GUIA No. 2.

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

CRISTIAN JAVIER ZMBRANO SANABRIA

COD.1610706

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA

INGENIERÍA BIOTECNOLOGÍCA

CÚCUTA

2022
GUIA No. 2. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

CRISTIAN JAVIER ZAMBRANO SANABRIA

COD.1610706

BIOTECNOLOGIA AGRICOLA

PROFESORA:

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA

INGENIERÍA BIOTECNOLOGÍCA

CÚCUTA

2022
 INTRODUCCIÓN

Los microorganismos son organismos que están equipados con individuos para funcionar

necesario para el crecimiento, reproducción, alimentación y excreción; pero para
ello necesitan condiciones favorables para realizar todas estas
funciones. Para utilizar diferentes microorganismos para la
investigación en un laboratorio microbiológico, es importante proporcionar las condiciones
necesarias para estos organismos. Se requiere un medio para esto.
 OBJETIVOS

Prepare una variedad de materiales impresos, realice correctamente la técnica de hacer

materiales impresos. Con la mejor calidad.

Aprenda a almacenar correctamente diferentes medios.

Comprender el significado y la razón de ser de los medios culturales como materiales

Indispensable para uso en laboratorios microbiológicos.
 METODOLOGIA

El medio consiste en un gel o solución que contiene los nutrientes necesarios asegurar

(en condiciones favorables de pH y temperatura) el crecimiento del virus,
microorganismos (bacterias, hongos y protozoos), células, tejidos vegetales e incluso plantas.
Dependiendo de lo que quieras cultivar, el medio requerirá una u otra condición. Normalmente
antes de cocinar, se deshidratan en un polvo fino o granular, preparación
los podemos encontrar en estado sólido, semisólido y líquido. Una vez preparado el medio,
sé puede inocular (es decir, añadiendo microorganismos), luego se cultivan en condiciones
que promueven el crecimiento microorganismo. Los microorganismos se cultivan como cultivos,
cultivos estériles o puros que contienen uno tipos de microorganismos.
La composición del medio debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios, y
deben estar libres de microorganismos contaminantes. El medio contiene al menos: carbono,
nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En algunos casos, se requieren ciertas vitaminas
y otros inductores. Un aumento. También se añaden colorantes como indicadores de detección.
Por ejemplo, formación de ácido o como inhibidor del crecimiento de ciertas bacterias, no otras
cosas. El agar es el principal agente solidificante utilizado en los medios de cultivo bacterianos.
Se disuelve Completamente curado a 100°C y enfriado a 40°C.
Los medios de cultivo biológico se clasifican de acuerdo: a. Una consistencia de líquidos: Se
denominan caldos y se preparan sin agar. Semisólido: contiene 0,5% de agar. Se utilizan para
estudiar la movilidad de las bacterias. (Con o sin flagelos)
Sólidos: Estos consisten en 1,5% a 2% de agar. Estos medios fijan las células para que
puedan crecer y formar grupos aislados visibles llamados colonias. Las colonias permiten a los
microbiólogos determinar la pureza de los cultivos. Las placas que contienen más de un tipo de
colonia no se consideran cultivos puros. Estas placas también se utilizan para determinar
las células viables (recuento de placas).

b. ocupación: definición y síntesis. Se conoce la composición exacta del medio. Un medio mínimo

es aquel que aporta únicamente los nutrientes necesarios para el crecimiento de los
microorganismos, no para su desarrollo óptimo. Un ejemplo de esto son los medios de
deshidratación, que están disponibles comercialmente en forma de polvo o gránulos.

Complejos o Naturales: Estos son los que se utilizan para cultivar microorganismos de forma
natural. Se desconoce la composición exacta del medio. Por ejemplo: extractos de sangre,
leche, levadura o carne.
c. Función: Medios selectivos: Estos son medios a los que se han agregado uno o más
componentes que inhibirán o evitarán el crecimiento de ciertas especies bacterianas y/o
promoverán el crecimiento de especies deseadas. Las condiciones físicas del medio, como el pH, la
temperatura, se pueden ajustar para que sean selectivas para el organismo de interés. Medios
diferenciales: permiten a los investigadores distinguir entre diferentes tipos de bacterias
en función de alguna característica observable de su patrón de crecimiento en el medio, ya
sea produciendo ciertos pigmentos o cambiando de color en el medio debido a los indicadores de
pH, o halos de descomposición de componentes individuales en el medio ambiente. Medios
enriquecidos: contienen ingredientes que permiten el crecimiento de ciertos
tipos de bacterias, pero no contienen sustancias inhibidoras.
Medio enriquecido: utilizado para el cultivo de microorganismos que requieren grandes
cantidades de factores de crecimiento. A menudo contienen extractos biológicos inusuales como
sangre, suero de leche en polvo, extracto de cerebro bovino, yema de huevo, etc.

PROCEDIMIENTO

A. Las instrucciones de cada etiqueta para preparar los medios recipientes para los medios
apropiados.

B. Continúe pesando la cantidad requerida en la balanza y agréguela al matraz Erlenmeyer

apropiado.
C. Agregar agua desmineralizada o destilada.

