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Appl Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538

https://doi.org/10.1007/s00253-017-8616-7

MINI-REVISIÓN

Propionibacteriumspp.—fuente de ácido propiónico, vitamina B12 y

otros metabolitos importantes para la industria

Kamil Piwowarek1&Edyta Lipinorteska1&Elżbieta haC-Szymanorteczuk1&marek kieliszek1&

IwonaScibisz2

Recibido: 30 de mayo de 2017 /Revisado: 31 de octubre de 2017 /Aceptado: 1 de noviembre de 2017 /Publicado en línea: 22 de noviembre de 2017
# El(los) autor(es) 2017. Este artículo es una publicación de acceso abierto

Resumenbacterias de laPropionibacteriumEl género consta de dos
grupos principales: cutáneos y clásicos. Cutáneo Propionibacterium
se consideran patógenos primarios para los humanos, mientras
que los clásicosPropionibacteriumSon ampliamente utilizados en la
industria alimentaria y farmacéutica. bacterias de la
Propionibacteriumgénero son capaces de sintetizar numerosos
compuestos valiosos con un amplio uso industrial. La biomasa de
las bacterias de laPropionibacteriumEl género constituye fuentes de
vitaminas del grupo B, incluyendo B12, trehalosa y numerosas
bacteriocinas. Estas bacterias también son capaces de sintetizar
ácidos orgánicos como el ácido propiónico y el ácido acético.
Debido al estado GRAS y sus características de promoción de la
salud, las bacterias delPropionibacteriumEl género y sus
metabolitos (ácido propiónico, vitamina B12 y trehalosa) se usan
comúnmente en las industrias cosmética, farmacéutica, alimentaria
y otras. También se utilizan como aditivos en piensos para el
ganado. En esta revisión presentamos las principales especies de
Propionibacteriumy sus propiedades y proporcionan una visión
general de sus funciones y aplicaciones. Esta revisión también
presenta la literatura actual relacionada con las posibilidades de
utilizar Propionibacteriumspp. para obtener metabolitos valiosos.
También presenta las vías biosintéticas, así como el impacto de la
* Kamil Piwowarek
kamil_piwowarek@sggw.pl
1
Departamento de Biotecnología, Microbiología y Evaluación de Alimentos, División de
Biotecnología y Microbiología de Alimentos, Facultad de Ciencias de la Alimentación,
Universidad de Ciencias de la Vida de Varsovia SGGW
(WULS-SGGW), Nooursynowska 159c Street,
02-776 Varsovia, Polonia
2
Departamento de Tecnología Alimentaria, División de Tecnología de Frutas y
Verduras, Facultad de Ciencias Alimentarias, Universidad de Ciencias de la
Vida de Varsovia (WULS-SGGW), Noyoursynowska 159c Street, 02-776
Varsovia, Polonia
factores genéticos y ambientales sobre la eficiencia de su
producción.
Palabras clavePropionibacterium.Ácido propiónico . Vitamina
B12 . Trehalosa. bacteriocinas
Introducción
Hasta la fecha, se han realizado numerosos estudios sobre el
uso de las bacterias dePropionibacteriumgénero, que reveló,
entre otros, que estas bacterias son capaces de biosintetizar
metabolitos valiosos, como el ácido propiónico, la vitamina B12,
las bacteriocinas y la trehalosa. Esto sugiere que constituyen un
grupo importante de microorganismos que son
industrialmente importantes en el futuro. La principal ventaja
de las bacterias delPropionibacteriumgénero es que tienen la
capacidad de crecer y sintetizar metabolitos sobre sustratos
que contienen diferentes residuos industriales, lo que eleva
considerablemente la rentabilidad económica de los procesos
biotecnológicos (Huang et al.2002; Yazdani y González2007;
Zhu et al.2010; Feng et al.2011; Ruhal y Choudhury 2012a;Zhu
et al.2012; wang y yang2013; Piwowarek et al.2016). bacterias
de laPropionibacteriumEl género y sus metabolitos (ácido
propiónico, vitamina B12 y trehalosa) se usan comúnmente en
las industrias cosmética, farmacéutica y alimentaria. También
se utilizan como aditivos en piensos para el ganado. En este
estudio presentamos la revisión bibliográfica más reciente
sobre las bacterias delPropionibacteriumgénero y sus
metabolitos como el ácido propiónico, la vitamina B12, la
trehalosa y todas las bacteriocinas conocidas y su uso actual y
potencial en diferentes industrias (Thierry et al.2005; Lee et al.
2013; Primo et al.2016; Divek y Kollanoor-Johny2016;
Angelopoulou et al.2017). Además, las vías biosintéticas de
estos metabolitos y la influencia de
516
factores ambientales y genéticos (Falentin et al.2010) sobre la
eficiencia de estos procesos y se revisa el impacto de diferentes
residuos industriales como fuentes de carbono sobre la
biosíntesis de estos metabolitos.
Caracterización dePropionibacterium
bacterias de laPropionibacteriumgénero fueron aislados y descritos
en la primera mitad del siglo XX por Eduard von Freudenreich, Orl-
Jensen y van Niela, quienes clasificaron este género en la clase
actinobacterias,pedidoactinomicetos,y familiaPropionibacteriaceae (
raza et al.1957). bacterias de la Propionibacteriumgénero se dividen
en dos grupos en función de su hábitat: piel (acnes) y clásica
(lácteos). El primer grupo comprende especies que están presentes
en la piel humana y en la mucosa oral y gastrointestinal, como
Propionibacterium acnes, Propionibacterium avidum,
Propionibacterium propionicum, Propionibacterium granulosum,y
Propionibacterium linfofilum (todos estos son microorganismos
patógenos). Los microorganismos que pertenecen al segundo
grupo filogenético incluyen las cepas clásicas: el primer grupo
comprende bacterias dePropionibacterium acidipropionici,
Propionibacterium jensenii,yPropionibacterium thoeniiespecies; el
segundo grupo contiene subespecies dentro Propionibacterium
freudenreichii (subesp.shermanii,subesp. freudenreichii) (Meile et
al.1999). Estas subespecies varían con respecto a dos
características: capacidad para reducir los nitratos y capacidad para
metabolizar la lactosa. Cepas bacterianas deP. freudenreichii
subesp. freudenreichiipueden reducir los nitratos, pero no tienen la
capacidad de fermentación de la lactosa. Sin embargo, las cepas de
P. freudenreichii subesp.shermaniipueden metabolizar la lactosa
(tienen genes que codifican la enzima β-D galactosidasa - EC
3.2.1.23), pero no son capaces de reducir los nitratos. Todas las
bacterias clásicas delPropionibacteriumtienen capacidad de
fermentación y son fuentes importantes de metabolitos valiosos,
como el ácido propiónico, la vitamina B12, la bacteriocina y la
trehalosa. Las bacterias del ácido propiónico (PAB) se utilizan en la
producción de queso (componentes de la vacuna para quesos
suizos y quesos holandeses al estilo suizo), encurtidos, ensilaje y
como probióticos en la nutrición animal. Los metabolitos obtenidos
de PAB se utilizan como conservantes.Propionibacteriumspp. están
presentes en las plantas herbáceas y en el rumen de las especies
bovinas, excrementos de los herbívoros, suelo, aguas residuales,
lodos, leche, encurtidos, agua después de la producción de aceite y
en jugo de naranja fermentado (Kusano et al.1997; Meile et al.1999;
Koussemon et al.2003; Leverrier et al.2004; Suomalainen et al.2008).
Propionibacteriumspp. son bacilos grampositivos, lo que
significa que no son móviles y no producen esporas
bacterianas, son catalasa positivos y tienen una longitud de 1 a
5 μm. Se reconocen como bacterias anaerobias o relativamente
anaerobias. Los PAB son muy pequeños y toman forma esférica
(cocos) en condiciones anaeróbicas. Sin embargo, en presencia
de oxígeno, muestran pleomorfismo en el que
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538
se observan células en forma de maza; también pueden tomar la
forma de las letras V e Y. El pH óptimo de las PAB oscila alrededor
de 7.0 (rango 4.5-8.0) en el que se caracterizan por su capacidad de
producir ácido propiónico y vitamina B12, y muestran una mayor
tasa de crecimiento incluso en el presencia de NaCl al 6,5% en su pH
óptimo. MásPropionibacteriumspp. son mesófilos; sin embargo,
son resistentes a temperaturas mucho más altas y pueden
sobrevivir hasta 20 s a 70 °C (algunas cepas soportan temperaturas
de hasta 76 °C durante 10 s). Su temperatura óptima de crecimiento
es de 30 °C. Los siguientes factores muestran un efecto inhibitorio
sobre laPropionibacteriumgénero: alta acidez, baja/alta
temperatura, alta concentración de sal y actividad del agua. La
adaptación de PAB a uno de los estresores antes mencionados
aumenta su resistencia a otros parámetros (Kujawski et al.1994;
Boyaval et al.1999; Koussemon et al.2003; Leverrier et al.2004;
Benjelloun et al.2007; Daly et al.2010). PAB tienen preferencias de
crecimiento significativas. Además de las sustancias necesarias para
su crecimiento (fuente de carbono y nitrógeno), también necesitan
una adecuada suplementación con microelementos (hierro,
magnesio, cobalto, manganeso, cobre, aminoácidos, vitaminas B7 y
B5 y clorhidrato de L-cisteína). La presencia de ácido aspártico en el
ambiente favorece el crecimiento de PAB y aumenta su eficiencia de
fermentación y producción de dióxido de carbono (Fröhlich-Wyder
et al.2002). Sus principales fuentes de carbono son los sacáridos (p.
ej., glucosa, lactosa, fructosa, ribosa y galactosa) y ácidos orgánicos
(ácido láctico). Obtienen nitrógeno a partir de péptidos,
aminoácidos, sales de amonio y aminas. Crecen muy lentamente en
medios sólidos y sólo en condiciones estrictamente anaerobias, a
una temperatura de 30 °C y con un pH óptimo. Su crecimiento dura
hasta 2 semanas cuando se cultivan en medio de lactato
suplementado con glucosa. Debido a esto, es difícil identificarlos y
aislarlos. Por lo tanto, se están realizando más estudios para
desarrollar métodos moleculares que puedan ayudar en la
detección de Propionibacteriumen su hábitat (Suomalainen et al.
2008). Las colonias de PAB en los medios sólidos pueden ser de
color crema, naranja, rojo o marrón según la especie; sin embargo,
en los medios líquidos, se comportan como un gránulo pesado
similar a la fibra.
Propionibacteriumspp. tienen muchas propiedades valiosas y desde
el punto de vista tecnológico, las siguientes son las más importantes:
pueden utilizar lactosa y lactatos como fuente de carbono, secretar
peptidasas intracelulares y proteasas asociadas a la pared celular,
sintetizar compuestos que tienen propiedades conservantes
(bacteriocinas, ácido propanoico y ácido acético), producen compuestos
que tienen aroma y sabor (la prolina aminopeptidasa libera prolina, que
contribuye al sabor dulce del queso; también tienen la capacidad de
convertir los aminoácidos libres en compuestos aromáticos), y son
capaces de producir vitamina B12 (Hugenholtz et al.2002). Algunos PAB
poseen estados generalmente reconocidos como seguros (GRAS) y
presunción calificada de seguridad (QPS), lo que significa que, si las
bacterias no han sido modificadas genéticamente, entonces las bacterias
vivas
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las células bacterianas y sus metabolitos se pueden añadir a los productos
alimenticios/piensos.
Uso industrial de PAB
bacterias de laPropionibacteriumgénero han encontrado una amplia
aplicación en la industria del queso como una microflora de queso (junto
con las bacterias del ácido láctico, que favorece el medio ambiente para
Propionibacteriumcepas), utilizado en la producción de queso de tipo
suizo de cuajo duro (queso suizo-Emmental, holandés-Leerdammer,
francés-Comté) y queso holandés polaco semiduro de tipo suizo (Tylż
ycki, Królewski). El papel de estas bacterias en la producción de queso se
basa en la fermentación de los lactatos a ácido propiónico y acético, lo
que le da un aroma específico al producto final; también sirven como
