lacaPRACTICA N6: CONTROL MICROBIOLOGICO DEL AGUA

I. FUNDAMENTO TERICO

En todo establecimiento que se alimenta los alimentos, el agua destinada al procesamiento as como para la limpieza debe reunir los requisitos microbiolgicos exigidos por las normas de calidad. La presencia de coliformes fecales y Escherichia coli se utiliza para indicar una contaminacin potencialmente peligrosa por el hecho que el habitad natural de estos microorganismos son las heces humanas y de animales de sangre caliente. Una poblacin de coliformes fecales es posible que contenga una proporcin de E. coli o sus variantes, aceptndose a E. coli como el indicador ms positivo de contaminacin fecal reciente. La contaminacin del agua por E. coli, lleva implcito el riesgo de que tambin hayan podido llegar microorganismos entricos patgen os, haciendo su consumo peligroso. Los miembros de la familia Enterobacteriaceae son bacilo gram negativos, inmviles o mviles con flagelos. Peritricos se desarrollan en medios artificiales y todas las especies forman cido o cido y gas a partir de glucosa. Su composicin antignica es un mosaico que interrelaciona serolgicamente varios gneros y aun familias, muchas de estas bacterias son parsitos de animales y otros patgenos. Para enjuiciar la calidad de las aguas se recorre a parmetro fsico qumico y biolgico. Los parmetros bacte riolgicos tienen mayor importancia para dictmenes higinicos; es preciso hallar el nmero de grmenes saprfilos o de coli y de bacterias procedentes del intestino humano como indicadores de la contaminacin. Conviene destacar la importancia que tienen las cifras de coli y coliformes, pertenecientes a las enterobacterias que fermentan lactosa con produccin de gas y cido. Para determinar el nmero de estas bacterias se suele emplear medio selectivo de endo.
PARMETROS BIOLGICOS DEL AGUA: El agua es un recurso natural necesario para el desarrollo de un gran nmero de actividades humanas. Su creciente degradacin por disminucin de su calidad implica la reduccin del nmero de usos que se le da; es por ello, lo que se hace necesario la realizacin de estudios que permitan determinar la calidad de esa agua. Los anlisis que se pueden realizar al agua para controlar su calidad son: fsicos, qumicos y microbiolgicos, en esta ocasin se har una determinacin microbiolgica.

Todos los organismos que se encuentran en el agua son importantes en el momento de establecer el control de la calidad de la misma sin considerar si tienen su medio natural de vida en el agua o pertenecen a poblaciones transitorias introducidas por el ser humano; si su crecimiento lo propician los LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA APLICADA
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nutrientes presentes en el escurrimiento natural y en aguas residuales municipales o lo frenan los venenos procedentes de la actividad agrcola o industrial; y si tienen capacidad para intoxicar a las personas y a los an imales superiores. Se debe conocer la forma de los patgenos hdricos y determinar su presencia y origen, la magnitud y oscilacin de su nmero, el curso de su ciclo vital y el ndice de su supervivencia. Los parmetros biolgicos en las aguas potables son de mucho inters, los microorganismos que puede haber en el agua son virus, bacterias, hongos, algas y protozoos. Aquellos que son inocuos para el hombre no tienen significacin sanitaria, por lo que el control microbiolgico del agua se va a centrar en las especies patgenas para el hombre. Dado que buscar todo tipo de microorganismos patgenos, por su diversidad, es costoso y complicado y como la relacin patgenos/no patgenos es muy pequea, se realiza un control del agua a travs de indicadores microbiolgicos de contaminacin. Hay muchos seres vivos que se emplean como indicadores de la calidad de un agua. As, segn predominen unos organismos u otros, podremos saber el estado de un agua. Para que un microorganismo sea considerado como indicador microbiolgico ha de reunir unas condiciones que son:  Debe ser incapaz de desarrollarse en el agua.  Debe tener una supervivencia en el agua superior a losorganismos patgenos.  Debe soportar mejor a los desinfectantes.  Deben ser fciles de aislar, identifi car y contar.  Deben ser muy abundantes en heces y escasos en otros medios. La normativa recoge una serie de anlisis microbiolgicos segn se efecte sobre el agua un anlisis mnimo: Coliformes Totales y Fecales; uno normal: los anteriores ms: bacterias aerobias a 37 C, Estreptococos Fecales y Clostridios Sulfito-Reductores; o completo: los anteriores ms aerobias a 22 C, microoganismos parsitos y/o patgenos; el anlisis realizado ha sido el normal. El agua problema procede de un manantial, vamos a realizar un anlisis microbiolgico normal y el objetivo va a ser determinar la contaminacin microbiolgica que puede existir, buscar las causas de esa contaminacin y proponer soluciones al problema.
BACTERIA COLIFORMES:

