CENTRO DE INVESTIGACION Y ASISTENCIA EN TECNOLOGIA Y DISENO DEL ESTADO DE JALISCO, A. C. —$—$—$—$— ——$ HONGOS MICORRIZICOS ARBUSCULARES ASOCIADOS A LA RIZOSFERA DE Agave cupreata: RIQUEZA DE ESPECIES, CULTIVO in vitro, PROMOTORES DEL CRECIMIENTO Y AGENTES DE CONTROL BIOLOGICO QUE PARA OBTENER EL GRADO ACADEMICO DE MAESTRO EN CIENCIA Y TECNOLOGIA EN LA ESPECIALIDAD DE BIOTECNOLOGIA PRODUCTIVA PRESENTA IBT. JESUS RAFAEL TRINIDAD CRUZ GUADALAJARA, JAL. ABRIL 2014.*. Guadalajara Jalisco @ 11 de Abril de 2014. CONSEJO GENERAL DEL POSGRADO INTERINSTITUCIONAL EN CIENCIA Y TECNOLOGIA PRESENTE. Los abajo firmantes miembros del comité tutoral del estudiante Jesiis Rafael Trinidad Cruz, una vez lelda y revisada la tesis ttuleda “HONGOS MICORRIZICOS |ARBUSCULARES ASOCIADOS A LA RIZOSFERA DE Agave cupreata: RIQUEZA DE ESPECIES, CULTIVO in vitro, PROMOTORES DEL CRECIMIENTO Y AGENTES DE CONTROL BIOLOGICO”, aceptamos que la referida tesis revisada y corregida sea presentada por ol alumno para aspirar al grado de Maestro en Clencia y Tecnologia en la Productiva durante el Examen de Grado opcién terminal de Biotecnolog! correspondiente. Y para que asi conste fimamos la presente a los 11 dias del mes de abril del afio 2014 Aye / Dr. Gabriel Rincén Enriquez Dra. Evangelina Esmeralda Quifiones Aguilar Director Co-directora Dr. Joaquin Alejandro Qui Zapata AsesorGuadalajara Jalisco a 21 de Abr de 2014, CONSEJO GENERAL DEL POSGRADO INTERINSTITUCIONAL EN CIENCIA Y TECNOLOGIA, PRESENTE. Los abajo firmantes miembros del Jurado de Examen de Grado del estudiante Jesiis Rafael Trinidad Cruz, una ver lefda y revised Ia tesis titulada “HONGOS MICORRIZICOS ARBUSCULARES ASOCIADOS A LA RIZOSFERA DE Agave cupreata: RIQUEZA DE ESPECIES, CULTIVO in vitro, PROMOTORES DEL CRECIMIENTO Y AGENTES DE CONTROL BIOLOGICO”. acoptamos que la referida tesis revisada y coregida sea presentada por el lumno para aspirar al grado de Maestro en Ciencia y Tecnologia en la opcién terminal de Biotecnologia Productiva durante el Examen de Grado correspondiente. Y para que asi conste firmamos la presente @los 21 dias del mes de abril del aio 2014. Lépez Pérez M. en C. Laura Verdica Hemindez, Cuevas ! Presidente Secretirio Dr. Gabfiel Rineéa Enriquez Vocal© CIATEJ © Bl trabajo de esta tesis fe realizado como parte del proyecto titulade: Utilizacion de recursos microbianos para el control biolégico de In pudricion del cogollo de agave tequilero en la DOT-Michoacin” Financiado por el Fondo Mixto (FOMIX) del estado de Michoacéin y el CONACYT (Convocatoria 2010). Clave del proyecto MICH-2010-CO1-148208, Lider de proyecto: Dr. Gabriel Rinen Enriquez. La presente investigaci6n se desarrollé en la Unidad de Biotecnologia Vegetal del Centro de Investigacisn y Asistencia en Tecnologia y Diseflo del estado de Jalisco (CIATED) A. C. bajo. fa codireccién de la Dra. Evangelina Esmeralda Quifiones Aguilar y ol Dr. Gabriel Rincon Enriquez; y In asesoria del Dr. Luis Lopez Pérez (UMSNEUIIAR) y el Dr. Joaquin Alejandro Qui Zapata.RESUMEN GENERAL El Agave cupreata Trel. & Berger ¢s la materia prima para la produccin de una bebida aleohica conocida como mezeal, Se conoce la importaneia de Ia riqueza y diversidad de los hongas ticorrizicos erbusculares (HIMA) como componentes que influyen en c! mantenimiento y la produetividad