Simmons2011 en Es

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Capítulo 1
¿Qué nos han enseñado los estudios de trastornos

genómicos sobre nuestro genoma?
Alexandra D. Simmons, Claudia MB Carvalho y James R. Lupski
Abstracto
La elucidación de los trastornos genómicos comenzó con tecnologías moleculares que permitieron la detección de
cambios genómicos que eran (a) más pequeños que los resueltos por la citogenética tradicional (menos de 5 Mb) y
(b) más grandes que los que podrían determinarse por electroforesis en gel convencional. Métodos como la
electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE) y la hibridación fluorescente in situ (FISH) podían resolver tales
cambios, pero se limitaban a estudios específicos de locus. El estudio de los trastornos genómicos ha avanzado
rápidamente con el desarrollo de técnicas basadas en matrices. Estos permitieron el examen de todo el genoma
humano a un nivel más alto de resolución, lo que permitió dilucidar la base de muchos trastornos nuevos, los
mecanismos que dan lugar a cambios genómicos que pueden dar lugar a la variación del número de copias (CNV)
y, lo que es más importante,
En este capítulo, nos enfocamos en las características estructurales y arquitectónicas del genoma, que
potencialmente pueden resultar en inestabilidad genómica, delineamos cómo los mecanismos, como NAHR, NHEJ y
FoSTeS/ MMBIR conducen a reordenamientos que causan enfermedades, y describimos brevemente la relación. entre los
principales métodos utilizados actualmente en el estudio de los trastornos genómicos. Terminamos con una discusión
sobre nuestra nueva comprensión sobre nuestro genoma, que incluye: la contribución de la nueva mutación CNV a la
enfermedad, la abundancia de mosaicismo, el alcance de los reordenamientos subteloméricos, la frecuencia dede novo
reordenamientos asociados con defectos congénitos esporádicos, la aparición de translocaciones equilibradas y
desequilibradas, el descubrimiento cada vez mayor de translocaciones de inserción, la exploración de reordenamientos
complejos y CNV exónicos. En la era posgenómica, nuestra comprensión del genoma ha avanzado muy rápidamente a
medida que aumenta el nivel de resolución técnica. Esto conduce a una mayor comprensión de los efectos de los
reordenamientos presentes tanto en sujetos sanos como en individuos con fenotipos clínicamente relevantes.
Palabras clave:Variación del número de copias, Recombinación, Dosis de genes, Mosaicismo, Translocación de
inserción, Hibridación genómica comparativa
1. Introducción
En el siglo pasado, los investigadores veían nuestro genoma como una colección
imperturbable de pares de bases en los que los pequeños errores (es decir, cambios en
un solo par de bases) eran la causa predominante de la enfermedad hereditaria. Hoy en
día, tenemos una comprensión más amplia de la plasticidad de nuestro genoma.
Lars Feuk (ed.),Variantes Estructurales Genómicas: Métodos y Protocolos, Métodos en Biología Molecular, vol.
838, DOI 10.1007/978-1-61779-507-7_1, © Springer Science+Business Media, LLC 2012
1
2 AD Simmons et al.
Esto se hará evidente por los numerosos ejemplos de alteraciones genómicas

descritas en este libro. Dependiendo de los segmentos (y genes) involucrados,
se pueden encontrar diferentes resultados: si las desviaciones del estado
diploide normal transmiten un fenotipo, estas condiciones se denominan
trastornos genómicos (1, 2). En otros casos, los segmentos que no contienen
genes o que contienen genes o regiones reguladoras que no son sensibles a la
dosis pueden estar implicados en reordenamientos. Estas alteraciones se han
asociado con cambios a pequeña escala reflejados en la variación del genoma
individual (desde unos pocos pares de bases hasta unos pocos Kb) y cambios
genómicos a gran escala que son evidentes a lo largo de la evolución de los
genomas de primates y homínidos.3–7).
Los primeros informes de enfermedades causadas por reordenamientos
genómicos de tamaño megabase se publicaron a principios de la década de
1990 (8). Gracias a los avances tecnológicos y conceptuales, cientos de
trastornos distintos y miles de variantes del número de copias (CNV) (es decir,
que se desvían del estado diploide normal; generalmentenorte=2) ahora se
han descrito las regiones.
Los reordenamientos genómicos incluyen cambios en el genoma diploide
que conducen a la duplicación, eliminación, inserción, inversión o
translocación de segmentos. Dichos cambios pueden variar desde unos pocos
cientos de pares de bases hasta megabases y pueden conducir a
polimorfismos neutrales o fenotipos de enfermedades (9). También se sabe
que las CNV son ubicuas, involucrando hasta el 12% del genoma humano (10–
20) y puede surgir durante la meiosis (21) o mitosis, como se desprende de los
estudios de mosaicismo somático de CNV (22–24).
El Proyecto del Genoma Humano generó el primer genoma haploide de
referencia que, junto con el desarrollo de técnicas de análisis del genoma de
alta resolución, como los métodos basados en matrices, y el refinamiento de
esos métodos han permitido que los análisis de todo el genoma avancen
rápidamente. En menos de un siglo, se identificó la sustancia de la herencia; su
estructura aclarada, el código genético descifrado, el genoma secuenciado y
los pares de bases correspondientes descritos con precisión. A pesar de la
cantidad abrumadora (y en constante crecimiento) de datos, todavía hay
muchas preguntas sin resolver.
Los reordenamientos estructurales del genoma humano son de dos tipos
generales: recurrentes y no recurrentes. Los reordenamientos con puntos
finales recurrentes muestran un agrupamiento de puntos de ruptura y
uniones que se limitan a la ubicación de repeticiones de copias bajas (LCR)
(descrito a continuación) donde la homología es extensa. En este caso, los LCR
estimulan y median el reordenamiento actuando como sustratos de
recombinación homóloga (HR). Los cambios estructurales no recurrentes, por
otro lado, tienen puntos de ruptura dispersos y los límites comparten una
identidad nucleótida limitada o nula (es decir, homología). Aquí, el
reordenamiento resultante puede ser complejo y tiende a tener un punto de
ruptura que agrupa cerca de regiones ricas en LCR altamente polimórficas. En
este caso, es posible que la presencia de LCR pueda estimular la formación de
conformaciones estructurales de ADN secundarias que pueden conducir a
inestabilidad genómica. LCR diferente
1 ¿Qué nos han enseñado los estudios de trastornos genómicos sobre nuestro genoma? 3
Las conformaciones pueden proporcionar regiones monocatenarias que pueden dar

como resultado horquillas de replicación de ADN colapsadas. Dichos eventos pueden
generar roturas o conformaciones de ADN de doble cadena en un extremo que pueden
dar como resultado roturas de doble cadena en dos extremos y deben repararse
mediante la reparación clásica de rotura de doble cadena (DSBR) (25).
El objetivo de este capítulo es ilustrarqué mecanismosconducen a
reordenamientos genómicos, los trastornos genómicos que resultan de
tales reordenamientos y laconocimiento adquiridoa través de tales
estudios genómicos.
2. Arquitectónico
caracteristicas de la
Genoma humano
Un poco más de la mitad de nuestro genoma está formado por ambosrepetir
secuencias yelementos muy repetitivos. La principal diferencia entre estos dos
es principalmente la frecuencia, presentando el primero muy pocas copias (es
decir, LCR) que han surgido como duplicaciones segmentarias de la secuencia
original y parecen formar conjuntos independientes (es decir, se originan a
partir de muchas secuencias diferentes cada uno). copiado solo unas pocas
veces), y estos últimos parecen haber surgido de eventos de duplicación de la
misma secuencia (o el mismo tipo de secuencias) que ha ocurrido varios miles
de veces (ver Tabla1).
tabla 1
Clasificación y porcentaje aproximado de secuencias repetidas en el genoma
humano (International Human Genome Sequencing Consortium, Nature, 2001,
2004, Levy/Diploid Genome PloSB/2007)
Aproximado
Longitud de número de copia porcentaje de la
Categoría Tipo una unidad (por genoma) genoma humano
transposón- Líneas 6kb 850.000 21

repeticiones derivadas SENOS 100–400 pb 1,500,000 13
(Intercalado retrotransposones LTR 1,5–11 KB 450.000 8 45
repite) transposones de ADN 80 pb–3 kb 300.000 3
Secuencia sencilla Repeticiones directas de cortosk-mers 1–500 pb ? 4.4
repite (minisatélites, microsatélites)
Bajas repeticiones de copia Bloques de ADN que han sido 1–300 KB ? 5.3
o segmentario copiado de una región del
duplicaciones genoma a otra región
Bloques de tándem Centrómeros, telómeros, cortos ? ? 8

repetido brazos de cromosomas
secuencias acrocéntricos y grupos de genes
ribosómicos
4 AD Simmons et al.
Los datos de centrifugación de equilibrio de sedimentación proporcionaron la

