Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Químicas

Carrera: Bioquímica y Farmacia
Guía de Prácticas de Laboratorio
Nombre: Toledo Casanova Maylo

No. de práctica 7.Partes y funcionamiento de un cromatógrafo de gases

7-8 8.Cromatografía de gases. Evaluación del efecto de la temperatura

Objetivos de la práctica de laboratorio:

Practica 7:

1) 1) Familiarícese con los componentes principales del equipo de cromatografía de gases antes de investigar su

funcionamiento.

2) 2) Identificar cómo trabajan juntas las diversas partes del equipo y su importancia para la elección de las

condiciones analíticas durante el análisis y la cuantificación.

3) 3) Identificar los tipos de analitos, muestras y áreas de aplicación que se pueden utilizar en el cromatógrafo de
gases.

Practica 8:

1) Reconocer los componentes del sistema cromatográfico de gases.

2) Identificar los parámetros de optimización cromatográfica por GC.

3) Determinar el efecto de aplicación de programación de temperatura para la separación cromatográfica.

Introducción: Marco teórico

En la cromatografía de gases, los componentes de una muestra vaporizada se separan al ser

distribuidos entre una fase móvil gaseosa y una fase estacionaria líquida o sólida retenida en una

columna. Al realizar una separación por cromatografía de gases, la muestra es vaporizada e inyectada

en la parte superior de una columna cromatográfica. La elución ocurre por el flujo de una fase móvil

inerte gaseosa. En contraste con la mayoría de los tipos de cromatografía, la fase móvil no interactúa
con las moléculas del analito. (Skoog, 2008)

La única función de la fase móvil es transportar al analito a través de la columna. Existen dos tipos

de cromatografía de gases: cromatografía gas-líquido y cromatografía gas-sólido.

• La cromatografía gas-líquido se utiliza ampliamente en todos los campos de la ciencia, donde

su nombre es usualmente acortado a cromatografía de gases (CG).

• La cromatografía gas-sólido se basa en una fase estacionaria sólida en la cual la retención de los

analitos ocurre debido a una adsorción física. La cromatografía gas-sólido tiene unaaplicación

limitada debido a la retención semipermanente de moléculas activas o polares y a las

pronunciadas colas en los picos de elución. (Skoog, 2008)

La formación de colas en los picos se debe al carácter no lineal del proceso de adsorción. Poreso

esta técnica no ha encontrado una amplia aplicación, excepto para la separación de algunas

especies gaseosas de baja masa molecular; La cromatografía gas-líquido está basada en la

partición del analito entre una fase móvil gaseosa y una fase líquida inmovilizada en la superficie

de un empaque sólido inerte o en las paredes del tubo capilar. El concepto de cromatografía gas-

líquido fue propuesto por primera vez en 1941 por Martin y Synge, quienes también fueron

responsables del desarrollo de la cromatografía de partición líquido-líquido. Sin embargo, tuvo

que pasar más de una década antes de que se demostrara experimentalmente el valor de la

cromatografía gas-líquido y esta técnica comenzara a utilizarse como una herramienta de rutina

en el laboratorio. En 1955 apareció en el mercado el primer aparato comercial para cromatografía

gas-líquido. Desde ese tiempo, el crecimiento en las aplicaciones de esta técnica ha sido

fenomenal. Actualmente se utilizan varios cientos de miles de cromatógrafos de gases en todo el

mundo (Skoog, 2008)

INSTRUMENTOS PARA CROMATOGRAFÍA GAS-LÍQUIDO

Sistema del gas transportador

Al gas de la fase móvil en la cromatografía de gases se le llama gas transportador y debe ser químicamente

inerte. El helio es la fase móvil más común, aunque también se utiliza argón, nitrógeno e hidrógeno. Estos

gases están disponibles en tanques presurizados. Para controlar la velocidad de flujo del gas se requieren

reguladores de la presión, calibradores y medidores de flujo. (Skoog, 2008)

Sistema de inyección de muestra

Para una alta eficacia de columna, una muestra de tamaño adecuado debe ser introducida como un

“tapón” de vapor. Una inyección lenta o muestras de gran tamaño provocan ensanchamiento de banda y

pobre resolución. Se utilizan microjeringas calibradas.