de los ‘ecosistemas, Los HMA son un alternatifa.biologica y pueden ser empleados como promotores del crecimiento de las plantas y como agentes de control biolégico, ademds de que su estudio a nivel in vitro puede generar un endlisis detallado de la interaecién entre los HMA-planta. Sin embargo, se desconoce como las especies de HMA asociadas a la rizésfera de A. cupreata influyen en To mencionado anteriomente. Bajo este contexto, en este estudio se evalud la tiqueza de hongos icorrizicos arbusculares en 1a epoca seca y de Iluvia asociados a la rizésfera de Agave cupreata en regiones mezealeras del estado de Michoacéin, Asi también, el efecto della disponibilidad de fostoro en ‘el medio de cultivo en el establecimiento in vitro de la especie nativa Glomus sp. con plantulas de popaya (Carica papaya L.) como planta modelo. Por iltimo, el efecto de la micorizacién de plantulas de Agave cupreata en la promocién del crecimiento vegetal y Ia bioproteccién contra Fusarium axysporum. Los resultados de este trabajo para los diferentes aspectos mostraron que, Ia rigueza de especies de HMA asociadas a la rizésfora de 4. cupreata fue de 37 especies, de las cuales el 24% fueron especies que no concordaron con las caracterfsticas de especies ya descrtas, por lo cual, pueden ser potencialmente nuevas especies para México. Respecto a la variacion estacional, se enconis6 que la poca seca presents un 30% del total de las especies, la época de lluvias un 13% y en comin en ambas épocas fue del 57% de las especies. Por otra parte, los niveles de P (disponible y no disponible pars las plintulas) evaluados in vitro no promovieron una mayor colonizacién micorrizica en las pléntulas de papaya, La especie nativa Glomus sp. posee un gran potencial para su establecimiento en cultivo i vitro, debido a que logré completar su ciclo de vida con la produccién de nuevas esporas. Finalmente, la incrementaron oculacién con diferentes consorcios natives y un inoculante comer signficativamente (Tukey, p < 0.05) a biomasa seca de las plintulas de 4. cupreata entre wn M43 @ 254% de incremento respecto a los agaves sin micorrizar, Hasta os 90 dias (4) después de le wiinoculacién dé # oxysporum en plantas micorrizadas y no micortizadas, no se observé algin efecto de bioproteecién de los HMA contra F. oxysporum. vii* AGRADECIMIENTOS ‘Ami madre, Sonia Cruz Torres, Por su amor y el apoyo incondicional en todas las etapas de mi vida. Gracias a ella be podido lograr una meta més en mi vida, Gracias por todo mam, te amo. ‘A mis hermanas, Corina Samary, Lourdes Montserrat, Sonia Fabiola y Daniela, Siempre me han. apoyado y alentado a seguir con mis estudigs, las amo. ‘A Jorge Daz Vieente Por so apoyo incondcionl pa seguir con mis estudio, gracias. Al Consejo Nacional de Ciencia y Teenologia (CONACYT). Por la beca otorgada para poder realizar mis estudios de maestria. ‘Al Centro de Investigacion y Asistencia en Tecnologia y Disefio det estado de Jalisco (CIATED), A.C. Por permitirme realizar mis estudios de maestria en la Unidad de Biotecnologia Vegetal Al Di. Gabriel Rincén Enriquez. Por la direccidn en este trabajo de tesis, por todo lo ensefiado durante la maestria y por siempre estar al pendiente de este trabajo. A la Dra, Evangelina E. Quiiones Aguilar, Por la codireccién del trabado de