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UNIVERSIDAD DE CARTAGENA
FACULTAD DE INGENIERÍA
2021
REVISIÓN SISTEMÁTICA DE PRODUCCIÓN DE BIOETANOL A PARTIR DE
LOS AZUCARES FERMENTABLES MEDIANTE HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE
LAS CÁSCARAS DE FRUTAS: MANGO, PIÑA Y BANANO
Directora:
Ingeniera Química
UNIVERSIDAD DE CARTAGENA
FACULTAD DE INGENIERÍA
CARTAGENA DE INDIAS, D. T. Y C.
2021
Nota de aceptación:
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Firma del presidente de jurado
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Firma del jurado 1
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Firma del jurado 2
Nelson Mandela
A mis padres, por cuidarme, por todo el apoyo incondicional y la dedicación que me
brindaron. A mis hermanos, por estar siempre en las buenas y malas.
Marcelo Bielsa
A mis padres, por confiar en mí en todo momento, por brindarme lo mejor de ellos
incondicionalmente.
En primera instancia, le agradezco a Dios por su amor y la bendición de cumplir esta meta.
A nuestra estimada profesora y directora de tesis, Gesira De Avila Montiel por su
paciencia, dedicación, tiempo y pertinentes anotaciones en cada momento.
Agradezco a mis padres por su apoyo incondicional en especial a mi madre por toda la
confianza depositada y el orgullo de saber lo que puedo lograr por y para ella. A mi abuela
y mis sobrinos por ser una fuente de inspiración.
A la Universidad de Cartagena, por concederme la oportunidad de formarme y cumplir este
sueño.
A mis amigos, a los que considero hermanos de la vida, por todas las aventuras
experimentadas, en los buenos y malos momentos en especial a “la cantera” por tantos
recuerdos agradables e inolvidables.
Al futbol, en el que encontré una gran motivación, apoyo y complemento ayudándome
incluso a pagar parte de mis estudios y por cruzarme con maravillosas amistades, de mi
programa (Familia Selección de Futbol IQ) , del alma mater (Futsala U de C), con quien
incluso llegué a representar a nivel interuniversitario regional, teniendo un maestro
futbolístico inolvidable, sobre todo por los valores y enseñanzas transmitidas a nivel
personal, para la vida, siempre enseñándonos a ser mejores personas, Huberto Escobar.
Y a todos los que de alguna manera contribuyeron a hacerlo posible.
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LISTA DE ANEXOS
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RESUMEN
Este trabajo se llevó a cabo con el objetivo de hacer una revisión sistemática de literatura,
sobre la producción de bioetanol a partir de los azúcares fermentables mediante la hidrólisis
enzimática de las cáscaras de mango, banano y piña. Con el fin de realizar la investigación,
se planteó una metodología exhaustiva, la cual inicia con tres preguntas de investigación
dirigidas al cumplimiento de los objetivos específicos del proyecto; se aplicó un método de
búsqueda, cribado, extracción y análisis de literatura teniendo en cuenta los parámetros de
(Kitchenham, 2004). Se seleccionaron estudios publicados entre los años 2011 y 2021
escritos en inglés, además, se establecieron criterios de inclusión, exclusión y de calidad
con el fin de minimizar el riesgo al sesgo de información. Entre las bases bibliográficas
utilizadas, se encuentran: Science Direct, Scopus, EBSCO y Springer link. En primera
instancia se obtuvieron 4962 artículos, de los cuales 3253 fueron preseleccionados, 559
resultaron del cribado del estudio y finalmente, se seleccionaron 26 artículos, para redactar
los resultados. En la primera fase se evidenció la composición química de las cáscaras de
mango, banano y piña. Esta última fruta presentó la mayor cantidad de lignocelulosa en los
artículos revisados, con una composición del 57%. Posteriormente, se realizó una
comparación de diferentes condiciones de operación presentes en las investigaciones
seleccionadas, para la obtención de azúcares reductores por medio de hidrólisis enzimática.
Los valores óptimos de operación encontrados en la literatura fueron con un pH entre 5 y 6,
mientras que la temperatura más común fue 50 °C. Posteriormente, se recopilaron datos de
estudios sobre la producción de bioetanol a partir de azúcares reductores. Los mayores
rendimientos obtenidos en las investigaciones para cada fruta respectivamente fueron: el
banano (32.4 g/L), seguidos de la piña con 10.43 g/L y el mango con 0,44 g/g de glucosa.
Finalmente, los datos obtenidos referentes a composición, cuantificación de azúcares
reductores y obtención de bioetanol, brindan la posibilidad de seguir optimizando
metodologías de producción de biocombustibles a partir de este tipo biomasas, debido a que
proporciona un amplio panorama de las condiciones de operación más eficientes y optimas
a la hora de poner en marcha este proceso.
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ABSTRACT
This work was carried out with the objective of making a systematic literature review on
the production of bioethanol from fermentable sugars through the enzymatic hydrolysis of
mango, banana and pineapple peels. In order to carry out the research, an exhaustive
methodology was proposed, which begins with three research questions aimed at fulfilling
the specific objectives of the project; A literature search, screening, extraction and analysis
method was applied taking into account the parameters of (Kitchenham, 2004). Studies
published between 2011 and 2021 written in English were selected, in addition, inclusion,
exclusion and quality criteria were established in order to minimize the risk of information
bias. Among the bibliographic databases used are: Science Direct, Scopus, EBSCO and
Springer link. In the first instance, 4962 articles were obtained, of which 3253 were
preselected, 559 resulted from the screening of the study and finally, 26 articles were
selected, to write the results. In the first phase, the chemical composition of the mango,
banana and pineapple peels was evidenced. This last fruit presented the highest amount of
lignocellulose in the reviewed articles, with a composition of 57%. Subsequently, a
comparison was made of different operating conditions present in the selected
investigations, to obtain reducing sugars by means of enzymatic hydrolysis. The optimal
operating values found in the literature were with a pH between 5 and 6, while the most
common temperature was 50 ° C. Subsequently, data from studies on the production of
bioethanol from reducing sugars were collected. The highest yields obtained in the
investigations for each fruit respectively were: banana (32.4 g / L), followed by pineapple
with 10.43 g / L and mango with 0.44 g/g of glucose. Finally, the data obtained regarding
composition, quantification of reducing sugars and obtaining bioethanol, provide the
possibility of continuing to optimize biofuel production methodologies from this type of
biomass, since it provides a broad overview of the most efficient operating conditions and
optimal when starting this process.
