UNIVERSIDAD DE LOS

ANDES FACULTAD DE
CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS
BIOLOGICAS LABORATORIO DE
BIOQUIMICA GENERAL

Informe de Laboratorio
Purificación y Cuantificación de Proteínas
Laboratorio de Bioquímica, 2022-1

a. Purificación:

1. Expliquen la importancia de ir agregando imidazol de bajas a altas concentraciones a la

columna de cromatografía. ¿Qué sucedería si se agrega imidazol en altas concentraciones en
el primer lavado? ¿Qué sucedería si se agrega altas concentraciones solamente en el paso
de la elusión final, y muy bajas concentraciones en los dos primeros lavados? Justifiquen sus
respuestas. (0.3)
2. Añadan a continuación su gel SDS PAGE de los pasos de purificación. Etiqueten las bandas
del marcador de peso y señalen con una flecha su proteína de interés (recordatorio:
trabajamos con una versión modificada de DHODH de Toxoplasma gondii, van a encontrar la
secuencia de la proteína, junto con su peso molecular y otras propiedades bioquímicas, en el
siguiente link: VSSM-TgDHODH). Comparen el peso reportado previamente con el que
encontraron en su gel. ¿Son consistentes los pesos? Justifiquen y discutan posibles errores o
factores que puedan alterar la migración de la proteína si no fue consistente (0.7).
3. Teniendo en cuenta los pasos de purificación que realizamos en la práctica, describan y
justifiquen sus resultados para cada carril y concluyan, ¿la purificación fue exitosa?
¿qué mejorarían del protocolo o qué pasos podrían proponer para mejorar el resultado final?
(1.0)

b. Cuantificación:

1. Con sus resultados de Bradford, analicen y cuantifiquen la concentración de la proteína por el

Factor del Método. Reporten la concentración final encontrada con la muestra total, 1:2 y 1:4
(recuerden multiplicar estas dos últimas por el factor de dilución para reportar la
concentración de la muestra original), ¿Las concentraciones finales son parecidas en los tres
casos? Discutan posibles factores de error (1.0).
2. Con sus resultados de BCA, realicen la cuantificación de la proteína por el Método de las
Pendientes. ¿El resultado es consistente con su análisis de datos del punto anterior? Si no es
así, discutan posibles fuentes de error (1.0).
3. Busquen información sobre la linealidad, sensibilidad y calidad general de los métodos
BCA y Bradford. Teniendo en cuenta lo que encontraron, ¿A qué método le creerían más?
Expliquen su respuesta y con base en esto concluyan sobre su cuantificación: ¿Cuál es la
concentración final que reportarían para la muestra que purificaron? (1.3).

** Recuerden añadir referencias de todas las páginas externas que usen para el informe y adjuntar
el Excel con su procedimiento para la cuantificación.