C.

1 ANÁLISIS DE CLOROFILA , Y TOTAL

(Goodwin, 1976)

Reactivos

Acetona al 80% (v/v).

Material y Equipo
1. Mortero con pistilo.
2. Matraz Kitazato.
3. Embudo Buchner.
4. Espectrofotómetro (HACH, modelo DR/4000U).
5. Bomba de vacío ( SIEMENS, modelo IRF3 052-4YC31).

Procedimiento
1. Pesar 1.0 g de lámina foliar sin nervaduras.
2. colocar la muestra en un mortero y adicionar 4 ml de acetona, para moler el tejido y
obtener una pasta fina. Adicionar 10 ml más de acetona .
3. Transferir el extracto resultante al embudo Buchner provisto de papel filtro
Whatman No.1 y filtrar al vacío.
4. Agregar 10 mL de acetona a la pulpa de las hojas y reanudar la molienda y el
filtrado.
5. Aforar la solución coloreada a 25 ml con acetona.
6. Realizar las lecturas de absorbancia a 648 y 663 nm de logidud de onda en el
espectrofotómetro.

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 Cálculos

Los cálculos correspondientes para determinar la concentración de clorofila se realizaron

mediante las siguientes ecuaciones:

Clorofila total = (20.2) (A648) + (8.02) (A663)

Clorofila a = (12.7) (A663) + (2.69) (A648)

Clorofila b= (22.9) (A648) – (4.68) (A663)

Donde A= absorbancia a 648 y 663 nm según corresponda. Las unidades resultantes son

mg clorofila/ g peso fresco.

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