tesis, las ensefianzas sobre los hongos micotrizicos arbusculares y por siempre brindarme tiempo para resolver inis dus. Al Dr. Joaquin A. Qui Zapata, Por el apoyo y tiempo brindado en el trabajo de tesis, sobre todo con el manejo de Fusarium oxysporum utilizado en las prucbas de patogenicidad, Al Dr. Luis Lopez Pérez, Por el tiempo brindado en la revisién de la tesis y las sugereneias brindadas, para mejorar este trabajo, ‘A la M. en C, Laura V. Hernandez Cuevas. Por el tiempo brindado en la revision de la tesis, las sugerencias brindadas para mejorar este trabajo y por Ia identificacion de las especies de Tos hongos: micorrizicos arbusculares de este trabajo. A los investigadores de la Unidad de Biotecnologia Vegetal del CIATEJ, Rodrigo, Nutan, Manuel, Patricia, Ernesto, Mita, Noemi, Antonia y Benjamin, Por su amabilided. ‘A Lupita Albarran y Daniel Simchez. Por su amistad y el apoyo brindado cuando legue a Guadalajara.A mis amigos, Julio C. Juarez Garefa y Adin Hernindez Moedano, Por su amistad y convivencia cura oda a est ‘A los amigos del laboratorio, Alma, Diego, Tania, Pablo, Silvio, Alejandra, Angel, Aurora, Dina, Socorro, Alejandro, Nelly, Ismael, lupita, Samuel, Consuelo, Marlene, Adrian, Anahi, Fabricio, ‘Emanuel y Roy. Por su amistad. ‘A los amigos, Fredy, Martin y Yareli.edunque fue poco tiempo para conocerios, gracias por su amistad. ‘A los amigos de Ia Universidad Michoacana, Cristina, Fredy y Susana, Por su amistad, tiempo y convivencia. ‘A mis amigos, Adriana, Joel, Jaime, Ana, Vietor, Carlos y Gabriela, Por su amistad y apoyo desde {que estabamos en la universidad. ixINDICE GENERAL 8 INTRODUCCION GENERAL....-.-0000-- Bate CAPITULO 1. Hongos micorrizicos arbusculares asociados In rizisfera de Agave cupreata Trel, & Berger de regiones mezcaleras del estado de Michonein. 1.1 RESUMEN. 1.2 INTRODUCCION....-. = ee 1,3 OBJETIVO GENERAL. 1.4 OBJETIVOS ESPECIFICOS.... 1.5 HIPOTESIS GENERAL...... seeean 1.6 HIPOTESIS ESPECIFICAS. 1.7 MATERIALES Y METODOS...... 1.7.1 Sitios de muestreo de poblaciones de Agave cupreata.... 1.7.2 Caracteristicas de los sitios de muestreo..... 1.7.3 Obteneién de la muestra. 1,74 Identificacion taxonémica. 1.7.5 Anlisis fisicoquimico de los suelos. 1.8 RESULTADOS Y DISCUSION.. 1.8.1 Riqueza de especies de HMA asociados a la riz6sfera de Agave cupreata. in estacional de especies de HMA asociados a la rizésfera de Agave 1.8.2 Varia cupreata, 1.9 CONCLUSION 1.10 AGRADECIMIENTOS. 1.11 LITERATURA CITADA, PaginaCAPITULO 2. Asociacin in vitro de Glomus sp. (Glomeromycota) con plintulas de papaya (Carica papaya L.), especie nativa de la rizésfera de Agave cupreata. 2.1 RESUMEN. 2.2 INTRODUCCION. 2.3 OBJETIVO GENERAL ......csesseseeee 24 OBJETIVOS BSPECIFICOS. Deesoessnssssensangenesetsneeeen a 2.5 HIPOTESIS GENERAL. 2.6 HIPOTESIS ESPECIFICAS.... 2.7 MATERIALES Y METODOS..........--000--+ 2.7.1 Material biolégico. 2.7.2 Extraceidn y desinfeceién de esporas nativas de HMA. 2.7.3 Phintulas de papaya (Carica papaya L.).....seesneen 2.7.4 Acondicionamiento de sistemas de micorrizacién in vitro, 2.7.5 Disefto experimental peccseseeeeree 2.7.6 Experimento. 2.7.7 Variables de respuesta evaluadas. 2.8 RESULTADOS Y DISCUSION. 2.9 CONCLUSION, 2.10 AGRADECIMIENTOS. 