conservantes naturales (Thierry y Maillard2002; Thierry et al.2005).
Cultivos iniciadores que consisten en PAB y bacterias del ácido láctico
(Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Penicillium jensenii,y
Penicillium acidipropionici)están siendo utilizados en la producción de
encurtidos vegetales. Su combinación aumenta la velocidad del proceso
de fermentación y protege el producto final contra el moho y la
podredumbre, además de que los encurtidos obtenidos por este método
están enriquecidos con vitamina B12 y poseen un mejor sabor y
propiedades dietéticas. Es más,
P. freudenreichiisubesp.shermaniiinduce la apoptosis de las células
de cáncer de colon, que se atribuye a la producción de propionato y
acetato (Cousin et al.2016). Además, se han publicado estudios
sobre el uso deP. freudenreichii subesp.shermaniicomo aditivo que
promueve la salud en el queso Fetatype en 2017. Unidades
formadoras de colonias (UFC) de Propionibacteriumen el producto
de maduración aumentó hasta los 7 días del proceso, y se logró una
concentración de ácido propiónico de 52,1 mM a los 60 días. El
queso Fetatipo obtenido, además de impartir sabor, se caracterizó
por propiedades promotoras de la salud y también prolongó el día
de caducidad (Angelopoulou et al.2017). Las cepas PAB también se
utilizan en la producción de piensos (Bioprofit™),que es fuente de
vitamina B12; facilitan la asimilación de hierro y calcio en los
animales y protegen el producto final contra la infección por
hongos. Algunas cepas de PAB se utilizan como probióticos para la
alimentación animal.
P. freudenreichiiregula la microflora intestinal, estimulando el
crecimiento deBifidobacteriabacterias, y protege al organismo contra el
crecimiento de microorganismos patógenos al generar bacteriocinas.
PAB tiene la capacidad de eliminar micotoxinas en el tracto digestivo.
Estimulan el sistema inmunológico y disminuyen los efectos
mutagénicos de las enzimas fecales, además generan trehalosa y
vitaminas B12, H y ácido fólico. La adición de PAB al alimento da como
resultado su mayor uso, lo que promueve el crecimiento de los animales
jóvenes. También se están realizando investigaciones sobre el uso de
PAB vivo como sustituto de conservantes con efectos beneficiosos para
la salud en productos lácteos (por ejemplo, quesos y requesón de
yogur), frutas y verduras.
517
productos, yBproductos horneados^ (Langsrud et al.
1995; Mantere-Alhonen1995; Piveteau1999; Jan et al.
2002; Hojo et al.2007; Zárate et al.2002; Meile et al.2008;
Borawska et al.2010, Ranadheera et al.2010; Miks Krajnik
2012).
Biosíntesis del ácido propiónico
El ácido propiónico es un compuesto orgánico del grupo de los
ácidos carboxílicos (C2H5COOH). Es un líquido incoloro soluble en
agua a temperatura ambiente con un olor acre desagradable. El
ácido propiónico se usa principalmente como conservante (E280);
inhibe el crecimiento de levaduras y mohos. Se utiliza como
conservante en pan de molde preenvasado, pan de centeno, panes
con calorías reducidas y panecillos parcialmente horneados, pan de
pita y productos de pastelería. También se utiliza como conservante
en la alimentación animal. La concentración máxima recomendada
de ácido propiónico es de 3000 mg/kg de producto final. Casi el 80%
del ácido propiónico generado se utiliza en la industria alimentaria
y de piensos. Es un componente esencial de las fibras de celulosa,
herbicidas, perfumes y productos farmacéuticos.
Existen tres vías conocidas en la biosíntesis del ácido
propiónico. Uno de ellos utiliza bacterias deClostridium
propionicum, Bacteroides ruminicola,yMegasphaera elsdenii.En
estos microorganismos, el piruvato obtenido a través de la
glucólisis se convierte primero en lactato (en presencia de L-
lactato deshidrogenasa) y luego se genera lactoil-CoA como
resultado de la actividad propionato CoA-transferasa, que se
convierte en acriloil-CoA por actividad deshidratasa. . La acriloil-
CoA se reduce a propionil-CoA en la reacción catalizada por la
acriloil-CoA reductasa en el paso final. Esta vía es ineficaz ya
que el acriloil-CoA es tóxico para las células bacterianas. Los
efectos inhibidores de la acriloil-CoA están directamente
relacionados con el pH del medio ambiente: la concentración
tóxica mínima de acriloil-CoA es proporcional al aumento del
pH. La presencia de acriloil-CoA en el medio ambiente provoca
un aumento en la relación molar de ácido acético a ácido
propiónico incluso hasta 1:1 (teóricamente debería ser 1:2,1979
; Reichardt et al. 2014). Según un estudio (Kosmider et al.2010
a), la proporción de estos compuestos en la reacción de Wood-
Werkman podría ser de 1:8. Así, la acriloil-CoA puede contribuir
al aumento de la producción de ácido acético a expensas del
ácido propiónico, favoreciendo así la biosíntesis de ácido
acético. Además, la extracción de ácido propiónico por
destilación está fuertemente inhibida por la presencia de ácido
acético. La baja concentración de ácido acético da como
resultado una eficiencia mejorada y facilita el procedimiento de
obtención de ácido propiónico puro a partir de los medios
líquidos de poscultivo. Por lo tanto, es importante, desde un
punto de vista tecnológico, que durante el proceso de
producción de ácido propiónico, se
518
importante para mantener una baja eficiencia de la biosíntesis de ácido
acético (Barbirato et al.1997).
La fermentación de propanodiol es otro proceso biosintético
conocido utilizado en la producción de ácido propiónico. Algunas
bacterias tienen la capacidad de sintetizar 1,2-propanodiol a partir
de desoxiazúcares (p. ej., fucosa y ramnosa), dihidroxiacetona y
lactato. Esta vía fue identificada en bacterias de Salmonella enterica
yRoseburia inulinivoransy también deLactobacillusgénero. El
lactoaldehído sintetizado durante la biosíntesis se convierte en 1,2-
propanodiol, luego en propanal y finalmente en propionina en
presencia de deshidrogenasa. La eficiencia de la producción de
ácido propiónico durante la fermentación de propanodiol depende
de la fuente de carbono utilizada. Los principales productos de
fermentación son el ácido acético, el ácido fórmico y el ácido láctico,
cuando se usa glucosa como fuente de carbono. En tales
circunstancias, el ácido propiónico constituye un porcentaje
insignificante de los metabolitos generados. La producción de ácido
propiónico aumenta cuando se utiliza fucosa o ramnosa como
fuente de carbono; sin embargo, el ácido acético sigue siendo un
producto dominante (Zang et al.2010, Reichardt et al. 2014).
La vía de Wood-Werkman es la tercera y más importante vía
biosintética de producción de ácido propiónico en la que las
bacterias dePropionibacteriumse utilizan los géneros. Los
subproductos de esta vía son metilmalonil-CoA, succinil-CoA y
CO2. Una característica clave del ciclo Wood-Werkman en PAB
es la reacción de transcarboxilación. La enzima que cataliza
esta reacción es la metilmalonil-CoA carboxiltransferasa, que
transfiere el grupo carboxílico del metilmalonil-CoA al piruvato
con la generación de ácido oxaloacético y propionil-CoA (Fig.1).
Esta enzima es una carboxitransferasa dependiente de biotina
(EC 2.1.3.1) y consta de tres subunidades (1.3S, 5S y 12S)
(Falentin et al.2010).
Vía de Wood-Werkman (Fig.1) comienza con la
transformación del piruvato generado durante la glucólisis en
oxaloacetato en presencia de metilmalonil-CoA
carboxitransferasa y biotina-CO2complejo. Luego, el
oxaloacetato se reduce a succinato a través de malato y
fumarato. En la siguiente etapa, la succinil CoA sintetasa acetila
el succinato en succinil-CoA, que en cooperación con la
coenzima B12 (cobalamina) y la metilmalonil-CoA mutasa se
transforma en metilmalonil-CoA, que a continuación conduce a
la generación de propionil-CoA. La CoA transferasa libera CoA a
partir de propionil-CoA, transformándola en propionato (Fig.1).
Además de las bacterias dePropionibacteriumgénero, esta vía
también está presente enVeilonella alcalescensySelenomonas
ruminantium (Reichardt et al.2014).
La vía de Wood-Werkman (Fig.1) es el mejor desde la perspectiva
de la producción de ácido propiónico. En comparación con las otras
dos vías, en esta vía, el producto principal de la fermentación es el
ácido propiónico, que se sintetiza de manera muy eficiente en
comparación con el ácido acético y otros subproductos (Kosmider et
al.2010a; Wang et al.2013). este camino es
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538
caracterizado también por una amplia gama de posibles fuentes de
carbono a aplicar (ricosPropionibacteriumsistema enzimático intensifica
este efecto). La ventaja de esta vía es también el hecho de que ninguno
de los productos intermedios de fermentación es directamente tóxico
para las células que lo sintetizan. Sin embargo, la producción de ácidos
da como resultado la acidificación del medio ambiente, lo que inhibe el
crecimiento adicional de los microorganismos, lo que disminuye la
producción de ácido propiónico (Zhang y Yang 2009). Sin embargo, esto
se puede corregir fácilmente neutralizando el entorno de producción.
Método de producción de ácido propiónico.
El ácido propiónico se sintetiza actualmente a través de procesos
petroquímicos (por la hidrocarboxilación de etileno) que requiere un
gasto financiero sustancial y causa un daño considerable al medio
ambiente. Esto resulta del hecho de que la producción química de ácido
propiónico es más económica que el proceso microbiano que utiliza PAB.
El precio de mercado del ácido propiónico sintético cuesta $1000/
tonelada, mientras que el costo de 1 tonelada de ácido producido
mediante procesos biotecnológicos con la participación de PAB puede
alcanzar los $2000.
El mercado global de producción de ácido propiónico alcanzó su
punto máximo en casi $ 935 MM en 2012. Según
MarketsandMarkets, esta cifra debería aumentar a al menos $ 1.7
mil millones para 2018 (la gran mayoría involucra el producto
sintético). Los países en desarrollo de África y Asia pueden
responder a tales demandas. Además, el aumento de la demanda
de ácido propiónico de origen microbiano se atribuye a las
crecientes necesidades de las comunidades de Norteamérica y
países europeos, donde se observa el creciente interés por los
productos ecológicos. Este aumento de la demanda de ácido
propiónico está relacionado con la introducción de los productos
conBetiqueta limpiaŝ sin aditivos artificiales en el mercado
(Baumann y Westermann2016). Considerando la escasez de
recursos y los graves daños ambientales causados por la
producción química de ácido propiónico, así como por el aumento
de la demanda de productos alimenticios naturales y ecológicos,
existe una creciente demanda en la producción microbiana de ácido
propiónico con el uso de los productos de desecho generados por
diversas industrias. Esto debería reducir considerablemente el costo
así como también debería mejorar el estado ambiental. Para ello, es
necesaria la búsqueda de nuevas rutas metabólicas para
intensificar la biosíntesis de metabolitos en PAB (Chen et al.2012;
Wang et al.2013; Guan et al.2015c).
bacterias deP. freudenreichii, P. jensenii, P. thoenii,y
P. acidipropioniciespecies parecen ser las más apropiadas
para la producción biotecnológica de ácido propiónico. Por
su amplia variedad de sistemas enzimáticos, pueden utilizar
carbón de diversas fuentes, puro y de desecho (Boyaval y
Corre1987; Carrondo et al.1988; Hsu y Yang1991; lewis y
yang1992; Quesada-Chanto et al.
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538 519

