PRACTICA NO² +.

TECNICAS DE 5EPARACIÓN DE BIOMOLECULAS. CROHATOGRA

FIA PAPEL Y CROMATOGRAFIA EN CAPA FÍNA.
Jergio Tolio Uarqas Neira.
Jorge Luis Hayorqa Caotilo
Åle Fernardo Quiroga Roblo

Facultad de Ingeniería
Agronómica
laboratorio de Bioquí mica.

Universidcd Pedagégica Tecno

lóqica de Colomba (0.PT.C.)

Revnmen:
En esta práctica Se realizó separacion de aminoácid
la

por en papel
Cromatoqratíca y Cromatoqraffa en capa fina.
en en ca pa fina Son
Ca cromatogtaa apel
Compo
tipo de cromatoqrafía de rearto en (a que lo de
nentes de Cna metcia Oe separan Por diferenice)
Solubilidad entre do A disdwente. tsto
3istenas método
de análisis eermiten separar, qislar e identHHcar Componentes
estrechamente relacionado, presentes en metclas
ComplejO de 5e dividió en
Para ello, se tomó Un pael frltro
en el Centro,
goade y se le hio un orificio
4
Se
Par tes
oen
ubi cada Fraccionapel Cier ta cantidad de
del
alanina, Prolina, acido apartico columnQy Una
Sotucion
inoacida
descono cidaj También uti iito na
de papel de cromatoýrafíoa, se hito na Deparacion de
1 Cm en Cada extremo se cbi caron cado uno de
amino ácidos anteriore a
ditcancia igucles sobre
se
ona de las Ineas de separacion, Poteriormente
realít el procedimiento respectivo de Cada una de
ellase
Intro docion.
técnicas çromgtoqrd Ficas se emglean para Depurar
Componentes individoales de cna metcla, V en
Ciertos Caso,para ioentificar Cn Comfueto compcarando
Su Compor taminto croMatoqráfico Con el de wstn
Conocidas empleacdos Como patrón alqUna o
propiedad Fisicoquimicc Jel compuesto,
romatografía en parl:
el método en
la propredad ue tienen Cierto
Comesto
en dos
de Der soluble, aunçue en agítud dferente,
más sclventes que 3on miscibe entre i,
miscihte
1 Que e hayan en contccto, Coondo e permite qve
se Cn tiempo 3uficiente Para alconor el equtlibrio,
el encontrara dfstribuio entre
foe rqurdcU (faoe eytcion crío y fase nevil), de cn
modo Coractferisticoo El rearto qUe De defne
relación que CAste entre Concetracíon A del
ComeUesto en el Concentracson B en
Solvente G, se cxerea ai
K CNI/CBI. C11
€te pocecdimerto es nuy Simple 4 no requiere de equipo
rara que peraonas
eSpetclc, por (o ÇUe reulta, ideol, Ofa ventog
poco eer tay
Je Mntenen
obtengan rew ltdo demostratRUO).
(es condiciones estubles, i 5e eMplea
ÇUe sI

el mio upel to miomo olvente (os mime Conoicio

ne Cambien tcle, La mouilidad de na mancha correipOndles

te SUItnciC PUra Constcnte, y poY lo tento

poible TOentificar esa mauncha por omperocion
Con One bmancho etron.De otra forma, n auJe
directca
aa de patrone, es pble la iOcntifrcacicn e lo 0stenele.
Con base en propiedades FisicoqÁMiCa a partir el
factor de Retencion CRF).
|\lamao la relcciOn QUe eyiote entre la dotencie
Yeorrida for la mancha cdistuncia
respecto
de mencha
a

