Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaz de fermentar la lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los totales. Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces estn formados por Escherichia Coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. stos ltimos se denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas ms elevadas. Esta es la caracterstica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgnica, pH, humedad Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminacin fecal. Su presencia se interpreta como una indicacin de que los organismos patgenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua se halla exenta de organismos productores de enfermedades.
Procedimiento:
Vamos a seguir el mismo mtodo para la determinacin de los dos tipos de Coliformes, lo nico que variar ser la temperatura de incubacin de cada determinacin, que para los Coliformes Totales ser de 37 C y para los fecales ha de ser de 44 C.
Prueba presuntiva:
Para determinar estos Coliformes se va a utilizar el medio de cultivo BGBB (dispuesto en tubo), que es un medio selectivo y de enriquecimiento ya que inhibe el crecimiento de microorganismos distintos de los del grupo de los Coliformes a la vez que permite que stos crezcan sin restriccin, se distribuye el medio en nueve tubos (tres series de tres tubos) con diez mililitros cada uno de medio de cultivo y echando 10 ml de el agua a la primera serie de tubos, 1 ml de agua a la segunda serie, y 0,1 ml a la tercera. Colocaremos en cada tubo
la campana Durham por lo menos en un 10% de su capacidad, y el medio vira a color amarillo debido a formacin de cido. Una reaccin positiva por dbil que sea, indicar la presencia y coliformes y habr que hacer las pruebas confirmativas de IMViC. Se aplicar la tcnica del nmero ms probable (NMP).
Pruebas IMViC:
Las bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, pueden identificarse a travs de una serie de pruebas bioqumicas, que permiten determinar la presencia o ausencia de ciertas enzimas y a veces incluso permiten determinar la existencia de una secuencia metablica. Con este fin se han desarrollado diversos esquemas de clasificacin, uno de los ms
Si aparece una coloracin roja indica que la prueba es positiva, el microorganismo produce indol. - Rojo de metilo: Esta es una prueba cualitativa de la acidez producida por el crecimiento de una bacteria en agua de peptona glucosa con tampn fosfato. Debido a la acidez producida, el medio virar de amarillo a rojo considerando la prueba positiva al aadir un reactivo. El procedimiento es el mismo que el del indol, con la diferncia que, en vez de aadir indol de kovacs, aadimos Rojo de Metilo.
Tincin de Gram:
La coloracin de Gram tiene fundamental importancia en la diferenciacin morfolgica y taxonmica de las bacterias. Las bacterias se clasifican en dos grandes grupos segn retengan o no el colorante de base usado en la tincin, que es el violeta de genciana o el cristal violeta: Las bacterias Gram positivas aparecen con el citoplasma teido uniformemente de color azul o violeta. Las bacterias Gram negativas se tien de rojo por el colorante usado como contrastador, fuchina, safranina.
pared celular y su permeabilidad. La pared de las Gram negativas es ms delgada y presenta un contenido en lpidos, grasas, diez veces superior que el de las Gram positivas, lo cual dificulta la tincin y la retencin del colorante en el citoplasma. Tomamos una colonia de las aparecidas en EMB Levine y realizamos una tincin diferencial, a continuacin observamos con el microscopio.
Resultado de la determinacin:
Se han obtenido idnticos resultados tanto en la determinacin de coliformes totales como fecales y stos han sido:
Prueba presuntiva:
En los tubos ha aparecido un viraje del color del medio de cultivo de violeta a amarillo debido a la produccin de cido y en la campana Durhan puede apreciarse con bastante gas en su interior. Los resultados son positivos en 2 de los 3 primeros tubos,2 de los 3 sundos y 1 de los 3 ltimos (viraje del medio y gas); con estos datos vamos a las tablas del nmero ms probable (NMP) y tenemos: Ms de 20 u.f.c. por cada mL de agua problema. Como sta prueba ha sido positiva, realizaremos las pruebas confirmativas, de haber resultado negativas las primeras, daramos por terminado el anlisis.
resultado negativo y resultado positivo a la derecha. - Voges-Proskauer: El microorganismo no produce acetilcarbimol al aadirle el reactivo que se detecta con la aparicin del color rojo, en este caso el resultado es negativo, (tubo del medio). En la figura aparecen de izquierda a derecha: tubo sin inoculacin de bacterias, resultado negativo y resultado positivo a la derecha. - Citrato: Tras la incubacin se observa que el microorganismo no ha crecido en el slam del tubo (tubo del centro) y el medio no ha virado de color, por lo que no es capaz de obtener su fuente de carbono del citrato.
Tincin de Gram:
Con esta prueba, hemos observado bacterias bacilares Gram negativas con lo que podemos confirmar la presencia de Escherichia Coli que responde a estas caractersticas y es el mayor indicador de contaminacin fecal en el agua.