SIMULACION DE LOS PROCESOS INVOLUCRADOS EN LA

PRODUCCION DE BIOETANOL A TRAVES DE SUERO DE

LECHE.
1
Joshue Chévez Macías
jchevez5683@utm.edu.ec
1

Facultad de Matemática, Física y Químicas, Carrera de Ingeniería Química Universidad

técnica de Manabí.

RESUMEN
El rendimiento de bioetanol se respeta una solución energética que aporta a la merma de impactos
ambientales destructivos, originados principalmente por el uso desmedido de combustibles fósiles.
Teniendo en cuenta la evaluación de la producción de bioetanol por parte del suero de leche de bovinos,
optimizando el proceso de hidrolisis de la lactosa y la fermentación del hidrolizado. El suero de leche se
caracterizó tanto física como químicamente usando dos procesos de hidrolizado: química con ácido
clorhídrico al 0.01, 0.1 y 1M (40 y 85 minutos) y enzimática con 0.43, 1, 1.6 μL/L de lactasa (15 a 20
minutos). La eficiencia del proceso de hidrólisis se cuantificó con el contenido de azúcares reductores por
DNS y de glucosa por la técnica GOD-GOP (Trinder) y mediante fermentación de los mejores
tratamientos. Los sueros (ácido y dulce) hidrolizados con la concentración de solución de HCl al 0.1 M,
crudos y suplementados al 6 y 12 % fueron fermentados con una concentración de inoculo de 1x106
cel/mL a una temperatura de 30°C bajo condiciones anaerobias, durante 85 horas. En estas condiciones,
se obtuvieron 28.44 g/L en suero dulce suplementado (12% de azúcar total) y 30.02 g/L de bioetanol en
suero ácido suplementado.

Palabras Claves: Bioetanol, residuos agroindustriales, lactosuero, fermentación.

ABSTRACT

The performance of bioethanol is respected, an energy solution that contributes to the reduction of
destructive environmental impacts, mainly caused by the excessive use of fossil fuels. Taking into account
the evaluation of bioethanol production by bovine whey, optimizing the process of hydrolysis of lactose
and the fermentation of the hydrolyzate. The whey was characterized both physically and chemically
using two hydrolyzing processes: chemical with hydrochloric acid at 0.01, 0.1 and 1M (40 and 85 minutes)
and enzymatic with 0.43, 1, 1.6 μL/L of lactase (15 to 20 minutes). ). The efficiency of the hydrolysis
process was quantified with the content of reducing sugars by DNS and glucose by the GOD-GOP
technique (Trinder) and by fermentation of the best treatments. The sera (acid and sweet) hydrolyzed with
the concentration of HCl solution at 0.1 M, raw and supplemented at 6 and 12%, were fermented with an
inoculum concentration of 1x106 cells/mL at a temperature of 30°C under anaerobic conditions. for 85
hours. Under these conditions,
28.44 g/L in supplemented sweet whey (12% total sugar) and 30.02 g/L of bioethanol in supplemented
acid whey were obtained.
Key Words: Bioethanol, agro-industrial waste, whey fermentation.
1
1. INTRODUCCIÓN significativas de proteína, grasa, azúcar (lactosa),
vitaminas y algunas trazas de otros elementos.
La producción de etanol genera emisiones de carbono
negativas, lo que exacerba los gases de efecto
invernadero y el calentamiento global. Además, el etanol
es responsable de la destrucción de millones de
hectáreas de habitad natural a nivel mundial.
Actualmente los altos índices de contaminación han
llevado a los gobiernos de todo el mundo a exigir a las
industrias una producción limpia, lo cual hace que las
empresas planteen soluciones para disminuir sus cargas
contaminantes (Panesar et al., 2007), mediante la
mejora de sus procesos o a través del
aprovechamiento de los subproductos.
La industria láctea alrededor del mundo es una de las
principales de la industria alimenticia de origen animal.
Genera grandes recursos, y su forma de producción
depende de las tecnologías utilizadas, produciendo
leche y derivados. En el marco ecuatoriano, la leche es
producida principalmente por pequeños ganaderos,
quienes venden su producción láctea a las marcas de
expendio y procesamiento de lácteos.
El principal residuo que genera la industria láctea es el
suero de leche, la producción mundial de este residuo
por año es de 160 millones de ton, con un crecimiento
de 1-
2 % anual (Dragone et al., 2011; Guimarães et al., 2010;
Das et al., 2015).
Lo mencionado con anterioridad causa un gran daño al
ambiente por la alta concentración de sustancias
orgánicas disueltas (Mukhopadhyay et al., 2003),
mismas que provocan una alta demanda bioquímica de
oxígeno (DBO) de 35- 45 mg/L, así como una alta
demanda química de oxígeno (DQO) 80,000mg/L
(Dragone et al.,
2011), las variaciones en la demanda están
determinadas directamente por el tipo de leche y del
contenido de lactosa.
El lactosuero es un subproducto de la elaboración del
queso, el cual se caracteriza por el color amarillo-
verdoso, la forma opalescente, y el alto valor nutritivo
debido a la presencia de proteínas de alto valor biológico
(Kamei et al., 1975). En la actualidad se sigue
desperdiciando en países en vías de desarrollo en lugar
de direccionarlo para diferentes usos como:
alimentación animal o como sustrato microbiano. Por
otro lado, el suero de leche contiene cantidades

