dptico que expiden las casas distribuidoras de material de
laboratorio 6 fotografia o utilizar un pafio de algodén. Para el polvllo se puede
utilizar un perilla con pincel de pelo de camello. Nunca deben tocarse las lentes del
ocular, objetivo y condensador con los dedos; las huellas digitales perjudican la
visibilidad, y cuando se secan resulta trabajoso eliminarlas.
Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel de éptica,
envolviendo un palillo con algo de punta con una solucién de éter/alcohol (70-
30 %) y luego pasarlo por la superficie cuantas veces sea necesario. La limpieza
de la Optica ha de realizarse en espiral, desde el centro hacia el exterior. El aceite
de cedro que queda sobre la lente frontal del objetivo de inmersién debe quitarse
inmediatamente después de finalizada la observacién. Para ello se puede pasar el
papel de éptica impregnado con una gota de xi. En caso de estar seco debe
nerse la zona a remojo con la soluci6n sefialada. Para guardarlo se acostumbra
a ‘etivo de menor aumento sobre la platina y bajado hasta el tope; el
colocar el obj 1 posicién mas baja, para evitar que tropiece con
condensador debe estar on lugares secos, para evlar que la humedad
alguno de los objetivos. Guardese on IuG} :
impulsado por (3 CamScanner favorezca la formacién de hongos. Ciertos dcidos ¥ otras sustancias quimicas que
Producen emanaciones fuertes, deben mantenerse alejados de! microscopio.
Se denomina campo de! microscopio al circulo visible que se observa a través del
[editarITipos de microscopios
Existen diversas clases de microscopios, segtn la naturaleza de los sistemas de luz, y
otros accesorios utilizados para obtener las imagenes.
El microscopio compuesto u éptico utiliza lentes para ampliar las imagenes de los
objetos observados. El aumento obtenido con estos microscopios es reducido, debido a la
longitud de onda de la luz visible que impone limitaciones. El microscopio 6ptico puede
Ser monocular, y consta de un solo tubo. La observacién en estos casos se hace con un
solo ojo. Es binocular cuando posee dos tubos. La observacién se hace con los dos ojos.
Esto presenta ventajas tales como mejor percepcién de la imagen, mas cémoda la
observacién y se perciben con mayor nitidez los detalles,
Microscopio estereoscépico: e! microscopio estereoscépico hace posible la vision
tridimensional de los objetos. Consta de dos tubos oculares y dos objetivos pares para
cada aumento. Este microscopio ofrece ventajas para observaciones que requieren
Pequefios aumentos. El éptimo de visin estereoscépica se encuentra entre 2 y 40X 0
aumento total de! microscopio.
Microscopio de campo oscuro. Este microscopio esta provisto de un condensador
Paraboloide, que hace que los rayos luminosos no penetren directamente en el objetivo,
sino que iluminan oblicuamente la preparacién. Los objetos aparecen como puntos
luminosos sobre un fondo oscuro.
Microscopio de fluorescencia. La fluorescencia es la propiedad que tienen algunas
sustancias de emitir luz propia cuando inciden sobre ellas radiaciones energéticas. E!
tratamiento del material biolégico con flurocromos facia la observacién al microscopio.
Microscopio de contraste de fases. Se basa en las modificaciones de la trayectoria de
los rayos de luz, los cuales producen contrastes notables en la preparacién.
[editarJEI microscopio electrénico
Articulo principal: Mictoscopio electrénico.
[editar]Invencién del microscopio electrénico
En 1932, Bruche y Johnsson construyen el primer microscopio electrénico a base de
ectrostaticas. Ese mismo afio Knoll y Ruska dan a conocer los primeros
a btenidos con un microscopic electrénico Siemens, construido con lentes
ee 7 a i 1ace el microscopio electrénico. Para 1936 ya se ha perfeccionado y se
Oe ciples electronicos que superan en resoluci6n al microscopio dptico.
fabrican
impulsado por (3 CamScanner Estos logros no s6lo
al compo de le Biologia ean cers oy €1 campo de la electrénica, sino también
a 5 nuchas las estructuras biolégicas que se han
deacublero Y que revelan detalles inusitados, al observarlas al microscopio electronico.
[editariFuncionamiento del microscopio electrénico
El microscopio electrénico utiliza un flujo de electrones en lugar de luz. Consta
fundamentalmente de un tubo de rayos catédicos, en el cual debe mantenerse el vacio. El
cétodo esta constituido por un filamento de tungsteno, que al calentarse eléctricamente
emite los electrones, los cuales son atraidos hacia el énodo por una diferencia de
Potencial de 50.000 a 100.000 voltios. La lente del condensador enfoca este haz y lo
dirige hacia el objeto que se observa, cuya preparacién exige técnicas especiales. Los
lectrones chocan contra la preparacion, sobre la cual se desvian de manera desigual.
Se acostumbra a utilizar el término microoscopicos para las fotografias tomadas a través
del microscopio éptico y micrografia 0 electromicrografia para las que se toman en el
microscopio electrénico.
Los aumentos maximos conseguidos en el microscopio electrénico son del orden de
2,000.000X mediante el acoplamiento al microscopio electrénico de un amplificador de
imagen y una camara de television. En resumen, el microscopio electrénico consta
esencialmente de:
. Un filamento de tungsteno (cdtodo) que emite electrones.
Condensador o lente electromagnética, que concentra el haz de electrones.
Objetivo o lente electromagnética, que amplia el cono de proyeccién del haz de
luz,
* Ocular o lente electromagnética, que aumenta la imagen.
= Proyector o lente proyectora, que amplia la imagen.
= Pantalla fluorescente, que recoge la imagen para hacerla visible al ojo humano.
[editarjTipos de microscopios electrénicos
Existen varios tipos de microscopios electrénicos, que cada dia se perfeccionan mas.
EI microscopio electrénico de transmisién que utiliza un haz de electrones acelerados por
un alto voltaje (cien mil voltios). Este haz ilumina una seccién muy fina de la muestra,
sean tejidos, células u otro material.
EI microscopio electrénico de barrido se utiliza para el estudio de la morfologia y la
topografia de los elementos. Estos instrumentos utilizan voltajes cercanos a los 20.000
voltios. Las lentes magnéticas utilizan un haz muy fino de electrones para penetrar
repetidamente la muestra, y se produce una imagen ampliada de la superficie observada
en la pantalla de un monitor. El microscopio electrénico mixto tiene propiedades comunes
con el de transmisi6n y con el de barrido y resulta muy util para ciertas investigaciones.
Hay otros microscopios analiticos que detectan sefiales caracteristicas de los elementos
que constituyen la muestra. 7
que utiizan el flujo de electrones las radiaciones
poderosos instrumentos, | ‘ r i fi
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