D. Medir el pH del medio líquido. 

E. Para un medio sólido, calentar en un horno hasta que el agar se disuelva; déjalo en el medio
hasta que Llevar a ebullición y mantener alejado del fuego.

 F. Cubra y etiquete el matraz Erlenmeyer con papel y cinta adhesiva.

G. ponerlos en una olla a presión.

H. Proporcionar servicios de medios según sea necesario.

Atención: Si el medio preparado no se va a utilizar inmediatamente, es mejor prepararlos

Análisis grande (20-30 ml) o matraz Erlenmeyer de 125 ml a razón de 100 ml por minuto, envase
por lo que entonces, Se secará más lentamente. Antes de su uso, deben licuarse en un baño de
agua y luego inclinarse o dividirse en un tubo de ensayo. En una placa de petri. En este último
caso, sólo cuando el ambiente es interior. La temperatura ronda los 45°C. Dispersa el material
sobrecalentado, provocando una gran condensación en la tapa del tanque.

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS DE CULTIVO Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y

otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que la variedad de medios de
cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos, ni
siquiera refiriéndonos a las bacterias con exclusividad.

CONSTITUYENES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

A continuación se da una idea general sobre algunos de los constituyentes habituales de los
medios de cultivo.

AGAR. Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el agar
bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se obtiene de ciertas algas
marinas y que presenta la indudable ventaja de que a excepción de algunos microorganismos
marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se licua alrededor de los 100ºC y
se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de su grado de pureza.
EXTRACTOS. Su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales o vegetales (p.e.
carne, hígado, cerebro, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor y posteriormente
concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos preparados deshidratados son a menudo
empleados en la elaboración de los medios de cultivo. Los más utilizados son el extracto de carne,
de levadura y el de malta.

PEPTONAS. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales minerales, que
se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja caseína
carne, etc.). Las peptonas son muy ricas en pépticos y aminoácidos, pero pueden ser deficientes
en determinadas vitaminas y sales minerales.

FLUIDOS CORPORALES. Con frecuencia es necesario añadir a los medios de cultivo de algunos
patógenos sustancias como sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero sanguíneo,
sobre todo para conseguir el primer aislamiento a partir del hospedador. La sangre no puede ser
esterilizada, y por tanto debe de ser obtenida en condiciones asépticas directamente de un animal
sano, y adicionada al medio de cultivo después de que este haya sido auto clavado. Los fluidos
corporales no solo aportan factores de crecimiento sino que también aportan sustancias que
neutralizan a inhibidores del crecimiento de algunas bacterias. Un ejemplo podría ser la catalasa
presente en las células sanguíneas destruye el peróxido de hidrógeno que algunas bacterias que
no poseen este enzima acumulan como producto del metabolismo del oxígeno.

SISTEMAS AMORTIGUADORES. Para mantener el pH dentro del rango optimo del crecimiento
bacteriano a veces, es necesario añadir algunos componentes al medio de cultivo. Debido a que la
mayoría de las bacterias son neutrófilas, se suelen emplear sales del tipo de los fosfatos bisodicos
ò bipotásicos u otras sustancias como las peptonas para prevenir la desviación del pH.

INDICADORES DE PH. Con el objeto de poder detectar variaciones en el pH debido a

fermentaciones u otros procesos, se hace necesario a veces añadir indicadores acido-base que nos
lo indiquen.

AGENTES REDUCTORES. Con el objetivo de crear en los medios de cultivo condiciones que
permitan el desarrollo de los gérmenes microaerofilos ò anaerobios se añaden estos agentes
reductores siendo, los más empleados la cisteína y el tioglicolato entre otros.

AGENTES SELECTIVOS. La adición de determinadas sustancias a un medio de cultivo puede

convertirlo en selectivo. Así, por ejemplo, la adición de cristal violeta, sales biliares, acida sódica,
telurito potasico, antibióticos, etc., a la concentración adecuada hará que actúen como agentes
selectivos frene a determinados microorganismos.

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO MEDIOS GENERALES.

Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran variedad de microorganismos.

MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO. Son aquellos que favorecen el crecimiento de u determinado tipo

de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento de los demás.

MEDIOS SELECTIVOS. Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos

determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.
MEDIOS DIFERENCIALES. Son aquellos en los que se pone de manifiesto propiedades que un
determinado tipo de microorganismos posee.