2.11 LITERATURA CITADA, CAPITULO 3. Hongos micorrizicos arbusculares como biofertilizantes y agentes de control biolégico contra Fusarium oxysporum en plintulas de Agave cupreata Trel. & Berger. ae eee rceceen en nrtenereSRO 3.1 RESUMEN..... 3.2 INTRODUCCION...... 34 35 37 7 38 38 39 39 39 4 2 4B 4B 44 46 34 38Cuadro 1 Cuadro 2. Coadro 3, Cuadro 4. Cundro 5, = INDICE DE CUADROS Ubicacién geografica de los sitios muestreados en tres Tocalidades productoras de A. cupreata en el estado de Michoseén. Caracteristicas fisicoguimicas del suelo rizosférico de 4. cupreata de las ruestras de la €poca seca de los siete sitios de muestreo. Diversidad de especies de HMA encontradas en el suelo rizostérico de 4. ‘cupreuta, en distintos sitios y 6pocas de muestreo (Seca y Hluvia) en el Estado de Michogesn.. Efecto de diferentes medios de cultivo sobre el establecimiento in vitro de esporas natives de Glomus sp. con pléntulas de papaya a las 19 semanas sulaci6n,. después de lain Ffecto de los diferentes consorcios natives y un inoculante comercial sobre el crecimiento vegetal de plintulas de 4. cupreata a los siete meses después de su inoculacién con los HMA en condiciones de invernadeto. Pagina 10 4 46 ” xiiiFigura 1 Figura 2 Figura 3 Figura 4, INDICE DE FIGURAS Sitios de muestreo en wes localidades productoras de A. cupreata en la diferentes regiones mezcaleras del estado de Michoacén, Bit: El Huizachals LC: Las Campesinas; RCR: Rancho Carlos Rojas; EL: El Limén; PA: Paso Ancho; BN: Barranes de ls Nueces; CM: Cero del Metate Microfotografias de las especies de HMA que se presentaron en tocios Jos sitios de muestreo (a-d) y de algunas de las especies potencialmente nuevas (¢- 3) asociadas a la rizsfera de A. cupreata en las regiones mezcaleras del estado de Michoacdn, a: Acaulospora serobiculara; b: A. spinosa; ¢: Diversispora ‘aurantium; d: Glomus deserticola; ©: Acaulospora sp. 1; £& Acaulospora sp. 2 8 Glomus sp. 1; h: Pacispora sp. 1s i: Seutellaspora sp. 1.9 Las mierofotogratias fueron cortesia de la M. en C, Laura Verdnica Hernindez-Cuevas. Rigueza de especies de HMA registradas en los ocho sitios de muestreo ea, ambas épocas del aiio (seca y lluvins) en la rizésfera de 4. cupreaia de regiones mezealeras del estado de Michoacan, S: Fspecies (nics de HMA cencontradas en la Gpoca sec; L: Especies dnicas de HMA encontradas en la época de Lluvia; C: Especies en comin en ambas ép0cas (seea y lovias); T Total de especies en fambas épocas de muestroo sin repetir especies; EH: El Huizachsls LC: Las Campesinas: RCR: Rancho Carlos Rojass EL: El Limén; BN: Barranca de las Nueces A: Paso Ancho; CM: Cervo de] Metate Esporas de Glomus sp. colacadas en las placas Petri con medio de cultivo MSR después del proceso de desinfeccién, MSR: Strullu-Romand Modificado: “Las fotos fueron tomadas ocho semanas después del inicio del experimento; Barra 2mm, Pagina i 19 40 xivFigura 6. Sigtema de cultivo autotréfico para la micorrizacién in vitro propuesto por Dupré de Boulos et al, (2006). 