primera línea de evidencia que demostró la presencia de ADN repetido de manera
experimental. Los investigadores descubrieron que para la mayoría de los
eucariotas, el ADN se dividía en una banda principal (o pico) y cualquier pico
adicional se denominaba "ADN satélite". Unos años más tarde, los ensayos de
cinética de reasociación demostraron que estos picos estaban formados por ADN
altamente repetitivo (revisado en (26)). Hoy en día, el término "ADN satélite"
representa secuencias repetidas en tándem.
Mesa1muestra cuatro categorías de ADN repetido: repeticiones
intercaladas, repeticiones de secuencias simples, repeticiones de pocas copias
y bloques de secuencias repetidas en tándem.repeticiones intercaladasson,
con mucho, los más abundantes, entre ellosLÍNEA 1(LÍNEA) yaluminio(Los
elementos SINE) son destacados ya que tienen 850.000 y 1.500.000 copias por
genoma haploide, y comprenden el 18,9 y el 10,6% de nuestro genoma,
respectivamente. Entre elrepeticiones de secuencias simples(o microsatélites),
los dinucleótidos son los más abundantes y constituyen el 0,5% de nuestro
genoma, siendo la mitad específicamente repeticiones AC. Estos también
incluyen minisatélites (también llamados VNTR, repeticiones en tándem de
número variable) que son altamente polimórficos. Hay menos información
sobresecuencias repetidas en tándem, como centrómeros, telómeros,
regiones pericentroméricas y teloméricas, ya que se han subrepresentado
deliberadamente en los proyectos de secuenciación, principalmente debido a
la dificultad de encontrar la ubicación genómica correcta de los clones que
contienen secuencias tan repetitivas (para obtener información más detallada,
consulte la ref.27).
LCR, (28) o duplicaciones segmentarias (SDs, (29)) se definen como
segmentos de ADN que ocurren más de dos veces en el genoma haploide,
tienen una extensión superior a 1 kb (puede extenderse a más de 300 kb de
tamaño) y presentan más del 95 % de identidad de secuencia entre sus copias
parálogas (4, 30). Se sabe que los LCR son uno de los mediadores de una gran
cantidad de reordenamientos genómicos; sin embargo, todo el ADN repetitivo
puede ser potencialmente un sustrato para los reordenamientos. Se ha
demostrado que la presencia de estas secuencias repetitivas y repeticiones
específicas como características arquitectónicas de nuestro genoma transmite
inestabilidad genómica.
Algunos loci genómicos tienen una arquitectura genómica compleja,
lo que significa que tienen patrones complicados de LCR directos e
invertidos. Estas regiones están asociadas con lo que se llama regiones
CNV donde el número de copias puede variar del número de genoma
diploide esperado, generalmentenorte=2, uno heredado de cada padre
(es decir, una copia de cada segmento por genoma haploide) (25).
Los cambios genómicos pueden ocurrir en tres niveles distintos: (a) a nivel
de pares de bases (SNP, mutaciones puntuales), (b) a nivel estructural
(reordenamientos cromosómicos, trastornos genómicos) o (c) a nivel
conformacional. Bacolla y Wells revisaron cómo las secuencias específicas de
ADN pueden conducir a cambios conformacionales del ADN.
y la formación de estructuras de ADN no B. Por ejemplo: las repeticiones

invertidas, también llamadas repeticiones en espejo, forman cruciformes;
tractos de purina-pirimidina pueden formar ADN triplex; tractos de
purinapirimidina alternos pueden formar Z-DNA zurdo; y cuatro corridas
de guanina estrechamente espaciadas parecen ser capaces de formar
ADN tetraplex (31). Una serie de experimentos con plásmidos en los que
se incorporó el sistema LacZ-GFP como indicador adyacente a un tramo
de polipurina-pirimidina (que contiene repeticiones directas e invertidas)
aumentó la frecuencia observada de eventos mutacionales. Esto fue
evidente por la alteración del gen GFP. Se observó recombinación intra e
intermolecular. En la mayoría de los casos conduce a la eliminación y, en
un caso particular, a una inversión. En todas las deleciones examinadas,
los puntos de ruptura ocurrieron en las estructuras de ADN no B
predichas y dejaron una microhomologíacicatriz(2–8 pb) en el sitio del
punto de ruptura. Los autores sugieren que las conformaciones de ADN
no B aumentan la frecuencia de aparición de grandes reordenamientos al
aumentar el número de roturas de doble cadena (DSB): sus datos
muestran que un DSB primario en un sitio parece desencadenar la
aparición de un segundo DSB en un sitio secundario en la misma
molécula de ADN o en una diferente para producir una reacción de
recombinación entre estos dos DSB (32, 33).
La evidencia de esto también se proporciona en el trabajo realizado
con levadura (34) y células de mamíferos (35), donde la inducción artificial
de DSB puede conducir a una translocación recíproca por la vía de unión
de extremos no homólogos (NHEJ) (explicada a continuación). Utilizando
la captura de conformación cromosómica (3C), se ha demostrado que se
pueden generar reordenamientos cromosómicos gruesos después de la
formación de DSB en cromosomas de levadura en los que la maquinaria
de la telomerasa y la proteína de la envoltura nuclear Mps3p secuestran
los DSB a la periferia nuclear, lo que limita la tasa. de RRHH. Los
resultados sugieren que podría haber una competencia entre
mecanismos de reparación alternativos y que la ubicación nuclear podría
afectar el resultado de la reparación al modificar la interacción del DSB
con otros fragmentos de cromatina.36).
Las CNV y el cambio estructural parecen agruparse en regiones
donde están presentes las LCR, en regiones heterocromáticas
(centrómeros y telómeros) (37–41), en orígenes de replicación y
terminadores (42), donde las secuencias de unión de andamios están
presentes (43, 44) y donde prevalecen los elementos LINE y SINE (45).
Además de la arquitectura cromosómica, el tipo de división celular
(mitosis, meiosis), la etapa del ciclo celular y las características del
segmento roto (rotura de ADN de doble cadena con dos extremos o con
un extremo) pueden conducir a la reclutamiento de diferentes factores
que utilizan tipos específicos de mecanismos de reparación, lo que lleva a
reordenamientos genómicos.
6 AD Simmons et al.
3. Mecanismos
Principal
a los reordenamientos
Hay una serie de mecanismos propuestos que conducen a
Observado
reordenamientos de nuestro genoma que pueden generar CNV. Estos
en Enfermedad
mecanismos se clasifican comúnmente como mecanismos HR y
mecanismos de recombinación no homóloga, estos últimos se subdividen
en mecanismos replicativos y no replicativos (revisados en25)). Nuestro
enfoque está en los mecanismos que conducen a los reordenamientos
asociados con la enfermedad, por lo que nos concentramos en
recombinación homóloga no alélica(NAHR), NHEJ ybloqueo de horquilla y
cambio de plantilla(FoSTeS)/replicación inducida por rotura mediada por
microhomología(MMBIR).
3.1. NAHR NAHR es un mecanismo de recombinación homóloga. La HR es un tipo de

mecanismo de reparación del ADN con otras funciones en la división de las
células, como permitir la segregación ordenada de los cromosomas y producir
nuevas combinaciones de alelos enlazados (meiosis). HR en células de
mamíferos y humanos (46, 47) requiere alrededor de 200–300 pb de secuencia
casi idéntica, un segmento de procesamiento mínimo eficiente y la
participación de la proteína Rad51, que cataliza la invasión de un 3¢extremo
del ssDNA a una secuencia dúplex en la cromátida hermana o en el homólogo.
La HR se considera un mecanismo de reparación preciso, pero puede conducir
a reordenamientos estructurales porque pueden estar presentes múltiples
tractos LCR parálogos en regiones contiguas, por lo tantoconfuso la
maquinaria de reparación. Durante la reparación, la utilización de LCR
parálogos como secuencias de sustrato de homología conduce a NAHR (25).
El mecanismo de NAHR como causa de reordenamientos asociados
con trastornos genómicos se describió por primera vez a principios de la
década de 1990.48), pero el término NAHR no se introdujo hasta 2002 (30
). También conocido como recombinación homóloga ectópica, NAHR
puede causar una variedad de reordenamientos. Esto incluye
duplicaciones, deleciones e inversiones, que pueden tener lugar entre LCR
en cromosomas iguales o diferentes, en orientación directa u opuesta. La
eliminación o la duplicación pueden resultar cuando dos LCR se colocan
en el genoma en orientación directa, lo que permite intercambios
intercromatídicos o intercromosómicos. Cuando los LCR que interactúan
causan NAHR intracromatidal, solo se observan deleciones. Si los LCR
involucrados en el reordenamiento están en el mismo cromosoma pero
en orientación opuesta, NAHR dará como resultado la inversión del
segmento contenido entre las copias del sustrato LCR. Pueden producirse
translocaciones si los LCR que median el reordenamiento están ubicados
en diferentes cromosomas (1). Con base en esta información, esperamos
que la frecuencia de las eliminaciones sea mayor que la frecuencia de las
duplicaciones, y los ensayos de PCR de esperma único parecen respaldar
esta hipótesis, al menos para los loci examinados (21, 49, 50).
Los elementos repetitivos, como SINE, LINE y LTR, también
parecen ser capaces de mediar en NAHR (11, 51, 52) a pesar de
el tramo de identidad entre cualquiera de estos dos elementos suele ser más
corto que lo que se ha descrito para los LCR.
Cuando NAHR está operativo, los cruces se agrupan en puntos de acceso
estrechos (53). Esto se ha observado en enfermedades como la
neurofibromatosis tipo 1 (NF1, MIM162200), la enfermedad de Charcot-Marie-
Tooth tipo 1A (CMT1A, MIM118220) y la neuropatía hereditaria con riesgo de
parálisis por presión (HNPP, MIM162500).
NAHR puede ocurrir durante la meiosis o la mitosis, la primera
generalmente responsable de trastornos hereditarios (como CMT1 y HNPP) y
trastornos esporádicos (como PTLS o SMS), el último responsable del
mosaicismo somático, que puede conducir a la formación de tumores
cancerosos (53–55). No parece haber una distinción entre las secuencias
involucradas en la NAHR meiótica o mitótica (para ejemplos, véase la ref.54–56
), pero los puntos críticos de recombinación reales y la frecuencia de la
recombinación mitótica o meiótica pueden diferir (53). Por ejemplo, un estudio
sobre NF1 muestra que los reordenamientos mitóticos y meióticos parecen ser
responsables de diferentes tamaños de deleción (es decir, utiliza diferentes
sustratos de recombinación) y sugiere que pueden estar operando diferentes
mecanismos en cada caso. La NF1 puede ocurrir como consecuencia de
mutaciones intragénicas o microdeleciones que involucran elNF1 gene. La
deleción más común (tipo 1) abarca 1,4 Mb en 17q11.2 y abarca 14 genes,
incluidosNF1. Las deleciones de tipo 1 afectan predominantemente al
cromosoma materno por recombinación intercromosómica durante la
meiosis. Las microdeleciones de tipo 2 abarcan 1,2 Mb, por lo que los
pacientes presentan un fenotipo clínico menos grave. Tanto las
microdeleciones de tipo 1 como las de tipo 2 parecen estar mediadas por
NAHR. Además, también se han identificado pacientes con microdeleciones
atípicas. Las deleciones atípicas de NF1 parecen surgir como consecuencia de
mecanismos no basados en homología (como NHEJ) y tienen lugar en el
cromosoma paterno por un mecanismo intracromosómico durante la división
celular mitótica en la espermatogénesis.57).
La eficiencia de NAHR puede verse afectada por varios factores,
incluidos: (a) grado de identidad de secuencia, (b) orientación de los
LCR, (c) distancia entre ellos, (d) su ubicación (intra o
intercromosómica) siempre que la recombinación evento ocurre
durante la mitosis o la meiosis, y (e) en el sexo del individuo
(oogénesis o espermatogénesis) (53).
NAHR se distingue del entrecruzamiento desigual ya que este último se
refiere a la segregación de genotipos marcadores y los fenómenos observados
(cromosomas recombinantes). NAHR es mecanicista; sus productos incluyen
inversiones y, debido a las características arquitectónicas involucradas, nos
permiten hacer predicciones de resultados específicas según la orientación del
sustrato de recursos humanos.
Cuando se investigaron las duplicaciones recurrentes poco comunes asociadas
con PTLS utilizando aCGH y análisis de puntos calientes de recombinación, se
encontró que el entrecruzamiento ocurrió cerca de, dentro de 400 nucleótidos, un
motivo de punto caliente de recombinación homóloga descrito recientemente. Este
cis-la secuencia de actuación parece unirse a PRDM9,
8 AD Simmons et al.
una proteína con actividad histona H3K4 trimetilasa. El motivo se definió