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados; normalmente

bajo la forma de liofilizados a los que es preciso rehidratar. En estos casos la preparación del
medio de cultivo se reduce sencillamente a pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en
agua destilada siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolábiles, se esterilizan
por filtración y se añaden al resto de los componentes después de que estos hayan sido
previamente esterilizados en el autoclave y enfriados a temperatura ambiente ó a 40-50ºC si se
trata de medios con agar. Antes de su esterilización los medios líquidos se reparten en los
recipientes adecuados (tubos, matraces, etc.). Si es un medio sólido y se ha de distribuir en tubos
ó en matraces será necesario fundir el agar en baño Maria u horno microondas, una vez fundido y
homogenizado, se distribuye en caliente a los tubos ó matraces (no en placas Petri) se tapa y se
esteriliza en el autoclave. Una vez finalizada la esterilización los medios se dejaran enfriar a
temperatura ambiente y en el caso de medios sólidos contenidos en tubos deberán, en su caso,
inclinarse para que al solidificarse adopten la forma de agar inclinado ó pico de flauta(slant) si tal
es su finalidad. 5 Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y estéril dentro de
ellas y en un ambiente aséptico (por ejemplo en la proximidad de la llama de un mechero Bunsen)
es conveniente homogenizar el medio en el transcurso de la operación para evitar que el agar
sedimente en el fondo del recipiente y no se distribuya por igual en todas las placas. También es
posible conservar el medio destinado a preparar placas Petri solidificado y estéril en tubos que se
fundirán al baño Maria en el momento de la preparación de las mismas. Los caldos y medios
sólidos pueden conservarse, una vez esterilizados, a temperatura ambiente pero para reducir su
deshidratación y el consiguiente cambio en las concentraciones de sus componentes es preferible
conservarlos a 4ºC.
 CUESTIONARIO

a.Elabore un cuadro que comprenda las siguientes característica para cada uno de los medios que va a
trabajar (Mac Conkey, Agar Nutritivo):

 Medio
 Composición (incluyendo inhibidores e indicadores)
 Aporte nutricional
 Microorganismo que comúnmente se siembran
 Interpretación y lectura
BD CLED Agar / MacConkey II Agar (Biplate) se utiliza para el análisis microbiológico de orina. CLED
Agar es un medio de cultivo diferencial para uso en el aislamiento y recuento de bacterias en
muestras de orina. MacConkey II Agar es un medio de diferenciación selectivo para el aislamiento
y la diferenciación de Enterobacteriaceae y diversos bacilos gram negativos en muestras clínicas y
no clínicas.

PRINCIPIOS Y EXPLICACIÓN DEL PROCEDIMIENTO Método microbiológico. CLED Agar: En 1960,

Sandys publicó el desarrollo de un nuevo método para prevenir la proliferación de Proteus en
medios sólidos mediante la restricción de electrolitos en un medio de cultivo que posteriormente
se modificó en varias ocasiones para utilizarlo en los cultivos de orina1-3. Se designó como medio
Cistina-Lactosa deficiente en electrolitos (CLED) (del inglés, Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient) y
se proclamó que resultaba ideal para la bacteriología urinaria. En CLED Agar, las peptonas y el
extracto de carne bovina proporcionan los nutrientes. La lactosa es una fuente de energía para los
microorganismos capaces de utilizarla a través de un mecanismo de fermentación. El azul de
bromotimol es un indicador de pH que permite diferenciar los microorganismos fermentadores de
los no fermentadores de lactosa. Los primeros reducen el pH y modifican el color del medio,
pasando éste de verde a amarillo. La cistina permite el crecimiento de “colonias enanas” de
coliformes3 . Se reducen las fuentes de electrolitos con el fin de minimizar la proliferación de las
especies de Proteus. MacConkey II Agar: Una de las primeras fórmulas de medios para la
diferenciación de Enterobacteriaceae fue desarrollada por MacConkey y publicada en 1900 y
19054,5. Esta fórmula fue diseñada sabiendo que las sales biliares precipitan por acción de ácidos
y que determinados microorganismos entéricos fermentan la lactosa, mientras que otros no
presentan dicha capacidad. Posteriormente, este medio fue modificado varias veces6,7.
MacConkey Agar es sólo ligeramente selectivo, dado que la concentración de sales biliares, que
inhiben los microorganismos gram positivos, es baja en comparación con otros medios de siembra
en placa entéricos. Se recomienda el uso de este medio con muestras clínicas que posiblemente
contengan flora microbiana mixta, tales como la orina y muchas otras más, dado que permite una
agrupación preliminar de Enterobacteriaceae y otros bacilos gram negativos en fermentadores y
no fermentadores de lactosa7-10. La fórmula de MacConkey II Agar se diseñó para mejorar la
inhibición de la proliferación de la especie Proteus, lograr una mejor diferenciación de los
organismos fermentadores y no fermentadores de lactosa y alcanzar un crecimiento superior. En
MacConkey II Agar, las peptonas proporcionan los nutrientes. El cristal violeta inhibe las bacterias
gram positivas, en especial los enterococos y estafilococos. La diferenciación de los
microorganismos entéricos se logra mediante la combinación de lactosa y el indicador de pH rojo
neutro. Se producen colonias incoloras o de color de rosa a rojo según la capacidad del aislado
para fermentar los carbohidratos. La presencia de agar CLED y agar MacConkey II en esta biplaca
permite la determinación del recuento total y el aislamiento de bacterias gram positivas y gram
negativas a partir de muestras de orina.
PRECAUCIONES Para uso diagnóstico in vitro Solamente para uso profesional. No utilizar las placas
si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración, deshidratación, grietas o
cualquier otro signo de deterioro. ALMACENAMIENTO Y VIDA ÚTIL Al recibir las placas,
almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 ─ 8 °C, en su envase original hasta justo
antes de su uso. Evitar la congelación y el sobrecalentamiento. Las placas pueden inocularse hasta
la fecha de caducidad (véase la etiqueta del paquete) e incubarse durante los períodos de
incubación recomendados. Las placas de pilas abiertas de 10 unidades almacenadas en un área
limpia a una temperatura de 2 a 8 °C pueden utilizarse durante una semana. CONTROL DE
CALIDAD DEL USUARIO Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener
más datos, el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar las placas a 35 ± 2 °C en
una atmósfera aerobia. Examinar las placas al cabo de 18 - 24 h para observar la extensión del
crecimiento, la pigmentación, el tamaño de las colonias y la inhibición de la proliferación o
propagación del Proteus.

Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera. Tipos y recogida de
las muestras Este medio se utiliza exclusivamente para contar y diferenciar las bacterias presentes
en la orina. Se puede utilizar la orina de la parte media de la micción, de la sonda o recogida
mediante punción vesical suprapúbica (ver también CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO Y
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). Emplear técnicas asépticas al recoger las muestras urinarias.
Es preciso extender la orina directamente sobre el medio no más tarde de las 2 horas siguientes a
la recogida de la muestra, o bien refrigerarla (menos de 24 horas) para evitar el crecimiento
excesivo de los agentes infecciosos o contaminantes, antes de la inoculación de este medio. 8-11
Procedimiento de análisis Recoger con un asa calibrada (0,01 ó 0,001 mL) una muestra de orina no
diluida, adecuadamente mezclada, para cada uno de los dos medios de esta biplaca. Confirmar la
obtención de una cantidad de muestra adecuada en el asa. Primero, extender una muestra de la
orina sobre CLED Agar, después extender la segunda muestra sobre MacConkey II Agar. Incubar en
atmósfera aerobia a 35 ± 2 °C durante 24 ─ 48 h. No incubar en una atmósfera aerobia enriquecida
con CO2. Recuento e interpretación de los resultados. Contar el número de colonias (UFC) en la
placa. Si se utiliza un asa de 0,01 mL, cada colonia resultante representa 100 UFC/mL; si se utiliza
un asa de 0,001 mL, cada colonia corresponde a 1000 UFC/mL de orina . Orina de la parte media
de la micción y de sonda: Las directrices actuales indican que, para un único aislado, una densidad
de ≥105 UFC/mL indica infección.

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO CLED Agar es

adecuado para aislar y efectuar el recuento de numerosos microorganismos de crecimiento
aerobio como Enterobacteriaceae, Pseudomonas y otros bacilos gram negativos no
fermentadores, enterococos, estafilococos, especies de Candida y muchos otros de estos
microorganismos, en muestras de orina. Los estreptococos y otros microorganismos que precisan
sangre o suero para su crecimiento pueden no ser recuperados suficientemente en este medio o
requerir una prolongada incubación. Por tanto, si se espera hallar tales microorganismos, se debe
cultivar la muestra asimismo en una placa de agar sangre. Los patógenos genitourinarios como
Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, Chlamydia, Ureaplasma y otros microorganismos
exigentes, no crecen en este medio. Consultar las referencias para conocer las técnicas de
detección adecuadas para estos microorganismos. 9,10,12 Aunque en este medio puede
efectuarse la diferenciación conforme a la fermentación de lactosa y determinadas pruebas de
diagnóstico, se precisa el análisis bioquímico y, en caso indicado, inmunológico, empleando
cultivos puros para lograr la identificación completa10-12. MacConkey II Agar es uno de los medios
estándar utilizados para la siembra primaria en placas de muestras clínicas y para diversos
materiales no clínicos. En este medio crecerán microorganismos de la familia Enterobacteriaceae y
una diversidad de otros bacilos gram negativos, p. ej. Pseudomonas y géneros relacionados. En
este medio crecen microorganismos no fermentadores si son resistentes a sus componentes
selectivos. Consultar los capítulos correspondientes en las referencias antes de utilizar el medio
para organismos específicos. 8,10 Se ha descrito la inhibición de algunas Enterobacteriaceae y de
Pseudomonas aeruginosa en MacConkey Agar cuando se incuban en una atmósfera enriquecida
con CO2 13. Ciertas pruebas diagnósticas pueden efectuarse directamente en este medio; no
obstante, para lograr la identificación completa se necesitan pruebas bioquímicas y, si así se
indica, pruebas inmunológicas usando cultivos puros. Consultar las referencias correspondientes.