1: Sellado del tubo con la tapa de placa Petsi con silioén, coneetando ambos orificios (placa y tubo}; 2-3: Cinta adhesiva de papel sobre ! mM) inhibe 182; Miranda y ‘pgerminacién de esporas tanto en condiciones in vivo como in vitro (Siqueira etal. 19 ‘ay 2010), aunque este efecto es variable enre las especies de HMA. Ademds, esté bien establecido lidad de P son mas fécilmente colonizadas _que las plantas que crecen en condiciones con poca dispar | por os {IMA (Nagatashi cra, 2010) Debido alo anterior, Ia manipulacén en Ia composicén det blecer exitosamente las nuevas especies de HMA al 1997; Karandashov ef al., 362.3 OBJETIVO GENERAL 4 efecto del cisponibiidad de fsforo en el medio de culiv en el establecimjento in wir de t tutiva de Gloras sp. con papaya (Carica papaya L.) como planta modelo. 24 OBJETIVOS ESPECIFICOS cultivo en el plinuls de papaya (Carica papaya 1.) en sistema de culivo autotrfico para la micorizacion ica con la especie nativa Glomus sp. 372.5 HIPOTE! iS GENERAL, isponibilidad del fosforo en el medio de cultivo y las pléntulas de papaya (Carica papaya L.) ~ fe plniz modelo en el sistema auttrfico para ta micorizacién in viro inlurin en el 2.6 HIPOTESIS ESPECIFICAS (Carica papaya L.) como planta modelo en el sistema de cultivo autotréfico para la sorizacién in vitro influird en el establecimiento in vitro de la especie nativa Glomus sp. 382.7 MATERIALES Y METODOS as | El Huizachal (EH) y Cerro del Metate (CM). De cada cultivo trampa se tom6 50 g en peso seco de Imes y fueron mezsados para hacer la extaccién de expors mediante la tenia de tamizado ‘himedo y decantacién (Gerdemann y Nicolson, 1963). Solo se utilizaron las esporas grandes que | proceso de desinfecci6n, las esporas fueron colocadas dentro de un sistema de filtracién al vacio (Sterifil® Aseptic system and holder, Merck Millipore) sobre una membrana de 0.2 jim, previamente estarilizados (121 °C durante 20 min), Posteriormente las esporas fueron enjuagadas con 50 mL de 39ick e7 al., 2005). Con ayuda de una micropipeta se colocaron 10 esporas de HMA por (90 mm de diémetro) con medio de cultive MSR estéril (121 °C durante 20 min), sin is ¥ adicionado con 10 g L"' de sacarosa, gelifieado con 3 gL" de Phytagel® y el pH fue 5.5 GHC] 0 NaOH 1 M) antes de su esterilizacién (Declerck ef al, 1998). Las placas Pettias de papaya (Carica papaya 1.) gral Vezeal se wilizaron pléntulas de papaya (C: papaya 1.) var Marado! roja de cinco “edad con tres cuatro hojas verdaderas, Ins pkinfulas fueron obtenidas como @ proceso de desinfeccisn del fruto. Hl fruto fue lavado con jabén comercial y enjuagado de flujo laminar, se realiz6 la desinfeccién superficial sxegendo clanol (96°) y lameindoo, vada vez que el leohol se consumié se agregd mis sexe proceso se reairé dunte 10 min. Posterionmens, se realiz6 un cote transversal ala Lito y se extrajeron las sells, las cuales fueron colocedas ea placas Petri (90 mm de | mucilago de las semillas fue removido con ayuda de pinzas y bisturi, Por ultimo, las ‘de capacidad (Phytacon™ Vessel, Sigma-Aldrich) con 100 mL. del medio de cultive Strullu- snd Modificado (MSR) estéril (121 °C durante 20 min), sin sacarosa ni vitaminas, gelificado conhicir al cultivo in vitro la especie nativa de Glomus sp., se utilizé el sistema de cultivo ra la micorrizacién in vitro propuesto pot Dupré de Boulois et al. (2006). jon placas Petri de (90 mm de didmetroya las cuales se le realiz6 un orificio de 12 mm en el tpa, en el cual se coloeé un tubo tipo Falvén estéril de 50 mL al cual se le realiaé un corte| walamientos: MSR, MSR", MSR = fosfato tricalcico (FTC), MSR + fosfato tricalcico, io (Sy MSR" + suclo, con o sin Glomus sp. Se