El puerto de la muestra generalmente se mantiene a alrededor de más de 50 ºC por encima del punto de

ebullición del componente menos volátil de la muestra. Para columnas analíticas empacadas de manera

ordinaria, el tamaño de las muestras va desde unas pequeñas décimas de microlitro hasta 20 µL. Las

columnas capilares requieren muestras que sean menores por un factor de 100 o más. (Skoog, 2008)
Inyectores para columnas empaquetadas

La inyección de muestras en columnas empaquetadas no presenta problemas particulares, este tipo de

columnas admiten cantidades de muestra relativamente elevadas y la inyección de unos cuantos

microlitros de muestra no conduce a una merma apreciable de la eficacia de la columna. (científicas,

2018)
 Ilustración 3 Inyector para columnas empaquetadas

Inyectores para columnas capilares

Inyección con división de muestra (Split)

Es el más sencillo de los que se utilizan en cromatografía capilar. Este consta básicamente de los

mismos elementos que un inyector normal, con la única adición de un sistema de división de flujo a la

salida de la cámara de mezcla. Su proceso es que el flujo de gas portador que pasa a través del inyector,

se divide en dos; una parte es introducida en la columna y la otra escapa fuera del sistema a través de una

válvula de aguja que permite regular la proporción de gas que es introducido en la columna. (científicas,

2018)
Inyección splitless

La totalidad de la muestra inyectada es dirigida hacia la columna, que se mantiene durante la inyección

a una temperatura inferior al punto de ebullición del componente más volátil de la muestra. Latotalidad

de la muestra inyectada, lógicamente condensa en la cabeza de la columna, actuando en este caso del

disolvente condensado en la columna a modo de trampa donde se concentran los componentes a

analizar.

Transcurrido un tiempo adecuado, se abre en el inyector una válcula de purga con el fin de barrer a la

atmósfera el disolvente vaporizado que pudiera quedar en el inyector; al mismo tiempo, se comienza

un

programa de calentamiento de la columna para realizar el análisis. (científicas, 2018)

 Técnicas de inyección adecuadas

Configuraciones de columna y hornos de columna

Las columnas en la cromatografía de gases son de dos tipos generales: columnas empacadas o

columnas capilares. En el pasado, la gran mayoría de los análisis por cromatografía de gases utilizaban

columnas empacadas. En la mayoría de las aplicaciones actuales, las columnas empacadas han sido

reemplazadas por columnas capilares más eficientes y rápidas.

La longitud de las columnas cromatográficas va desde menos de 2 m hasta 60 m o más. Están hechas

de acero inoxidable, vidrio, sílice fundida o teflón. Con el fin de ajustarlas en un horno para la

regulación

de la temperatura, usualmente se arreglan como bobinas que tienen diámetros de 10 a 30 cm. (Skoog,

2008
 Columna capilares

La temperatura de la columna es una variable importante que se debe controlar en unas pocas décimas

de grado para un trabajo preciso. Por lo tanto, la columna normalmente se aloja en un horno con la

temperatura regulada. La temperatura óptima de una columna depende del punto de ebullición de la

muestra y del grado de separación requerido. Una temperatura igual o ligeramente por debajo del punto

de

ebullición de una muestra resulta en un tiempo de elución razonable (de 2 a 30 min). (Skoog, 2008)
Horno Termostatizado

Detectores cromatográficos

Características de un detector ideal

El detector ideal para cromatografía de gases debe tener las siguientes características:

1. Sensibilidad adecuada. En general, las sensibilidades de los detectores actuales se encuentran en el

intervalo de 10–8 a 10–15 g soluto/s.