durante los estudios de HapMap como una secuencia estimulante de
recombinación homóloga alélica (AHR) asociada con "puntos críticos" de
recombinación. Sin embargo, se encuentra cerca de los "puntos de
acceso" de AHR y NAHR para cruces (58).
3.2. NHEJ NHEJ es un mecanismo de reparación no replicativo y no HR. En células de

mamíferos y levaduras, NHEJ es uno de los principales mecanismos de
reparación utilizados para resolver DSB de ADN y parece funcionar en todas
las fases del ciclo celular, pero especialmente en la fase G1. DSB puede ocurrir
debido a la presencia de especies reactivas de oxígeno, que pueden surgir
como consecuencia de fenómenos endógenos (subproductos del metabolismo
celular) o exógenos (rayos X, rayos gamma). No todos los DSB son eventos
estocásticos; algunos están realmente programados en las células, como es el
caso de la recombinación V(D)J para generar anticuerpos, diversidad de
receptores de células T (mitótica) (59) y entrecruzamiento (meiótico).
Los mamíferos poseen dos mecanismos para reparar DSB: reparación
homóloga (HR, descrita anteriormente) y NHEJ. NHEJ requiere la unión de
un complejo Ku (específicamente, Ku70 y Ku80, (25)), que reconoce la
ruptura y la participación de numerosos complejos proteicos. Los
complejos más estudiados son (a) la proteína quinasa dependiente de
ADN (DNA-PK) aparentemente involucrada en la unión de los extremos
rotos para facilitar la reincorporación y el reclutamiento/activación de
proteínas responsables de la remodelación de la cromatina, el
procesamiento final del ADN y la ligadura; (b) el complejo ADN ligasa IV-
XRCC4, que está presente en todos los eucariotas, estimula la ligadura del
ADN; y (c) La participación de una o más enzimas de procesamiento final
(principalmente exonucleasas).
NHEJ se considera un mecanismo de reparación propenso a errores
ya que no depende de la presencia de una plantilla homóloga. A
diferencia de NAHR, NHEJ no requiere sustratos de secuencia homóloga ni
segmento de procesamiento mínimo eficiente (MEPS) y, como
consecuencia, pueden aparecer pequeñas deleciones (1 a 4 pb) o algunos
nucleótidos (2 a 34 pb) de ADN libre (generalmente de origen
mitocondrial o retrotransposón) se pueden agregar a los extremos rotos y
permanecer en la secuencia de unión (60–65).
Si bien NHEJ no depende de la presencia de LCR, la aparición de
elementos y secuencias de ADN repetitivos relacionados con la
modificación arquitectónica del ADN parece causar inestabilidad en el
genoma y susceptibilidad a DSB que pueden ser reparados por NHEJ.
Ejemplos de trastornos genómicos que pueden ocurrir por NHEJ son
algunos reordenamientos no recurrentes asociados con la enfermedad de
Pelizaeus-Merzbacher (PMD, MIM312080, (66)) y síndrome de Smith-
Magenis (SMS, MIM182290, (51)).
3.3. FOSTES/MMBIR Estudios deE. colimuestran que la inhibición de la replicación conduce a la

formación de DSB (67). Células humanas normales que son inducidas a
el estrés replicativo mediante el uso de afidicolina, un fármaco que es capaz de inhibir las
polimerasas de ADN asociadas con la replicación, muestra numerosos cambios en el
número de copias grandes que tienen microhomología en los puntos de unión. Tales
ocurrencias podrían explicarse por una reparación errónea que ocurre después de que la
bifurcación de replicación se ha estancado (68).
En muchos casos, los trastornos genómicos parecen estar causados por
reordenamientos complejos en los que los segmentos duplicados y triplicados
se interrumpen con regiones en las que no se observa ningún cambio en el
número de copias. Tal es el caso de varios genes, comoPLP1,APLICACIÓN
MECP2,SNCA, RAI1,PMP22(69–82), que muestran duplicaciones y triplicaciones
que son causales de la enfermedad y fenotipos asociados. En 2007, Lee et al. (
83) propusieron un mecanismo basado en la replicación que podría conducir a
reordenamientos genómicos humanos tan complejos: FoSTeS. Los autores
estudiaron a pacientes con PMD previamente determinados para tener una
duplicación del gen sensible a la dosisPLP1utilizando una matriz de
oligonucleótidos de alta resolución (ensayo de hibridación genómica
comparativa) y análisis de secuencia de punto de ruptura. Muchos pacientes,
de hecho, tenían reordenamientos complejos, en los que los segmentos
duplicados y triplicados se intercalaban con secuencias de números de copias
normales. Secuenciaron puntos de corte en 3 de 17 pacientes y describieron
reordenamientos extremadamente complejos, que no pudieron ser explicados
con parsimonia ni por NAHR ni por NHEJ. Se propone que FoSTeS/ MMBIR
ocurra durante la mitosis. También representa un tipo de mecanismo no HR ya
que se necesita poca o ninguna homología.
De acuerdo con el modelo FoSTeS, una muesca (o lesión de

ssDNA) podría provocar el estancamiento del replisoma en la
bifurcación, y la hebra rezagada se desconectaría y cambiaría a otra
bifurcación de replicación activa. La microhomología sería necesaria
para el cebado de la replicación del ADN en la plantilla cambiada, y la
dirección del segmento recién insertado depende de la dirección en la
que avanza el replisoma (5¢a 3¢o 3¢a 5¢) (83).
Las observaciones experimentales características descritas por Lee et
al. (83) (es decir, reordenamientos complejos con microhomología en las
uniones de puntos de ruptura) son similares a los descritos en
E. coli, por lo que el estrés por inanición induce la amplificación de la
operón laca 20–100 copias que aparecen tanto en orientación directa
como invertida (84–86). En este sistema, como lo demuestra la evidencia
que evalúa los efectos de la eliminación o sobreexpresión de un 3¢gen
exonucleasa (xonA), gratis 3¢Los extremos del ADN parecen estar
involucrados en la amplificación de laoperón lac. El hecho de que la
duplicación sea más frecuente en las cepas dondexonAse elimina y
experimentos similares con un 5¢exonucleasa no muestran cambios
relevantes en el número de amplificación, apoyan la idea de que 3¢Se
requieren extremos para este mecanismo (87).
10 AD Simmons et al.
Ensayo del sistema lac enE. coliproporcionó un modelo de amplificación en el