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1. INTRODUCCIÓN
Por lo anterior, se han iniciado diferentes investigaciones que representan una alternativa en
búsqueda de soluciones basadas en energías sostenibles y respetuosas con el medio
ambiente (Adewuyi, A. 2020) como las biomasas y otras fuentes orgánicas que han
promovido la producción de bioetanol como una alternativa clara a los combustibles fósiles
(Zentou et al., 2019). Tal es el caso de un estudio realizado a nivel nacional sobre la
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hidrólisis Endo-enzimática para la producción de etanol a partir de frutas del banano (Bravo
et al., 2015). Otro estudio analizó la hidrólisis enzimática a altas temperaturas para la
obtención de azucares fermentables y la posterior obtención de etanol en presencia de
levaduras, evaluando el efecto de la concentración de etileno sobre la hidrólisis. El estudio
brinda información sobre las condiciones óptimas de tratamiento de esta clase de cultivos,
sin embargo, abre la puerta a nuevas investigaciones que permitan aumentar el rendimiento
obtenido enfatizando en la optimización del proceso hidrolítico (Bravo et al., 2015). Estos
resultados han abierto nuevas direcciones para la investigación y desarrollo en el país
donde se planteen rutas metodológicas de bajo costo y alto rendimiento en la obtención de
biocombustibles, tal como se plantean en las investigaciones reportadas y clasificadas en la
actual revisión, que sirven de guía para minimizar el impacto medioambiental por
acumulación de residuos agrícolas a nivel regional y nacional donde se encuentren cultivos
de banano, mango y piña, brindando una importante alternativa de solución a una de las
problemáticas ambientales más complicadas de combatir en la agricultura colombiana. En
este sentido la presente investigación realiza una búsqueda exhaustiva y clasificación
sistemática que permite comparar distintas condiciones de tratamiento y resultados hallados
sobre las principales metodologías aplicadas a biomasas frutícolas, en sus etapas de
hidrólisis para la obtención de azucares y posterior fermentación alcohólica.
La investigación está directamente relacionada con las líneas temáticas del grupo de
Investigación en Diseño de Procesos y Aprovechamiento de Biomasas - IDAB del
programa de Ingeniería Química de la Universidad de Cartagena, en el área de Producción
de Biocombustibles, donde se plantea una solución para el manejo de subproductos del
banano, mango y piña, después de ser procesada a nivel agroindustrial, fortaleciendo las
bases de aprovechamiento de residuos con el planteamiento de una evaluación teórica de
las condiciones de operación dadas para la producción de biocombustibles, contribuyendo
así en la ampliación de la literatura actual y aportando bases para futuras investigaciones,
generando un impacto científico, que demuestra la relevancia de la investigación dentro del
campo profesional de la ingeniería química y en el campo de desarrollo de la agricultura
local, regional y nacional. Cabe destacar que el desarrollo de esta investigación resulta
económicamente accesible por los recursos disponibles del programa de Ingeniería Química
de la Universidad de Cartagena, que permiten el acceso a las bases de datos de la
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universidad sin restricción alguna garantizando un aporte significativo en la economía de la
búsqueda de material bibliográfico que soporta la metodología de la investigación
presentada.
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2. OBJETIVOS
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3. ALCANCE
La presente investigación fue realizada por medio de una revisión sistemática de fuentes
bibliográficas, donde se estudiaron diferentes metodologías de producción de bioetanol a
partir de biomasas de banano, mango y piña, recolectados de las bases de datos de la
Universidad de Cartagena en lugares propios y predispuestos por los autores de la
investigación, como medida de prevención del contagio con el Covid 19.
La investigación fue llevada a cabo durante 6 meses, la cual constó de dos etapas de
ejecución para lograr los objetivos establecidos en este documento. La primera etapa
incluyó la búsqueda, recolección, filtrado y clasificación del material bibliográfico,
mientras que en la etapa posterior se registró el análisis de la información clasificada en
tablas de resultados específicos y relacionados con cada objetivo del estudio bibliográfico.
El desarrollo del proyecto se basa en los conceptos que abarcan la producción de bioetanol
a partir de los azúcares reductores obtenidos por medio de hidrólisis enzimática de las
biomasas estudiadas. Por lo anterior es pertinente apuntar la investigación a los datos en la
literatura sobre composición química de las cascaras de mango, piña y banano; la hidrólisis
enzimática y la fermentación de los azúcares obtenidos.
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4. MARCO REFERENCIAL
4.1.1. Biocombustible
4.1.2. Bioetanol
4.1.3. Azúcares
Los azúcares, también conocidos como glúcidos, son un grupo de biomoléculas orgánicas
predominantes en la naturaleza (Sánchez et al., 2010).
Son azúcares que contienen el grupo carbonilo intacto, y que por medio de este pueden
reaccionar como agentes reductores (donadores de electrones) con otras moléculas que
actuarán como agentes oxidantes (receptores de electrones). Esta característica permite
determinar la concentración de una solución de azúcar calculando la cantidad de agente
oxidante que es reducido (Chintagunta et al., 2017).
4.1.5. Celulosa
Compuesto que está constituido por monosacáridos D-glucosa, unidas por enlaces
glucosídicos (Fengel & Wegener, 1984), los cuales son de relevancia en la fermentación.
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La celulosa contiene una estructura cristalina y otra amorfa. Las cepas de celulosa se
encuentran en grupos llamados fibrillas de celulosa. Generalmente, estas fibrillas de
celulosa son independientes y enlazadas de manera endeble a través de uniones de
hidrógeno (Riaño et al., 2010).
4.1.6. Hemicelulosa
4.1.7. Lignina
También conocido como mango (Figura 1), es el miembro más conocido de las
Anacardiáceas, es un árbol de tamaño mediano, de 10 – 30 metros de altura. El tronco es
básicamente recto, cilíndrico y posee un diámetro entre 75- 100 cm, el cual posee una
corteza de color gris, las hojas son alternas y se encuentran distribuidas a lo largo de las
ramas. La fruta posee una forma variable, generalmente es ovalada, de 4 a 20 cm de largo y
2 a 10 cm de grueso, posee color verde o amarillo cuando está maduro. La carne es de color
amarillo o anaranjado y pulposa (Martínez et al., 2008).
21
Figura 1. Mangifera indica l.