2. Buena estabilidad y reproducibilidad.

3. Una respuesta lineal a los solutos que se prolonga a lo largo de varios órdenes de magnitud.

4. Un intervalo de temperatura que va desde temperatura ambiente hasta al menos 400 ºC.

5. Un tiempo de respuesta corto que es independiente de la velocidad del flujo.

6. Alta confiabilidad y facilidad de uso. En la mayor medida posible, el detector debe ser a prueba de

errores cometidos por operadores inexpertos.

7. Similitud en la respuesta para todos los solutos o, de manera alternativa, una respuesta altamente

predecible y selectiva hacia una o más clases de solutos.

8. No debe destruir la muestra

Detectores de ionización de flama (FID)

El detector de ionización de flama (FID, por sus siglas en inglés) es el detector más utilizado para la
cromatografía de gases. Con un FID, el efluente de la columna es dirigido a una pequeña flama de
aire/hidrógeno. La mayoría de los compuestos orgánicos producen iones y electrones cuando se pirolizan
a la temperatura de una flama de aire/hidrógeno. Estos compuestos son detectados al monitorear la
corriente producida al colectar los iones y los electrones. Para colectar los iones y los electrones se
aplican
unos cuantos cientos de volts entre la punta del quemador y el electrodo colector localizado sobre la
flama. Entonces, la corriente resultante (~10–12 A) se mide con un picoamperímetro se
nsible. (Skoog,
2008)

Detector de ionización de
flama

Detectores de conductividad térmica

El detector de conductividad térmica (TCD, por sus siglas en inglés), el cual fue uno de los primeros

detectores empleados para la cromatografía de gases, aún tiene una extensa aplicación. Este dispositivo

consiste en una fuente calentada eléctricamente cuya temperatura, a energía eléctrica constante, depende

de la conductividad térmica del gas circundante. El elemento calentado puede ser un alambre fino de

platino, oro o tungsteno, o bien, un pequeño termistor. La resistencia eléctrica de este elemento depende

de la conductividad térmica del gas.

 Con frecuencia se utilizan cuatro elementos de resistencia sensibles a la temperatura. Un par de

referencia se localiza por delante de la cámara de inyección de la muestra y un par de la muestra se

localiza inmediatamente después de la columna. En forma alternativa, se puede dividir la corriente del

gas. Los detectores son incorporados en dos brazos de un circuito de puente simple.

Celda de un detector de conductividad térmica

Detectores de captura de electrones

El detector de captura de electrones (ECD, por sus siglas en inglés) se ha convertido en uno de los

detectores más utilizados en las muestras ambientales, ya que responde selectivamente a compuestos

orgánicos que contienen halógenos, como los pesticidas o los bifenilos policlorados. En este detector, la

muestra eluida de una columna se hace pasar por un emisor b radiactivo, usualmente níquel-63. Un

electrón del emisor causa la ionización del gas transportador (generalmente nitrógeno) y la producción de

una explosión de electrones. En ausencia de especies orgánicas, este proceso de ionización resulta en una

corriente permanente y constante entre un par de electrodos. Sin embargo, la corriente disminuye

notablemente en presencia de moléculas orgánicas ue contienen grupos funcionales electronegativos que

tienden a capturar electrones. Con alta sensibilidad, se detectan compuestos como los halógenos, los

peróxidos, las quinonas y los grupos nitro. El detector es insensible a grupos funcionales como las aminas,

los alcoholes y los hidrocarburos. (Skoog, 2008)

 Detector de captura de electrones

Reactivos de laboratorio:

• Dimetil sulfóxido (calidad reactivo)

• Benceno (estándar certificado)

• Butanol (estándar certificado)

Materiales de laboratorio:
Columna Capilar de tipo Zebron ZB-5ms (30 m x 0.25 mm x 0.50 um)

Equipos de laboratorio:

• Cromatógrafo de gases
− Detector FID, Gas de arrastre Helio, Inyector Split

Método, técnica operatoria o procedimiento: (Diagrama de flujo)

Cálculos y Resultados obtenidos:

Datos

Compuestos Condiciones de temperatura ensayadas

Inyec 1 El programa del horno (A) fue isotérmico a 30 ºC y se logró eludir en 4

min.