Incluyen E. Coli y otras bacterias que se asemejan morfolgica y fisiolgicamente. Estos M.O. con frecuencia difieren entre si en caractersticas pequeas. Las bacterias coliformes suelen encontrarse en el aparto intestinal del hombre y animal. E. Coli, rara vez se encuentra fuera del intestino

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Las bacterias coliformes son bacilos cortos, gram negativos que fermentan la lactosa y forman cido y gas. Son anaerobios facultativos, se multiplican a mayor rapidez a temperatura entre 30 y 37 C, crecen a grandes abundancias en medios corrientes, como caldo y agar. La colonia de E. Coli en agar E.M.B (eosina y azul de metileno) tienen 2 a 4 mm de dimetro, un centro grande de color oscuro e incluso negro, y tienen brillo verde metlico cuando se observan con luz refleja. Se han creado otras pruebas para diferenciar tipos de bacterias coliformes, suelen emplearse 4 y se han juntado sus iniciales en la palabra nemotcnica IMViC (Indol, Rojo Metilo (R.M.), Borges Proskauer (V: P) y utilizada de citrato. La reaccin de IMViC de algunas bacterias coliformes como E. Coli ++ -, significa que el M: O: produce Indol y es positivo al rojo metilo y negativo al V.P. Hay 16 combinaciones posibles de resultados prueba negativa y positiva. Se considera que todas las bacterias colif ormes, tienen importancia en el H2O desde el punto de vista sanitario aunque muchos autores han tratado de diferenciar el tipo fecal (e. Coli) y el no fecal (A: aurogenes).
ANLISIS SANITARIO DEL H2O:

El diagnostico de las colonias coliformes en la muestra de H2O se basa en la capacidad de dicho M: O: para producir gas a partir de la lactosa.
FILTRACIN:

Es un medio eficaz de eliminar M.O. y otras sustancias de suspensin del H2O.

CLORACIN:

Es el mtodo ms eficaz de hacer potable el H2O. La cantidad de cloro que se agrega depende del grado de contaminacin del abasto hdrico y su contenido de sustancias orgnicas. El cloro mata la mayor parte de las bacterias no esporgenas. El H2O clorada, en consecuencia no siempre es estril, pero suele brindar seguridad para consumo por el ser humano. Recuento de Coliformes en Filtro de Membranas (Mtodo): Se hace pasar parte de la muestra por una membrana de filtracin de acetatos de celulosa con poros y dimetro tal capte la bacteria, en tanto que permita el paso libre del H2O. La membrana de filtracin se coloca aspticamente en una caja de Petri en un cojincillo absorbente saturado con una sal nutritiva P. Ej., caldo M. Endo, se incuba a 24 C durante 24 horas. Despus se examina la membrana con microscopio de poca potencia y se cuentan las colonias verdes violceos con resplandor metlico, si considera que son bacterias coliformes. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA APLICADA
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H2O POTABLE:

Sea limpia, fresca, sin olores o sabores desagradables o que causen rechazo de quien lo consume y sin sustancias qumicas o M.O. nocivos. Ventajas del uso de Filtro de membrana para las H2O: 1. Rapidez en la obtencin de resultados 2. Ahorro de manos de obra, medios, materiales de vidrios, y coste de los materiales si el filtro se lava y se vuelve a utilizar. 3. Pueden exponerse los organismos a medio de enriquecimiento muy fcilmente durante un corto tiempo y a una temperatura conveniente. Inconvenientes de Uso: 1. No hay indicacin de formacin de gas (algunas H2O tienen gran cantidad de organismos fermentadores de la lactosa sin produccin de gas capaces de crecer en el medio). 2. La filtracin por membrana es inadecuada para H2O con mucha turbidez y bajos recuentos, porque el filtro llega a obturarse antes de que pase agua suficiente. 3. Cantidades grandes de organismos no coliformes capaces de crecer en el medio pueden interferir en el crecimiento de los coliformes .
II. OBJETIVO:

 Familiarizar a los estudiantes con el mtodo de diluciones sucesivas para estimar el nmero de bacterias aerobias facultativas viables mesfilos y el mtodo del nmero ms probable usando tubos mlt iples, para determinar coliformes, y realizar las pruebas de diferenciacin bioqumica para la identificacin de E. coli.
III. MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES

REACTIVOS

 Frasco de vidrio neutro o plstico no toxico esterilizable, de boca ancha, con tapa protectora y cierre hermtico.  Matraz  Tubos de ensayo  Placas estriles.  Pipetas de 10 y 1 ml.