utiliz6 un disefto completamente al azar, en fvaluaron un total de 12 tratamientos. Una unidad experimental fue un sistema con una papaya. Se utlizaron cuatro repeticiones para los tratamientos sin HMA y seis repeticiones talamientos con EMA, debido al poco nimoro de plantulas de papaya obtenidas, (819° 3221.4", 0 101° 05°41.8"). FI suelo fue tamizado (600 um) para eliminer las rocas. mente, 150 g de suelo fueron colocado en tubo para centrifuga de 250 ml, de capacidad y se le 200 ml. de agua destilada. La mezcla fue agitada vigorosamente durante S min y n de fosfatos que lleva el medio El medio base MSR o MSR” fue utilizado sin sacarosa ni viteminas, gelificado con 3.g L* de gel" y el pH fue ajustado a 7.2 (NaOH 1 M) antes de su esterilizacién, este medio base se uso 3elerin6 con basc en la observacién al estéreomicroscopio. Los sistemas de micorrizacién on @ temperatura de 26 + 1 °C y con fotoperiodo de 16/8 (Iuz/oscuridad) en cuarto de ‘Las placas Potri fueron cubierias con plistico negro para mantener condiciones de liaron observaciones no destructivas de los tratamientos con HMA cada semana pera determinar rollo del las hifas con ayuda de un estéteomicroscopio gencia de esporas germinadas y el desé [4 colonizacion radical fue estimada para los tratamientos inoculados con esporas de Glomus sp, gato pa os rtamientos con MSR + S y MSR" + S por no presentar germinacién de las esporas“hifas se considerd cuando el tubo germinativo presenté al menos una ramificacién. Estas ‘determinaciones se realizaron con la observacién de los sistemas al estéreomicroscopio.. 2 452,8 RESULTADOS Y piscusION salcico y suelo) y sit remnes met de etvo con P disponible (P) P no disponible (Fosfato tric vitro entre las Ssporas de Glomus SP- yy tas plantutas de papaya 1M de P) no iio In germinaci6n de esporas, 12 fo). La concentracion de P en los medios G0 mM de P ncentraciones mayores & | ay Yano-Melo, 2001; Giovannett et al., 2010). sei deta germinacion de esporas S© ht reportado para cot 196, Balaxy Vositha: 1997s Mal dio 4, Beto de diferentes netios de cultivo sobre et establocimento vitro de esporas natives smanas después de ta inoeulaclon ssp. con plantas de papaya a as 19 se Germinacion —_‘Hifasen deesporas _crecimfento Cotonizacton micorrizica’ _ seen Oe ‘Rimero de sistemas am Ve re) ae 083 2 2 a ° 0 ‘ ae ° ° ae ccm | Se = ce TT Rae sale Vestoulass CF sto praia nica option de cada rataminto ae present colonzaciin miorizcs, MSR Medio de -pomand Modificado; MSRT: MSR sin Ps FTC: Fosfato ticalcico; S: Suelo; HMA: Hongo 46a ilado como Glomus mosseae) comparado con el extracto de suelo no esterilizado donde la oe aes 2200 °C por mas de 15 min disminuyé los porcentajes de germinacién de esporas deBrig scare) Gago, 2000) nods fstratanientos, exept ataninto con ilo (Figura ;léntulas de papaya en los diferentes medios de cultive. a: Tratamiento 1 (MSR + HMA) a la 7 ‘fx Tratamiento | (MSR + HMA) a la 12 SDI, ¢: Tratamiento 6 (MSR? + FTC + HMA) ala 11 oe A ‘Tratamiento 3 (MSR + HMA) a la 12 SDI. SDI: Semanas despuss de la inoculacién; BAS: mucturas ramificadas de absorciOn; F: Hifa; El; Espora inmadura; EM: Espora madre; RP: Ralz de papaya:parte, se logré establecer Ia simbiosis micorriziea con tas plintulss de papaya en los os con MSR, MSR" y MSR" + FTC, aunque solamente