22
4.1.10. Musa paradisiaca
El banano es una planta herbácea de gran tamaño que posee un pseudotallo, sin embargo,
puede a medir hasta 8 metros. Es una de las frutas más consumida del mundo (Molina,
2016). El fruto es pulposo de textura suave, formado por tres carpelos, uniéndose para
formar el estilo y el estigma. Posee forma de arco cuando es reciente y paulatinamente en
forma de cilindro cuando va aumentando su diámetro. La fruta se desarrolla entre 70 y 90
días (Fagiani & Tapia, 2007).
Es un proceso que requiere como catalizador enzimas denominadas celulasas, cuyo objetivo
es la degradación de la celulosa. Realizar una etapa de pretratamiento facilita el desarrollo
de hidrólisis enzimática. La mayoría de procesos tienen un primordial interés por los
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azúcares derivados de la celulosa, no obstante, los estudios en la actualidad se inclinan por
el aprovechamiento integral de la biomasa, por lo que es importante la obtención de otros
azúcares derivados de la hemicelulosa, induciendo al uso de otros tipos de enzimas que
actúen sobre dichas sustancias (Sánchez et al., 2009).
4.1.12. Fermentación
4.1.14. Destilación
Es un proceso físico que separa los componentes de una mezcla líquida en base a sus
diferentes puntos de ebullición o presiones de vapor con el fin de purificar un componente
en específico (Íñiguez et al., 2010).
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Figura 4. Destilación simple
Es una técnica que se usa en una fase móvil (gas) para hacer pasar una mezcla de sustancias
volátiles a lo largo de una columna que contiene a la fase estacionaria, estas columnas
tienen dimensiones variables y operan a temperaturas entre los 50 y 300 °C. La fase móvil
es un gas inerte que se conoce como gas transportador y arrastra a las sustancias gaseosas a
través de la columna. La separación de los componentes del soluto se lleva a cabo por la
diferencia en las presiones de vapor de los solutos individuales y las interacciones que
forman las diferentes moléculas con la fase estacionaria. De esta manera, un soluto más
volátil eluye más rápidamente que uno menos volátil. La identificación del soluto se realiza
teniendo en cuenta el tiempo de retención a medida de que estos son efluidos del gas que
los transporta en la columna (González et al., 2015).
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4.1.16. Panorama de los cultivos de mango, piña y banano en Colombia
26
4.2. Antecedentes
Nivel local
Nivel Nacional
27
la destilación. Los resultados mostraron que la fermentación sumergida obtuvo los mejores
resultados para la obtención de bioetanol. Además, el rango de pH y la temperatura para el
óptimo rendimiento de la producción de etanol estuvieron entre 3,5-8,5 y 78°C,
respectivamente. Las concentraciones máximas de etanol obtenidas fueron 9,32, 15,96 y
13,90 mg/L para las cáscaras de limón, naranja y mandarina respectivamente (Medina et
al., 2014).
Nivel Internacional
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Bello et al., investigaron el uso de la microfiltración como proceso de separación de sólidos
en suspensión en la pervaporación de bioetanol producido por residuos de cultivos de
banano. En la universidad de la región de Joinville (Brasil) Manejaron la composición del
caldo fermentativo puesto que influyó en la separación, y el uso de diferentes sustratos
conduce a una revalorización del proceso, aunque esté bien establecido. Por tanto, se
estudió la pervaporación de etanol utilizando membranas de polidimetilsiloxano con
mezclas binarias (etanol y agua) así como con caldo fermentativo. Se comparó el
pretratamiento del caldo fermentativo a través de microfiltración con su centrifugación.
Lograron establecer la reducción del caudal de permeado, sin embargo, el aumento de
parámetros como el factor de enriquecimiento y la concentración de etanol en el permeado
también se observó cuando se empleó la microfiltración, tanto en comparación con la
centrifugación como con la mezcla binaria (Bello et al., 2012).
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58.8, 81.6 y 84.5%, respectivamente. Debido a que la sacarificación y la fermentación se
llevan a cabo en el mismo recipiente en la alternativa SSF, y no se observaron diferencias
significativas de SSF y PSSF en la concentración de etanol (Carrillo-Nieves et al., 2015).
Cabral et al., estudiaron el potencial de las fibras de cáscara de coco verde como materia
prima para la producción de bioetanol. (Brasil). Las fibras de coco se pretrataron mediante
un método alcalino, se llevó a cabo la hidrólisis enzimática y se sometieron a fermentación
de etanol con Saccharomyces cerevisiae. A pesar de la importante pérdida de celulosa
(4,42% en relación con la fibra y 17,9% con respecto al contenido de celulosa original), el
pretratamiento promovió una eficiente extracción de la lignina (80%), dando lugar a que las
fibras de coco sea una alternativa posible para estudios de producción de etanol segunda
generación. La hidrólisis enzimática transformó cerca del 90% de los azúcares y la
fermentación consumió el 81% del sustrato, lo que condujo a una eficiencia de conversión
de azúcar a etanol del 59,6%. Estos resultados señalaron que esta biomasa es una
alternativa prometedora a la producción de bioetanol (Cabral et al., 2016).
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Conesa et al., estimaron el empleo de microondas como pretratamiento para mejorar la
hidrólisis enzimática de los residuos industriales de piña para la producción de bioetanol.
En la universidad politécnica de Valencia (España). Se aplicaron diferentes potencias de
microondas en un horno de microondas provisto de una placa giratoria (LGMH63340F /
MH6340FS) con una frecuencia de 2,45 GHz (10.625, 8.5, 6.375, 4.25 y 2.125 W/g) y
tiempos de exposición (1-20 min) a la parte sólida del residuo antes de hidrólisis
enzimática. La termografía infrarroja se utilizó para evaluar la evolución de la temperatura,
y las modificaciones estructurales fueron evaluadas por Cryo-SEM. También, se
determinaron el contenido de azúcar y los inhibidores de la fermentación (fenoles, furfural
e hidroximetilfurfural). Concluyeron que el uso de microondas incrementa el rendimiento
de azúcar siempre que se usen poderes intermedios (hasta 6.375 W/g). Sin embargo, las
altas potencias y los tratamientos más largos dan como resultado la degradación del azúcar
y/o una disminución en la eficiencia del proceso de hidrólisis enzimática (Conesa et al.,
2016).
Nivel Nacional
31
aplicaron estas condiciones en experiencias para evaluar la influencia del aumento de
celulosa hidrolizable, usando 6%; 8% y 10% de celulosa disponible con rendimientos de
sacarificación de 74%, 42% y 16% (Arismendy et al., 2019).