 Cristales de tiosulfato de sodio (100mg/l.) colocados en el frasco antes de esterilizar.  Solucin salina peptonada.  Caldo lactosado, concentracin doble (CLCD).  Caldo lactosado, concentracin simple (CLCS).  agar EMB  caldo lactosado bilis verde brillante (CLBVB  Agar PCA

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e cada na de las dil ciones preparadas tomar .1 ml colocar en placas est riles previamente

marcadas. . Incorporar el agar P A dil ido placas, mezclar 8 oras. enfriado a 5 a las por

dejar solidificar e incubar a 5

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1. Agitar el agua.

. Pipetear 10ml de agua en cada uno de los tubos LCD, 1 ml a tres CLCS otros tubos CLCS. por ltimo, 0.1 ml a los

. Incubar a

C durante

oras.

Si despus de 8 oras, no ay presencia de gas, la prueba presuntiva es negativa. Si ay gas en las campanas de fermentaci n se consideran positivos y se realizara el siguiente procedimiento:

omar dos asada de caldo de cada tubo positivo y sembrar a un tubo de CLBVB

5. Incubar a

C por 8 oras.

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 DE ERMINACI N DE COLIFORMES Los resultados de la prueba presuntiva fueron los siguientes: Dilu iones Tubos Positivos 0 0 0

Observando en la tabla

P: NMP/100ml

 Dado ue en la prueba presuntiva todos los tubos resultaron negativos no se realizo la prueba confirmativa

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VI.

CONCLUSIONES Y DISCUSIONES

 La presencia de coliformes fecales y Escherichia coli se utiliza para indicar una contaminacin potencialmente peligrosa por el hecho que el habitad natural de estos microorganismos son las heces humanas y de animales de sangre caliente.  La contaminacin del agua por E. coli, lleva implcito el riesgo de qu e tambin hayan podido llegar microorganismos entricos patgenos, haciendo su consumo peligroso.  Para enjuiciar la calidad de las aguas se recorre a parmetro fsico qumico y biolgico.  Los parmetros bacteriolgicos dictmenes higinicos. tienen mayor importancia para

 Para la numeracin de microorganismos se toma el valor de UFC/ml) porque se encuentra en el rango de 30 - 300 colonias ( .4 a diferencia del valor de que solo tiene 7 colonias.  En la determinacin de los coliformes pod emos concluir de la prueba presuntiva, en la cual todos los tubos dieron negativo, que el agua analizada en el laboratorio est exenta de coliformes y por lo tanto no ha tenido contaminacin fecal durante su tratamiento.  Cuando estas bacterias no se detectan en un volumen especfico en el agua, sta se considera potable o adecuada para el consumo humano. Se pueden determinar por Filtracin por Membrana, es el mtodo ms comn y preferido para evaluar las caractersticas microbiolgicas del agua. Prueba de presencia-ausencia (p-a), esta prueba puede emplearse para coliformes, es el mtodo ms simple para determinar coliformes fecales. Prueba colilert, se utiliza para analizar otros coliformes as tambin como e. coli.
VII. RECOMENDACIONES

 Para que resulte el experimento el agua no debe presentar cloro porque perjudicara la muestra y no obtendramos los resultados deseados.  Trabajar siempre cerca del mechero al realizar las siembras para as evitar alteraciones en nuestros resultados  No acercar la punta de la pipeta al mechero ya que podra romperse.  Antes de agregar el agar a la placa verificar que este bien diluido. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA APLICADA
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VIII.

BIBLIOGRAFA:

   

Ciencia de los Alimentos Norman. N. Potter Joseph Hotehkins Editorial Acribia S.A Microbiologa moderna de los alimentos 3era Edicin Editorial Acribia Zaragoza (Espaa) Autor: James M. Jay. Ciencia de los Alimentos Norman. N. Potter Joseph Hotehkins Editorial Acribia S.A Microbiologa moderna de los alimentos 3era Edicin Editorial Acribia Zaragoza (Espaa) Autor: James M. Jay.

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