Figura 1Ruta de biosíntesis del ácido 2.1.3.1

piruvato
propiónico en PFREUD_18840 (1.3S)
Propionibacteriumespecies (Falentin et PFREUD_18870 (5S)
al.2010) *número de enzima (rojo), PFREUD_18860 (12S)
nombre del gen (negro), locus (verde)

oxaloacetato

1.1.1.37
Trabajador de la madera
mdh
Ciclo
malato
S-metilmalonil-CoA 4.2.1.2
fumC
mco5.1.99.1 Fumarato
1.3.99.1
R-metilmalonil-CoA sdhA, A3, sdhB, B3,

muta succinato
6.4.1.3 5.4.99.2
MutB
pccB
`
Propionil CoA Succinil-CoA

2.8.3.-
cuna

propionato

1994; Barbirato et al.1997; Ramsay et al.1998; Himmi et al.
2000; Huang et al.2002; Yazdani y González2007; Zhu et al.
2010; Feng et al.2011; Zhu et al.2012; Piwowarek et al. 2016
).
La utilización de productos de desecho que se generan a
partir de los procesos tecnológicos es uno de los problemas
importantes de las empresas manufactureras y los
ambientalistas. La gestión adecuada de los residuos tiene
muchos beneficios, entre ellos la contaminación ambiental y los
costos de limpieza limitados, la mejora de la higiene o la
posibilidad de adquirir nuevos productos a bajo costo. Por ello,
los investigadores buscan constantemente soluciones
innovadoras para gestionar los residuos industriales,
especialmente en biotecnología. Los productos de desecho son
un reservorio frecuente de compuestos biológicamente activos
(pueden ser una buena fuente de carbono, proteínas, pectina,
fibra, vitaminas y ácidos orgánicos). Por lo tanto, es
recomendable considerar los productos de desecho como
reservorios de materiales valiosos que pueden procesarse más.
Esto reducirá el costo del enriquecimiento de los medios, lo que
resultará en productos más baratos.
eliminación de residuos, sino también a través de su
transformación en compuestos industriales útiles y valiosos,
como el ácido propiónico, que actualmente se obtiene a través
de la producción química (Cybulska et al.2013, Piwowarek y Lipi
norteska2015).
Los métodos de cultivo por lotes y semicontinuos se utilizan
con frecuencia en la producción de ácido propiónico (Barbirato
et al.1997; Zhu et al.2010). La producción de ácido propiónico
con el uso de PAB puede tener una inhibición de
retroalimentación por la acumulación extensa de
subproductos, principalmente ácido acético (disminuye el pH,
por lo que inhibe el crecimiento bacteriano) (Suwannakham y
Yang2005). Se realizó fermentación extractiva para reducir el
efecto de los ácidos generados en la producción de propionato
(Jin y Yang1998; Zhu et al.2012). El proceso de fermentación
realizado en estas condiciones también tiene desventajas,
como la reducción de la efectividad del proceso como resultado
de la presencia del compuesto de extracción en el cultivo que
aumentó la presión osmótica (Kourkoutas et al. 2005; Meynial-
Salles et al.2008). Suwannakham y Yang (2005) realizaron
cultivo inmovilizado de
520
P. acidipropioniciATCC 4875 dentro del biorreactor, con el fin de reducir
el efecto de los ácidos sobre la actividad metabólica de las bacterias. Las
células inmovilizadas produjeron una cantidad mucho mayor de ácido
propiónico (71,8 g/l), lo que indica que las células bacterianas mostraron
una mayor resistencia a los ácidos generados. Este método produjo
entre un 20 % y un 59 % más de propionato, un 17 % menos de ácido
acético y un 50 % menos de succinato en comparación con las células
libres. Los tallos de caña de azúcar fueron utilizados por Chen et al. (
2012) para la inmovilización de
P. freudenreichiiCCTCC M207015. La mayor concentración
de ácido propiónico (136,23 g/L) se obtuvo mediante
fermentación continua, la cual aumentó un 21,07 % con
respecto a las células libres. En cada caso (Suwannakham y
Yang2005; Chen et al.2012), se observaron cambios
morfológicos en las células inmovilizadas, como triplicar la
longitud, disminuir el diámetro y aumentar el área de
superficie, lo que probablemente resultó en un transporte
más efectivo de los compuestos y metabolitos a través de
las membranas celulares. Esto, a su vez, aumentó la
producción de ácido propiónico por parte de las bacterias.
Investigación para mejorar la biosíntesis de ácido propiónico
mediante ingeniería genética
El ácido propiónico se produce principalmente mediante procesos
petroquímicos; sin embargo, existe un interés creciente en la
obtención de este compuesto a través de la fermentación de la
biomasa renovable. Biosíntesis de ácido propiónico con el uso de
bacterias delPropionibacteriumEl género lamentablemente se
caracteriza por la baja eficiencia del proceso desde un punto de
vista industrial. Por lo tanto, los intentos de intensificar el proceso
de fermentación a través de herramientas de ingeniería genética
están en marcha. Pocas estrategias se realizaron con éxito. Por
ejemplo, Suwannakham et al. (2006) producción mejorada de ácido
propiónico a partir deP. acidipropioniciATCC 4875 eliminando
reconocergen que codifica acetato quinasa de su genoma. Esto
resultó en la inhibición de la producción de ácido acético y, por lo
tanto, aumentó la producción de ácido propiónico.P. acidipropionici
mutante (privado del gen que codifica acetato quinasa) fue utilizado
por Zhang y Yang (2009) durante su estudio sobre la tolerancia de
PAB a la condición ácida mediante la inmovilización de las bacterias
en un reactor de lecho fibroso. Después de aproximadamente 3
meses de adaptación del mutante, la concentración de ácido
propiónico en el caldo de fermentación alcanzó los 100 g/L, que fue
sustancialmente mayor que la concentración del metabolito con el
uso de la cepa de tipo salvaje (71 g/L) . El mutante inmovilizado se
caracterizó por una menor susceptibilidad a los ácidos producidos
como resultado del aumento de la actividad y expresión del gen
que codifica H+-ATPasa, que está relacionada con el bombeo de
protones y la capacidad de la célula para controlar su gradiente de
pH intracelular. Sobreexpresión de genes
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538
La codificación de glicerol deshidrogenasa (GDH), malato
deshidrogenasa (MDH) y fumarato hidratasa (FUM) a través de
la ingeniería genética mejoró la producción de ácido propiónico
por Liu et al. (2015). Se encontró que la actividad de estas
enzimas en la cepa modificada era de 2,91 a 8,12 más alta que
la de la cepa de tipo salvaje.P. jensenii,mientras que el nivel de
transcripción aumentó de 2,85 a 8,07. La coexpresión de GDH y
MDH aumentó la producción de ácido propiónico de 26 a 39 g/
L.
Wang et al. (2015a) analizaron los efectos de la
sobreexpresión de tres enzimas dependientes de biotina, a
saber, piruvato carboxilasa (PYC), metilmalonil-CoA-
descarboxilasa (MMD) y metilmalonil-CoA transcarboxilasa
(MMC) que son responsables del flujo de carbono en el Wood-
Werkman. ciclo. Los mutantes con sobreexpresión de MMC y
MMD se caracterizaron por una mayor síntesis de ácido
propiónico y una producción reducida de ácidos acético y
succínico en comparación con la cepa de tipo salvaje. Sin
embargo, el crecimiento de los mutantes que sobreexpresan
PYC fue más lento, produjo más succinato y tuvo un 12 %
menos de eficiencia en la biosíntesis de propionato. Wang et al.
(2015b) inspeccionaron el efecto de la sobreexpresión de
propionil-CoA/succinato CoA transferasa (CoAT) nativo en las
células deP. shermanii en la producción de ácido propiónico a
partir de glucosa y glicerol. La cepa mutada produjo más ácido
propiónico y se caracterizó por un 10% más de eficiencia. La
sobreexpresión de CoAT podría haber resultado en la dirección
del contenido de carbono en la biosíntesis de ácido propiónico,
aumentando así la eficiencia. En otros estudios, Ammar et al. (
2014) gen clonado que codifica la fosfoenolpiruvato carboxilasa
(PPC) deEscherichia colidentroP. freudenreichii. PPC cataliza la
conversión de oxalacetato en fosfoenolpiruvato en presencia
de CO2. Sobreexpresión de PPC enP. freudenreichiicambió
significativamente la fermentación del ácido propiónico. Los
mutantes que sobreexpresan PPC utilizaron glicerol de manera
más efectiva y produjeron propionato más rápido que el tipo
salvaje. Esto se puede atribuir a una unión más eficiente de CO2
y cambios en la vía del ácido dicarboxílico.
bacterias deP. freudenreichiisubesp. No puede utilizar xilosa, un
azúcar que abunda en la biomasa leñosa. Wei et al. (2016)
identificaron tres genes en la vía catabólica de la xilosa enP.
acidipropionici:xilosa isomerasa (xylA),transportador de xilosa (
xylT),y xiluloquinasa (xilB).La sobreexpresión de estos genes enP.
freudenreicohola subsp.shermaniicélulas se llevó a cabo utilizando
el vector de expresión pKHEM01, lo que permitió al mutante una
utilización eficaz de la xilosa, incluso en presencia de glucosa. El
mutante generado se caracterizó por una cinética de fermentación
similar de glucosa, xilosa y mezcla de glucosa/xilosa. Cepa
construida deP. freudenreicohola subsp.shermaniipor lo tanto,
puede representar una alternativa potencial para la fabricación
industrial de ácido propiónico y otros productos de alto valor
agregado a partir de biomasa lignocelulósica (Liu et al.2012).
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538
La biosíntesis de ácido propiónico se controla mediante un
mecanismo de retroalimentación en bacterias del
Propionibacterium género. El aumento de la resistencia
bacteriana a los ácidos es la estrategia más eficaz para
aumentar la biomasa de PAB y, posteriormente, la síntesis de
ácido propiónico (Guan et al. 2014). Para lograr esto, Guan et al.
(2012) utilizaron evolución adaptativa y barajado del genoma.
Un papel significativo de la arginina desiminasa (EC 3.5.3.6) y
glutamato descarboxilasa (EC 4.1.1.15) en la tolerancia
bacteriana contra los ácidos enP. acidipropionicicélulas (Guan
et al.2013; Zhang y Yang,2009) también se determinó. Guan et
al. (2015b) trató de mejorar la resistencia deP. jensenii ATCC
4868 contra el efecto de los ácidos a través de la
sobreexpresión de cinco genes:Arca, ARCC, gadB, GDH,yybaS,
codificando, entre otras, glutamato deshidrogenasa y arginina
deiminasa. El efecto más positivo sobre la resistencia
bacteriana al ácido propiónico y la eficiencia de su producción
resultó de la sobreexpresión degadB (que codifica la glutamato
descarboxilasa). Resistencia de
P. jenseniicontra el ácido aumentó más de 10 veces (en
comparación con la cepa de tipo salvaje), y la eficacia alcanzó
una cantidad total de 5,92 g/g de glicerol (aumentó en un
23,8%). Sus resultados han confirmado que la expresión de
genes a través de la ingeniería genética dio como resultado un
cambio en el grupo de aminoácidos y una expresión adicional
de otros genes, lo que puede haber contribuido al aumento de
la biosíntesis de ácido propiónico. Esta es una estrategia
efectiva para aumentar la producción de propionato con el uso
de bacterias delPropionibacteriumgénero. Esta estrategia
puede ser útil en la producción de otros ácidos orgánicos. El
conocimiento científico actual del funcionamiento de la
resistencia al ácido en las células dePropionibacterium
permaneció en el nivel microambiental. Por lo tanto, se
requieren más pruebas para comprender estos mecanismos.
Los métodos de biología de sistemas podrían ser útiles en este
sentido. Las tecnologías que comparan la genómica y la
transcriptómica se pueden usar para obtener cepas bacterianas
resistentes a los ácidos a nivel de ADN, mientras que la
proteómica y la metabolómica se pueden usar para identificar
proteínas y metabolitos clave, así como las vías responsables de
una característica particular. La biología de sistemas, que
implica la introducción de características de un organismo en
otro, también se puede utilizar para mejorar la resistencia de
Propionibacterium a pH bajo. Para ello, se introducirán en
Propionibacterium (Guan et al. 2015a,2015b). Por ejemplo, Lu
et al. (2013) identificaron un nuevo sistema de resistencia a los
ácidos enE. coli,en la reacción en la que la L-glutamina se
convierte en ácido L-glutámico con liberación de amoníaco.
Elementos responsables de este cambio enE. colipuede llegar a
ser aplicable enPropionibacterium para aumentar la resistencia
a las condiciones ácidas. El factor de limitación de la ingeniería
metabólica de bacterias de
521
losPropionibacteriumgénero es el sistema de modificación de
restricción (RM), que disminuye las capacidades de
transformación de la célula. Este es un revés importante para
las manipulaciones genéticas (Van Luijk et al.2002). Estos
sistemas coordinan la actividad de las enzimas de restricción y
modificación para distinguir el ADN extraño del ADN del
huésped, protegiendo así a las células contra la introducción de
material genético extraño.
La aplicación de la biología de sistemas y los métodos de la biología
sintética pueden resolver los problemas y proporcionar nuevos datos y
posibilidades, que amplían el alcance dePropionibacterium solicitud.
Una verdadera revolución en términos de romper las limitaciones del
sistema RM en las células PAB puede ser un método de modificación del
ADN, basado en la proteína Cas9-CRISPR-Cas9 (repeticiones
palindrómicas cortas agrupadas regularmente interespaciadas (CRISPR)
asociadas). Este sistema utiliza los elementos de la inmunidad adquirida
en bacterias y arqueas en respuesta a la infección por fagos y la
transformación genética con nuevo material genético. Los
microorganismos incluyen fragmentos de ADN extraño en sus loci
CRISPR en el genoma, lo que permite un rápido reconocimiento futuro y
la erradicación de infecciones. Cas9 puede utilizarse para introducir
cambios estables en el genoma (knock-out y knock-in), entre otros, en
los procesos de modificación genética y activación o silenciamiento de
genes seleccionados (Jinek et al. 2012; Wiedenheft et al.2012; Cong et al.
2013; Jiang et al. 2013; Ran et al.2013; Ousterout et al.2014).
Biosíntesis de vitamina B12
La vitamina B12 es un término general que se utiliza para los
compuestos del grupo de las cobalaminas. Esto incluye cuatro formas
químicas básicas: cianocobalamina, en la que el cobalamina se sustituye
por el grupo CN-, la hidroxocobalamina por el grupo OH-, la
metilcobalamina por el grupo CH-; y desoxiadenosilcobalamina que
contiene un resto 5-desoxiadenosilo. La vitamina B12 pertenece a los
compuestos de corrina (cobalaminas). La molécula de cobalamina consta
de cuatro subunidades de pirrol (A-D) conectadas entre sí en posición
alfa, estableciendo así una estructura macrocíclica. La primera
subunidad se conjuga con la cuarta (A y D) directamente a través del
enlace químico Cα-Cα. Esta estructura se une al átomo de carbono de
posición central con dos ligandos coordinados (superior e inferior), por
ejemplo, grupo cianídico, adenosina y 5,6-dimetilbencimidazol (DMBI).
DMBI es responsable de las propiedades terapéuticas de la vitamina B12
en humanos. La presencia de otro sustituyente como la adenina en la
posición DMBI forma la llamada pseudovitamina B12, que es activa solo
en las células bacterianas (Raux et al.1999; Arroyo2001; Martens et al.
2002). La vitamina B12 solo puede ser sintetizada por las células
bacterianas y las arqueobacterias y, entre otros, por los
microorganismos del suelo, por la microflora en el tracto digestivo de
humanos y animales, fertilizantes naturales y aguas residuales. Leche,
queso, huevos, carne de rumiantes, aves, pescado, crustáceos y
despojos de carne
522
son las fuentes de vitamina B12 en la dieta humana (Rodionov et al.
2003; Ortigues-Marty et al.2006; Smith et al.2007). En humanos, la
ingesta recomendada de cobalamina depende de la edad y el
estado fisiológico de la persona. La dosis diaria óptima para
mujeres y hombres (edad≥14 años) es de 2,4 μg, mientras que la
dosis diaria para mujeres embarazadas y lactantes es de 2,6 a 2,8
μg. La vitamina B12 es esencial en la eritropoyesis (formación de
glóbulos rojos en la médula ósea) y en muchas otras funciones del