Por otra parte, para el año 2020, una investigación realizada en el Instituto Politécnico
Colombiano en la ciudad de Medellín, publico los resultados obtenidos en la evaluación de
la producción de etanol a partir de yuca fresca mediante el uso de enzimas reductoras de
viscosidad y enzimas hidrolizantes de almidón en forma granular utilizando la estrategia de
proceso de integración en forma simultánea de la hidrólisis y la fermentación. En el estudio
se evaluó el efecto del pH, carga enzimática y la cáscara sobre la producción de etanol. Se
alcanzaron concentraciones de etanol de 85 g/l que equivalen a rendimientos del 100%. Es
posible producir etanol mediante la estrategia de proceso HEFS usando enzimas
degradantes de la pared celular, que permiten la reducción de la viscosidad de las
suspensiones de yuca y el uso de enzimas que hidrolizan los gránulos de almidón sin la
necesidad de realizar el proceso a condiciones convencionales de licuefacción
(temperaturas mayores a 90°C). (Castaño, 2020).
Nivel Internacional
32
producción con tecnologías nuevas, limpias, innovadoras y eficientes desde la escala
laboratorio, hasta llevarle a escala industrial con el fin de ayudar al medio ambiente y
fortalecer la economía nacional, tomando de referencia a las grandes potencias en la
producción de bioetanol (Janhavi et al., 2017)
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alcanzó 112 Lt − 1 de etanol y raquis 103 Lt − 1. Las condiciones que llevaron a lograr la
producción de etanol fue realizando el proceso con alta carga de sólidos, baja dosificación
de enzimas, bajo inóculo de levadura y sin suplementos de sales minerales (Guerrero et al.,
2018).
Carrillo et al., con apoyo del Clúster de Bioalcoholes, Centro Mexicano de Innovación en
Bioenergía (Cemie-Bio) en México, analizaron los potenciales de residuos lignocelulósicos
agroindustriales en México para la producción eficiente de bioetanol de segunda generación
utilizando bioprocesamiento consolidado. Se desarrolló la experiencia con varios procesos
alternativos para la producción de bioetanol a partir de una gran variedad de desechos
agroindustriales (AIW), pero los altos costos económicos de estas tecnologías y la
composición de sustrato variable limitan su implementación a escala comercial. La
producción de bioetanol de segunda generación se ha investigado cada vez más en los
últimos años y, hasta el momento, es el enfoque de fermentación más prometedor para la
producción de bioetanol. A pesar de que México se ubica como uno de los principales
países productores de alimentos en todo el mundo con 818 productos agroalimentarios, 71
de los cuales ocupan el primer lugar por volumen de producción a nivel internacional, es
necesario incorporar estrategias y acciones específicas para la gestión de los desechos
agroindustriales (AIW) (Carrillo et al., 2019).
Tan et al., Estudiaron la composición de azúcares y minerales del jugo de fronda de banano
(BFJ) y se evaluaron los efectos de la concentración de BFJ, la adición de fuentes de
nitrógeno y el pH. El estudio realizado en la Escuela de Tecnología Industrial de la
Universidad de Sains en Malasia, encontró que las hojas de banano contenían azúcares
potenciales para la obtención de etanol. El BFJ al 80% (v / v) complementado con extracto
de levadura a 15 g/l con un pH óptimo a 6,8 aumentó con éxito la concentración de
bioetanol hasta 42,47 g/l. Las condiciones de fermentación optimizadas en el matraz de
agitación se ampliaron hasta un biorreactor de 2 a 1, la concentración de bioetanol que se
obtuvo en el sistema de biorreactor fue de 45,75 g/l, que es 0,33 g de etanol / g azúcar o
65% del rendimiento teórico. Los resultados obtenidos de este estudio mostraron el
potencial de producción de azúcares de BFJ para la posterior producción de bioetanol y una
34
mayor optimización de los parámetros necesita un biorreactor para mejorar la producción
de bioetanol (Tan et al., 2019).
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Kim et al., en el Departamento de Ingeniería Química de la Universidad Kyung Hee en la
República de Corea, propusieron una estrategia de biorrefinería para la coproducción de
combustibles de hidrocarburos líquidos y químicos de biomasa lignocelulósica. Se
maximizó la utilización de biomasa hasta en un 47,8% desde biomasa hasta productos
valiosos, lo cual permite que se pueda incrementar la viabilidad económica del proceso
propuesto. El análisis tecno-económico mostró que el precio mínimo de venta de BO es $
4.21 por galón de gasolina equivalente en la estrategia integrada, lo que indica que es una
alternativa prometedora a los enfoques actuales de producción de biocombustibles (Kim et
al., 2021).
36
5. METODOLOGÍA
37
autores, ajenos a las instalaciones de la Universidad de Cartagena, como medida de
prevención de contagio con el COVID 19.
RQ1 ¿Cuáles son los porcentajes de celulosa, hemicelulosa y lignina en las cáscaras
de piña, banano y mango que se determinan usando técnicas analíticas?
¿Qué tipos de pretratamientos y métodos enzimáticos se utilizan en la extracción de
RQ2 azúcares fermentables de las cáscaras de piña/banano/mango para su conversión en
bioetanol?
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Se escogieron y analizaron los artículos científicos que cumplían con los criterios de
inclusión. Se estableció una búsqueda de información para cada una de las preguntas de
investigación diseñadas. Primero, se hizo una extracción de artículos de las bases de datos
consultadas, con el fin de seleccionar los estudios más destacados, se utilizaron ecuaciones
de búsqueda en Scopus para identificar los artículos de investigación y las revisiones de
literatura sistemática relacionadas con el tema de investigación. Para ello, se manejaron
varios criterios para filtrar el efecto de la búsqueda que son las palabras claves
(“biocombustibles”, “bioetanol”, “cáscara de mango”, “cáscara de piña”, “cáscara de
banano”, “hidrólisis enzimática” para el título o resumen); período de publicación (de
"2011" a "2021" para cobijar el etapa de publicación de 10 años); tipo de documentos
(artículo de investigación, revisiones de literatura); y sobre temas de investigación
(“producción de bioetanol”, “síntesis de bioetanol” y “azúcares reductores”).
Posteriormente, se refinó aún más el resultado de la búsqueda, con áreas/tema
("biotecnología", "biocombustibles”, "gestión de residuos de alimentos”); palabras claves
refinadas ("biocombustibles" y “bioetanol”); tipo de contenido ("tipo de revista" y
"revisiones la literatura"); e idioma ("inglés").