2
La obtención de etanol a partir de lactosuero es
considerada un recurso energético sostenible, con alta
viabilidad técnica, que brinda ventajas
medioambientales y económicas a largo plazo, obtenido
de la fermentación realizada por los microorganismos
los cuales metabolizan los azúcares provenientes de
subproductos de grandes procesos industriales
(Jácquez et al., 2015). Es de suma importancia recalcar
el valor que tiene el lactosuero, ya que como sustrato
fermentable generaría una oportunidad de desarrollo
para nuevas formas de producción y cuidado con el
medio ambiente.
Los sueros se caracterizan por medio de la física y
química con métodos de hidrólisis ácida y enzimática.
La hidrólisis fue eficiente y se cuantificó mediante el
contenido de azúcares reductores y glucosa.

2. MATERIALES Y MÉTODOS
Obtención del suero de queso
Se colecto el suero de dos distintas queserías en el
sector de Montañita, Junín. En el caso del suero
dulce fue conseguido por coagulación de la caseína por
vía enzimática (renina) y el suero ácido por la mezcla de
renina y cultivos lácticos.
Material biológico y medio de cultivo
Se utilizó una cepa etanolgénica de Saccharomyces
cerevisiae (levadura de cerveza) ITPE01, muestra
señera de caña de azúcar la misma que fue
conservada por medio del cultivo usando el agar papa-
dextrosa a 4 °C. Composición química
El suero contiene, por lo tanto, lactosa (63-70%),
proteínas solubles (10-12%, albúminas y globulinas) y
cenizas (8-12%).
El suero ácido y dulce está compuesto químicamente
bajo ciertos criterios como: materia seca que se evaluó
por secado en una estufa RIOSSA H-33 a 65°C, las
cenizas se incineraron en la mufla a 540°C por 5 horas;
la proteína se cuantifico por medio de
espectrofotometría; la grasa butírica se desarrolló por el
método de Gerber (NMX-F-317-S-1978), el pH se utilizó
un potenciómetro Hanna modelo HI-98130; para medir
el DQO se usó un kit HACH® que se basa en el método
800 para agua y aguas residuales, por último se
determinó la lactosa usando el equipo Lastocan. Todas
las determinaciones se realizaron por triplicado.
Pretratamiento del suero de queso