que la replicación se reinicia en los sitios de reparación de DSB de ADN, donde se
planteó la hipótesis de que el cambio de plantilla (a una bifurcación de replicación
diferente) ocurriría durante el reinicio de la replicación en bifurcaciones de
replicación estancadas (87). Además, la escisión de doble cadena de ADN cerca del
operón aumenta la tasa de amplificación (88).
Los estudios en levadura parecen apoyar la hipótesis de que pueden
surgir repeticiones en el genoma como consecuencia de la reparación durante
la replicación del ADN.42). En este experimento, utilizaron un inhibidor de la
topoisomerasa I para cortar el ADN. Estas hebras melladas provocaron el
colapso de la horquilla y, en última instancia, aumentaron la frecuencia de
formación de duplicaciones. Curiosamente, los autores también observaron
que el bloqueo de la horquilla, a diferencia del colapso de la horquilla, no tuvo
un fuerte impacto en la frecuencia de duplicación (42). Los experimentos en
los que el ADN se transfectó en células de mamíferos revelaron una
microhomología y una inserción de secuencia errática en las uniones, lo que
los autores explicaron al proponer un modelo similar también basado en el
cambio de plantilla (89).
MMBIR fue propuesto recientemente por Hastings et al. (84) para dar
cuenta de la microhomología observada en los reordenamientos complejos, el
cambio de plantilla y la inserción de secuencias cortas en la unión del punto de
ruptura que se moldean a partir de intervalos genómicos cercanos. Sugieren
que las moléculas de ADN de doble cadena de un solo extremo generadas por
una horquilla de replicación colapsada, a partir de complejos de transcripción
estancados, en tractos de reparación por escisión o en estructuras secundarias
en el ADN (es decir, cruciformes, horquillas), pueden repararse utilizando ADN
monocatenario (también disponible en estructuras de ADN secundarias) si
comparte una homología muy corta con 3¢extremo de la hebra rota que se ha
escapado de la horquilla colapsada. A nivel molecular, proponen que una
reducción de Rad51 inducida por el estrés deja la reparación de la horquilla de
replicación colapsada en manos de Rad52 (y posiblemente de otras proteínas),
lo que requiere solo una homología mínima y usaría la hibridación de cadenas
de ADN individuales para cebar el ADN. la replicación como el principal
mecanismo disponible para dicha reparación. En este modelo, MMBIR está
sustituyendo la replicación clásica inducida por rotura (BIR). El modelo MMBIR
puede explicar reordenamientos complejos y también puede explicar la
formación de duplicaciones, eliminaciones, inversiones, translocaciones y
amplificaciones simples debido a los círculos rodantes según la ubicación a la
que cambia la hebra rezagada: una posición detrás de la ubicación donde
colapsó la bifurcación, a una secuencia no homóloga, etc. Los autores sugieren
numerosas implicaciones que respaldan un modelo de reparación de la
replicación, comenzando con la formación de cáncer y los trastornos
genómicos y avanzando hasta la evolución y el barajado de exones. MMBIR es
un modelo mecanicista molecular basado en estudios en humanos y
organismos modelo, comoE. coliy levadura El modelo FoSTeS se basó en la
“fenomenología” observada en los trastornos genómicos humanos; no
proporciona el detalle mecanicista como se aclara para MMBIR.
4. Alta resolución
Análisis del genoma
Métodos y sus
Inicialmente, la única forma de visualizar nuestro genoma completo era
Limitaciones
realizando cariotipos y estudiando cromosomas. Se descubrió que algunos
fenotipos de enfermedades humanas eran la consecuencia de la aneuploidía
cromosómica completa o la aneuploidía segmentaria, la presencia de grandes
deleciones que abarcaban más de 5 Mb de longitud. La hibridación
fluorescente in situ (FISH) fue el siguiente enfoque utilizado para identificar y
delimitar duplicaciones y deleciones (90). En la mayoría de los casos, se usaron
clones BAC (150 a 200 Kb) como sondas, lo que proporcionó una resolución de
deleciones de menos de 1 Mb de tamaño (53). También se utilizaron clones de
fósmidos (~40 kb) (57).
Actualmente, todavía se realizan bandas cromosómicas y FISH, pero la CNV,
tanto con fines clínicos como de investigación, se estudia principalmente en
laboratorios de diagnóstico mediante el análisis del número de copias basado en
matrices (ABCNA) debido a su nivel superior de resolución del genoma. Hay dos
tipos de plataformas ampliamente disponibles para realizar ABCNA:matriz de
hibridación genómica comparativa(aCGH), en el que la muestra de prueba se
compara directamente con una muestra de control emparejada por género (91), y el
matrices no comparativas(NCA) que determinan el número relativo de copias
dentro de un solo genoma, de manera cuantitativa, sin el uso de una muestra de
control en el mismo experimento.
Una matriz consta de una colección de fragmentos de ADN (BAC, PAC,
cDNA, productos de PCR u oligonucleótidos sintéticos) que se unen a un
portaobjetos de vidrio o sílice (92). Las dos empresas líderes que producen
matrices de oligo CGH son Agilent y NimbleGen (Roche). Al etiquetar el ADN
del paciente y del control con diferentes tintes fluorescentes, se pueden
evaluar los cambios en el número de copias según el color y la intensidad de la
señal (verde frente a rojo) registrada para cada sonda de interrogación en la
matriz. Agilent permite matrices diseñadas a medida que pueden abarcar un
segmento de interés o el genoma completo. Ofrecen formatos de paquete
único o multipack (1, 2, 4 u 8 matrices por portaobjetos) y se pueden utilizar
hasta 1 millón de sondas de interrogación de 60 mer.impresoen cada pieza de
vidrio. Es posible producir arreglos personalizados o prediseñados (http://
www.chem.agilent.com). Los arreglos NimbleGen HD2 también utilizan
oligosonda largas (de 50 a 75 bases de longitud) con un número máximo de
2,1 millones de sondas por arreglo, lo que lo convierte en el CGH de mayor
densidad disponible en la actualidad. Sus matrices se pueden pedir en
formatos multiplex (1, 3 o 12 matrices por diapositiva). También se pueden
producir matrices diseñadas a medida (http://www.nimblegen.com).
Las ventajas de usar matrices de oligo CGH son numerosas, algunas
de las más obvias son (a) no se requieren células en división y se pueden
usar pequeñas cantidades de ADN (350 ng a 2metrog, según el formato),
(b) detecta anomalías cromosómicas desequilibradas a un nivel que
escapa a la resolución del cariotipo en bandas, (c) aCGH detecta
mosaicismo genómico no detectado previamente por análisis de
cariotipo, y (d) tanto LCR como secuencias repetitivas pueden ser excluido.
La principal desventaja de esta tecnología es que se trata de una metodología

comparativa, en la que el resultado es relativo, en lugar de absoluto. La señal
final depende del estado del número de copias del ADN de control; por
ejemplo, lo que parece una ganancia en el ADN del paciente, en realidad
podría ser una pérdida en la muestra de control (93). Otras desventajas de
aCGH incluyen (a) la incapacidad de proporcionar información de posición y
orientación, lo que se refleja en la falla para detectar inversiones equilibradas
y translocaciones equilibradas (93), y (b) la dificultad de identificar el número
total de copias de genes que tienen más de cuatro copias. Esta última
desventaja representa una limitación técnica del método que puede explicarse
como una disminución general en el rango dinámico a medida que aumenta el
número relativo de copias comparativas. Sin duda, este será uno de los
próximos desafíos de la identificación del número de copias: lidiar con estados
de enfermedad que resultan de números de copias superiores a 4 (y en la
mayoría de los casos, incluso superiores a 3). Hay varios genes que están
presentes en múltiples copias, como los genes de la función inmunológica.
Una vez que este problema se resuelva, la evaluación de algunos de los rasgos
complejos como el lupus y los trastornos autoinmunes será más factible.
Recientemente, se utilizaron plataformas de secuenciación de próxima

generación (NGS) para desarrollar un algoritmo de mapeo de lectura (mrFAST)
que permite la evaluación de CNV y predice con precisión el número absoluto
de copias de genes multicopia y regiones genómicas (94). Es muy posible que
el siguiente nivel de resolución genómica sea la secuenciación del genoma
completo y se pueda encontrar una cantidad aún mayor de CNV: con el cambio
en la tecnología, la cantidad de CNV descritas parece aumentar al menos en un
orden de magnitud (consulte la Tabla2).
Los NCA son producidos principalmente por Affimetrix e Illumina.
Affimetrix ofrece una matriz de genotipificación híbrida (Genome-Wide Human
SNP Array 6.0) que coloca 906 600 SNP y 946 000 sondas no polimórficas en la
misma matriz. Las sondas están espaciadas uniformemente
Tabla 2
Resolución del genoma y variación del número de copias.
interrogando CNV totales Número medio de

sondas (píxeles) detectado CNVs en un individuo Referencias
ROMA 85K 221 11 (12)

BAC ACGH 3 K 255 12 (10)
BAC ACGH 25 K 1,447 ~24–70 dependiendo de (13)
Affymetrix GeneChip la plataforma
Mapeo Humano 500 K
Oligonucleótido aCGH 42×103k 11,700 ~1117–1488 (138)

