CROMATOGRAFÍA

ANÁLISIS INSTRUMENTAL
Primavera 2021
Dra. Eva Águila Almanza

Ejercicio

1. Definir: a) elución, b) fase móvil, c) fase estacionaria, d) tiempo de retención,

e) factor de selectividad, f) factor de retención, g) altura del plato

a) Purificación de una especie por lavado en una columna mediante la adición

continua de fase móvil nueva.
b) Donde se disuelve la muestra.
c) Donde pasa la fase móvil (Columna o S. Solida)
d) El tiempo requerido para que esta zona llegue al detector después de la
inyección de la muestra
e) El factor de retención es una medida del tiempo que un compuesto
permanece en la fase estacionaria, en relación con el tiempo que
permanece en la fase móvil. Se define como el cociente de los moles de un
soluto en la fase estacionaria entre los moles en la fase móvil
f) un parámetro experimental importante que se usa con frecuencia para
comparar las velocidades de migración de los solutos en las columnas
g) La anchura de una curva gaussiana está directamente relacionada con su
desviación estándar s

2. Elaborar una lista de las variables que conducen a un ensanchamiento de

banda

Las variables que provocan el ensanchamiento de la zona son

(1) grandes diámetros de partículas para fases estacionarias

(2) grandes diámetros de columna

(3) altas temperaturas (importantes sólo en GC)

(4) para las fases estacionarias líquidas, capas gruesas del líquido inmovilizado

(5) caudales muy altos o bajos.

3. ¿cuál es la diferencia entre cromatografía gas-líquido y líquido-líquido?

En la cromatografía gas-líquido, la fase móvil es un gas, mientras que en la

cromatografía líquido-líquido es un líquido. líquido, es un líquido.
4. ¿cuál es la diferencia entre cromatografía líquido-líquido y líquido-sólido?

En la cromatografía líquido-líquido, la fase estacionaria es un líquido que se

inmoviliza por adsorción o enlace químico a una superficie sólida. Los equilibrios
que provocan la separación son equilibrios de distribución entre dos fases líquidas
inmiscibles. En la cromatografía líquido-sólido líquido-sólido, la fase estacionaria es
una superficie sólida y los equilibrios implicados son equilibrios de adsorción.

5. Describir un método para la determinación del número de platos en una

columna

El número de placas de una columna puede determinarse midiendo el tiempo de

retención tR y la anchura de un pico en su base W. El número de platos N es
entonces N = 16(tR /W)2

6. Describa dos métodos generales para mejorar la resolución de dos

sustancias en una columna cromatográfica.

La disminución de la anchura de los picos aumentará la resolución, al igual que el

aumento de la separación de los picos. de los picos. El aumento de la separación
puede lograrse alargando la columna para aumentar el número de placas o
aumentando la selectividad. número de placas o aumentando la selectividad.

7. Los datos siguientes corresponden a una columna cromatográfica:

Longitud del empaque 24.7 cm

Velocidad de flujo 0.313 mL/min
VM 1.37mL
VE 0.164mL

En un cromatograma de una mezcla de las especies A, B, C y D se observaron los

datos siguientes:

Tiempo de retención, Ancho de la base del pico

min (W), min
No retenido 3.1 -
A 5.4 0.41
B 13.3 1.07
C 14.1 1.16
D 21.6 1.72

Calcular:

a) el número de platos de cada pico

 𝑁 = 16(𝑡𝑅 /𝑊)2

𝑁𝐴 = 16(5.4/0.41)2 = 2775.49

𝑁𝐵 = 16(13.3/1.07)2 = 2472.04

𝑁𝑐 = 16(14.1/1.16)2 = 2363.97

𝑁𝐷 = 16(21.6/1.72)2 = 2523.31

b) la altura de plato para la columna

𝐻 = 𝐿/𝑁

24.7
𝐻= = 9.749 × 10−3 𝑐𝑚
2534 𝑝𝑙𝑎𝑡𝑜𝑠

c) el factor de retención para A, B, C y D

𝑘𝐴 = (𝑡𝑅 − 𝑡𝑀 )/𝑡𝑀

5.4 − 3.1
𝐴, 𝑘𝐴 = = 0.74
3.1
13.3 − 3.1
𝐵, 𝑘𝐴 = = 3.3
3.1
14.1 − 3.1
𝐶, 𝑘𝐴 = = 3.5
3.1
21.6 − 3.1
𝐷, 𝑘𝐴 = =6
3.1