AGAR NUTRITIVO

USO Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el aislamiento y recuento de
microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Su uso está descripto en
procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.
FUNDAMENTO Medio de cultivo nutritivo no selectivo, en el cual la pluripeptona y el extracto de
carne constituyen la fuente de carbono, nitrógeno y aportan nutrientes para el desarrollo
bacteriano. El agregado de cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente
solidificante. Puede ser suplementado con sangre ovina desfibrinada estéril para favorecer el
crecimiento de microorganismos exigentes en sus requerimientos nutricionales y permite una
clara visualización de las reacciones de hemólisis. CONTENIDO Y COMPOSICIÓN Código B0212205:
envase x 100 g. Código B0212206: envase x 500 g. Nutritivo Agar FÓRMULA (en gramos por litro)
PLURIPEPTONA ......................................................................................................................5.0
EXTRACTO DE CARNE .....................................................................................................3.0 CLORURO
DE SODIO .........................................................................................................8.0
AGAR ...............................................................................................................................................15.
0 pH FINAL: 7.3 ± 0.2 B0212205 B0212206 INSTRUCCIONES Suspender 31 g del polvo en 1 litro de
agua purificada. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 o
2 minutos hasta su disolución total. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a
121°C durante 15 minutos. Preparación de Agar Sangre: agregar 5-10 % de sangre ovina
desfibrinada estéril (Britasheep) al medio esterilizado, fundido y enfriado a 45-50 ºC.
Homogeneizar y distribuir en placas de Petri estériles. CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO Medio de
cultivo deshidratado: color beige claro, homogéneo, libre deslizamiento. Medio de cultivo
preparado: color ámbar claro ligeramente opalescente. Suplementado con sangre: color rojo
cereza.
ALMACENAMIENTO Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC. Medio de cultivo preparado a 2-8
ºC.

PROCEDIMIENTO Siembra En superficie: inocular directamente la muestra por estría. En

profundidad: inocular una alícuota de la muestra directa o de su dilución. Verter un volumen del
medio de cultivo fundido y enfriado a 40 - 45°C. Homogeneizar mediante movimientos de vaivén y
rotación. Dejar solidificar. Incubación El tiempo, la temperatura, y la atmósfera de incubación,
dependerán del microorganismo que se quiera recuperar. En general se recomienda: Bacterias de
fácil crecimiento: en aerobiosis, a 33-37º C durante 18 a 24 horas. Bacterias exigentes en sus
requerimientos nutricionales: en atmósfera con 5-10 % de CO2, a 33-37 ºC durante 24-48 horas.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Observar las características de las colonias. Para el medio
de cultivo conteniendo sangre, observar las reacciones de hemólisis: Hemólisis alfa: lisis parcial de
los glóbulos rojos. Se observa un halo de color verdoso alrededor de la colonia en estudio. Es
debido a la oxidación de la hemoglobina a metahemoglobina (compuesto de color verdoso) por el
peróxido de hidrógeno generado por los microorganismos. Hemólisis beta: lisis total de los
glóbulos rojos. Se observa un halo CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO Medio sin inocular Sin
cambios CRECIMIENTO Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio HEMÓLISIS Beta Alfa
Alfa CRECIMIENTO Satisfactorio Satisfactorio Satisfactorio 03/2021 - REV .02 DIAGNÓSTICO IN
VITRO CÓDIGO Nº ELABORADOR ESTÉRIL Nº DE DETERMINACIONES LOTE Nº FECHA DE
VENCIMIENTO LÍMITE DE TEMPERATURA INSTRUCCIONES DE USO MICROORGANISMOS
Escherichia coli ATCC 25922 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Enterococcus faecalis ATCC 29212
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 MICROORGANISMOS Streptococcus pyogenes ATCC 19615
Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 CONTROL DE
CALIDAD claro, brillante alrededor de la colonia en estudio. Hemólisis gamma: ausencia de lisis de
los glóbulos rojos. El medio de cultivo no presenta modificaciones de color y aspecto alrededor de
la colonia en estudio. Nutritivo Agar suplementado con 5% de sangre ovina: MATERIALES
NECESARIOS NO PROVISTOS Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de
calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según requerimiento.

PRECAUCIONES - Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclusivo. - No utilizar
el producto si al recibirlo su envase está abierto o dañado. - No utilizar el producto si existen
signos de contaminación o deterioro, así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento. -
Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto. - Considerar las muestras
como potencialmente infecciosas y manipularlas apropiadamente siguiendo las normas de
bioseguridad establecidas por el laboratorio. - Las características del producto pueden alterarse si
no se conserva apropiadamente. - Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos
del mismo según reglamentaciones vigentes.

El medio contiene extracto de carne, peptona y agar, siendo una formulación suficiente para el
desarrollo de los microorganismos. El extracto de carne proporciona al medio fuente de
carbohidratos, de nitrógeno y vitaminas. El empleo de este medio es de acuerdo al tipo de estudio
por realizar. PREPARACION: Rehidratar 23 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a
15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para
disolverlo por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos.
Enfriar aproximadamente a 45ºC. Vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar en refrigeración de 2
a 8ºC.

Presentación de 500 grs. *Para el aislamiento y cuenta de microorganismos poco exigentes a partir
de diversas muestras. En pruebas para comprobación de esterilidad. *FORMULA EN GRAMOS POR
LITRO DE AGUA DESTILADA: Agar 15.0, Extracto de carne de res 3.0, Peptona de gelatina 5.0 (pH
6.8 ± 0.2) *CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO: Escherichia coli–Colonias grandes, crema
brillante y lisas, Staphylococcus aureus–Colonias grandes ligeramente amarillas, brillantes y lisas,
Enterococcus faecalis–Colonias pequeñas, crema opacas y lisas.

¿Qué medios de cultivo utilizan normalmente para el cultivo de las bacterias de interés?.

