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LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA GENERAL

PLAN DE ESTUDIO: __INGENIERIA BIOTECNOLÓGICA____

ASIGNATURA: __PRODUCCIÓN DE BIOMOLECULAS___
DOCENTE: _NELSON VEGA__ AÑO:_2020_

PRÁCTICA # 1 IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

INTRODUCCIÓN
Los hidratos de carbono constituyen el grupo de biomoléculas más abundante sobre la
superficie terrestre, representando aproximadamente el 75 % de la materia orgánica existente.
En ocasiones, se denominan también carbohidratos, azúcares, sacáridos o glúcidos. Todos son
términos que hacen referencia a su sabor dulce, o a que poseen la composición Cn(H2O)n.
Aunque dicha nomenclatura subsiste, no todos los glúcidos tienen sabor dulce ni responden a
tal composición.

Los carbohidratos o hidratos de carbono están formados por carbono (C), hidrógeno (H) y
oxígeno (O) con la formula general (CH2O)n. Los carbohidratos incluyen azúcares, almidones,
celulosa, y muchos otros compuestos que se encuentran en los organismos vivientes. Los
carbohidratos básicos o azúcares simples se denominan monosacáridos. Azúcares simples
pueden combinarse para formar carbohidratos más complejos. Los carbohidratos con dos
azúcares simples se llaman disacáridos. Carbohidratos que consisten de dos a diez azúcares
simples se llaman oligosacáridos, y los que tienen un número mayor se llaman polisacáridos.

Esta práctica consiste en estudiar algunas reacciones químicas en las que participan estos
hidratos de carbono, que constituyen la base para la caracterización cualitativa de cada uno de
los grupos principales y de reconocimiento de los distintos tipos de azúcares.

OBJETIVOS:
 Diferenciar entre carbohidratos reductores y no reductores
 Identificar azúcares mediante diferentes reacciones químicas.

GENERALIDADES:
Los carbohidratos se identifican generalmente haciéndolos reaccionar con fenol en presencia
de un ácido concentrado no oxidante, con lo que se obtienen diferentes coloraciones. Muchos
carbohidratos se caracterizan por poseer un carbono reductor. Este permite que una reacción
sirva para diferenciar entre carbohidratos reductores y no reductores, utilizando reactivos que
contienen el ion cúprico que se reduce a Cu2O.

PRUEBA DE MOLISH: Se utiliza para comprobar la presencia de carbohidratos.es un solución de

al 5% e alfa naftol y se usa para reconocer los carbohidratos en general.
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La prueba de Molish está basada en la formación de furfural o derivados de éste a partir de los
carbohidratos, que se condensan con el alfa-naftol, dando un producto violeta. Es una reacción
muy sensible puesto que soluciones de glucosa al 0.001% y sacarosa al 0.0001% dan positiva la
prueba. Esta prueba también es positiva para aldehídos, cetonas y algunos ácidos como
fórmico, oxálico, láctico y cítrico.

PRUEBA DE BENEDICT: esta prueba es utilizada para reconocer carbohidratos reductores. El

reactivo se prepara disolviendo 173gde citrato de sodio y 100 de Na2CO3 anhidro en 800ml de
aguay se adiciona a la solución inicial hasta completar un litro de solución.

Se basa en la reducción de Cu2+ a Cu+ en medio básico débil. Aunque es similar a la reacción
de Fehling, el medio básico débil y el estabilizante (citrato sódico) utilizados hacen que este
test sea más sensible y estable.

PRUEBA DE BARFOED: permite comprobar la presencia de monosacáridos (fructosa). El reactivo

de Barfoed es una solución de acetato cúprico en ácido acético que se prepara disolviendo
16.6g de acetato de cobre cristalizado en 245ml de agua y agregándole 2.4ml de ácido acético
glacial.

El reactivo de Barfoed es débilmente ácido y es reducido solamente por monosacáridos,

formándose como producto de reacción óxido cuproso. En medio ácido, tan sólo los
monosacáridos son capaces de reducir el Cu2+ a Cu+. El Cu+ así producido reduce al ácido
fosfomolíbdico a un complejo de intenso color azul oscuro.

PRUEBA DE SELIWANOFF: con este se comprueba la presencia de carbohidratos tipo cetosa,

dando una coloración rojiza con o sin precipitado. El reactivo de Seliwanoff, es una solución de
resorcinol en HCl.

La prueba de Seliwanoff es una reacción para diferenciar cetosas de aldosas; aunque ambas
dan la reacción, las cetosas la dan rápidamente y las aldosas lentamente. Está basada en la
formación de durfural o en un derivado de éste y su posterior condensación con el resorcinol,
dando un color rojo fuego para cetosas y rosa para aldosas.

PRUEBA DE LUGOL: sirve para determinar la presencia de (polisacáridos) almidón y glucógeno.

El reactivo de lugol es una solución de yodo.
Los polisacáridos sin ramificar forman complejos característicos cuando reaccionan con yodo.
Los ramificados también lo hacen, pero los complejos formados tienen menos intensidad de
color.
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PRUEBA DE FEHLING: Esta prueba se utiliza para el reconocimiento de azúcares reductores. El

poder reductor que pueden presentar los azúcares proviene de su grupo carbonilo, que puede
ser oxidado a grupo carboxilo con agentes oxidantes suaves. Si el grupo carbonilo se encuentra
combinado no puede presentar este poder reductor.