d) la constante de distribución

𝑉𝑀 1.37
𝐾 = 𝑘( ) ∴ 𝐾 = [(𝑡𝑅 − 𝑡𝑀 )/𝑡𝑀 ] × = [(𝑡𝑅 − 𝑡𝑀 )/𝑡𝑀 ] × 8.35
𝑉𝑆 0.164

5.4 − 3.1
𝐾𝐴 = [ ] × 8.35 = 6.2
3.1
 13.3 − 3.1
𝐾𝐵 = [ ] × 8.35 = 27
3.1

14.1 − 3.1
𝐾𝐶 = [ ] × 8.35 = 30
3.1

21.6 − 3.1
𝐾𝐷 = [ ] × 8.35 = 50
3.1

e) la resolución

2[(𝑡𝑅 )𝐶 − (𝑡𝑅 )𝐵 ]
𝑅𝑆 =
𝑊𝐵 + 𝑊𝐶

2[14.1 − 13.3]
𝑅𝑆 = = 0.72
1.07 + 1.16

f) el factor de selectividad

14.1 − 13.1
𝛼𝐶,𝐵 = = 1.08
13.1 − 3.1

g) la longitud de la columna para separar las especies B y C con una resolución de

1.5

0.717 √2534
=
1.5 √𝑁2

(1.5)2
√𝑁2 = 2534 ×
(0.717)2

√𝑁2 = 11090 𝑝𝑙𝑎𝑡𝑜𝑠

𝐿 = 9.749 × 10−3 ∙ 11090

𝐿 = 108 𝑐𝑚

h) la longitud de la columna para separar las especies C y D con una resolución de

1.5
 (1.5)2
𝑁1 = 2534 × = 210 𝑝𝑙𝑎𝑡𝑜𝑠
(5.21)2

𝐿 = 9.749 × 10−3 ∙ 210

𝐿 = 2.0 𝑐𝑚

8. Los datos siguientes se obtuvieron por cromatografía gas-líquido en una columna

con un empaque de 40cm:

compuesto tR, min Ancho de la base

del pico (W}), min
Aire 1.9 -
Metilciclohexano 10.0 0.76
Metilciclohexeno 10.9 0.82
Tolueno 13.4 1.06

Calcule

a) número promedio de platos, a partir de los datos

̅ = 2.7 × 103
𝑁

b) altura de plato promedio para la columna

𝐻 = 0.015

c) la resolución metilciclohexano y metilciclohexeno

𝑅𝑆 = 1.1

d) la resolución metilciclohexano y tolueno

𝑅𝑆 = 2.7

9. Escriba de 5 a 10 especies químicas que se pueden separar por HPLC pero

no por CGL?

fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB y venenos

10. Describir las diferencias fundamentales que existen entre la cromatografía

de adsorción y la de partición.

Principalmente que cada una sucede en diferentes tipos de fases de la materia. Las
interacciones implicadas en las fuerzas de van der Waals. La fase estacionaria
11. Describir las diferencias fundamentales que existen entre la cromatografía de
intercambio iónico y la exclusión por tamaño.

La fase estacionaria sólida y la retención de los contraiones que se intercambian

por iones de la fase móvil en la cromatografía de intercambio iónico.

La fase estacionaria en un material poroso el cual retiene las moléculas en función

de su tamaño en la cromatografía de exclusión por tamaño.