Los medios de cultivo para microbiología son usados en laboratorios como material

alimenticio donde crecen los microorganismos. Estos medios de cultivo son artificiales y
deben reunir una serie de características que los hacen óptimos para que se dé el
crecimiento de microorganismo como bacterias, mohos o levaduras.

Características de los medios de cultivo

Entre las características o condiciones importantes con las que debe contar un medio de
cultivo están:

Temperatura: los microorganismos crecen de forma óptima en  temperaturas variadas que

depende del tipo de cultivo. Los cultivos deben proveer estas temperaturas ideales.

pH: el pH mide la acidez o alcalinidad. Muchos de los cultivos crecen mejor con un pH
neutro, aunque hay otros que requieren medios más ácidos.

Medios estériles: todos los medios de cultivos deben ser completamente estériles para
evitar que se pueda alterar, cubrir o incluso impedir el crecimiento microbiano normal.

Luz ambiental: los medios de cultivo deben estar ubicados donde no estén expuesto a luz
solar. La luz siempre debe ser controlada.

Humedad: las condiciones de humedad deben ser las adecuadas tanto para el medio como
para el ambiente donde se encuentra. Para muchos microorganismos se requiere un mínimo
nivel de humedad.

Consistencia del medio de cultivo

Los medios de cultivo que ofrecemos en MDM Científica pueden presentarse como

medios sólidos, semisólidos y líquidos. La consistencia dependerá del tipo de cultivo que se
quiera cultivar.

Los medios de cultivo se pueden modificar. A los medios líquidos pueden añadirse
productos como el Agar. Este material gelatinoso convierte los medios líquidos en
semisólidos o sólidos, dependiendo de cómo se requiera.

Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero
hay también gran cantidad de medios de cultivo líquidos, usados ampliamente en
laboratorios.

Microbiología Clínica e Industrial

Los medios de cultivo son mayormente usados en la microbiología clínica e industrial:

La primera se encarga de estudiar microorganismos relacionados con enfermedades,

agentes infecciosos o para controles epidemiológicos.

La segunda, la microbiología industrial, se encarga de estudiar y reproducir

microorganismos para el proceso de creación de diversos productos, como bebidas
alcohólicas.
 Según su utilización y su composición los medios de cultivo se pueden
clasificar en:
 Simples.
 Enriquecidos.
 Selectivos.
 Diferenciales.
 Enriquecimiento.

Teniendo en cuenta los tipos de medios de cultivo, seleccione mínimo 5 e investigue la

composición de cada uno de ellos, clasifíquelos y realice dibujos o tome fotos de cómo se ven
cuando se encuentran listos para inoculación de microorganismos.

.Variedad De Medios De Los medios de cultivo que se utilizan el laboratorio dependen del

Cultivo microorganismo que se pretende cultivar y de la finalidad de su
cultivo. Puede hacerse una descripción global de los mismos
atendiendo a su composición química, a su estado físico y la finalidad
del cultivo. Como la distribución se hace atendiendo a diferentes
criterios un medio de cultivo puede incluirse en más de una categoría.

Composición: 3.1 Según su composición química Para preparar los medios de cultivo

definidos/indefinidos definidos o sintéticos (ej el medio de Koser para la utilización del
citrato) se utilizan componentes de alta pureza, por lo que se conoce
su composición química (cualitativa y cuantitativamente).

  Cuando no es decisivo conocer la composición exacta del medio de

cultivo se utilizan medios indefinidos, naturales o complejos, como el
Agar nutritivo preparados con mezclas de
nutrientes como peptonas, extracto de carne, extracto de
levadura, agar-agar, etc.  

Estado físico: Líquidos/ 3.2. Según su estado físico .  Los medios de cultivo sólidos (como
sólidos/ semisólidos el  TSA) contienen el agente solidificante (generalmente agar al 1,5-
2%) y los medios de cultivo  líquidos (como el agua de peptona) no
llevan adicionados agentes solidificantes; los medios de cultivo 
semisólidos (como el  Agar de Hugh-Leiffson contienen el agente
solidificante en menor concentración que los sólidos.

Finalidad: Ordinarios/ 3.3. Según su finalidad   Cuando se cultivan microorganismos que

enriquecidos/ requieren nutrientes comunes, se utilizan medios de cultivo
diferenciales/, ordinarios (como el Agua de peptona): sus nutrientes permiten el
selectivos/de crecimiento de gran número de microorganismos, pero no de los que
enriquecimiento requieren nutrientes particulares. Las bacterias mas exigentes
nutricionalmente se cultivan en medios enriquecidos (como Agar
 chocolate  que es Agar nutritivo añadido del 10% de sangre calentada
–hemolizada-): Contienen los nutrientes ausentes de los medios
ordinarios, como por ejemplo  factores orgánicos de crecimiento.

  Cuando se pretende que el propio cultivo de la bacteria diferencie

entre distintos tipos de bacterias se utilizan Medios de cultivo
diferenciales (ej. Medio para la fermentación de la lactosa): algún
componente del medio proporciona un cambio visible del cultivo si
existen ciertas bacterias  (en el caso de la lactosa la acumulación de
ácidos).