/
la
dis
recorridper
teuncia aolvente
el so lvente t

C11
Gomatografía en
Caa fna:
otra de' (as fecniceis cçomatográfias e la de capa Fina,
lamad aÍ pOrqUe a fade estcconaria eson
Doluente
polar, noTmulmente Ho,abrbido en Una capa tina de on
moteray eoror incr te.,for (otonto la naturalende la fease
e polar, la fae movil e Una metcla de disolvente Cn
diterentes propor cicnes meno oler que el ayoe aborbido
en el motericu poroo que emiqra emigra or a Fae estocion
ay debrdo cl fenemeno de calaridoL.E s mouimiento,
Grratra mayor menor
o

de propoTciOn al comonente o meTcic

CoMponentes cde ona metcle en furcion oe
menore 0 Mayoe
Cuefidentes de reprto, [2J
 Desarrolo
Materialespapel Reactiue) Capa ina.
-Eotuta electrica metras Je aminoácido cl 17.
Capticres vorio -ninhidrina C1 en acetono)
-laprt p*2.
hatman N1
- Fose mévil: N-butnol-Acetona - Acetico - Hz0
-Papel
-Vasos preipitudo Rectiuo en purel.
-pipeta mueatra de ouminoácdos al 17%

-frcsco Vevelader ninhidrina

-Fase móvil: tz0
- re la Fenol Saturcdo en

- caja petri.
Capa fin
•Hateri cle
- piaca Fina de celoloa.
microf peta de 7o
mictolitro

frasco revelcador
-cwbeta romatográtrcc
Pintas de madera
#2,

Procedimiento
papel whatman traar de Kheos Con
En el
Papel: ona Vertical
otra horizontol, realitar Un orlfieio
(apit
Proceoo a
aplicar lo mi proxÍ mo atote orcio
Central
(as soluciones de auminocido a 3ln
en forma de gota
la HigOra.
de acuerdo la ditrî beción qie erienta
Probtema
el caplar de papel detro del oriflcio y ub{quelo Tento
Cdoque Ca
Con l cpel circolor Sobre placa Je petr que contie
solwente afolea Tepee le paca de Petry ceidando que
Cap lar no qUcde doblodo 4 deje Correr el slvente
e

hasta el borde del apelo Extrciqa el ypel de ftlto de ia

caa de Ftca. tenqa

eor exoion al cculor qenerodo
coicado de
por eco Con en
Pocie el pel sépvel o lce cotuta
hestoa menehes
(a) Re preente en el el reultado
Sigutente
cf de
dbtenid o
amino
tran n
ácido
la
Cculcule e
Conoidos, así Como
de sconocido
el de
de
(o qe e lo
enCucn
 Prolina
Rt:
A\anina
Alanina: 3.5 cn o.4
4.5 cm
• Pro na: 3.3cm
4.4
Aido
Aspárti Co:
3.1cm -0.72
4o3cn

Sin
Sln deSConocida:
deconecila Apártico 3.2Cm
Acido -Acido A spar tico
4.4 an
- prolina 3.35 Cm T0.76.
H.4 cm
- Alanina 3.58 Cm -0.81
4,4 Cn

ratón (a cucl Se produce estca Separa

B) EypkqUe la
CIón de los aminoácidos? 5e encuen
debido
Eta separacon Se produce polare V aeolare.
aminoácidos
tran Preæntes de lo apolares (alaninay prolinaSon)
para el Con la fase movil
al entrar en Contccto
lo olare debido aue
atrastrados
Con mayor faci (lidad
(a
solvente, ademay
qoe Interactúan mejor Con el
estacionCaria meno polar
Cromatoqraf(a otilla ona fase facilita (a interaccion de lo
Ue Fase móril lo que
amino ácido Con la fae movilo
En eta práctica de cromatografía Se oberva qe
(a alantna Se desplac más quc prolina, pesar a
amba Son apolares, debido la concentracion de a
estructura de la Profina.
Paro Cajo del ácido aspár tioo al ser polar Fecorre
meno) Porque se adsorbe mnás fuertenente (o iones a
del papel
Conclusones puede deducir uoted sobre
Soweón desconodda3
Para el de a soloción desconocida se deduce
Por la tincion
s distancics recorridas, que Se
la
lo 3
e
,enwentra
acidos Compueto por la mecla
meAcla de
ya menciona do. A hallar el RF de la sln
la amino
desconc cida no arrojo reou tado mUy o
\qcale de Cu de 0 Componentes, a eroximo Conocidoy
de os aminoácido, por eMo Se dedoce es una metcla ae
«Ciomo lovopio Coo fna
Coloqe
en
aPvgximado mente 25ml de fase
movil Satol
So alnofe,a. Ca Cvomoogrorio efectovo
Csbelo Ce,woda
Troce Con lapr Sin apreloy denasiado
Po ra \o lneahov 0n tal
del bov de inferoY
pia coant y.
Sobie la ata, Mor(o
olonna
ponlos C3 ntos
Pono
Proena lon Sepoy cion ente
Colao plocos lce po .omalgapa
51, \o5 lo hmedo
vOY amie
al Spe
bode. Aplio
o l