organismo humano (Fenech2001; Knasmüller y Verhagen2002;
Paoloni-Giacombino et al.2003; Kolling et al.2004; Luggen2006;
Smith et al.2007). Los efectos severos de la deficiencia de vitamina
B12 son anemia, aterosclerosis, enfermedades cardíacas,
enfermedades neurológicas (parálisis de extremidades, ataxia y
letargo), aumento de la susceptibilidad del ácido
desoxirribonucleico (ADN) a daños, cambios en la metilación y otros
(Aleman et al.2001; Fenech2001; Dharmarajan et al.2003; Figlin et
al. 2003; Luggen2006).
La cobalamina se sintetiza a través de dos mecanismos: aeróbico
(con la participación demazorcagenes presentes en bacterias de
Pseudomonasgénero) y anaeróbico (con la participación de cbi
genes presentes en bacterias deBaciloySalmonela género).
bacterias de laPropionibacteriumEl género necesita condiciones
tanto anaeróbicas como aeróbicas (el genoma de estas bacterias
tiene genes con el prefijocbiymazorca)para producir efectivamente
vitamina B12 (Scott1994; Raux et al.1996; Raux et al.1998; Martens
et al.2002; Falentin et al.2010).
La biosíntesis de todos los derivados tetrapirrólicos en plantas,
arqueas y la mayoría de las bacterias comienza con el esqueleto de
glutamato C5. El primer paso es la adición de glutamato aARNtpor la
acción del glutamil-tRNAGlúsintetasa. Esta reacción requiere la hidrólisis
de una molécula deatpen AMP y PPi. A continuación, ARNtGlúse reduce a
glutamato-1-semialdehído, y esta reacción es catalizada por glutamil-
tRNA reductasa. El glutamato-1-semialdehído formado se convierte
luego en ácido 5-aminolevulínico (ALA) por la glutamato-1-semialdehído
aminotransferasa, primer precursor general de cualquier tetrapirrole
conocido (transferencia intramolecular del grupo amino entre C-2 y C-1
del semialdehído). ). La adenosilcobalamina se produce a partir del
uroporfirinógeno III, que se deriva de ocho moléculas de ácido 5-
aminolevulínico. Los primeros pasos en la producción de vitamina B12 se
realizan en condiciones anaeróbicas y son catalizados por las enzimas
codificadas por los genes concbi prefijo (fig.2). La síntesis de la vitamina
B12 comienza con la dimerización de las moléculas de ácido 5-
aminolevulínico, lo que resulta en la generación de porfobilinógeno
(PBG). El siguiente paso es la polimerización de cuatro moléculas de PBG,
lo que resulta en la formación de preuroporfirinógeno. Posteriormente,
este compuesto sufre inversión y ciclación generando uroporfirinógeno
III biológicamente activo, un precursor de la estructura de la corrina.
Tres enzimas participan en las reacciones antes mencionadas: 5- ácido
aminolevulínico deshidratasa (dobladillo B),porfobilinógeno desaminasa
(hemC),y uroporfirinógeno III sintasa (dobladillo D). La acción de la
uroporfirinógeno-III C-metiltransferasa da como resultado
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538
la metilación de este compuesto en las posiciones C-2 y C-7,
provocando la versión prototipo del anillo (precorrina-2)formación.
Inmediatamente después de generarse, el prototipo del anillo
corrin se une al cobalto. Esta reacción es catalizada por la quelatasa
independiente de ATP. El carbono C-20 se elimina tras la unión del
cobalto y la oxidación en forma de acetaldehído, lo que está
relacionado con la presencia de cobalto que puede tener diferentes
estados de oxidación (de +1 a +3). En las siguientes nueve
reacciones que son catalizadas por diferentes tipos de enzimas (Fig.
2), que involucra la metilación del carbono en las posiciones
apropiadas, el anillo de corrina se convierte en cobinamida. Esto se
logra mediante la conjugación de aminopropanol con un resto de
ácido propiónico unido a la cadena lateral del anillo D. Las
siguientes reacciones requieren la presencia de oxígeno ya que son
catalizadas por las enzimas codificadas por los genes conmazorca
prefijo (fig.2). En consecuencia, se crea el ligando inferior y los
ligandos superior e inferior se unen a la cobinamida. La formación
del nucleótido presente bajo el anillo macrocíclico resulta de la
transferencia del resto fosforribosilo del mononucleótido de
nicotinamida a DMBI para producir α-ribazol. Luego, el rybazol α se
une en presencia de GDP a la adenosilcobamamida, que libera
GMP. Todas las transformaciones antes mencionadas conducen a la
generación de la forma completa de adenosilcobalamina (Fig.2)
(Lamm et al.mil novecientos ochenta y dos; Blanca et al.1989;
Warren et al.1990; Louie et al.1992; Jordán1994; Sattler et al.1995;
Warren et al.1998; Roessner et al.2002; Warren et al.2002; Piao et al.
2004a,2004b; Falentin et al.2010; kosMider y Czaczyk2010B; Khan
Mazharuddin et al.2011, Chamlagain2016).
La vitamina B12 activa se diferencia de la pseudovitamina por la
presencia de DMBI en la posición inferior del ligando del anillo
macrocíclico. Según Deptula et al.2015, losP. freudenreichiiEl genoma
tiene la enzima de fusión BluB/CobT2 implicada en la producción de la
forma activa de vitamina B12. Comprender los mecanismos que afectan
la síntesis de diferentes formas de cobalamina es importante en el
contexto de la selección de cepas y el aumento de la producción de
vitamina B12. Treinta genes están implicados en la biosíntesis de
vitamina B12 enP. freudenreichii (Roth et al.1993). Los más importantes
desde el punto de vista industrial son los pasos finales de la vía
(producción, activación y unión del ligando inferior) que determinan la
generación de vitamina terapéuticamente activa. El complejo enzimático
BluB/CobT2 es clave en la biosíntesis de la vitamina B12 activa (fig.2). El
DMBI se genera mediante la reducción de FMN catalizada por la enzima
BluB en bacterias anaerobias. El DMBI generado luego es activado por la
enzima CobT2 (CobT2 es responsable de la introducción selectiva de
DMBI en la cobinamida), lo que da como resultado la producción de
fosfato de α-ribazol, que luego se une al anillo macrocíclico creando una
molécula completa de forma activa de cobalamina. Entre los siete
homólogos analizados de CobT2 derivados de diferentes
microorganismos, todos se caracterizaron por tener afinidad con DMBI y
falta de capacidad para utilizar otros sustratos, lo que impide la
biosíntesis de compuestos inactivos. Bajo nivel de producción de
pseudovitamina B12, que es causado por la falta
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538
Figura 2Biosíntesis de vitamina B12 Ácido 5-aminolevulinato
por las bacterias de 4.2.1.24
dobladillo
Propionibacteriumgénero (Falentin et
al.2010) *número de enzima (rojo), porfobilinógeno
nombre del gen (negro) 2.5.1.61
dobladillo
Hidroxilmetilbilano
4.2.1.75
dobladillo
Uroporfirinógeno III
2.1.1.107
CysG/cbiX
precorrina-2
1.3.1.76/4.99.1.3
CysG/cbiX
Co-precorrina-2
2.1.1.151
cbiL
Condiciones no aeróbicas
Co-precorrina-3
2.1.1.131
cbiEGH
Co-precorrina-4
2.1.1.133
cbiF
Co-precorrina-5A
cbiEGH
Co-precorrina-5B
2.2.1.-
cbiD
Co-precorrina-6A
1.3.1.54
cbij
Co-precorrina-6B
cbiEGH
Co-precorrina-7
CBIT
Co-precorrina-8
5.4.1.2
cbiC
Ácido cobirínico
de la capacidad del complejo enzimático para utilizar, por ejemplo,
adenina, sugiere queP. freudenreichiiLas bacterias prefieren la
forma activa de cobalamina como cofactor de procesos enzimáticos
(Falentin et al.2010; Deptula et al.2015, Chamlagain2016).
TodosPropionibacteriumlas cepas capaces de producir vitamina
B12 de forma activa pueden producirla sólo en presencia de
oxígeno. Está relacionado con la dependencia de oxígeno del
ligando DMBI. Por lo tanto, la producción de vitamina B12 con el
uso de PropionibacteriumLas cepas se pueden dividir en dos fases:
en la primera fase, las células bacterianas deben cultivarse en
condiciones anaerobias durante los primeros días para generar el
precursor de la vitamina B12, es decir, la cobinamida (intermedio
que carece del grupo DMBI). En la segunda fase, la biosíntesis de la
cobalamina activa finaliza con una aireación delicada del cultivo
durante los días siguientes, cuando se sintetiza el ligando inferior y
se conjuga con la cobinamida generada previamente (Fig.2).
También es importante mantener un pH neutro y una adecuada
523
Cob(II)ácido irínico a,c-diamida
1.16.8.1
Byo
tuB/CoBT2
C (I) ácido irínico a,c-diamida
transmisión exterior
2.5.1.17
cobA2
a,c-diamida del ácido adenosil-Cob(I)irínico
6.3.5. 1 0
mazorca
hexamida del ácido adenosil-cobírico
6. 3. 1.1 0
CoBD
adenosil cobinamida
2.7.1.156
cobU
fosfato de adenosil cobinamida
2.7.7.62
CoBtu
adenosina-GDP-cobinamida
2.7.8.26
CoBS
VITAMINA B12
Ami
roBic Co itío s
Dakota del Norte
norte
6.3.1.-
cbia
temperatura (respectivamente: pH 7,0 y temp. 30 °C) (Miyano et
al.2000; Lemán2007) del entorno de producción para una
producción eficiente. Por lo tanto, es necesario eliminar el ácido
propiónico y acético generado durante la fermentación, por
ejemplo, mediante la alcalinización de los medios, Bfiltración de
flujo cruzado (Hatanaka et al.1998), fermentación con
purificación en columna de carbón activado (Nakano et al.1996
), fermentación por extracción (Zhang et al. 1993), electrodiálisis
(Lewis y Yang1992), o inmovilizando células bacterianas (Yang y
Huang1995; Czaczyk et al.1997a; Czaczyk et al.1997b). Para
mantener una producción eficaz, los medios de cultivo deben
complementarse con compuestos o precursores importantes
durante la biosíntesis de la vitamina B12, como iones de
cobalto, DMBI, glicina, treonina, ácido 5-aminolevulínico,
betaína (presente en la melaza de remolacha) y colina. ,
independientemente de las cepas de producción utilizadas
(Roman et al.2001).
524
Producción industrial de vitamina B12
Debido a la complejidad (aproximadamente 70 etapas) y los altos costos
de síntesis química de la cobalamina, su producción industrial se basa
únicamente en procesos de fermentación con microorganismos,
típicamenteP. denitrificans (Blanca et al.1995; Blanca et al. 1998; Piao et
al.2004a,2004b). En los últimos años ha aumentado el enriquecimiento
de productos alimenticios con vitamina B12 mediante fermentación in
situ. En este contexto, llama la atención queP. freudenreichii es el único
microorganismo utilizado con estado GRAS, que puede sintetizar la
forma activa de vitamina B12, lo que lo convierte en una solución única
en la producción comercial de la vitamina, alimentos y suplementos
microbiológicos de piensos con ella. Es más,P. freudenreichiilas bacterias
producen vitamina B12 terapéuticamente activa con la producción
menor concomitante de un análogo inactivo. Se conocen otros
organismos productores de vitamina B12, y que están clasificados como
especies GRAS, pero por diferentes causas son menos atractivos para la
industria que los PAB. Por ejemplo,Lactobacillus reuterilas bacterias no
pueden incluir ligandos distintos de la adenina en la parte inferior del
anillo; sintetizan vitamina B12 que es inactiva para los humanos (Santos
et al.2007; Crofts et al.2013).
Hay dos formas de sintetizar la vitamina B12 por
Propionibacterium:en el primer método se utilizan cultivos
bacterianos, que son los responsables del enriquecimiento de
ciertos productos alimenticios fermentados con vitamina B12 (Van
Wyk et al. 2011). En segundo lugar, la vía química de producción de
vitamina B12, que requiere mucha mano de obra y es bastante
costosa, se reemplaza por la síntesis microbiana.
La empresa Aventis (líder en producción de vitamina B12)
prefiere utilizarP. denitrificans (que carece del estatus) para la
producción industrial de cobalamina. Biosíntesis de vitamina B12
porP. denitrificans,contrariamente aP. freudenreichii,tiene lugar en
condiciones aeróbicas puras. La combinación de ingeniería genética
con procedimientos de mutagenización concomitantes permitió a
los científicos de Rhône-Poulenc-Rorer obtener una
P. denitrificanscepa que produce vitamina B12 a un nivel de 300
mg/L (Blanche et al.1995). Blanca et al. (1989) describen la
amplificación de ocho genes decobF–cobMoperón, lo que resultó en
un aumento del 30% en la producción de cobalamina. Una mejora
adicional de la biosíntesis del metabolito (en un 20 %) fue posible
aumentando las copias decobAymazorca genes Los genéticamente
modificadosP. denitrificanscepa permite la producción de vitamina
B12 cubriendo el 80% de su demanda global (Martens et al.2002).
Para mejorar la eficiencia de la producción de cobalamina,
P. freudenreichiicepa fue manipulada genéticamente. Piao et al. (
2004a,2004b) permitió un aumento de 2,2 veces en la biosíntesis de
cobalamina, pero se encontró que su eficiencia era baja en
comparación conP. denitrificans.Expresaron los genes que
participan en la biosíntesis de cobalamina (dobladillo, mazorca, y
cbi).El clon recombinado deP. freudenreichii, que posee el vector de
expresión pPK705 concobA, cbiLF,
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538
ocbiEGHel inserto produjo respectivamente 1,7, 1,9 y 1,5 veces
más cobalamina que la cepa salvaje. Los científicos (Piao et al.
2004a,2004b) también introdujo lahemagen en el vector de
expresión aislado deRhodobacter sphaeroides células y genes
endógenosdobladilloycobA,obteniendo así 2,2 veces más
vitamina B12 que cuando se utilizaP. freudenreichii que
contiene el vector pPK705.
El uso de microorganismos modificados genéticamente en la
producción de metabolitos para la profilaxis de la salud humana es
motivo de considerable controversia. Por ello, se han realizado
numerosos estudios para optimizar la producción de vitamina B12
utilizando microorganismos que no están sujetos a modificaciones
genéticas. Estos estudios están dedicados a la búsqueda de cepas
caracterizadas por eficiencias naturalmente altas de biosíntesis de
vitamina B12 o eficiencia del método de cultivo (Tabla1). Además, se
han realizado intentos para mejorar la eficiencia de la biosíntesis de
cobalamina mediante la optimización de la composición de los
medios de fermentación mediante la selección de las fuentes de
carbono más apropiadas (Quesada-Chanto et al.1994), adición de
micronutrientes (Trojanowska y Czaczyk1996) e iones de cobalto
(Seidametova et al.2004), y el uso de diferentes factores al mismo
tiempo (Chiliveri et al.2010). Se obtuvo una mejora considerable en
la producción de vitamina B12 al enriquecer los medios de
producción con precursores (Marwaha et al.1983; Murooka et al.
2005) y análogos de la vitamina B12 (Thirupathaiah et al.2012).
Wang y Yang (2013), al cofermentar glucosa y glicerol por su
adición gradual, pudieron obtener cantidades relativamente
altas de vitamina B12 y ácido propiónico utilizando
P. freudenreichiisubesp.shermanii (0,72 mg/g y 0,71 g/g,
respectivamente). El uso de ambas fuentes de carbono por
separado condujo a resultados inferiores. Wang et al. (2013)
demostraron que un sistema de fermentación integrado puede
proporcionar un método eficaz para la producción económica y
ecológica de ácido propiónico y vitamina B12.
Un factor clave que limita la producción de vitamina B12
activa porPropionibacteriumbacteria es la biosíntesis del
ligando inferior del metabolito, es decir, DMBI. Chamlagain et
al. (2016) probaron la influencia de los precursores de DMBI
(riboflavina (RF) y nicotinamida (NAM)) y DMBI en la producción
de vitamina B12 porP. freudenreichiiyP. acidipropionicien
medio a base de suero. La suplementación concomitante de
medios con RF (40 mM) y NAM (27 mM) aumentó cuatro veces
la producción de vitamina B12 en comparación con los cultivos
de control. Para muchas cepas, la eficiencia de la producción de
vitamina fue comparable o superior a la obtenida mediante la
adición de DMBI (100 mM). Chamlagain et al. (2016)
demostraron que la disponibilidad de RF y NAM aumenta la
producción de vitamina B12 activa porP. freudenreichii
dependiendo de la cepa.
Wang P. et al. (2015) probaron la influencia del ácido propiónico
y DMBI en la producción de vitamina B12 combinado con la
purificación en una columna de absorción utilizando un biorreactor.
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538 525