ACGHhibridación genómica comparativa basada en matriz,BACcromosoma artificial bacteriano,Roma análisis de
micromatrices de oligonucleótidos representacionales
y apuntar a regiones genómicas conocidas que exhiben CNV. La muestra de

prueba se procesa, se etiqueta y se hibrida directamente con la matriz, sin el
uso de una muestra de control. Su software utiliza valores de diferencia de
pares absoluta media (MAPD) para predecir el número de copias.
Illumina ofrece Infinium HD BeadChips que proporcionan desde
300.000 a más de un millón de marcadores. Las matrices de Illumina se
diferencian de otras matrices comerciales disponibles en que los
oligonucleótidos se colocan en perlas de sílice de 3 micras que se
autoensamblan en micropocillos en haces de fibra óptica o portaobjetos
planos de sílice (tecnología BeadArray). El software GenomeStudio permite el
análisis de datos CNV mediante el uso del algoritmo cnvPartition, que calcula
los valores de salida del registroR(LRR) y frecuencia del alelo B (BAF). Dado que
LRR es la relación logarítmica de la intensidad de la sonda observada frente a
la intensidad esperada, las desviaciones de cero se interpretan como un
cambio en el número de copias.
Tanto Affimetrix como Illumina ofrecen opciones para desarrollar
arreglos personalizados, aunque estas plataformas no son tan flexibles como
el formato aCGH para arreglos personalizados. Las ventajas/desventajas de
estas plataformas son muy similares a las descritas para las matrices de oligo
CGH, excepto que no son un ensayo comparativo. Las ventajas sobre aCGH
incluyen la capacidad de: identificar relaciones de consanguinidad, inferir
pérdida (LOH) o ausencia (AOH) de heterocigosidad y diferenciar alelos y
origen parental usando la información de SNP.
Ser capaz de analizar nuestro genoma en este nuevo nivel de
resolución ha permitido un estudio más completo de los cambios y
reordenamientos del número de copias normales y perjudiciales. También
nos ha permitido profundizar en los mecanismos que dan lugar a
reordenamientos e incluso proponer nuevos mecanismos que pueden dar
lugar a reordenamientos genómicos. Tal fue el caso de FoSTeS (53, 83) y
MMBIR (84).
5. ¿Qué tenemos?
Aprendido de
Alta resolución
El aumento en el nivel de resolución al que podemos examinar el genoma
Análisis de la
humano ha sido proporcional a la ganancia en conocimiento relativo a la
¿Genoma humano?
estructura, fluidez y mecanismos que conducen a cambios en nuestro
genoma, tanto normales como relacionados con enfermedades. Algunos de
los hallazgos más inesperados pero interesantes se describen a continuación
(ver Fig.1).
5.1. Mosaicismo El mosaicismo cromosómico se define como tener más de una línea celular
con distintos cariotipos en diferentes células de un individuo. Cuando se
utilizan cariotipos y bandas cromosómicas para este tipo de detección, la
identificación del mosaicismo se limita al tipo de célula utilizado y al porcentaje
requerido para la detección. Los estudios cromosómicos convencionales
utilizan cultivos de sangre periférica estimulados que
Entero
Translocaciones desequilibradas
Reordenamientos subteloméricos
Cromosoma
Translocaciones de inserción
Translocaciones recurrentes
de novoreordenamientos
Mosaicismo
Reordenamientos complejos
genética prenatal
Cromosoma
Segmento
CNV exónicos
Gen único
Figura 1. Lo que los estudios de trastornos genómicos nos han enseñado sobre nuestro genoma: Hallazgos según el tamaño de los segmentos involucrados
en los reordenamientos.
dependen del uso de mitógenos agregados artificialmente, un paso de

selección que limita el uso del análisis cromosómico convencional en los
estudios de mosaicismo.
Se utilizaron matrices de clones BAC dirigidos para examinar 2585 muestras
clínicas y se informó que se encontraron 12 (0,46 %) que presentaban mosaicismo
cromosómico (95). De ellos, se informó previamente que 10 (0,39%) pacientes
tenían un análisis de cromosomas sanguíneos normal. También usando la matriz
CGH, (96) informaron 18 casos en los que se detectó mosaicismo, 14 de los cuales
(8% de todos los casos anormales evaluados) eran desconocidos previamente. Lu et
al. informó mosaicismo cromosómico en el 1,9% de los recién nacidos con defectos
de nacimiento (97).
En un estudio más reciente, la sensibilidad al mosaicismo se midió utilizando
cromosomas completos derivados artificialmente y aneuploidías segmentarias.
Sorprendentemente, los autores encontraron que el oligonucleótido aCGH puede
detectar un mosaicismo de bajo nivel en ambos casos, aproximadamente un 10 %
de mosaicismo para el cromosoma completo y un 20-30 % de mosaicismo de las
aneuploidías segmentarias.98). Las tasas más altas de detección de mosaicismo
parecen deberse al hecho de que (a) el ADN se extrae de todos los linajes de
glóbulos blancos para realizar análisis de micromatrices, (b) el análisis de
"población" celular de matrices versus los eventos de células individuales
estudiados por cariotipos, y (c) la mayor capacidad para detectar cambios sutiles en
el número de copias con matrices; haciendo del oligonucleótido aCGH una
poderosa herramienta para la detección del mosaicismo.
La evidencia acumulada respalda la idea de que muchos de nosotros

podríamos ser mosaicos debido a los reordenamientos somáticos que ocurren
en diferentes tejidos. Los estudios de gemelos monocigóticos con fenotipos
clínicos concordantes o discordantes mostraron la presencia de CNV
diferentes dentro de los pares de gemelos en ambos grupos.22). En el pasado,
asumimos que las células normales son genéticamente idénticas y que la
mayoría de las CNV deben generarse durante la meiosis. Un estudio analizó las
CNV en 34 muestras de tejido (cerebro, piel, corazón, riñón, músculo liso,
hígado, etc.) de tres sujetos y encontró CNV que variaban en tamaño de 82 a
176 kb, que afectaban a un solo órgano, o uno o más tejidos del mismo tema (
99). Estos datos indican que los humanos pueden presentar regularmente
mosaicismo somático y sugieren la participación de las CNV somáticas en
trastornos específicos de tejido, como el cáncer. En un estudio sobre células
madre embrionarias de ratón (23), se observaron CNV extensas y recurrentes
generadas en los aislados clonales derivados de líneas parentales comunes.
Propusieron que las nuevas CNV probablemente surgieron durante la mitosis
y que todos los tejidos somáticos de los individuos pueden mostrar
mosaicismo en forma de variantes del genoma cigótico. Un estudio sobre las
inversiones cromosómicas en el ADN humano derivado de la sangre (24)
informaron inversiones genómicas recurrentes con una frecuencia
relativamente alta en las células sanguíneas utilizando ensayos de PCR de
largo alcance. Los reordenamientos fueron más abundantes en adultos que en
recién nacidos, concluyendo que las poblaciones celulares deben ser
consideradas como mosaicos en cuanto a su estructura genómica y que el
mosaicismo aumenta con la edad. El caso de la diversidad de anticuerpos que
ocurre como consecuencia de reordenamientos programados (59) es un
ejemplo de cómo los reordenamientos mitóticos en tipos de células específicos
pueden representar vías o sistemas de biología del desarrollo que utilizan
reordenamientos genómicos para implementar un repertorio de
programación de tipo celular específico.
5.2. Subtelomeric El retraso en el desarrollo, el retraso mental, las características dismórficas y

Reordenamientos las anomalías congénitas pueden ser causados por reordenamientos
subteloméricos. Las regiones subteloméricas son ricas en genes y, debido a la
presencia de secuencias repetidas, son susceptibles a reordenamientos
genómicos.100, 101). Los métodos tradicionales para evaluar los
reordenamientos subteloméricos incluyen cariotipo, bandas cromosómicas y
FISH subtelomérico. El uso de aCGH o análisis de micromatrices cromosómicas
(CMA) con cobertura subtelomérica extendida ha mejorado la detección de
reordenamientos en estas regiones genómicas.
El aCGH dirigido con cobertura extendida en las regiones subteloméricas,
hasta 10 Mb de las 41 regiones subteloméricas, se introdujo por primera vez
en el Baylor College of Medicine en 2004 como una prueba clínica junto con la
verificación FISH (102). En un estudio, se aplicó CMA para evaluar a 5380
pacientes clínicos e identificó 499 (9,3 %) casos con desequilibrios
subteloméricos, de los cuales 236 (4,4 %) eran patogénicos. Esto representa
cerca de la mitad de todas las anomalías genómicas detectadas utilizando esas
matrices específicas (37), y fue significativamente
dieciséis AD Simmons et al.
más alto que el informado por otros grupos que utilizan otras tecnologías con
menor capacidad de resolución del genoma. Aproximadamente el 2,5% de los
reordenamientos subteloméricos patógenos fueron detectados por FISH
subtelomérico (103, 104).
Una alta proporción de anomalías citogenéticas se deben a
reordenamientos de regiones subteloméricas y aCGH es una plataforma
sensible y robusta que puede usarse para detectarlas.37, 105–108).
Los reordenamientos subteloméricos de 9q34.3 nunca se
identificaron antes de la FISH subtelomérica, ya que eran
demasiado pequeños para ser vistos por microscopía
convencional. El análisis de 43 puntos de corte dentro de la región
9q34 de pacientes que presentaban deleciones subteloméricas
utilizando array-CGH mostró que elementos repetitivos cortos,
como SINE, LINE, LTR y STR, estaban presentes en los puntos de
corte o cerca de ellos. Dichos elementos son susceptibles tanto a
los DSB, debido a la formación de estructuras secundarias, como a
la acumulación de roturas monocatenarias en la horquilla de
replicación. Se ha propuesto la presencia de estos elementos
repetitivos cortos en las regiones subteloméricas para ayudar en
la estabilización de las deleciones terminales. En un paciente, P6,
se propone que la presencia de una estructura de deleción
interrumpida/duplicación invertida es la cicatriz de un mecanismo
de ciclo de ruptura-fusión-puente. Sin embargo,38).
5.3. Reordenamientos Los análisis genéticos de diagnóstico convencionales generalmente realizan