 Hidrolisis enzimática de suero de leche

3
En el proceso se usó la enzima en estado líquido (β- Corrida Tiempo Enzima Temperatura
galactosidasa) Medibac Lab. bajo el nombre comercial 1 15 0.43 36
2 18 0.43 40
Lactoset, el producto fue almacenado en frio a 4°C hasta
3 20 0.43 40
que se utilice. La enzima tiene una actividad de 10,000 4 15 1.2 36
u/g de enzima (1mol de o-nitrofenol/min, en condiciones 5 15 1.5 36
6 15 1 36
óptimas). La lactosa por medio del método de hidrolisis 7 20 1 40
se optimizó bajo los siguientes parámetros: temperatura 8 20 0.45 40
9 18 0.45 40
(35-40°C), pH (6.5-7.5), tiempo (15-20 min) y 10 20 0.43 40
concentración de enzima (0.43, 1, 1.6 μL/L). 11 18 1 36
12 18 1.35 40
13 15 1.40 36
 Hidrolisis química de suero de leche 14 20 0.45 36
Se llevó a cabo bajo ciertas condiciones: autoclave a 15 20 1.25 36
123°C/16 psi y 100°C/1 atm, por un tiempo de 40 y 85
Tabla 1 Diseño de Box-Benkhen
minutos y una concentración de ácido 0.01, 0.1 y 1 M
cada uno. 3. RESULTADOS Y DISCUSION
Producción de alcohol Composición química
Las muestras hidrolizadas fueron centrifugadas a 10000 Los resultados finales para la composición química
rpm de 8 a 10 minutos a una temperatura de 4°C, las fueron los del Cuadro 2. Lo que es materia seca y el pH
impurezas fueron filtradas en el papel filtro No 1, el pH a del suero son similares a lo dicho por Boudjema et al.
4.6 y los azucares reductores se cuantificaron en el (2015), se encontro ceniza presente en ambos sueros y
hidrolizado se realizó mediante el método de DNS Se se mostro que la cantidad es menor respecto a lo
inocularon matraces de 1000 ml con un volumen de conseguido por Yadav et al. (2015), la cantidad de
trabajo de 500 ml de suero hidrolizado, con una proteína es menor, y la cantidad de ácido láctico es
concentración de inoculo de 1x106 cel/ml, temperatura y mayor a lo reportado por Anand et al. (2013), la cantidad
tiempo de fermentado fue de 30°C y 85 horas, por ultimo de lactosa fue mayor a lo expuesto por Panesar et al.
las muestras se destilaron y el etanol porcentual se (2007), la cantidad de grasa es menor a lo dicho por
estimó por la ecuación Gay Lussac. Yadav et al. (2015), esto tiene relación a las rasgos
Análisis estadístico físicos y químicos de la leche, la especie bovina usada,
El efecto que puede tener los diferentes parámetros de el tiempo en el que se obtubo la leche, tipo de
hidrolisis química utilizados se evaluaron una factorial de alimentación de animal bovino y el método de
dos y tres niveles (23) así se llevó a cabo un análisis de coagulación usado para separar la caseína Park et al.
varianza usando la ANOVA y comparativo de medias (2007), el DQO es similar a lo expuesto por Boudjema
(LSD). La hidrolisis enzimática se evaluó por medio del et al. (2015), esto se refleja de tal manera por la
método del diseño optimizado de Box-Benkhen, todos composición física y química de la leche (Navas, 2015).
los análisis se realizaron por duplicado; (Cuadro 1). El
análisis estadístico se realizó a través del software Parámetro Ácido
statgraphic.
Materia seca 6.75 ± 0.20
Cenizas 0.85 ± 0.03
Proteinas 0.15 ± 0.60
Ácido láctico 5.00 ± 1.20
Lactosa 3.496 ± 0.132
pH 4.40 ± 0.15
DQO 74.52 ± 0.02

Tabla 2 Composición química (%) de suero de leche

bovino

4
Hidrolisis enzimática encontraron que la concentración y tipo de la fuente de
nitrógeno afecta el consumo de galactosa cuando se
La solución de la efectividad de la hidrolisis enzimática
usan cepas de panificación y cerveceras.
por Box-Benhken no mostro datos que reflejen alguna
diferencia relevante (P=0.308 y 0.809 respectivamente).
Inmediatamente en el tratamiento de hidrolisis en el
suero los análisis mostraron que no hubo una diferencia
significativa respecto al contenido de azucares
reductores, lo cual se debe principalmente a la inhibición
competitiva que ejercen los productos de reacción,
glucosa y galactosa, ya que van en incremento y la
galactosa ocupa el sitio activo de la enzima evitando
que la lactosa se una al mismo (Beltran y Acosta, 2003).

Hidrolisis química
Gráfico 2 Cinética de consumo de azúcares reductores
En el ANOVA, los factores evaluados, concentración de en suero ácido de bovino.
la solución de HCl y el contenido de azúcares reductores
(P-Value: 0.502) señala que no existe diferencia Producción de alcohol

significativa entre dichos factores (Gráfico 1), por lo que El rendimiento de alcohol obtenido de la fermentación
se procedió a utilizar, la concentración más baja de la procesada (suero en crudo y con la melaza 6 y 12%) se
solución de HCl para efectuar la hidrólisis. muestran en la tabla 3.