tabla 1Producción de vitamina B12 por cepas seleccionadas de laPropionibacteriumgénero

Son fuente de carbono Produccion de Referencias

vitamina B12

P. acidipropioniciDSM 8250 melaza de remolacha 34,8 miligramos por litro Quesada-Chanto et al.1994
P. acidipropioniciDSM 8250 melaza de caña 28,8 miligramos por litro Quesada-Chanto et al.1994
P. freudenreichiisubesp. shermaniy OLP-5 Glucosa 31,67 miligramos por litro Thirupathaiah et al.2012
Propionibacterium freudenreichiiNCIB 1081 Glucosa 4,3 miligramos por litro Czaczyk et al.1997a jardinero y
Propionibacterium shermaniiFRDC Pr1 Licores de fermentación (fermentación láctica) 1,8 mg/l champán2005 Hatanaka et al.
Propionibacterium shermaniiPZ-3 Glucosa 52 miligramos por litro 1998 Yu et al.2015
P. freudenreichiisubesp.shermaniiDSM 20270 Residuos de la producción de tofu 10 miligramos por litro

Propionibacterium freudenreichiiCCPI 10019 Glucosa, extracto de maíz 42,6 miligramos por litro Wang et al.2012

En consecuencia, los autores determinaron que mantener una La vía OtsAB incluye dos reacciones enzimáticas que son
concentración inicial y posterior de ácido propiónico de 10 a 20 y 20 catalizadas por trehalosa-6-fosfato sintasa y trehalosa
a 30 g/l, respectivamente, puede aumentar la producción de fosfatasa: la primera enzima cataliza la transformación de UDP-
cobalamina de manera eficiente. Su método que involucra el glucosa por glucosa-6-fosfato en trehalosa-6-fosfato, que luego
control de la cantidad de ácido propiónico y DMBI resultó en la es hidrolizada por fosfatasa trehalosa (Fig.3). En las bacterias
eficiencia de la vitamina B12 (58.8 mg/L). capaces de utilizar almidón, glucógeno o maltodextrina como
fuente de carbono, tiene lugar una ruta de biosíntesis de
trehalosa diferente, que es catalizada por dos enzimas:
maltooligosil trehalosa sintasa (TreY) y maltooligosil trehalosa
Biosíntesis y papel de la trehalosa trehalohidrolasa (TreZ) (De Smet et al. .2000; Cardoso et al.2007
enPropionibacterium ). TreY impacta el enlace glucosídico α-1,4- en el extremo
reductor de la maltodextrina, transformando así el enlace en
La trehalosa natural consta de dos moléculas de glucosa unidas por enlace glucosídico α,α-1,1, dando como resultado
un α,α-1,1′-O-enlace glucosídico. Debido a la baja energía del enlace
glucosídico, es el disacárido termodinámica y cinéticamente más
estable que se encuentra en la naturaleza. Debido a que las OtsAB Glucosa
unidades de Dglucopiranosilo están unidas por la participación de Pólipo
Glucoquinasa
átomos de carbono anoméricos, la trehalosa no tiene propiedades
reductoras.
Glucosa 6-fosfato
La trehalosa está ampliamente distribuida en las células vivas, por
ADP-glucosa
ejemplo, en levaduras, hongos, plantas y microorganismos (nematodos, Trehalosa-6-fosfato
sintasa
crustáceos e insectos). También se identificó en numerosas células
bacterianas, incluidasPropionibacterium.La presencia de trehalosa en
Trehalosa 6-fosfato
PAB ya ha sido descrita hace 50 años (Stjernholm1958), sin embargo, el Trehalosa-6-fosfato
fosfatasa Pi
metabolismo del disacárido de trehalosa en estas células bacterianas
trehalosa
solo se ha entendido recientemente.
El disacárido de trehalosa desempeña diferentes funciones en trehalosa sintasa