   Puede favorecerse la probabilidad de seleccionar cierta bacteria

específica de una mezcla de ellas utilizando medios de
cultivo selectivos o realizando un enriquecimiento de la bacteria que
se pretende seleccionar, en detrimento de otras bacterias de la
mezcla. Los Medios de cultivo selectivos (como el Agar Mac Conkey)
son medios sólidos que contienen sustancias que inhiben el
crecimiento de algunas bacterias, pero permite el de otras. El Agar
Mac Conkey contiene sales biliares antibacterianas pero permiten el
crecimiento de las Enterobacterias cuyo hábitat natural (el intestino)
contiene tales sales antibacterianas. El resultado es el crecimiento
selectivo de las bacterias que resisten las sales biliares, entre ellas las
enterobacterias. El efecto antibacteriano selectivo de algunos medios
de cultivo permite su utilización sin aplicar
la esterilización convencional

  Los  cultivos de enriquecimiento se realizan en medios líquidos

(medios de cultivo de enriquecimiento), con alguna propiedad física o
química que favorecen el desarrollo de un determinado tipo
bacteriano, o se incuban bajo condiciones especiales: el desarrollo de
los microorganismos celulolíticos se favorece en un medio de cultivo
que contiene celulosa como único sustrato orgánico. Otros
microorganismos no podrán crecer tan eficientemente. V.cholerae es
una bacteria que tolera el pH alcalino, por lo que el Agua de peptona-
alcalina (pH 11) permite el enriquecimiento de Vibrio  cholerae de una
muestra de heces

  Medio de Koser  (por litro) Agua de TSA (Agar de triptona

peptona (por litro) y soja;  por litro)
Fosfato sódico 1,5
amónico g Peptona 10 g Peptona de 15 g
caseína
Fosfato monopotásico 1,0 NaCl  5 g
g Peptona de  4 g
soja
Sulfato magnésico 0,2
NaCl  5 g
 g

Citrato sódico 3,0 Agar 20 g

g

     

4. Composición de algunos medios de cultivo de uso común

Peptona 2g

Glucosa 10g

Azul de bromotimol            0.03g

NaCl 5g

K2HPO4 0.3g

Agar 2.5g

Peptona 10 g

NaCl  5 g

   

Lactosa  2 g

Púrpura de bromocresol  0,025 g

Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los que crece y se multiplican los
microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar diferentes especies bacterianas, con el
din de identificarlas y realizar estudios complementarios.

Clasificación

Pueden clasificarse según

su:

Consistencia
Origen

Composición

Utilización

Consistencia

Líquidos: contienen nutrientes a los cuales se les adicionan sustancias con la capacidad de

mantener  estables un pH, entre ellos

podemos encontrar el caldo nutritivo y caldo peptona.

Solidos: se obtienen agregando agar (sustancia de tipo polisacárido que se obtiene de algas
marinas) a un medio liquido determinado. Al tener un medio sólido, nos facilita obtener colonias
bacterianas aisladas.

Semisólidos: similares a los medios sólidos, la única diferencia es que a estos se les disminuye la
cantidad de agar, lo que permite conservar cepas bacterianas y la observación y registro de
bacterias móviles.

Origen

Según su origen los medios de cultivo se dividen en medios sintéticos y medios naturales.

Los medios sintéticos o químicamente definidos son medios compuestos por productos químicos
conocidos y se utilizan para realizar estudios metabólicos, por ejemplo: agar blando, caldo
nutritivo, agar eosina azul de metileno, etc.

Los medios naturales o químicamente no definidos son aquellos medios que se preparan a partir
de sustancias naturales animales o vegetales, por ejemplo: suero, leche, papa, etc.

Composición y utilización

Según su utilización y su composición los medios de cultivo se pueden clasificar en:

Simples

Enriquecidos

Selectivos
Diferenciales

Enriquecimiento

Medios Simples

Poseen los requisitos nutricionales para permitir el desarrollo bacteriano general, ejemplos: agar
nutritivo, caldo nutritivo, entre otros.

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Medios enriquecidos

Son medios simples o comunes, a los que se le añaden ciertos elementos como sangre, suero,
líquido ascítico, huevo, glucosa, vitaminas, etc. lo que permite el aporte de factores de crecimiento
o sustancias que neutralizan agentes inhibidores del crecimiento en bacterias exigentes
nutricionalmente, entre algunos ejemplos: agar sangre, medio de Löwenstein-Jensen, enriquecido
con huevo para facilitar el crecimiento de Mycobacterium; agar desoxicolato-lactosa (DLA),
enriquecido con lactosa y desoxicolato.

Medios selectivos
Se consiguen añadiendo al agar nutritivo compuestos químicos nocivos para algunas bacterias
cuyo crecimiento no es de interés o también mediante una alteración de las condiciones físicas del
medio, entre algunos ejemplos tenemos

El agar Mac Conkey que contiene cristal violeta.

Thayer-Martin medio selectivo para Neissar, ya que este posee antibióticos como la vancomicina
colistina y nistatina.

Caldo lactosado bilis verde brillante en donde la bilis inhibe el crecimiento de bacterias gran
positivas.

Löwenstein-Jensen con verde de malaquita es selectivo para Mycobacterium.