Suero dulce Suero ácido

Tipo
Etan Rendimie Etan Rendimie
ol nto teórico ol nto teórico
(g/l) (g/l)
Suero 0.316 18.35 0.632 17.45
hidroliza ± ± ± ±
do 0.00 0.00 0.00 0.00

Suero 15.8 30.66 15.8 30.66

Suplem ± ± ± ±

Gráfico 1 Gráfico de efectos principales, tipo de suero y e nto 0.00 0.00 0.00 0.00
concentración de ácido. (6%)
Suero 28.44 61.33 30.02 61.33
Fermentación de los hidrolizados del suero
Suplem ± ± ± ±
Durante el proceso los azucares reductores presentes e nto 0.129 0.00 0.129 0.00
en la fermentación del suero suplementado con melaza (12%)

gráfico 2, mostro un consumo acelerado de azucares en

el transcurso de las primeras 18 horas, luego se logra
Tabla 3 Rendimiento de alcohol obtenido a partir de
estabilizar medianamente.
suero.

Se observó que, a pesar de haber mantenido la

La producción de bioetanol en suero ácido y dulce
fermentación hasta 92 horas, a partir de las 40 horas el
hidrolizado sin suplementar es acorde a lo esperado
consumo es prácticamente nulo, lo que indica la
considerando que el contenido de azúcar (lactosa) es
posibilidad de que se esté agotando otro nutriente que
cercano al 40%, y coincide con estudios previos donde
actúa como sustrato limitante. (Carvalho et al. (2013)

5
se utilizó suero solo para la producción de etanol, en los La concentración de azúcares totales en suero de leche
que se encontraron bajos rendimientos. (Miller, 2003) hidrolizado ejerció gran influencia en la producción de
etanol por Saccharomyces cerevisiae ITPE01 siendo la
La evaluación de la producción de bioetanol en suero
ácido y dulce suplementado con melaza al 6 y 12%
muestra un rendimiento del 50% con respecto al
rendimiento teórico, en el que 1 mol de glucosa produce
2 mol de etanol, 2 moles CO2 y energía (Sánchez,
2005)

Los resultados obtenidos coinciden con lo esperado, ya

que se detectó que la levadura solo consume una parte
del sustrato principal (fuente de carbono y energía
azúcares), lo que indica la posibilidad de que se esté
agotando otro nutriente y que actúe como sustrato
limitante. Sin embargo, en este trabajo no se evaluó la
evolución de otros nutrientes.

Trigueros et al. (2016), encontraron que S. cerevisiae

consume rápido la glucosa y metaboliza con mayor
lentitud la galactosa, debido a que célula está lista para
metabolizar glucosa. Ocasionado que su sistema de
síntesis enzimática, necesario para asimilar la segunda
fuente de carbono dependa de su estado de energía
asociado con la concentración de glucosa en el medio.
Regulando el sistema en diferentes mecanismos tales
como la represión de catabolitos y la inactivación
catabólica, lo que resulta, en fermentaciones
prolongadas. No obstante S. cerevisiae posee una
buena capacidad fermentativa y tolerancia al etanol, lo
que permite producir hasta 20% (v / v) (Boudjema et al.
2015; Guimarães et al., 2010), convirtiéndola en la
levadura más usada para la generación de este
producto.

4. CONCLUSIONES
Se puede concluir que los parámetros físicos y químicos
del suero de leche proveniente de la región de
Montañita, Junin se encuentran dentro de los intervalos
aceptables.

La optimización de la hidrolisis enzimática por razón del

diseño de Box-Benhken no aconsejó residuo típica
reducido de sustancias mientras que el interés de
acceso termo-ácidos (hidrólisis química) incremento el
agotamiento de almíbares sumas mediante soluciones
de HCl a bajas coagulaciones permitiendo llevar a
cabo métodos de desarrollo fermentativos.

6
formación de producto máxima de 28.44 y 30.02 para
suero dulce y ácido respectivamente, cuando se utiliza
una concentración de suplemento (melaza) al 12 %. Por
último, el uso de suero de leche como sustratos
representa una oportunidad importante que puede
permitirnos mejorar el valor añadido de los procesos
agroindustriales, reduciendo temporalmente los costos
de eliminación ayudando a mitigar la contaminación, de
cuerpos de agua y suelos.

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