diferentes organismos. Desempeñan un papel protector en

respuesta al estrés inducido por, entre otros, temperatura alta o
Maltosa
GGG(G)norte
baja, deshidratación o cambios en la presión osmótica.P.
amilomaltosa
freudenreichiilas bacterias son capaces de acumular altos niveles de
trehalosa, particularmente en condiciones de estrés. Se conocen tres Glucosa GGG(G)n+1
cinco rutas metabólicas de la trehalosa: OtsAB, TreS, TreYZ, TreP y
TreT (Avonce et al.2006). Las dos primeras vías son utilizadas por
Propionibacteriumbacterias Siguiendo los informes de Cardoso et
al. (2007), síntesis de trehalosa porP. freudenreichiitiene lugar a Glucólisis
través de la vía OtsAB, mientras que TreS es responsable de su Fig. 3Esquema del metabolismo de la trehalosa enP. freudenreichii (Cardoso
catabolismo. et al.2007; Ruhal et al.2013)
526
en la formación de maltooligosyl trehalose. Posteriormente,
TreZ cataliza la hidrólisis del segundo enlace glucosídico α-1,4
de la maltooligosil trehalosa, lo que conduce a la liberación de
trehalosa (Elbein et al.2003). En ciertas bacterias (p. ej.,
Pimelobactersp.), se detectó trehalosa sintasa (TreS) que
cataliza la reagrupación intracelular de maltosa a trehalosa.
TreS isomeriza el enlace glucosídico α-1,4 de la maltosa a
enlace glucosídico α,α-1,1 formando trehalosa (Elbein et al.2003
). Posteriormente, la enzima trehalosa fosforilasa (TreP)
participa en la vía biosintética del disacárido de trehalosa,
teniendo lugar en determinados hongos. TreP cataliza la
liberación hidrolítica de trehalosa a partir de trehalosa-6-fosfato
que se formó anteriormente a partir de glucosa y glucosa-1-
fosfato. La última vía biosintética conocida de trehalosa se
determinó en células hipertermófilas deThermococcus litoralis
arqueón En estas células está involucrada la trehalosa
glicosiltransferasa sintasa (TreT), que cataliza la biosíntesis
reversible de trehalosa a partir de ADP-glucosa y glucosa (Qu et
al.2004; Ryu et al. 2005).
La trehalosa-6-fosfato sintasa se ha identificado en numerosas
especies de bacterias, levaduras, mohos, plantas e insectos.
Dependiendo de la especie, existe una especificidad variable de
OtsA hacia la fuente de glucosa. En caso deP. freudenreichii,
siempre que las proteínas OtsA estén bajo condiciones de estrés,
exhiben afinidad por la ADP-glucosa. En caso de crudoP.
freudenreichiiextractos, OtsA utiliza únicamente ADP-glucosa,
mientras que OtsA pura recombinada, además de ADP-glucosa,
también utiliza UDP-, GDP- y TDP-glucosa. Esto sugiere que la
proteína reguladora, que determina la especificidad de OtsA hacia
ADP-glucosa, es la segunda proteína de la vía OtsB (Fig.3) (Cardoso
et al. 2007).
En respuesta al estrés osmótico o a la disminución del pH del
medio ambiente,P. freudnereichiimuestra un aumento en el nivel
de trehalosa-6-fosfato sintasa de la vía OtsAB, mientras que el nivel
de enzimas de la vía TreS permanece inalterado o disminuye
levemente. Esto confirma que bajo condiciones de estrés para
Propionibacteriumespecies: la trehalosa se sintetiza solo a través de
la vía OtsAB. La ausencia de vías comunes de degradación de la
trehalosa en el extracto deP. freudnereichii sugiere que la vía TreS
es responsable de la actividad en estas células, lo que resulta en la
descomposición de la trehalosa en maltosa (Fig.3). Alta actividad de
amilomaltasa en el extracto deP. freudnereichiiindica que desde el
extremo reductor de la maltosa de los maltooligosacáridos,
obtenidos a través de TreS, se libera glucosa, que posteriormente
es catabolizada en la vía de la glucólisis (Cardoso et al.2007; Othake
y Wang2010).
El papel fisiológico de numerosas vías de trehalosa se
determinó claramente solo en varias especies bacterianas (De
Smet et al.2000; Lobo et al.2003; Makihara et al.2005). Se
observaron fuertes evidencias en la degradación de la trehalosa
a través de la vía TreS enSphaeroides rhodobactermutantes
(Makihara et al.2005). También se ha propuesto una vía TreS
similar paraCorynebacterium glutamicumcélulas. El curso
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538
La reacción catalizada por TreS en estas bacterias está dirigida tanto a la
síntesis como a la degradación de la trehalosa. La síntesis de trehalosa
tiene lugar únicamente cuando la maltosa es la única fuente de carbono
disponible en el medio ambiente (Wolf et al.2003), en los casos
restantes, TreS es responsable de la descomposición de trehalosa a
maltosa.
La trehalosa se acumula en las células deP. freudenreichiien
respuesta al estrés osmótico, oxidativo, ácido y térmico. Sugiere
claramente una función protectora de este azúcar frente a los
factores antes mencionados. Durante condiciones de estrés, como
osmolaridad elevada, la trehalosa es responsable de mantener la
elasticidad de la célula. El papel de la trehalosa como eliminador de
radicales de oxígeno se ha demostrado enSacchraomyces
cerevisiae (Benaroudj et al.2001; Chi et al.2001). La acumulación de
trehalosa en reacción al efecto de la temperatura elevada se ha
explicado en una variedad de organismos mesófilos, como
levaduras y bacterias.E. coliyS. enterica) (Strom1993; de Virgilio et
al.1994; Cánovas et al.2001). También se han determinado genes de
trehalosa sintasa en el genoma dePicrophilus torridusbacteria, que
tiene un pH óptimo de crecimiento de 0,7. Lo más probable es que
para este microorganismo la trehalosa participe en la estabilización
de la membrana celular, que tiene que soportar fuertes gradientes
de pH en el medio ambiente.
La maltosa, la sacarosa y la glucosa son las fuentes de carbono
comúnmente utilizadas en la investigación para la producción de
trehalosa. Sin embargo, han sido reemplazados gradualmente por
desechos de diferentes ramas de la industria, principalmente de la
industria agrícola y alimentaria, por ejemplo, almidón de maíz y
glicerol crudo (Ruhal y Choudhury2012a). Algunos estudios han
indicado una mejora en la eficiencia de la obtención de trehalosa
mediante el uso de mutantes osmóticamente sensibles de
Propionibacterium (Ruhal y Choudhury)2012a,B) y optimización de
las condiciones ambientales (Cardoso et al.2004).
Cardoso et al. (2004) examinó 18 cepas de Propionibacterium
aislado de diferentes fuentes lácteas para la producción de
trehalosa. Entre los microorganismos estudiados, solo tres no
exhibieron la capacidad de biosintetizar y acumular trehalosa. Esto
indica que los microorganismos probados tienen la capacidad de
producir trehalosa. El nivel más alto de acumulación del disacárido
trehalosa se determinó en las células deP. freudenreichiisubesp.
shermaniiNizo B365 (131 mg/g). Los científicos (Cardoso et al.2004)
también determinaron la influencia de la citada cepa sobre las
condiciones ambientales durante la producción de trehalosa. Se
descubrió que la lactosa es la mejor fuente de carbono para la
producción de trehalosa. Sin embargo, se encontró que el lactato,
que tiene un impacto muy bueno en el crecimiento de bacterias, es
un precursor débil de la acumulación intracelular del polisacárido.
Cuando se agotaron las fuentes de carbono contenidas en el medio,
Cardoso et al. (2004) comenzaron a observar una pérdida gradual de
trehalosa en la biomasa, lo que sugiere su papel como material de respaldo
en las células bacterianas. También determinaron un aumento en
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538
acumulación intracelular de trehalosa en las siguientes condiciones:
descenso del pH ambiental de 7,0 a 4,5, concentración de NaCl al 2 % y
cultivo en condiciones aeróbicas, donde la saturación de aire fue del 50
%. La acumulación máxima de trehalosa en las células aumentó de 200 a
400 mg de trehalosa/g de biomasa. Estos resultados indican un papel
dual de la trehalosa en PAB. Al ser un compuesto de reserva, este
metabolito también funciona para proteger a las células bacterianas
contra las condiciones ambientales de estrés.
P. freudenreichiisubesp.shermaniiNizo B365 puede producir cantidades
relativamente grandes de trehalosa a partir de leche reducida en grasa,
lo cual es prometedor con respecto a la producción de productos lácteos
fermentados enriquecidos con trehalosa (Cardoso et al.2004).
Ruhal y Choudhury (2012a,B) demostraron que la biosíntesis de
trehalosa por mutantes y de tipo salvajeP. freudenreichii subesp.
shermaniien el medio ambiente, donde el glicerol crudo era la única
fuente de carbono. En el caso del mutante con sensibilidad
osmótica elevada, la acumulación del metabolito fue tres veces
mayor en comparación con la cepa de tipo salvaje (fue de 391 mg/g
de biomasa). Lo más probable es que esto se deba al aumento de la
actividad de la ADP-glucosa pirofosforilasa.
La producción industrial de trehalosa se realiza principalmente
mediante la conversión enzimática (Chi et al.2003). Aunque los métodos
enzimáticos son eficientes, el uso de bacterias y desechos industriales en
la producción de trehalosa se ha incrementado, lo que podría influir en
el costo de producción del disacárido de trehalosa y, por lo tanto, en su
precio de mercado (Li et al.2011). Se probó la capacidad de ciertas
bacterias para acumular trehalosa para la aplicación industrial, entre
otros,Corynebacterium, E. coli (Li et al.2011), y
P. freudenreichii (Ruhal et al.2011; Ruhal y Choudhury 2012a,B;
Dalmasso et al.2012). Comprender el metabolismo de la trehalosa
podría fomentar el desarrollo de cepas resistentes al estrés,
utilizadas en procesos de fermentación industrial.Lactococcus lactis
es el mejor ejemplo en este sentido. Es posible desarrollar una cepa
de la especie caracterizada por una mayor acumulación de
trehalosa y una mejor resistencia al ácido (pH 3,0), baja
temperatura (4 °C), choque térmico (45 °C) y deshidratación
(Carvalho et al.2011).
Aplicación industrial de la trehalosa
La trehalosa recibió el estatus GRAS de la FDA de EE. UU.; por lo
tanto, puede agregarse a productos destinados a un consumo
ampliamente entendido (Mancini et al.2011). El disacárido de
trehalosa se ha utilizado ampliamente en la industria alimentaria,
cosmética y farmacéutica, y también se ha aplicado en medicina.
La trehalosa es resistente al pardeamiento no enzimático, que es causado
por la reacción de Maillard (como azúcar no reductor, la trehalosa no está
sujeta a reacciones con compuestos que contienen grupos amino) y la
caramelización (esto se debe a la baja energía del enlace glucosídico de la
trehalosa, lo que resulta en una alta durabilidad). La trehalosa es la mitad de
dulce que la sacarosa, asegura la prolongación de
527
niveles de energía y provoca una secreción muy baja de insulina. Esto
hace que el disacárido de trehalosa se use comúnmente en las
industrias de producción de alimentos. Se utiliza principalmente como
edulcorante y como agente espesante (relleno); enmascara los olores
desagradables y protege el almidón, los lípidos y las proteínas contra el
daño oxidativo y el daño por calor o frío. La trehalosa se agrega, por
ejemplo, a vegetales y frutas secos para mantener su aroma y
características organolépticas (Higashiyama2002; Elbein et al.2003;
Kroger et al.2006; Othake y Wang2010). Teniendo en cuenta el creciente
interés de los consumidores en términos de salud y belleza, la trehalosa
tiene un gran potencial en aplicaciones comerciales, como el azúcar
adelgazante. Una ventaja adicional de la trehalosa es el hecho de que
exhibe una perfecta estabilidad durante el procesamiento (Cardoso et al.
2004), así como resistencia al estrés, como baja temperatura y alta
osmolaridad (Ruhal Choudhury2012b). Debido al efecto protector de la
trehalosa sobre los liposomas en cosméticos y proteínas y lípidos de la
piel, se encuentra en la preparación de ungüentos hidratantes. Las
investigaciones han demostrado que la solución de trehalosa al 2 %
puede disminuir los olores desagradables emitidos por la piel humana
hasta en un 70 % (inhibe la descomposición de ácidos grasos
insaturados y ciertos aldehídos). Por lo tanto, la trehalosa encuentra
aplicación en desodorantes, perfumes y antitranspirantes (Higashiyama
2002; Teramoto et al.2008; Yu et al.2012). Es un componente de
THEALOZ® gotas utilizado para tratar la sequedad en el ojo. Esto se
debe a que puede proteger a las células epiteliales de la córnea contra la
deshidratación y la desnaturalización de los tejidos (Lee et al.2013).
Aparte de esto, la trehalosa se utiliza en la producción de soluciones
utilizadas en la crioconservación de células madre y el almacenamiento
de órganos y tejidos destinados a trasplantes. Además, prolonga la vida
útil de vacunas y anticuerpos, y permite el almacenamiento de enzimas
restrictivas y ADN polimerasa a temperatura ambiente. Según diferentes
estudios, el consumo de alimentos que contienen trehalosa influye en la
mejora del metabolismo óseo y previene el desarrollo de osteoporosis
(Higashiyama2002; Teramoto et al.2008; Yu et al. 2012). Las
denominadas proteínas y polipéptidos terapéuticos se utilizan en el
tratamiento de numerosas enfermedades (p. ej., artritis, anemia,
diabetes y cáncer). Su delicada estructura los hace muy susceptibles al
efecto de las enzimas proteolíticas, la degradación química y física, o la
agregación en los fluidos corporales, todo esto influye en la pérdida de
actividad biológica de la molécula. Se han realizado investigaciones (Jain
y Roy2008) sobre portadores de proteínas de hidrogel entrecruzados
con trehalosa. Teniendo en cuenta sus propiedades bioprotectoras,
cuando se libere, será capaz de crear un microambiente que impida la
inactivación de proteínas y polipéptidos terapéuticos secretados junto