Inyec2 secuencialmente se fue aumentando la rampa de temperatura en

incrementos de 10 ºC/min hasta alcanzar una rampa de 30 ºC/min.

Inyec3 Secuencialmente se fue aumentando la rampa de temperatura en

incrementos de 10 ºC/min hasta alcanzar una rampa de 30 ºC/min.

Inyec4 Secuencialmente se fue aumentando la rampa de temperatura en

incrementos de 10 ºC/min hasta alcanzar una rampa de 30 ºC/min.

Conclusiones:

1. 1. Puede identificar los componentes que componen un sistema de cromatografía de gases.

2. 2. Se identifican los parámetros que ayudan a optimizar mejor la cromatografía de elución precisa.

3. 3. El punto de ebullición y la capacidad de interactuar con la fase estacionaria son un factor importante
cuando utilizamos la cromatografía de gases.También existen métodos como la programación de
temperatura en la separación cromatográfica para determinar los resultados.

4. 4. El horno juega un papel importante porque al cambiar el programa del horno para
adaptarse a los compuestos que se analizan, se puede obtener la separación deseada.

Actividades para desarrollar:

- Indicar los condiciones de temperatura para la columna en el horno que procura el artículo científico objeto
de la práctica para las 4 inyecciones de la mezcla benceno-butanol.

- Indicar los tiempos de retención para los 4 ensayos realizados.

Datos

INYEC1 INYEC2 INYEC3 INYEC4

Benceno 3.75 2.60 2.16 2.04

Butanol 3.75 2.60 2.19 2.07

- Explicar a qué se debe el cambio de orden de elución de los dos compuestos analizados.

A condiciones isotérmicas de 30°C se observó que el benceno fue más rápida su elución que el butanol

debido que toma un papel muy importante el punto de ebullición, por otra parte, cuando se realiza un

aumento de 10 ºC/min hasta alcanzar una rampa de 30 ºC/min el butanol empieza a eluir más rápido que

el benceno porque tiene menos interacción con la fase estacionaria por su polaridad y visualizando el

efecto que tiene la temperatura con la presión de vapor.

 - Explicar la fase estacionaria utilizada en la columna y sus características.

Características de la Fase Estacionaria

Zebron ZB-5MSi

• Fase estacionaria:( 95% dimetilpolisiloxano y 5% de Fenilo)

• Dimensiónes: 20 m x 2.18 mm x 0.18 μm

• Intervalo de temperatura aproximado (°C): De -60 a 360/370 °C

• Aplicación en compuestos semivolátiles, compuestos halogenados, pesticidas, herbicidas, drogas,

aminas, identificación sistemática de muestras desconocidas

• No polar

• Bajo sangrado

• Altamente inerte

Zebron ZB-5ms

• Fase estacionaria (95% dimetilpolisiloxano y 5% Fenil-arileno)

• Dimensiones:30 metros x 0,25 mm x 0,50 μm

• Límites de temperatura: -60 hasta 325/350 ºC

• Aplicación: Ácidos, alcaloides, Aminas, Dioxinas, Drogas, Halo-hidrocarburos.

• No polar

• Bajo sangrado.

• Altamente estable.

Recomendaciones:

• Revisar previamente las características de la fase estacionaria para evitar accidentes y poder
acoplar las características de flujo para una correcta lectura.

• Tener en cuenta el método de inyección usado y el detector de acuerdo con lo que se desea
Determinar.

Bibliografía:

• Científicas, C. s. (2018). Cromatografía de gases. Obtenido de

• https://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatografia/cromatografia_de_
gases.pdf
• Rua. (s.f.). Cromatografía de gases. Obtenido de

• https://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8247/4/T3gascromat.pdf

• Skoog. (2008). Principios del Análisis Instrumenta. México: Cengage Learning .