Solo se seleccionaron los artículos que se clasificaron como Q1 y Q2, es decir, en revistas
con alto prestigio internacional. Posteriormente, se realizó una selección de los estudios
enfocados en áreas, tales como: caracterización de la biomasa lignocelulósica de la cáscara
e hidrólisis enzimática de azúcares, rendimiento y calidad del bioetanol. Los análisis de los
artículos se hicieron de forma conjunta hasta llegar a un consenso sobre los estudios más
pertinentes con el tema de investigación. Finalmente, se realizó el diagrama PRISMA
39
(Páramo, 2020), que contiene el procedimiento de selección, exclusión y número de
artículos escogidos de forma definitiva.
CI1. Solo artículos originales y/o artículos de revisión que hayan sido categorizados en Q1
y Q2.
CI2. Artículos publicados en el periodo comprendido entre 2011 – 2021
CI3. Estudios publicados en inglés
CI4. Filtro por palabras, tomando como palabras claves: Mango, Banana, Pineapple, Peel,
Bioethanol, Enzymatic Hydrolisis, Fermentation y los operadores booleanos OR y AND.
CE1. Artículos duplicados existentes en dos bases de datos o diferentes versiones del
mismo estudio
CE2. Artículos cortos, capítulos o reseñas de libros y trabajos presentados en congresos.
CE3. Los artículos publicados en idioma diferente al inglés, español y portugués.
40
CE4. Los artículos publicados antes de 2011.
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Este análisis de topología, facilitó la compilación de datos de los artículos, se revisaron las
hipótesis que intentaron comprobar en el estudio y las nuevas tendencias en la exploración
del tema, está información se presentó en forma de matriz, seguido del proceso de
clasificación de los artículos, con la intención de facilitar el manejo y estudio de datos para
dar respuesta a las preguntas de investigación (RQ).
Se han planteado muchos instrumentos para evaluar la calidad de los estudios, con el fin de
emplearlos en el contenido de las revisiones sistemáticas, entre ellos se encuentran los
diseñados por el “Manual para la elaboración de directrices” de la OMS, 2015 y el “Manual
Cochrane de revisiones sistemáticas de intervenciones”, 2011. Con la ayuda de este
conjunto de herramientas se utilizaron escalas de valoración numérica para varios
elementos de calidad, también se aplicaron listas de verificación donde se formularon
preguntas específicas, como las sugeridas por (Kitchenham y Charters, 2007). Otro método
para determinar la calidad fue el criterio de inclusión/exclusión para separar los estudios
que dieron respuesta a la totalidad de las preguntas de investigación, sugerido por
(Kitchenham y Charters, 2007), además, se extrajeron los resultados de los estudios, que
brindaron una información acerca del estado actual de la producción de bioetanol mediante
hidrólisis enzimática de la cáscara de mango, banano y piña, por tanto, se realizó el proceso
de evaluación de calidad que suministró la lista de estudios relacionados con las preguntas
de investigación.
De acuerdo con los modelos propuestos por (Kitchenham & Charters, 2007), una vez
seleccionados los estudios, fue necesario evaluar la calidad de las investigaciones y
42
contrastarlas de forma cuantitativa, mediante Evaluaciones de Calidad. Por lo tanto, se
definen cuatro criterios de calidad adoptadas por (Kitchenham et al., 2004, Kitchenham et
al., 2009 y Abouzahra, Sabraoui, Afdel, 2020), para la revisión sistemática de literatura en
estudio.
Se manejó una puntuación para cada evaluación de calidad, colocando los siguientes
valores a cada una de las cuatro preguntas: Sí cumple (Y) = 1, Parcialmente cumple (P) =
0.5 y No cumple (N) = 0, y luego sumando los resultados de cada pregunta, para un puntaje
máximo de cuatro (Sari, Tosun & Alptekin, 2019), se tuvieron en cuenta artículos con
puntajes mayor o igual a 2.5.
Los criterios que consisten en preguntas de evaluación de calidad, denotados por la sigla
QA (Quality assessment), para cada clasificación establecida en el análisis de la tipología.
43
QA2.3 ¿El artículo menciona las concentraciones de la enzima utilizada para obtener
azúcares reductores y el tamaño de partícula de la biomasa?
QA2.4 ¿El estudio muestra la cantidad de azúcares reductores obtenidos y como varía con
respecto a la temperatura y pH?k,
44
● Explicación de las contribuciones importantes y conceptos claves que son adecuados
con el tema seleccionado (Lacerda, Petrillo, Pimenta & Guéhéneuc, 2020; Abouzahra,
Sabraoui & Afdel, 2020).
Se manejaron varios criterios propuestos por la OMS, para los estudios de alta calidad; los
artículos de investigación o revisión se evaluaron con rigurosidad científica y si existía
duplicación entre los artículos incluidos, se cotejaron los resultados. Luego, se escogió el
estudio establecido con rigurosidad científica y se mostraron los datos. Si hay una
duplicación importante entre los estudios incluidos en la revisión y si presentan coherencia
en la metodología, se realizó un resumen de las ideas encontradas en el texto. Si entre los
estudios de las revisiones sistemáticas se plantean conceptos de confiabilidad y validez de
los resultados y no hay duplicación se hizo un resumen de las ideas fundamentales de forma
cualitativa y/o cuantitativa (OMS, 2015).
45
5.12. Variables del proceso
En las Tabla 2, se muestran las variables que se tuvieron en cuenta durante el proceso de
investigación y evaluación de la literatura, con las que se realizaron los análisis
comparativos de las distintas experimentaciones y/o metodologías publicadas, enfocadas en
la producción de etanol por medio de hidrolisis enzimática a biomasas de frutícolas.
% v/v
Concentración de enzima Complejo enzimático que actúa en la hidrólisis
mm
Tamaño de partícula Dimensión de la biomasa inicial
Porcentajes de azúcares %
Cantidad de azucares obtenidos
reductores.
Concentración de % v/v
azúcares reductores
totales (ART) (Sustrato)
46
Figura 5. Diagrama de flujo de la metodología
47
6. RESULTADOS: ANÁLISIS Y DISCUSIÓN FINAL
En cumplimiento del primer objetivo del presente estudio, para lograr la caracterización
teórica de los compuestos químicos protagonistas en las biomasas analizadas para la
obtención final de bioetanol, se hizo una revisión sistemática de las caracterizaciones
presentadas por diversos autores a las biomasas de banano, mango y piña. La búsqueda del
material bibliográfico se realizó haciendo uso de las bases de datos principales y del meta
buscador en línea, que permitieron clasificar información concreta de acuerdo a las palabras
claves utilizadas, incluyendo artículos científicos reportados en la literatura nacional e
internacional.