con la trehalosa. Además, se han realizado intentos para utilizar la
trehalosa en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas tales
como el Alzheimer, el Parkinson o la enfermedad de Huntington. La
agregación y fijación atípicas de proteínas individuales tiene lugar en
pacientes con cualquiera de las enfermedades anteriores. Un estudio
demostró que la trehalosa disminuye tales efectos e inhibe la formación
de amiloides neurotóxicos (Liu et al.2005; Miura et al.2008; Yu et al.2012;
Chaudhary et al.2014).
528
Biosíntesis y papel de las bacteriocinas sintetizadas por
PAB
Las bacteriocinas son moléculas de péptidos o proteínas
sintetizadas en los ribosomas con un efecto antimicrobiano, que es
producido por bacterias Gram-negativas y Gram-positivas. Según la
literatura, hasta el 99% de las bacterias tienen la capacidad de
biosintetizar al menos una bacteriocina (Klaenhammer, 1993).
Inicialmente se pensó que estas sustancias exhiben actividad
únicamente hacia los microorganismos relacionados con el
productor de la bacteriocina dada. Sin embargo, investigaciones
posteriores demostraron que tienen efecto sobre microorganismos
de géneros distintos al del productor, incluidos microorganismos
patógenos, comoListeria monocytogenes, Staphylococcus aureus,y
Clostridiumspp. La actividad, la estabilidad y la forma en que actúan
las bacteriocinas están determinadas por su composición de
aminoácidos y estructura molecular (Jack et al.1995; Schillinger et al.
1996).
En los últimos años, los consumidores han manifestado un gran
interés por los alimentos sin conservantes químicos; así, se han
realizado una serie de estudios sobre los métodos biológicos de
conservación de alimentos. Una de las soluciones podrían ser los
metabolitos bacterianos que presenten un efecto antimicrobiano,
constituyendo una alternativa a los conservantes químicos, por ejemplo,
las bacteriocinas o los cultivos bacteriocinógenos vivos. Estos
compuestos se consideran no tóxicos para los humanos; son sensibles al
efecto de, entre otros, la pepsina y la tripsina (están sujetas a
degradación en el tracto digestivo), y no se ha determinado un impacto
negativo de las bacteriocinas sobre las características organolépticas y
sensoriales de los alimentos (Cabo et al.2001; Cleveland et al.2001). La
aplicación de bacteriocinas como bioconservantes en la industria de
alimentos y piensos requiere la comprensión de las características de
estos compuestos con especial énfasis en su estructura, mecanismo de
acción y estabilidad. Además, es necesaria la legalización de las
bacteriocinas como aditivos alimentarios. No deja de tener importancia
también la cuestión económica relacionada con la optimización de sus
condiciones de producción. Los PAB se utilizan ampliamente en la
producción de alimentos, lo que los hace interesantes como una fuente
potencial de compuestos con propiedades antimicrobianas (Faye et al.
2000; Miescher et al.2000; Brede et al.2004; Faye et al.2004; van der
Merwe et al.2004; Gwiazdowska y Trojanowska2005; Gwiazdowska2010).
Las bacterias clásicas y dérmicas del géneroPropio
nibacteriumtienen la capacidad de producir bacteriocinas. La
mayoría de estos compuestos son producidos por las especies
clásicas, comoP. thoenii, P. jensenii,yP. freudenreichii (Al-Zoreky
et al.1991; Faye et al.2000; Miescher et al.2000; Ben-Shushan et
al.2003; Brede et al.2004; van der Merwe et al.2004;
Gwiazdowska y Trojanowska2005).
La biosíntesis de bacteriocinas depende de una variedad de
factores: pH, temperatura y composición y consistencia del
medio de cultivo. El pH apropiado para la producción de
bacteriocinas por PAB depende de la cepa que se utilice. los
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538
La producción más intensa de propionina PLG-1 tiene lugar a
un pH de 7, mientras que la producción máxima de jensenina G
se ha observado a un pH de 6,4 (Lyon et al.1993; Hsieh et al.
1996; Ekinci y Descalzo1999; Brede et al.2004). Faye et al. (2000)
observaron una temperatura óptima diferente durante la
biosíntesis de propionicina T1 usando dos cepas deP. thoenii.
La cepa LMG 2792 alcanzó la mayor producción de propionicina
T1 a una temperatura de 22 °C, mientras que la cepa 419
alcanzó su mayor producción a una temperatura de 30 °C. Los
mejores medios para la biosíntesis de bacteriocinas por PAB en
condiciones de laboratorio son caldo con lactato de sodio, MRS,
y medio consistente en melaza de remolacha y macerado de
maíz. Ben-Shushan et al. (2003) demostraron que la producción
de propionicina PLG-1 en medio líquido por laP.thoenii La cepa
P127 fue superior a la de la cepa GBZ-1, mientras que en medio
semilíquido, ambas bacteriocinas tuvieron niveles de
producción comparables. Bacteriocinas dePropionibacteriumse
caracterizan por una baja actividad antimicrobiana en el
ambiente de cultivo. Por lo tanto, es importante optimizar las
condiciones relacionadas con la biosíntesis de bacteriocinas y
optimizar un método adecuado para su separación y eficiencia.
Debido a la baja concentración de bacteriocinas, es necesario
concentrar los líquidos de postcultivo para determinar su
actividad antimicrobiana (Lyon et al.1993; Ekinci y Descalzo1999
; Morgan et al. 1999; Faye et al.2000; Brede et al.2004).
El mecanismo de acción de las bacteriocinas puede ser de naturaleza
bactericida y/o bacteriostática. La mayoría de las bacteriocinas
producidas por PAB muestran un efecto antagónico hacia
PropionibacteriumyLactobacillusespecies. El efecto de las bacteriocinas
de PAB hacia cepas estrechamente relacionadas es variable y depende
del grado de relación de la cepa del productor y la cepa sensible. La
actividad de las bacteriocinas se ve influenciada además por la dosis, el
grado de purificación, la fase de crecimiento de las células sensibles, el
pH y la temperatura del ambiente (Cintas et al.2001). La mayoría de las
bacteriocinas tienen efecto bactericida sobre microorganismos sensibles
varios minutos después del contacto. Ciertas bacteriocinas (lactocina,
leucocina) (Upreti1994) tienen efecto bacteriostático, inhibiendo así la
propagación de microorganismos sensibles. Las bacteriocinas pueden
exhibir una actividad variable, según el microorganismo sensible;
jensenina G tiene efecto bactericida contraL. delbrüeckiy efecto
bacteriostático contraP. acidipropionici (Grinstead y descalzo1992). El
contacto de la bacteriocina con las células sensibles se produce a través
de interacciones electrostáticas entre la molécula de inhibidor cargada
positivamente y los fosfolípidos cargados negativamente (ácido teicoico
y ácido lipoteicoico) que se encuentran en la membrana celular del
microorganismo sensible. Como consecuencia de estas interacciones, se
forman poros y canales iónicos en la membrana celular (ciertas
bacteriocinas requieren receptores de membrana específicos). Los poros
formados provocan la salida pasiva de fosfato, iones de potasio,
aminoácidos, ATP y otros compuestos, lo que provoca la alteración de la
fuerza motora de protones, el gradiente de pH o el potencial de
membrana. Deficiencia de iones, ATP bajo y nivel de
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538
el cofactor da como resultado la inhibición de la síntesis de
proteínas y ácidos nucleicos; también es imposible que las células
obtengan nutrientes del medio ambiente, lo que lleva a su muerte
(Bhunia et al.1991; Jack et al.1995; Chen et al.1997; Marciset et al.
1997; Moll et al.1999; Ryan et al.1999). Ciertas bacteriocinas
perturban la síntesis de la pared celular a través de la inhibición de
la biosíntesis de petidoglicanos al nivel de transglicosilación o
inducen la lisis de células de especies bacterianas sensibles
(deVuyst y Vandamme1994; González et al.1994).
Se ha demostrado el rango más amplio de actividad para la
propionicina PLG-1 sintetizada porP.thoeniiP127 (Tabla2), que
tiene un efecto antimicrobiano frente a PAB, bacterias del ácido
láctico, y frente a bacterias Gram-negativas, levaduras y mohos.
Propionicin GBZ-1 y thoenicin 447 tienen un efecto
antibacteriano hacia la cepa patógena deP. acnes.Esto sugiere
la posibilidad de usar este compuesto en el tratamiento del
acné causado porP. acnes.Jensenin G inhibe el crecimiento de
Clostridium botulinumtipos de esporas A, B y E. Las
bacteriocinas de PAB seleccionadas, como propionicin F,
propionicin T1 y propionicin SM1 tienen un efecto antagónico
solo para cepas de la misma especie que el productor. Las
preparaciones de bacteriocina no purificadas que contienen
propionicina SM1 exhiben actividad antimicrobiana contra
levaduras, mohos, PAB y bacterias del ácido láctico. Después de
la purificación, propionicin SM1 exhibe actividad únicamente
hacia elP. jenseniicepa DSM20274. Esto probablemente se deba
al hecho de que una preparación no purificada contiene
compuestos que favorecen la actividad de la bacteriocina, que
tienen un efecto antibacteriano y fungistático. En muchos
casos, las bacteriocinas de PAB tienen un efecto más fuerte
sobre las bacterias del ácido láctico que sobre otras PAB.
Propionicina GBZ-1 tiene la actividad antagonista más fuerte
contraLactobacillus delbrueckiisubesp.lactisATCC 4797.
Thenicin 447 tiene efecto bactericida contraLactobacillus
delbrueckiisubesp. bulgaricoLMG 13551, mientras que muestra
efecto bacteriostático haciaP. acnes.Jensenin G se caracteriza
por una actividad elevada hacia génerosLactobacillusy
Lactococcus. Las bacterias activadas enzimáticamente se
caracterizan por el antagonismo hacia las cepas deP.
acidipropionici, P. freudenreichii, P. jensenii, P. thoenii,y seis
cepas del género Lactobacillus (Lyon y Glatz1991; Ratnam et al.
1999; Faye et al.2000; Miescher et al.2000; Faye et al.2002; Ben-
Shushan et al.2003; Brede et al.2004; van der Merwe et al.2004).
Características de bacteriocinas seleccionadas
La bacteriocina más pequeña actualmente conocida sintetizada
por Propionibacteriumes propionicina F. Su masa molecular es
de 4397 Da, y su forma madura consta de 47 aminoácidos. Es la
primera bacteriocina que se ha aislado del cultivo de dos cepas
distintas de la especieP. freudenreichii:LMGT 2956 y LMGT 2946
(Brede et al.2004). Está codificado por el
529
pcfAgen, por debajo del cual genes cotranscritos conpcfAse
encuentran:pcfB, pcfC,ypcfD.Se sospecha que la propionicina F se
activa mediante dos procesos: el primer proceso incluye el corte de
101 aminoácidos de la parte N-terminal y el segundo consiste en la
eliminación de 111 aminoácidos de la parte Cterminal del
propéptido. La propionicina F contiene cisteínas ubicadas en el
punto de corte del extremo amino de la probacteriocina; por lo
tanto, según Brede et al. (2004), lospcfBcodificación de genesS-
adenosilmetionina transferasa participa en la liberación de la parte
N-terminal con la formación concomitante de residuos de cisteína.
El corte de la parte Cterminal se atribuye a lapcfcgen, que codifica la
prolina aminopeptidasa (Brede et al.2005; Faye et al.2011). La
presencia de prolina en la región carboxílica de la prolina peptidasa
podría participar en el procesamiento postraduccional de la
bacteriocina. Es un proceso sobredimensionado, ya que consiste en
el corte de fragmentos en ambos extremos de la probacteriocina, y
la literatura aporta casos de procesamiento postraduccional de un
extremo principalmente. los genespcfD (codificación del
transportador ABC) ypcfcson responsables en el sistema secretor de
la bacteriocina fuera de la célula. Proteínas de membrana
codificadas porPCFIcontrolar la resistencia de las células frente a la
propionicina F (Brede et al. 2007).
Propionicin SM1 es la más grande de las bacteriocinas actualmente
conocidas de PAB producida por dos cepas diferentes de
P. jensenii.Se forma como un propéptido de 207 aminoácidos. Como
ocurre con la mayoría de las bacteriocinas, la propionicina SM1 se
secreta fuera de la célula cuando se corta un fragmento de señal de 27
aminoácidos del extremo N-terminal. El péptido señal tiene una
estructura típica y posee un extremo amino con carga positiva, una
región hidrofóbica central y un extremo carboxílico polar (von Heijne
1988).
La propiocina T1 es una bacteriocina cargada positivamente con una
masa molecular de 7,1 kDa. Demuestra actividad contra las siguientes
bacterias:P. acidipropionici, P. jensenii, P. thoenii,yP. acnes (Patente de
EE. UU. n. 2003/0096365A1) y ciertas cepas de ácido láctico. Basado en la
identificación del gen que codifica propionicin T1 (pctA),se ha
determinado que la propionicina T1 se sintetiza como un prepéptido de
96 aminoácidos que contiene un péptido líder de 31 aminoácidos de
longitud en su extremo amino caracterizado por las características
típicas del péptido señal, como un extremo amino cargado
positivamente, hidrofobicidad y región de corte específica. Como
resultado de la translocación y el procesamiento por el sistema sec, el
prepéptido se transforma en una bacteriocina activa de 65 aminoácidos.
El análisis de ADN reveló una región codificante de proteínas (orf2)
ubicado a la distancia de 68 nucleótidos por debajo del codón de
terminación del gen estructuralpctA;el extremo amino de esta región
indica su unión con los transportadores ABC. Esta proteína se encuentra
en la membrana plasmática y posee cuatro sitios de unión a ATP en el
citoplasma. Como la propionicina T1 exhibe características de proteínas
secretadas con el método de secreción básico (von Heijne1988), un
transportador de cassette de unión a ATP (ABC) probablemente no esté
vinculado con su transporte
 530