genómicos de novo y pruebas de un solo locus (gen) mediante secuenciación de ADN con la expectativa
Defectos de nacimiento esporádicos de encontrar una mutación puntual que sea causal para un fenotipo específico. Se
ha descrito que los cambios en el número de copias pueden ser una causa común
de trastornos genéticos, dondede novolas tasas de mutación específicas del locus
para los reordenamientos genómicos están entre 10−6y 10−4, de 100 a 10 000 veces
mayor que el de las mutaciones puntuales (110).
Según el informe de 2008 generado por el Centro Nacional de Estadísticas
de Salud (http://www.cdc.gov/nchs/hus.htm), la principal causa de muerte en
el período neonatal (menos de 28 días de vida) son los trastornos relacionados
con la corta gestación, el bajo peso al nacer y las malformaciones congénitas.
El aumento en la resolución del genoma ha brindado a los genetistas clínicos
una herramienta más fina, permitiéndoles identificar una CNV causal en
pacientes en los que se sospecha la presencia de una anomalía cromosómica.
Al utilizar el análisis citogenético tradicional, se han detectado
reordenamientos estructurales en el 0,5% de los recién nacidos (110). Cuando
un médico sospecha un síndrome cromosómico, la tasa de detección de una
anomalía cromosómica es de alrededor del 21 % (111–113).
En un estudio publicado en 2008 (97), se evaluó mediante CMA a un total de 638

recién nacidos con diferentes anomalías congénitas. Este es uno de los estudios más
grandes publicados que utilizó aCGH para estimar las frecuencias de los desequilibrios
genómicos en las pruebas de recién nacidos con defectos de nacimiento. Los resultados
son asombrosos. La detección de CNV patológica informada
la tasa de muestras de sujetos remitidos con una indicación de “sospecha

de anomalía cromosómica” fue del 66,7 %. Cuando se compara con otros
estudios publicados durante los 15 años anteriores (111–114), este
número es unas tres veces mayor (66,7 frente a 21,6%). Está claro que
estos reordenamientos no podrían haber sido identificados ni definidos
por el cariotipo con bandas GTG e ilustra la importancia en la resolución
del genoma para el diagnóstico.
5.4. Genética prenatal Se han observado reordenamientos cromosómicos equilibrados de novo en

aproximadamente el 6% de las evaluaciones prenatales (115) y se encuentran
comúnmente tanto en pacientes con anomalías fenotípicas como en
individuos aparentemente normales. De estos, aparentemente 1 de cada 5 es
un evento de novo (110);de novoLas translocaciones aparentemente
equilibradas tienen una mayor probabilidad de estar asociadas con un
resultado clínico anormal.115).
En 2006, se realizó un análisis de 30 muestras prenatales sin cultivar
previamente caracterizadas utilizando dos matrices BAC y PAC diferentes para
detectar anomalías cromosómicas prenatales (105). Se utilizaron dos tipos de
matrices: una matriz "grande" que cubría todo el genoma con una resolución de 1
Mb y una matriz "pequeña", dirigida específicamente a regiones de interés clínico.
El uso del arreglo pequeño permitió el diagnóstico correcto de 29/30 muestras (la
excepción fue un caso de triploidía). Los autores concluyeron que aCGH podría
reemplazar potencialmente a la citogenética convencional para la mayoría de los
diagnósticos prenatales, pero advirtieron que el uso de matrices grandes podría
generar dificultades en la interpretación hasta que se aprendiera más sobre la CNV
genómica. Los datos agregados han demostrado en los últimos años que todos los
reordenamientos no conducen a la enfermedad, y muchos parecen representar
variantes polimórficas en la población (ver Base de datos de variantes genómicas,
http://projects.tcag.ca/variation/). Hallazgos similares fueron reportados por (106).
Se evaluó la viabilidad del uso de CGH de matriz específica para la

evaluación del desequilibrio genómico de los embarazos actuales (116). Se
analizaron noventa y ocho muestras de líquido amniótico, vellosidades
coriónicas y células cultivadas, y todas mostraron una concordancia
completa entre los resultados del cariotipo y la matriz. Los autores
demostraron la viabilidad de usar aCGH para el diagnóstico prenatal y
sugirieron que el uso de matrices podría aumentar la detección de
anomalías en relación con el riesgo. También informaron un tiempo de
respuesta más corto (6 a 16 días). El bandeo cromosómico y el cariotipo
microscópico es una técnica laboriosa que no se puede automatizar y,
debido a la necesidad de cultivar células, tiene un tiempo de respuesta
promedio de 2 semanas.
Restringir el análisis de una muestra prenatal a solo kayrotype o G-
banding puede limitar la información disponible para el asesoramiento y la
toma de decisiones informadas en nombre de los padres. Esto se mostró muy
bien utilizando el análisis de cromosomas con bandas G (107) para detectar un
de novotranslocación balanceada citogenéticamente entre el cromosoma 2 y
el cromosoma 9; t(2;9)(q11.2;q34.3). La matriz CGH fue
luego se usó para descubrir una deleción submicroscópica de 2,7 Mb de una

región subtelomérica de 9q34.3, lo que demuestra que el reordenamiento
estaba desequilibrado. Los resultados se confirmaron mediante FISH. El
análisis eficaz de las regiones genómicas sensibles a la dosis es de gran
importancia para la atención prenatal.
En un estudio más grande, se analizaron 300 muestras prenatales.
Las indicaciones más comunes fueron edad materna avanzada y hallazgos
ecográficos anormales. Se detectaron cambios en el número de copias en
aproximadamente 58 (19 %) de las muestras, y solo 15 (5 %) tuvieron
importancia patológica (108). Concluyeron que aCGH ha mejorado los
diagnósticos para las pruebas cromosómicas prenatales.
5.5. Aparentemente El uso de micromatrices de ADN ha demostrado que las "translocaciones

Equilibrado, Desequilibrado equilibradas" aparentemente visibles desde el punto de vista citogenético pueden
Translocaciones en realidad estar desequilibradas y presentar reordenamientos complejos, como
deleciones, inversiones e inserciones en o cerca de uno o ambos puntos de ruptura.
Un estudio mostró que seis de cada diez pacientes con fenotipos anormales, pero
que se pensaba que eran translocaciones equilibradas, presentaban desequilibrios
no reconocidos previamente en los cromosomas involucrados en la translocación.
117). Otro estudio comparó individuos fenotípicamente normales y anormales que
eranequilibradoportadores de translocación y encontró que en todos los individuos
afectados había desequilibrios genómicos en los puntos de ruptura o en otros
lugares (118).
5.6. Recurrente NAHR se considera principalmente como un mecanismo que conduce a

Translocaciones microdeleciones, microduplicaciones e inversiones intersticiales, pero las
translocaciones también pueden ser estimuladas por características
arquitectónicas genómicas que se encuentran en diferentes cromosomas.
Tal parece ser el caso de dos de las translocaciones constitucionales
recurrentes t(11;22)(q23;q11), en las que las repeticiones palindrómicas
ricas en AT (PATTR) son responsables del reordenamiento (119–124) y t (4;
8) (p16; p23), en los que los LCR del grupo de genes del receptor olfativo
median la translocación a través de NAHR (125, 126).
Una publicación más reciente estudió a tres pacientes con una
translocación desequilibrada der(4)t(4;11)(p16.2;p15.4). En los tres
casos, encontraron que los puntos de ruptura ocurrieron dentro de
LCR que se extendían más de 200 kb de longitud y tenían más del 94
% de identidad de secuencia de ADN. Un análisis adicional de otros
dos pacientes previamente informados con la misma translocación
documentó que en todas las translocaciones t(4;11) recurrentes (cinco
de cinco), el reordenamiento había ocurrido por NAHR, mediado por
LCR intercromosómicos. Posteriormente, utilizando métodos
computacionales, analizaron la presencia en todo el genoma de LCR
intercromosómicos de más de 10 kb de longitud y se construyó un
"mapa de translocación recurrente". El mapa predijo la existencia de
~400 LCR intercromosómicos (20 kb de longitud) potencialmente
capaces de actuar como sustratos de recursos humanos y mediar en
translocaciones recurrentes por parte de NAHR.
bases de datos de laboratorio y encontró otros seis ejemplos de translocaciones

recurrentes que informaron puntos de ruptura predichos por el mapa (127). Estos
resultados sugieren que la arquitectura genómica humana juega un papel en las
translocaciones recurrentes.
5.7. Inserción Al interpretar los resultados de aCGH, siempre se debe recordar

Translocaciones que se realiza un análisis comparativo del número de copias y que
las matrices no brindan información sobre la posición o la
orientación del cambio. Se prefiere el término "ganancia" a
"duplicación" porque en algunos casos el intervalo genómico que
muestra una ganancia aparente (en comparación con el control)
no se inserta junto a la secuencia original. En algunos casos, los
segmentos que se duplican pueden insertarse en otra ubicación
genómica, un fenómeno conocido como translocación de
inserción. Estos eventos se consideran raros ya que requieren que
ocurran al menos tres rupturas (a diferencia de una o dos
rupturas requeridas para eliminaciones, duplicaciones o
translocaciones terminales). En esta situación, el uso de
microarreglos es insuficiente para confirmar la ubicación de la
secuencia duplicada,128).
La frecuencia estimada previamente de translocación de inserción fue de
aproximadamente 1:80,000 cariotipos (129, 130). Utilizando aCGH junto con
análisis FISH, se identificaron un total de 40/18.000 casos en los que se había
producido translocación insercional (una frecuencia de alrededor de 1:500) 160
veces mayor que la previamente establecida en la literatura mediante técnicas
de resolución limitada (128).
5.8. Complejo Los reordenamientos genómicos pueden ser complejos. Los ejemplos incluyen
Reordenamientos triplicaciones dentro de duplicaciones, duplicaciones no contiguas, inserciones
en la unión del punto de ruptura de deleciones y duplicaciones, etc. Ahora se
encuentran reordenamientos complejos en numerosos loci en todo el genoma
(revisado por Zhang et al. (131)).
PMD, un trastorno desmielinizante del sistema nervioso central ligado al
cromosoma X, es causado por mutaciones puntuales o reordenamientos
genómicos que involucran elPLP1gene. Previamente, se pensaba que el PMD
asociado conPLP1la duplicación se produjo principalmente a través de
mecanismos de recombinación homólogos y no homólogos acoplados (66, 132
). En 2007, un estudio (83) utilizaron matrices de alta resolución y
secuenciación de puntos de corte para estudiar los reordenamientos de 17
pacientes conPLP1duplicaciones; Cabe destacar que el 65% de las muestras
presentó complejidades, como tramos intercalados de ADN de número de
copias normal en medio de las duplicaciones, triplicaciones dentro de las
duplicaciones, inserciones en las uniones de puntos de ruptura, etc.
Las deleciones en 17p13.3 causan el síndrome de Miller-Dieker. Las
personas con duplicación submicroscópica de la misma región presentan
un mayor riesgo de macrosomía, retraso leve del desarrollo y trastorno
generalizado del desarrollo con una dismorfología facial característica. En
2009, un informe describió siete pacientes
con microduplicaciones, todas no recurrentes, y tres (alrededor del