Al finalizar la extracción rigurosa llevada a cabo en cada una las bases de datos, se constató
que existe poca información sobre la composición química de las biomasas utilizadas en el
presente estudio, en especial sobre la cáscara de mango, lo que hace pertinente enfocarse en
el estudio de esta biomasa. Los estudios evidenciaron que estas biomasas son fuentes
potenciales de azúcares reductores.
48
Figura 6. Diagrama de flujo PRISMA para resolver la RQ1.
49
temas de investigación relacionados a la obtención de bioetanol a partir de azúcares
fermentables mediante hidrólisis enzimática de las cáscaras de frutas: mango, piña y
banano.
Figura 7. Publicaciones en el área de caracterización de las biomasas (cáscara de piña, mango y banano).
La evaluación de calidad se realizó con el fin de eliminar sesgos, y procurar que escoger los
artículos más adecuados para dar respuesta a nuestras preguntas de investigación, en la
Tabla 3, se adjuntan los artículos seleccionados para evaluar la calidad.
50
citrus peel waste processing for bioethanol
production (Choi et al., 2014)
Fermentation of pineapple fruit peel wastes for
bioethanol production (Casabar, Unpaprom & Y Y Y Y 4
Ramaraj, 2019)
Industrial ethanol from banana peels for
developing countries: Response surface
Y Y Y Y 4
methodology (Gebregergs, Gebresemati & Sahu,
2016)
Valorization of banana peel waste via in-situ
catalytic pyrolysis using Al-Modified SBA-15 Y Y Y Y 4
(Ozbay et al., 2019)
Assessment of microwave-assisted alkali
pretreatment for the production of sugars from Y Y Y P 3,5
banana fruit peel waste (Tiwari et al., 2018)
Characterization of lignocellulosic fruit waste as an
alternative feedstock for bioethanol production Y Y Y P 3,5
(Sánchez et al., 2014)
Microwave assisted alkali pretreatment of fruit
peel wastes for enzymatic hydrolysis (Tiwari et al., Y Y Y P 3,5
2017)
The potential of mango peel utilization for
cellulose ex‐traction by hydrothermal pretreatment Y Y Y Y 3,5
(Yingkamhaeng & Sukyai. 2014)
51
En la Tabla 4, se presentan cada una de las investigaciones analizadas, para las cuales se
reportan los datos de contenido celulosas, hemicelulosas, glucosas y ligninas, entre otras
estructuras carbonatadas presentes en las cáscaras de los frutos analizados que dan origen a
diversas actividades biológicas que representan los compuestos lignocelulosicos. El cuadro
comparativo muestra un total de cinco estudios de caracterización evidenciados para la
cáscara de banano; los autores reportan los datos obtenidos a través de metodologías de
caracterización como Updegraff y análisis gravimétrico, siendo este último el de mayor
presencia y uso en los análisis de las biomasas frutícolas. Para el caso del Mango y piña, se
presentan las caracterizaciones por gravimetría en tres estudios diferentes para cada
biomasa.
52
Xilosa 1.0
Hemicelulosa 10.50
Cáscara de Banano Celulosa 40.15
Lignina 24.28 Gravimétrico (Ozbay et al.,2019)
Celulosa 35.27 ± 1.02
Cáscara de Banano Hemicelulosa 19.51 ± 0.98 Updegraff (Tiwari et al.,2019)
Lignina 6.68 ± 0.44
Celulosa 11.45
Cáscara de Banano Hemicelulosa 25.52 Gravimétrico (Sánchez et al., 2014)
Lignina 9.82
Celulosa 14.0;
Cáscara de Piña Hemicelulosa 20.2 Gravimétrico (Casabar et al., 2019)
Lignina 1.5
Celulosa 36.27 ± 2.00
Cáscara de Piña Hemicelulosa 22.5 ± 1.84 Gravimétrico (Tiwari et al., 2017)
Lignina 14.68 ± 1.58
Celulosa 25 ± 0.31
Cáscara de Piña Hemicelulosa 28 ± 0. Gravimétrico (Bhatia & Johri, 2016)
Lignina 8 ± 0.07
Celulosa 9.19;;
Cáscara de mango Hemicelulosa 14.51 Gravimétrico (Sánchez et al., 2014)
Lignina 4.25
Celulosa 34.22 ± 2.0
Cáscara de mango Hemicelulosa 17.88 ± 2.01 Gravimétrico (Tiwari et al., 2017)
Lignina 8.38 ± 1.52
Celulosa 38.35
(Yingkamhaeng &
Cáscara de mango Hemicelulosa 13.90 TAPPI
Sukyai, 2014)
Lignina 27.90%
Fuente: Propia.
53
2013) en composición de ligninas, lo que hace más difícil su tratamiento e hidrolisis para la
obtención de biocombustibles
54
Figura 8. Diagrama de flujo PRISMA para resolver la RQ2.
Luego de realizar una profunda extracción en cada una las bases de datos, se puede
observar que la temática sobre los pretratamientos y métodos enzimáticos para la extracción
de azúcares fermentables con las biomasas estudiadas presenta un crecimiento exponencial
en los últimos 10 años. Los estudios más influyentes se encaminan a la producción de
bioetanol, el cual es una alternativa a los combustibles fósiles amigable con el medio
ambiente. La mayoría de las investigaciones sobre el tema, se ubican en la India, Brasil y
Tailandia, como se evidencia en la Figura 9.
55
Figura 9. Publicaciones por país en el área de métodos enzimáticos para la obtención de azúcares reductores.
56
6.2.2. Evaluación de calidad
57
6.2.3. Análisis de condiciones de tratamiento y concentración de azucares
Con el fin de determinar las condiciones óptimas para obtener la mayor cantidad posible de
azúcares reductores, se tuvieron en cuenta en el análisis de la literatura las diversas pruebas
donde se manejan variables, tales como; la cantidad de enzimas, tamaño de partícula de la
biomasa, agitación, pH y temperatura. Además, se tuvieron en cuenta los diferentes
pretratamientos y métodos que implican el uso de distintos complejos de enzimas a nivel
mundial. La Tabla 6, indica la comparación realizada para diferentes estudios hechos con
las cáscaras de banano, mango y piña.