Tabla 2Características de bacteriocinas seleccionadas de bacterias del ácido propiónico

bacteriocinas Molecular Estabilidad Inactivación de enzimas Rango de actividad Referencias

peso (Da)
pH Temperatura.

Propionicina PLG-1 9238 3–9 80 °C por debajo de 15 min Proteasa, pronasa E, pepsina, Bacterias G(+):Lactobacillus bulgaricus, L. casei, Lyon y Glatz1991;
tripsina, α-quimotripsina Pediococcus cervisiaei inne, panadería G(-): van der Merwe et al.2004
Campylobacter jejuni, Escherichia coli, Vibrio
parahaemolyticus,y otros, hongos:Aspergillus goii
(ATCC 1778),Apiotrichum curvatum, Candida utilis, C.
lipolyticay otra
Propionicina T1 7130.20 > 2,5 60–100 °C por debajo Proteinasa K P. acidipropioniciATCC 4965, ATCC 4875,P. jensenii Faye et al.2000
15 minutos ATCC 4868, P17, P52,P.thoeniiATCC 4871, ATCC
4872Lactobacillus sakeiNCDO 2714 y otros
Propionicina F 4397 Sin datos Sin datos Proteinasa K cepas de la especiePropionibacterium freudenreichii Brede et al.2004
thoenicina 447 7130 1–10 100 °C por debajo de 15 min Proteinasa K, pronasa, pepsina, Lactobacillus bulgaricusLMG 13551,Propionibacterium van der Merwe et al.2004
tripsina, α-quimotripsina acnesATCC 6919, ATCC 6922, ATCC 11827, ATCC
11828
Propionicina SM1 19.942 Sin datos Sin datos Sin datos P. jenseniiDSM 20274, DSM 20535 Miescher et al.2000
Jensenin G. > 12.000 Sin datos 100 °C por 2 minutos Proteinasa K, pronasa E, P. acidipropioniciP5,P. jenseniip54,Lactobacillus Sip et al.2009
proteasa bulgaricusNCDO 1489,L. delbrueckii subesp. lactis
ATCC 4797,Clostridium botulinumtipo A, B, E y otros

Jensenin P. 6000–9000 3–12 100 °C por 60 minutos Sin datos P. jenseniiB1264,P.thoeniiP127P. acidipropioniciP5, Ratnam et al.1999
P.thoeniiP126,Lactobacillus acidophilusATCC 4356,
L. delbrückisubesp.delbrueckiATCC9649 y otros
PAMP 6383 Sin datos Sin datos En concentración > 100 μg/ml: cepas seleccionadas de especies:P. acidipropionici, P. Faye et al.2000
proteinasa K, A, P, tripsina, freudenreichii, P. jensenii, P. thoenii,bacterias del
generoLactobacillus
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538
Aplicación Microbiol Biotechnol (2018) 102:515–538
fuera de una celda. La ubicación del gen sugiere que el
transportador ABC es responsable de la resistencia de la célula a la
propionicina T1, es decir, la eliminación de la bacteriocina activa
fuera de la célula o su importación y degradación dentro de la
célula (Faye et al.2000). Los transportadores ABC protegen a los
productores contra la nisina, la subtilisina y la lacticina 481 (Klein y
Entian,1994; Siegers y Entian,1995; Rince et al.1997). La bacteriocina
con una secuencia completamente homóloga a la de la propionicina
T1 es una thoenicina 447 producida porP.thoenii447. Su forma
madura consta de 65 aminoácidos. La composición de aminoácidos
de la thoenicina 447 contiene un patrón típico de péptido señal
(Nielsen et al. 1997).
Un tipo especial de proteína producida porPropionibacteriumson los
llamados patrones moleculares asociados a patógenos (PAMP). El
nombre se refiere a proteínas producidas por células similares a las
bacteriocinas, que se activan solo como resultado de la actividad de la
proteasa. Fueron descritos por primera vez por Ratnam et al. (1999). Los
autores introdujeron una forma de acción atípica de los compuestos
producidos por las siguientes cepas:P. jenseniiB1264,
P. jensenii4868, yP. freudenreichii6207.P. jensenii B1264,
con la ausencia de enzimas proteolíticas en el ambiente de
cultivo, exhibió actividad únicamente hacia bacterias
propiónicas yLactobacillus delbrueckii.Debido a la actividad
de la proteasa, el alcance de la actividad PAMP de la cepa se
amplió aLactococcus lactis subesp.lactisC2, Lactobacillus
helveticusATCC 15009, ylibra plantarumPI 549.P. jensenii
ATCC 4868 yP. freudenreichii6207 en ausencia de enzimas
proteolíticas, tuvieron efecto solo sobre PAB, mientras que
en presencia de proteasas inhibieron el crecimiento de
Lactobacillus.Faye et al. (2002) caracterizó a los PAMP
producidos porP. jenseniiLMG 3032 yP. jensenii ATCC 4868.
PAMP se produce como un propéptido que consta de
198 aminoácidos, con un péptido señal de 27
aminoácidos de longitud ubicado en el extremo N. La
forma madura de PAMP contiene un fragmento de Cend
de este precursor. La activación de PAMP tiene lugar
solo fuera de la célula, lo que es bastante atípico con
respecto a otras bacteriocinas. La mayoría de las
bacteriocinas se producen en forma de precursores de
péptidos y luego se someten a modificaciones
postraduccionales intracelulares o durante la
translocación de proteínas fuera de la célula, y luego se
transforman en formas biológicamente activas. La
secuencia de aminoácidos pro-PAMP indica la presencia
de sitios de corte, por ejemplo, proteinasa K (región
específica ubicada entre dos argininas).1993; Faye et al.
2002).
Otra sustancia inhibidora (BLIS) producida por PAB,
precisamente porP. jenseniiSe ha identificado la cepa B1264 (Wang
et al.2014). BLIS inhibe el crecimiento deP. acnes ATCC 6919; por lo
tanto, la proteína podría tener una nueva aplicación potencial en la
industria farmacéutica para combatir el acné.
531
Perspectivas para la aplicación de bacteriocinas PAB
La mayoría de las bacteriocinas sintetizadas por PAB clásicas se clasifican
como proteínas de bajo peso molecular, cuya masa molecular no supera
los 10.000 Da, a excepción de la propionina SM1, cuya masa es de 20.000
Da. Las bacteriocinas se caracterizan por una alta estabilidad en una
amplia gama de rangos de pH y temperatura. Son activos en ambientes
ácidos, neutros y alcalinos y son termoestables, no pierden actividad
después de varios o 15 minutos de calentamiento a 100 °C. Como
ejemplo, la actividad de thoenicin 447 después de 15 minutos de
calentamiento a 100 °C permanece estable; la actividad cae (en un 80%)
solo a 121 °C. Jensenin G permanece activo hasta por 2 min de
calentamiento a 100 °C, pero una exposición más prolongada a dicha
temperatura (5, 10 y 15 min) limita su actividad, pero sin degradación.
Ciertas bacteriocinas PAB, como la jensenina P, son estables en un
ambiente que contiene 0. 1–1 mol/l de NaCl, 0,1–2,0 % de SDS, 4 mol/l de
urea y en presencia de diferentes disolventes orgánicos. Propionicin
PLG-1 y otras bacteriocinas son resistentes al deterioro tras un
almacenamiento prolongado, reteniendo la actividad hasta por 25
semanas (en temperaturas de 4 y
− 25 °C). Todas estas características demuestran la utilidad de las
bacteriocinas PAB en la producción y conservación de alimentos
(Hsieh et al.1996; Ratnam et al.1999; Ben-Shushan et al.2003). La
actividad de las bacteriocinas antes mencionadas, dirigidas a las
bacterias del ácido láctico, se puede utilizar en la producción de
productos lácteos fermentados para evitar el desarrollo excesivo de
bacterias del ácido láctico, lo que provoca una acidificación excesiva
del producto. Se han realizado investigaciones similares para, entre
otros, jensenin G (Weinbrenner et al.1997). Las bacteriocinas
también se han probado para la conservación de la carne. ekI
Carolina del NorteIy candogramoun (2014) evaluaron la influencia
de una mezcla de jensenina G y ácido etilendiaminotraacético
(EDTA) sobreListeria monocytogenesyE. colien trozos de carne
fresca. Una combinación de jensenin G y EDTA resultó en la
disminución del número deListeriabacilos encontrados en la carne
de res de 4.78 a 3.49 log ufc/g, pero no tuvo un efecto significativo
en la reducción deE. coli.Divek y Kollanoor-Johny (2016) probó la
influencia de dos subespecies deP. freudenreichii (P. freudenreichii
subesp.freudenreichiiyP. freudenreichii subesp.shermanii)hacia tres
especies bacterianas del género Salmonella (S. enteritidis, S.
typhimurium,yS.Heidelberg). Ambas cosasP. freudenreichiicepas
demostraron ser eficientes en la inhibición de la propagación de las
tres especies. Aparte de esto,
P. freudenreichiituvo una influencia significativa en la disminución de la
movilidad deSalmonela.Las bacteriocinas PBA también podrían aplicarse en la
elaboración de queso, en la restricción de la formación de manchas rojas en
los quesos provocadas por el pigmento producido porP.thoeniiy
P. jenseniisin ningún efecto negativo sobre los cultivos iniciadores de
P. freudenreichii (Sip et al.2009).La actividad antibacteriana de ciertas
bacteriocinas haciaP. acnescrea el potencial para la aplicación de tales
proteínas como aditivos a las preparaciones contra el acné (Wang et al.
2014). Parece que en el futuro, las bacteriocinas producidas por
Propionibacteriumpodría ser ampliamente
532
utilizados como agentes inhibidores contra el desarrollo de
microorganismos indeseables en una variedad de productos
alimenticios, cosméticos y farmacéuticos.
Conclusión
Los PAB, debido a su considerable potencial, están atrayendo cada
vez más la atención de los investigadores y las diferentes ramas de
las industrias de piensos, alimentos, farmacéutica y médica. Estas
bacterias poseen un sistema enzimático complejo que les permite
utilizar una amplia gama de fuentes de carbono. Sin embargo, el
hecho más importante, en el contexto del uso industrial de las
bacterias del ácido propiónico, es que son capaces de producir
numerosos compuestos biológicamente activos, incluidos el ácido
propiónico, la vitamina B12, la trehalosa y las bacteriocinas a partir
de subproductos de procesos tecnológicos. Por lo tanto, el uso
biotecnológico de PAB podría ayudar a disminuir la contaminación
ambiental al transformar los desechos en componentes utilizables y
valiosos para otras industrias. Sin embargo, se necesita más
investigación para aumentar la eficiencia biosintética de estos
metabolitos para que la producción pueda ampliarse, por ejemplo,
con el uso de productos de desecho, lo que podría ser más rentable
que los métodos de producción actuales. Además, nuevos estudios
sobre la biosíntesis de metabolitos por parte de las bacterias de la
Propionibacteriumgénero, asociados a la optimización de las
condiciones de cultivo, por ejemplo, mediante la adición al medio
de cultivo de fuentes de carbono adecuadas, bioestimuladores o
modificaciones genéticas. Sin embargo, debido a que en muchas
partes del mundo los organismos genéticamente modificados
(OGM) aún causan muchos problemas, se ha intensificado la
búsqueda de microbios apropiados capaces de producir este
metabolito con alta eficiencia sin interferir con su genoma.
Cumplimiento de normas éticas
Conflicto de interesesLos autores declaran no tener ningún conflicto de
intereses.
Cumplimiento de los requisitos éticosEste artículo no contiene ningún
estudio con sujetos humanos o animales.
Acceso abiertoEste artículo se distribuye bajo los términos de la licencia
internacional Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/
licenses/by/4.0/), que permite el uso, la distribución y la reproducción sin
restricciones en cualquier medio, siempre que dé el crédito correspondiente. a
los autores originales y la fuente, proporcione un enlace a la licencia Creative
Commons e indique si se realizaron cambios.
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