Medios diferenciales

A estos medios se le adiciona sustancias para que solo crezcan ciertas bacterias y estas, al actuar
sobre alguna de las sustancias adicionadas, permiten observar macroscópicamente ciertas
propiedades de crecimiento que ayudan a diferenciar sus colonas de otras especies diferentes,
entre algunos ejemplos encontramos:

Agar eosina azul de metileno (EMB), diferencia E. coli (color verde metálico brillante) de colonias
de Enterobacter aerogenes (color rosado, consistencia mucosa y crecimiento abundante).

Agar sangre, diferencia variedades de Streptococcus pyogenes en Streptococcus betahemolíticos

de Streptococcus alfa hemolítico y gama hemolítica.

Agar Salmonella-Shigella tiene lactosa y un indicador de pH que permite diferenciar las colonias de
bacterias fermentadoras de este disacárido.
Medios de enriquecimiento

Son medios líquidos que favorecen o permiten la multiplicación de las bacterias cuando la muestra
obtenida es muy pobre, por ejemplo:

Caldo tioglicolate, favorece el crecimiento de las bacterias anaeróbicas.

Caldo tetrationato favorece crecimiento de bacterias microaerófilas.

Los caldos bilis y de Muller-Kauffman, favorecen el crecimiento del género Salmonella.

Caldo o agua peptonada se utiliza para el crecimenot de Vibrio Cholerade.

 DISCUSION Y RESULTADOS

Para la obtención de los cultivos se tiene primero que obtener a los microorganismos, en primera
instancia se tiene que hablar de Robert Koch (padre de la bacteriología) donde explica como los
microorganismos están presentes en animales enfermos y que a partir de ellos se puede obtener a
los agentes causantes de enfermedades y sus postulados son: el organismo debe estar siempre en
animales que sufran la enfermedad y no en individuos sanos el agente debe ser aislado del cuerpo
en un cultivo puro a partir de las lesiones de la enfermedad del agente debe provocar la
enfermedad en un animal susceptible al ser inoculado del agente debe ser aislado de nuevo de las
lesiones producidas en los animales de experimentación y mostrar las mismas características que
el agente original. Ya una vez explicado los postulados podremos obtener al microorganismo y
posteriormente elaborar un medio de cultivo que es un material nutritivo para el crecimiento de
microorganismos, la mayoría de ellos pueden crecer en cualquier tipo de cultivo, sin embargo hay
otras que requieren medios especiales, en otras no crecen en ninguno de los medios existentes.
Cuando se hace el cultivo en medio solido se le agrega un agente solidificante conocido como agar
que es un polisacárido complejo proveniente de un alga marina utilizada anteriormente como
espesante de alimentos como jaleas y helados y sirve esencialmente ya que pocos
microorganismos pueden degradar el agar permaneciendo en estado sólido, en los laboratorios el
agar se mantiene en baños de agua a 50°C ya que no altera a la mayor parte de las bacterias
cuando son vertidas.[ CITATION Tor07 \l 2058 ]Así mismo una vez que el agar se solidifica puede
incubarse a temperaturas que se aproxima a los 100°C antes de que se licue y sirven
principalmente cuando se desea cultivar bacterias termófilas Los medios con agar se utilizan en
tubos de ensayo o en placas Petri cuando el agar se solidifica en un tubo de posición vertical se
denomina profundo mientras que las de Petri se realizan en placas poco profundas con una tapa
que cubre perfectamente la basepara evitar la contaminación de otro microorganismo.[ CITATION
Tor07 \l 2058 ]En lo que se elaboró en los laboratorios fue por el medio solido mediante el uso de
placas Petri con el método de cultivo puro (método de siembra por estría en placa) en el cual se
introduce un asa de inoculación estéril en un cultivo mixto que contenga un microorganismo y se
distribuye en la superficie del medio nutritivo para su posterior crecimiento y observación de la
bacteria que se aisló. (Hay varios tipos de medios de cultivo para aislar bacterias).
 CONCLUSIONES

Los medios de cultivo son uno de los métodos más usados para el análisis de microorganismos con
varios fines, como el de multiplicación, identificación, antibiograma, entre otros, y puede ofrecer
información valiosa sobre los mismos si se realiza de manera adecuada e higiénica para evitar la
contaminación del medio y la alteración de los resultados.
Aprendimos la importancia de preparar medios de cultivo, los cuales sirven para identificar
diferentes microorganismos.
 BIBLIOGRAFIA

https://www.probiotek.com/wp-content/uploads/2014/01/1022-A_AGAR-NUTRITIVO.pdf

https://es.slideshare.net/mwampii/medios-de-cultivo-practica

https://mdmcientifica.com/medios-cultivo-microbiologia-mas-usados/

https://ww2.ufps.edu.co/public/archivos/pdf/f184bd95d10bbe45165a5666b294c8c1.pdf

https://mdmcientifica.com/medios-cultivo-para-microbiologia/

https://www.studocu.com/es-mx/document/universidad-popular-autonoma-del-estado-de-
puebla/bacteriologia-y-micologia/discusion-practica-medios-de-cultivo/5913299

https://www.ica.gov.co/