42%) presentaron reordenamientos complejos (133).
Duplicación de laMECP2El gen en Xq28 es uno de los
reordenamientos más comunes identificados en machos que presentan
retraso en el desarrollo y la duplicación subtelomérica más común (37).
Xq28 muestra una arquitectura genómica intrincada y presenta múltiples
LCR directos e invertidos, lo que causa tanto variación estructural
polimórfica como enfermedad en la población (71, 134, 135). Utilizando
una matriz de oligonucleótidos de ruta de mosaico de 4 Mb, un análisis de
30 pacientes con duplicaciones, incluido elMECP2gen (134), informó haber
encontrado reordenamientos no recurrentes que variaron en tamaño de
250 kb a 2,6 Mb; Se encontraron reordenamientos complejos en el 27% de
los pacientes (seis sujetos mostraron triplicaciones dentro de las
duplicaciones y dos muestras con tramos de segmentos no duplicados
incrustados en la región duplicada). Los reordenamientos complejos en
estas regiones no se describieron previamente, ya que el análisis de
cariotipo y/o las matrices BAC no proporcionaron el nivel necesario de
resolución del genoma humano. El uso de matrices de oligonucleótidos
en mosaico ha permitido la reevaluación de muchas muestras de
pacientes y sugiere que la complejidad prevalece en numerosos
reordenamientos no recurrentes que causan trastornos genómicos.134).
Usando aCGH de alta densidad, se analizaron dos conjuntos de
muestras con reordenamientos que involucraban 17p11.2 o 17p12. El
primer grupo constaba de 14 duplicaciones asociadas a PTLS no
recurrentes (17p11.2) que variaban en tamaño de 3,5 a 19,6 Mb.
Curiosamente, se encontraron reordenamientos complejos en más de la
mitad de esos pacientes (57%). El segundo grupo estaba formado por
siete muestras con reordenamientos previamente identificados que
involucraban la región CMT1A/HNPP (17p12) que presentaba patrones de
amplificación de sonda dependientes de la ligadura multiplex
incompatibles con los reordenamientos mediados por NAHR. Se demostró
que una muestra tenía un reordenamiento complejo y las otras seis
mostraban deleciones exónicas. En ambas cohortes, los datos muestran
que FoSTeS/MMBIR puede generar reordenamientos complejos, que
pueden variar en tamaño desde unos pocos pares de bases hasta
aproximadamente 20 Mb,136).
Cuando se investigaron los reordenamientos no recurrentes
asociados con PTLS, se demostró que más del 50 % eran reordenamientos
complejos. Usando aCGH y análisis de secuencia de punto de ruptura, un
estudio que analizó a 21 individuos con no recurrentePMP22Las CNV
revelaron que varios mecanismos (NHEJ,Alu–Alurecombinación mediada
por FoSTeS/MMBIR) podría ser responsable de generar los
reordenamientos no recurrentes de 17p12 asociados con la neuropatía.
Entre los 21 pacientes, tres (~14%) presentaron deleciones que
involucraban uno o más exones delPMP22gene. Otros siete pacientes
presentaron parcialPMP22deleciones, mostrando que parcialPMP22la
deleción también puede resultar en mutaciones de pérdida de función y
haploinsuficiencia de la proteína PMP22, causando neuropatía.82).
5.9. CNV exónicos Los reordenamientos a menudo se han considerado como deleciones,
duplicaciones, inversiones o translocaciones de grandes bloques de ADN, pero
recientemente se demostró (136) que este podría no ser siempre el caso ya
que los reordenamientos pueden involucrar exones individuales. En algunos
ejemplos presentados en el Subtítulo5.8, los autores informan haber
encontrado pequeños reordenamientos que incluían uno o más exones:
Zhang et al. (136) informaron que el 86 % de las muestras con
reordenamientos en 17p12 tenían CNV exónicas. Al analizarPMP22CNVs, el
34% mostró reordenamientos que involucran uno o unos pocos exones (82).
Utilizando matrices dirigidas a exones de 180 K para examinar
2550 muestras, Cheung et al. informaron 15 casos (0,59%) de
reordenamientos intragénicos que involucran exones de diferentes
genes (FMA58A,PTEN, CREBBP,DLG3, entre otros). Los fenotipos de los
pacientes coincidían con el síndrome descrito para el gen afectado.
Dichos hallazgos se habrían pasado por alto utilizando aCGH no
dirigido al exón y otros métodos de diagnóstico molecular, lo que
reafirma la importancia de utilizar técnicas de alta resolución para
evaluar a pacientes con retraso mental inexplicable y anomalías
congénitas.137, 138).
6. Observaciones finales
A lo largo de este capítulo, se describieron los métodos utilizados para estudiar los reordenamientos
genómicos relacionados con enfermedades humanas (128) (bandas cromosómicas, FISH, microarrays), y
su capacidad para resolver cambios en el genoma humano de tamaños cada vez más pequeños,
incluidos exones de solo unos pocos cientos de pares de bases. Se han enumerado el uso del análisis del
genoma humano de alta resolución en el diagnóstico clínico y sus limitaciones (p. ej., información
posicional y de orientación). Curiosamente, existe una relación directa entre los avances tecnológicos y la
capacidad de resolver los cambios del genoma y el descubrimiento y descripción de los mecanismos
(NAHR, NHEJ y FoSTeS/MMBIR) que pueden ser causales de dichos cambios genómicos y, por lo tanto, la
comprensión de nuestro genoma. Ahora sabemos que NAHR generalmente conduce a reordenamientos
recurrentes del mismo tamaño en diferentes pacientes, lo cual se espera considerando que este
mecanismo refleja la arquitectura de la región y el requerimiento de sustratos de RH. Por otro lado, NHEJ
o FoSTeS/ MMBIR pueden generar reordenamientos no recurrentes, siendo este último responsable de
producir alteraciones complejas (p. ej., triplicaciones dentro de duplicaciones), que rara vez se
reportaban antes del uso de CGH de alta resolución. También se ha sugerido que FoSTeS/MMBIR puede
tener un papel en el proceso evolutivo molecular que subyace a los eventos, como el barajado de
exones, la fusión/fisión de genes y la acumulación de exones, y por lo tanto representa un mecanismo
importante para la evolución de nuestro genoma. que rara vez se informaron antes del uso de CGH de
alta resolución. También se ha sugerido que FoSTeS/MMBIR puede tener un papel en el proceso
evolutivo molecular que subyace a los eventos, como el barajado de exones, la fusión/fisión de genes y la
acumulación de exones, y por lo tanto representa un mecanismo importante para la evolución de
nuestro genoma. que rara vez se informaron antes del uso de CGH de alta resolución. También se ha
sugerido que FoSTeS/MMBIR puede tener un papel en el proceso evolutivo molecular que subyace a los
eventos, como el barajado de exones, la fusión/fisión de genes y la acumulación de exones, y por lo
tanto representa un mecanismo importante para la evolución de nuestro genoma.