Sore
deSpla
nto Jel
de MC Cado aminoauo0 Con (a micrO
\os nos o,5
los ex trendon
ES im tante qotos Se
Pipeto
o mono5 pbsibles. (as
vouei mismo Cont
moest vo oda no \os ontas povo
Concent at lo5 mue5o5 Anola
en han Cocado \os
ominoaos mues ro Probemo,
diferentes
Col
el
ouc sdente wede po decoo de lo
lineo los moests. Cos
30 minor placa.
no dcte leqo ex\emo
reali2at
Sperior
ootto
Piactca.
3n borde el nve
alcanzado por lo Ro5c
vOciela 3 min
en
Placo
hasto
Aanchas.

alaninoa.
proino

sln dexorgu co
faclor de yelencion

Alonino RF 3,5 Cm
45cm
O,62

ac asbio RF.
R 4.0cm o,88
415cm

b)denifiae e
el nombic de Codo omnooudo
cos de codo uno de ellos.
Alonng lo Sin\esrs de poçono,
Pidong lo
Convetdoen
(oinoSno,
Pivuva\o.
V (omo
\ici (ndlyectanenle en va
(omo fuente
eneao lor musluo cseletico.
Prolina moleclo
Ca
o polo opero
posee
Co5o
go nela
hidrc
\os com pleyos
Codos los es!
\o qroleino.
ocosoico: aminooudo no escen Caal olor.

maul mos
OminOocido polo, lo sepoauon
peor porqe?
alo
Cslo dbe q a
OolodoÀ del uente \a afindaJ 3e
ominoacdos Por lo fase estouonorro inuyendo
ressilo menoY Yelencion t se po vo Cn do (o
Com bn entos.
J) dosko lo veacciém
(os
de nnhdenn
cdor es q Se
(on
Presum
lo,
Lenet
\o wnhidvino con los
Qminoacidos lados en
neio Postivo argondPrastico
(olovocuon es
ue e fec\iyomente ienen ue do al
ntaSe, el (do con la alonna
\a |Ina monllo (on
vevde cla

Ciomotoerafia
aminooudo protecos?
ventaa)
\ogiio lodimensinal?
Se Podia dic cn cio Ciomalgafio de (opo fno delos
20 minoaudes proleO5. Co Cyomalegvafa de a pa
fino e5 gna tecico de Sepa vouor my ver5otl
qoe se utilto, fovo Sepuro meclas de Com puestoS,
Con basç perencios, de polaridod. En el coso de los
nooudos, pueden epoy Por io diper enua
de o Sblido en lOs 2 55cma5.
Ssfcmos Sin

motogvapio b IdimensOn al
Aiene vintayo
ogai de apo fina,
Sepayauon om onen
los com tes
Ona mayor locion,Y
Una mezca. Ad emas Omo togva Fia de
Se Pucde Com onentes e n
Onenyional
Se Pueden Sepo ror Po Crbmoog rafio de (apo fna,

Bleiogropio.
CA1 abbott Andeus A. 5,"t dcon
.
D.

mocaoi 2 cd. Alhombva,

madvid.

Lonline?, igorllogoo
5onble en: M.g/43u 431-6alc
3