La comparativa muestra los rangos de los valores óptimos de tratamiento, siendo para el
caso de la piña una temperatura oscilante entre 28 y 50 °C máximos, mientras que el pH
mínimo y máximo es de 5.5 y 6, respectivamente. El tiempo en la experimentación de la
obtención de azúcares es muy variable y se verá afectado por la enzima de tratamiento que
este en contacto con la biomasa tratada. El banano por su parte registra condiciones de
58
tratamientos con pH ácidos (5.5) y dependiendo de la enzima que lo trata se puede realizar
una experimentación con pH básicos (8-10), en este tipo de biomasa la temperatura de
operación fue de 50 y 70 °C.
Por otra parte, en esta etapa de la investigación los criterios de búsqueda de la bibliografía
permitieron el estudio de una sola fuente bibliográfica sobre las condiciones de tratamiento
de obtención de azúcares reductores con mango. En el estudio analizado el pH en 5
predomino al igual que la temperatura en 50 °C, además, el tiempo de tratamiento fue de 48
horas para esta biomasa. Finalmente, el reporte de producción de azúcares fermentables
coloca a la piña con el mayor contenido de azúcares por gramo de biomasa en una medida
alrededor de los 60g/L. El alto contenido, en el caso de la piña probablemente se deba a
hidrólisis de los polisacáridos ocurrida durante la exposición a altas temperaturas, la cual
libera otros azúcares menos complejos. En esta etapa es importante controlar la
temperatura, debido a que si es muy baja, la red compleja no se degradará y si es demasiado
alta provocará la caramelización de estos azúcares, en ambos panoramas se obtendrán
menos azúcares (Núñez et al., 2012).
Concentración
Enzima de Condiciones
Biomasa final de azúcares Referencias
tratamiento óptimas
reductores
pH 5.5
Cáscara de (Shilpa et al.,
Aspergilus niger Tiempo 7 días 0.25 g/g sustrato
piña 2013)
Temperatura 28°C
59
pH 8-10
Cáscara de Geobacillus (Prakash et al.,
Tiempo 30 min 54.14 g/L
banano stearothermophilus 2018)
Temperatura 70 °C
pH 5
Cáscara de Celulasa 15 FPU/g (Palacios et al.,
Tiempo 48 h 32 g/L
banano (Celluclast 1.5 L) 2017).
Temperatura 50°C
pH 5.0 ± 0.2;
Tiempo 24 h;
Fuente: Propia.
60
La respuesta de la tercera pregunta planteada en esta investigación, se obtuvo de la misma
forma que las preguntas anteriores, se colocó en práctica la metodología, utilizando los
criterios de inclusión y exclusión para la recolección de los artículos en las bases de datos.
Los resultados alcanzados en esta tapa se pueden observar en la Figura 10.
La información encontrada en las bases de datos utilizadas para esta investigación, acerca
de la producción de bioetanol a partir de la fermentación de azucares reductores es muy
amplia. Se hallaron una gran cantidad de artículos que apuntaron a distintas áreas de
investigación, como los biocombustibles y medio ambiente. En estas investigaciones se
implementaban diversos tipos de biomasas en distintas regiones del mundo. A pesar de
61
esto, se ha investigado poco sobre la obtención de este biocombustible utilizando la cáscara
de piña, mango y banano; las cuales son fuente de material lignocelulósico. Por tanto, es
pertinente trazar rutas que tengan como objetivo el uso de estas biomasas para la
producción de bioetanol.
Por otra parte, la Figura 11, descrita a continuación presenta las publicaciones revisadas en
el área de obtención de bioetanol mediante frutas o cáscaras de frutas de banano, mango y
piña. A nivel mundial, se observa en la Figura 11, que los países con más investigaciones
presentes en las bases de datos son: India, Brasil y México. Estos países van a la vanguardia
en las tecnologías para la fermentación de azúcares reductores en bioetanol. Entre las
tecnologías, se puede observar la utilización de distintos tipos de microorganismos en la
fermentación, con el fin de obtener mejores resultados en rendimiento de producción de
bioetanol, menor consumo de agentes fermentadores y menor costo de operación.
Figura 11. Publicaciones en el área de producción de bioetanol a partir de las biomasas (cáscara de piña,
mango y banano).
Fuente: Propia.
62
6.3.2. Evaluación de calidad
La evaluación de calidad se realizó con el fin de eliminar sesgos, y procurar escoger los
artículos más adecuados para dar respuesta a nuestras preguntas de investigación como se
muestra en la Tabla 7.
Tabla 7. Evaluación de calidad de los artículos seleccionados para RQ3.
Fuente: Propia
63
Teniendo en cuenta que SÍ (Y = 1), PARCIALMENTE (P = 0.5), NO (N = 0). Posterior a la
evaluación de la calidad de los artículos seleccionados, se pudo evidenciar que los 10
artículos tuvieron una puntuación mayor que 2, es decir, el 50% de la puntuación más alta
posible, además que el 50% cumplieron con los cuatro criterios de calidad descritos,
mientras que el 50% restante, puntuaron en 3,5.
Como desarrollo del tercer objetivo, se presenta en la actual revisión cuatro alternativas de
procesos aplicados a las biomasas estudiadas en la obtención a partir de azúcares
fermentables de bioetanol. La Tabla 8, relaciona los procesos de sacarificación y
fermentación simultánea (SSF), hidrólisis y fermentación separadas (SHF),
presacarificación, sacarificación y fermentación simultánea (PSSF) y finalmente azúcares
reductores totales (TRS) con el rendimiento final para la obtención de bioetanol.