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Med Genet 43, 478–489. La naturaleza compleja del derecho constitucional
104. Ballif, BC, Sulpizio, SG, Lloyd, RM, et al.(2007) de novotranslocaciones aparentemente
La utilidad clínica de la cobertura equilibradas en pacientes que presentan
subtelomérica mejorada en array CGH,Soy J fenotipos anormales,J Med Genet 42, 8–16.
Med Genet A 143A, 1850–1857. 118. Baptista, J., Mercer, C., Prigmore, E., et al.
105. Rickman, L., Fiegler, H., Shaw-Smith, C., et al.(2006) (2008) Mapeo de puntos de ruptura y matriz
Detección prenatal de reordenamientos CGH en translocaciones: comparación de una
cromosómicos desequilibrados por array CGH, J cohorte fenotípicamente normal y anormal,Soy
Med Genet 43, 353–361. J Hum Genet 82, 927–936.
106. Bi, W., Breman, AM, Venable, SF, et al. (2008) 119. Zackai, EH y Emanuel, BS (1980) Translocación
Diagnóstico prenatal rápido utilizando amniocitos recíproca específica del sitio, t(11;22) (q23;q11),
no cultivados y matriz de oligonucleótidos CGH, en varias familias no relacionadas con
Diagnóstico Prenatal 28, 943–949. disyunción meiótica 3:1,Soy J Med Genet 7,
107. Simovich, MJ, Yatsenko, SA, Kang, SH, et al.(2007) 507–521.
Diagnóstico prenatal de una microdeleción 9q34.3 120. Shaikh, TH, Budarf, ML, Celle, L., Zackai,
por array-CGH en un feto con translocación EH y Emanuel, BS (1999) Puntos de ruptura
aparentemente equilibrada,Diagnóstico prenatal agrupados en 11q23 y 22q11 y mala
27, 1112–1117. segregación meiótica 3:1 en múltiples
108. Van den Veyver, IB, Patel, A., Shaw, CA, et al.(2009) familias t(11;22) no relacionadas,Soy J Hum
Uso clínico de matriz de hibridación genómica Genet 65, 1595–1607.
comparativa (aCGH) para el diagnóstico prenatal 121. Kurahashi, H. y Emanuel, BS (2001) Long AT-
en 300 casos,Diagnóstico prenatal 29, 29–39. rich palindromes and the constitucional
109. Lupski, JR (2007) Reordenamientos genómicos y t(11;22) breakpoint,Hum Mol Genet 10,
enfermedad esporádica,Nat Genet 39, S43-47. 2605–2617.
110. Jacobs, PA, Browne, C., Gregson, N., Joyce, 122. Edelmann, L., Spiteri, E., Koren, K., et al. (2001)
C. y White, H. (1992) Estimaciones de la frecuencia Los palíndromos ricos en AT median la
de anomalías cromosómicas detectables en recién translocación constitucional t(11;22),Soy J Hum
nacidos no seleccionados utilizando niveles Genet 68, 1–13.
moderados de bandas,J Med Genet 29, 103–108. 123. Ashley, T., Gaeth, AP, Inagaki, H., et al. (2006)
111. Shah, VC, Murthy, DS y Murthy, SK (1990) Recombinación meiótica y proximidad espacial
Estudios citogenéticos en una población en la etiología de la t recurrente (11;22),Soy J
sospechosa de tener anomalías Hum Genet 79, 524–538.
cromosómicas.indio j pediatra 57, 235–243. 124. Kato, T., Inagaki, H., Yamada, K., et al.(2006) La
112. Kenue, RK, Raj, AK, Harris, PF y el-Bualy, MS variación genética afectade novofrecuencia de
(1995) Análisis citogenético de niños con translocación,ciencia 311, 971.
sospecha de anomalías cromosómicas,J 125. Giglio, S., Calvari, V., Gregato, G., et al. (2002) Las
Trop Pediatr 41, 77–80. inversiones submicroscópicas heterocigotas que
113. Goud, MT, Al-Harassi, SM, Al-Khalili, S. involucran grupos de genes de receptores
A., Al-Salmani, KK, Al-Busaidy, SM y Rajab, A. olfativos median la translocación recurrente t (4;
(2005) Incidencia de anomalías 8) (p16; p23),Soy J Hum Genet 71, 276–285.
cromosómicas en el Sultanato de Omán, 126. Maas, NM, Van Vooren, S., Hannes, F., et al.(
Arabia Med J 26, 1951–1957. 2007) La t(4;8) está mediada por
114. Kim, SS, Jung, SC, Kim, HJ, Luna, H. recombinación homóloga entre grupos de
R. y Lee, JS (1999) Anomalías cromosómicas en genes de receptores olfativos, pero otras
una población referida por sospecha de translocaciones 4p16 ocurren al azar,Cuentas
aberraciones cromosómicas: un informe de de ginetas 18, 357–365.
4117 casos,J Korean Med Sci 14, 373–376. 127. Ou, Z., Stankiewicz, P., Xia, Z.,et al.(2011)
115. Warburton, D. (1991)de novoreordenamientos Observación y predicción de translocaciones
cromosómicos equilibrados y cromosomas marcadores humanas recurrentes mediadas por NAHR
adicionales identificados en el diagnóstico prenatal: entre cromosomas no homólogos. Genoma
importancia clínica y distribución de los puntos de corte, Res 21, 33–46.
Soy J Hum Genet 49, 995–1013. 128. Kang, SH, Shaw, C., Ou, Z., et al.(2010)
116. Sahoo, T., Cheung, SW, Ward, P., et al.(2006) Translocación de inserción detectada mediante
Diagnóstico prenatal de anomalías cromosómicas confirmación FISH de resultados de
mediante hibridación genómica comparativa hibridación genómica comparativa de matriz
basada en matriz,Genet Med 8, 719–727. (aCGH),Soy J Med Genet A 152A, 1111–1126.
129. Fryns, JP, Kleczkowska, A. y Kenis, H. (1984) 134. Carvalho, CM, Zhang, F., Liu, P., et al. (2009)
de novoreordenamiento cromosómico Reordenamientos complejos en pacientes con
complejo (CCR) en un niño con retraso duplicaciones deMECP2puede ocurrir por bloqueo
mental severo,Ana Genet 27, 62–64. de horquilla y cambio de plantilla,Hum Mol Genet
130. Van Hemel, JO y Eussen, HJ (2000) 18, 2188–2203.
Inserciones intercromosómicas. 135. Small, K., Iber, J. y Warren, ST (1997) La
Identificación de cinco casos y revisión,Hum eliminación de Emerin revela una inversión del
gineta 107, 415–432. cromosoma X común mediada por
131. Zhang, F., Carvalho, CM y Lupski, JR (2009) repeticiones invertidas,Nat Genet 16, 96–99.
Reordenamientos cromosómicos y genómicos 136. Zhang, F., Khajavi, M., Connolly, AM, Towne,
humanos complejos,Tendencias Genet 25, CF, Batish, SD y Lupski, JR (2009) El
298–307. mecanismo FoSTeS/ MMBIR de replicación
132. Woodward, KJ, Cundall, M., Sperle, K., et al.( del ADN puede generar reordenamientos
2005) Las duplicaciones heterogéneas en complejos genómicos, génicos y exónicos
pacientes con enfermedad de Pelizaeus- en humanos.Nat Genet 41, 849–853.
Merzbacher sugieren un mecanismo de 137. Boone, PM, Bacino, CA, Shaw, CA,et al.Detección
recombinación homóloga y no homóloga de cambios en el número de copias exónicas
acoplada,Soy J Hum Genet 77, 966–987. clínicamente relevantes mediante array CGH,Hum
133. Bi, W., Sapir, T., Shchelochkov, OA, et al. Mutat 31, 1326–1342.
(2009) AumentoLIS1expresión afecta el 138. Conrad, DF, Pinto, D., Redon, R., et al. (2009)
desarrollo del cerebro humano y del ratón, Orígenes e impacto funcional de la variación del
Nat Genet 41, 168–177. número de copias en el genoma humano,
Naturaleza 464, 704–712.

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¿Qué nos han enseñado los estudios de trastornos

Alexandra D. Simmons, Claudia MB Carvalho y James R. Lupski

Esto se hará evidente por los numerosos ejemplos de alteraciones genómicas

Las conformaciones pueden proporcionar regiones monocatenarias que pueden dar

transposón- Líneas 6kb 850.000 21

Bloques de tándem Centrómeros, telómeros, cortos ? ? 8

Los datos de centrifugación de equilibrio de sedimentación proporcionaron la

y la formación de estructuras de ADN no B. Por ejemplo: las repeticiones

3.1. NAHR NAHR es un mecanismo de recombinación homóloga. La HR es un tipo de

una proteína con actividad histona H3K4 trimetilasa. El motivo se definió

3.2. NHEJ NHEJ es un mecanismo de reparación no replicativo y no HR. En células de

3.3. FOSTES/MMBIR Estudios deE. colimuestran que la inhibición de la replicación conduce a la

De acuerdo con el modelo FoSTeS, una muesca (o lesión de

Ensayo del sistema lac enE. coliproporcionó un modelo de amplificación en el

La principal desventaja de esta tecnología es que se trata de una metodología

Recientemente, se utilizaron plataformas de secuenciación de próxima

interrogando CNV totales Número medio de

ROMA 85K 221 11 (12)

Oligonucleótido aCGH 42×103k 11,700 ~1117–1488 (138)

y apuntar a regiones genómicas conocidas que exhiben CNV. La muestra de

dependen del uso de mitógenos agregados artificialmente, un paso de

La evidencia acumulada respalda la idea de que muchos de nosotros

5.2. Subtelomeric El retraso en el desarrollo, el retraso mental, las características dismórficas y

5.3. Reordenamientos Los análisis genéticos de diagnóstico convencionales generalmente realizan

En un estudio publicado en 2008 (97), se evaluó mediante CMA a un total de 638

la tasa de muestras de sujetos remitidos con una indicación de “sospecha

5.4. Genética prenatal Se han observado reordenamientos cromosómicos equilibrados de novo en

Se evaluó la viabilidad del uso de CGH de matriz específica para la

luego se usó para descubrir una deleción submicroscópica de 2,7 Mb de una

5.5. Aparentemente El uso de micromatrices de ADN ha demostrado que las "translocaciones

5.6. Recurrente NAHR se considera principalmente como un mecanismo que conduce a

bases de datos de laboratorio y encontró otros seis ejemplos de translocaciones

5.7. Inserción Al interpretar los resultados de aCGH, siempre se debe recordar

con microduplicaciones, todas no recurrentes, y tres (alrededor del

exones, la fusión/fisión de genes y la acumulación de exones, y por lo tanto representa un mecanismo

acumulación de exones, y por lo tanto representa un mecanismo importante para la evolución de

eventos, como el barajado de exones, la fusión/fisión de genes y la acumulación de exones, y por lo

tanto representa un mecanismo importante para la evolución de nuestro genoma.

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