Los azúcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el ión Cu2+ de color azul a
Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del azúcar se oxida a grupo carboxilo. En medio
fuertemente básico como en nuestro caso el NaOH el ión Cu2+ formaría Cu (OH)2 insoluble por
eso añadimos tartrato sódico potásico que actúa como estabilizador al formar un complejo con
el Cu2+.

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Equipos: Reactivos:
Balanza analítica Glucosa sólida y al 2%
Plancha de calentamiento y agitación Fructosa sólida y al 2%
Baño serológico Sacarosa sólida y al 2%
Maltosa sólida y al 2%
Materiales: Arabinosa al 2%
Micropipeta de 100 – 1000 µl Lactosa al 2%
Puntas para micropipeta Almidón sólida y al 2%
Pipetas pasteur Miel de abeja
Pinzas para tubo Ácido Sulfúrico concentrado
Tubos de ensayo Ácido Clorhidrico concentrado
Pipetas graduadas de 5ml Reactivo de Molish
Pipeteadores tipo cremallera Reactvo de Benedict
Erlenmeyers Reactivo de Barfoed
Probeta Reactivo de Seliwanoff
Gradillas para tubo Lugol
Reactivo de Fehling A
Reactivo de Fehling B
PROCEDIMIENTO

PRUEBA DE MOLISH:
a) Colocar en tubo de ensayo correspondiente 2 ml de cada solución de carbohidrato
b) Agregar 2 gotas del reactivo de Molish y mezclar.
c) Incline el tubo y dejar resbalar por la pared 1 ml de H2SO4 concentrado. No agite
d) Observe la formación de un anillo color violeta en la interfase es una prueba positiva.
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¿Cuál es el fundamento de la prueba?

PRUEBA DE BENEDICT:
a) Colocar 2 ml del reactivo de Benedict en cada tubo de ensayo
b) Agregar 1 ml de cada solución de carbohidrato
c) Colocar los tubos en baño de agua hirviendo durante 3 minutos
d) Observar la formación de un precipitado de Cu2O, indicando que es prueba positiva para
carbohidratos reductores.
¿Qué coloración toma una prueba positiva?, ¿cuál es su fundamento?

PRUEBA DE BARFOED
a) Coloque en cada tubo correspondiente 2 ml de solución de Glucosa, Fructosa, Arabinosa y
Maltosa
b) Agregue 2 ml de Reactivo de Barfoed a cada tubo
c) Colocar los tubos en baño de agua hirviendo durante 5 minutos
d) Observar la formación de un precipitado rojo, como señal de una prueba positiva para
monosacáridos.

PRUEBA DE SELIWANOFF
a) Colocar en el tubo de ensayo correspondiente 1 ml de las soluciones de fructosa,
arabinosa, glucosa, sacarosa y lactosa.
b) Agregar 0.5 ml del reactivo de Seliwanoff y mezclar.
c) Calentar en baño maría a ebullición.
d) Tomar lecturas de la coloración a intervalos de 1 minuto durante 5 minutos.
e) Un color rojo fuego es una prueba positiva para cetosas y un color rosa es una prueba
positiva para aldosas.
¿Que sucede? Explica tu respuesta.

PRUEBA DE LUGOL
a) Coloque 1 ml de solución de almidón
b) Agregue 1ml de HCl concentrado
c) Añada una gota de solución de lugol.
d) La formación de un color azul oscuro indica la presencia de almidón. Un color rojo revela
la presencia del glucógeno.

PRUEBA DE FEHLING
a) Colocar en cada tubo correspondiente 1 ml de cada una de las soluciones de carbohidratos.
b) Agregar 0.5 ml del reactivo de Fehling A y 0.5 ml del reactivo de Fehling B y mezclar.
c) Calentar en baño maría a ebullición durante 5 minutos.
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d) Un precipitado rojo ladrillo es una prueba positiva.

PRUEBA DE SOLUBILIDAD
a) Colocar en cada tubo de ensayo de 3 ml de agua destilada.
b) Agregar en el tubo correspondiente aproximadamente 50 mg de los siguientes
carbohidratos: glucosa, sacarosa, fructosa, almidón y miel de abeja
c) Mezclar y anotar el grado de solubilidad.
d) Calentar en baño maría durante 2 minutos.
e) Anotar el grado de solubilidad.

RESULTADOS
1. Que es un azúcar reductor
2. Qué importancia tienen los carbohidratos en las células de organismos tanto unicelulares
como pluricelulares

BIBLIOGRAFÍA:
Universidad D’Alacant. Segunda practica: Identificación de Azucares. Recuperado de
https://ciencias.ua.es/es/extension-universitaria/documentos/extension-universitaria/ven-a-hacer-
practicas/2017/bioquimica-identificacion-de-azucares.pdf. Visitado el 26 de marzo del 2020

Universidad Tecnológica (2001). Bioquímica general: Guía del alumno. México.

Laboratorios de Bioquimica. Química I: Carbohidratos. Recuperado de

https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-i/carbohidratos. Visitado el 26 de
marzo del 2020