Cáscara Saccharomyces pH 6;
17.00 ± 0.07 (Matharasi et
de SSF cerevisiae5% Temperatura -
g/L al., 2018)
banano v/v 35°C
pH 8;
Temperatura
5.48 g/L;
Cáscara 40°C;
Klebsiella sp. Rendimiento (Sarkar et al.,
de SSF Concentraci -
SWET4 0.137 g/g de 2020)
banano ón de
sustrato
sustrato 40
g/L
Temperatura
Cáscara Saccharomyces Eficiencia de (Manivannan
30°C; Consumo de
de SHF cerevisiae 4% fermentación & Anguraj,
Tiempo 48 TRS 73.97%
banano v/v 59.2% 2021)
h; 100 rpm
pH 5.5;
Aspergillus
Temperatura 0.35 g/L
Cáscara terreus y
38°C; Productivida (Teoh & Ooi,
de SSF Kluyveromyces -
Tiempo 5 d 0.07 2016)
banano marxianus 10%
dias; 150 g/L/dia
v/v
rpm
64
Temperatura
35°C;
Tiempo 64 Glucosa 46
Cáscara
Saccharomyces h; g/L; (Palacios et al.,
de PSSF 32.48 g/L
cerevisiae Concentraci Fructosa 35 2019).
banano
ón de g/L
sustrato 25%
p/v
Saccharomyces Temperatura
(Domínguez-
Zumo cerevisiae 30°C; Glucosa 16 0.47 g/g de
SHF Bocanegra et
de piña CDBB 790 3 Tiempo 60 g/L glucosa
al., 2015)
g/L h; 150 rpm
Temperatura
Saccharomyces
Cáscara 30°C; 82.10 ± 2.30% 65.27 ± (Niwaswong,
SSF cerevisiae
de piña Tiempo 72 v/v 2.45% v/v et al., 2014)
TISTR 5048
h; 150 rpm
pH 5.5;
Aspergillus
Temperatura 0.27 g/L
terreus y
Cáscara 38°C; Productivida (Teoh & Ooi,
SSF Kluyveromyces -
de piña Tiempo 5 d 0.05 2016)
marxianus 10%
dias; 150 g/L/dia
v/v
rpm
Mucor indicus pH 5 ± 0.2;
Cáscara (Bhatia &
SSF MTCC 4349 2% Temperatura - 10.43 g/L
de piña Johri, 2016)
v/v 30°C;
Rendimiento
de etanol
Temperatura
Saccharomyces 0.44 g/g
Cáscara 30°C; (Salih et al.,
SHF cerevisiae 6% 10.31 mg/mL glucosa;
de piña Tiempo 48 2021)
v/v Eficiencia de
h; 150 rpm;
fermentación
86.27%
Cáscara pH 5;
Saccharomyces (Saifuddin et
de - Temperatura - 11% v/v
cerevisiae 3 g/L al., 2014)
mango 30°C
65
los mejores rendimientos se alcanzan con las biomasas en un proceso de hidrólisis y
fermentación separadas (SHF), debido a que se ha establecido que la recuperación de
azúcar fermentable en primera instancia y los rendimientos de bioetanol aumentados con la
etapa de fermentación posterior están directamente correlacionados (Karimi et al., 2014).
66
et al., 2012). Morais et al., realizaron un estudio que se basó en la fermentación de azúcares
provenientes de Solanum lycocarpum utilizando como agente fermentador Saccharomyces
bayanus para la producción de bioetanol. En el caso del presente estudio los mejores
rendimientos asociados a cada una de las biomasas se dan con Saccharomyces cerevisiae
como agente fermentador, lo que corrobora la coherencia experimental que tienen las
diversas investigaciones realizadas en torno al rendimiento de obtención de bioetanol.
67
de esta forma seria una biomasa a considerar de gran conveniencia por su facilidad de
obtención, en la articulación de alternativas y/o fuentes de biocombustibles, representando
y fortaleciendo las distintas metodologías que buscan lograr consolidar la ruta adecuada
para minimizar las problemáticas ambientales asociadas con los residuos de la agricultura
nacional y aumente el desarrollo de los biocombustibles en Colombia.
CONCLUSIONES
La lignina tiene un papel adverso sobre los rendimientos de hidrólisis, en este estudio el
mango presentó el mayor contenido de lignina y el menor rendimiento en la obtención de
etanol. Caso contrario a la piña, que contiene el menor contenido de lignina y el mayor
rendimiento en la obtención de bioetanol mediante azúcares fermentables, debido al alto
contenido de celulosa en la biomasa producto de hidrólisis de los polisacáridos (Bhatia &
Johri, 2016). Por otra parte, los estudios de composición del banano realizados por análisis
gravimétricos arrojaron los valores de menor magnitud en la cuantificación de celulosas,
hemicelulosas, ligninas y otros compuestos presentes en la biomasa, pero evidencian
rendimientos mejores a los del mango. En el análisis estructural de las biomasas, se
estudiaron las condiciones operativas de las experimentaciones hechas por diferentes
autores, en ellas se aprecian rangos de temperaturas óptimas alrededor de los 50 °C, pH
entre 5 y 6 y tiempos de tratamientos máximos de 1 hora. Estos valores aportan
significativamente al proceso de extracción de azúcares reductores en tratamiento
enzimático con enzimas de celulasa.
68
Los datos obtenidos en el análisis de la literatura científica, relacionados con composición,
cuantificación de azúcares reductores y obtención de bioetanol, muestran mejores
rendimientos con las biomasas en un proceso de hidrólisis y fermentación separadas (SHF),
debido a la relación directa que existe entre la recuperación de azúcar fermentable y la
etapa de fermentación posterior con levaduras. En esta última etapa los mejores
rendimientos asociados a cada una de las biomasas se dan con Saccharomyces cerevisiae
como agente fermentador. Todos estos factores sumados a los valores óptimos de
experimentación hacen factible que se genere un profundo interés por diferentes grupos de
investigación públicos o privados, en seguir explorando metodologías de obtención de
biocombustibles, sobre todo porque los valores de operación de dicha experimentación se
encuentran en un rango muy accesible.
69
70
7. RECOMENDACIONES
71
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85
ANEXOS
86
Anexo A2. Recopilación y clasificación de artículos seleccionados RQ2
87
production by Pichia stipitis NCIM
3498 and Pachysolen tannophilus
MTCC 1077
88
Anexo A3. Recopilación y clasificación de artículos seleccionados RQ3
89
Mucor indicus
MTCC 4349
Ethanol production from banana peels A. Sócrates Palacios, Anna
at high pretreated substrate Ilyina. Rodolfo Ramos-
loading: comparison of two operational González, Cristóbal N. Aguilar.
strategies José Luis Martínez-Hernández,
Springer
Elda Patricia Segura-Ceniceros, Mexico 2019
Link
Monica Lizeth Chávez
González, Miguel Aguilar,
Mercedes Ballesteros, José
Miguel Oliva, Héctor A. Ruiz6
Production of Bioethanol from
Pineapple Rinds by Saccharification Salih, N. K. M., Hassan, H. M., Arabia
2021 Scopus
and Fermentation Using & Al Balawi, A. Saudí
Saccharomycescerevisiae
90