en una repeticidn de los tratamientos jonados. Se observaron diferencias visuales en el erecimiento y la ramificaciGn de las hifas See ‘esporas, estas estructuras han sido reportadas en otras especies, como Glomus sp. (Declerck: i, 1998), Rhizophagus proliferus (citado como Glomus proliferam) (Declerck ef al, 2000) y Rh. _olnizaion total hits, arbuscuosy vesfutas) en este sista fue del 43% a as 19 semanas despuéssario evaluar el comportamiento de las nuevas esporas durante sucesives aciones para considerarlo un caso exitoso de una nueva especie de HMA en cultivo in vitro leek etal, 2005). Debido a la contaminacidn externa de los sistemas con hongos filamentosos nodnuar con una segunda generacién, es claro que para poder establecer y mantener en ie yy Hibtiro las especies de HMA se requiere de snucha paciencia, habilidad y experiencia (Fortin et 0 etal, 2008). 1 microseopio compuesto las esporas nuevas producidas en el tratamiento MSR + -19 semanas después de la inoculaci6n. Los detalles de pared, esporas maduras, inmaduras & den observarse en Ja Figura 8. Microfotograilas de las esporas nuevas de Glomus sp. producidas en el sistema de en el tratamiento MSR® + FTC, a-e: Esporas | pata vir wosidocon plans an _ ontadas ‘en polivinil-alcohol en lactogli “Moleer. MSR": Medio de cultivo Strullu-Romsand Modificado sin fisforo; FIC: Fosfato tricalcico; Barra en a-< srol (PVLG), di: Esporas montadas en PVGL ~ reactivo de slcimiento de las plantulas (altura, ntimero de hojas y raices) de papaya fue similar en todos tos jentos (observacién personal) (Figura 10). Los pléntulas de papaya junto con los diferentes 2ues como se ha hecho para otras especies de plantas adaptadas a estos sistemas de in vitro (Nogales ef al, 2010; Kofi ef al, 2013). 0. Crecimiento de las plintulas de papaya en los sistemas de cultivo autotéfico para la HMA, 72: MSR, T3: MSR*2.9 CONCLUSION ‘Ta ssociacidn de las esporas de Glomus sp. con las pléntulas de papaya en los sistemas de a tniico para la micorrizacién in vitro en los tratamientos MSR + HMA, MSR" + HMA y FTC + HMA (solo un sistema) a las 19 semanas después de la inoculacién. Se logré observar silo del micclio extrarradical de Glomus §p. y produjo las estructuras tipicas esperadas como @ MSR* + FTC + HMA a partir de la séptima semana después de la inoculacién. Los dblidad de P en los medios de cultivo y las pléntulas de papaya como planta modelo no jen una mayor simnbiosis con las esporas de Glonus sp. La especie ativa de Glormus sp. que '20 este experimento poseen un gran potencial para su establevimiento al cultivo in vitro 2.10 AGRADECIMIENTOS a {abajo formé parte del proyecto titulado “Utilizacién de recursos microbianos para el control2.11 LITERATURA CITADA, IM. Pergola, V. Silvani, R, Colombo, J. Bompadre and A. Godeas. 2012. Continuous and long~ ooxenic culture of the arbuscular mycarshizal fungus Gigaspora decipiens in root organ eultre [AP and Y. Piché, 2005, Cistus incanus root organ cultures: a valuable tool for studying mycorrhizal §, 1. Voets,C. Bivort, L, Renard, D. G, Strullu and S, Declerek. 2005, Methodlogies for in vitro “aulvation of arbuscular mycorrhizal fungi with root organs. In; Declerck S., D. G. Strullu and J. A,tool for jek SS. Séguin and Y. Dalpé. 2005, The Monoxenic culture of arbuscular mycorchizal fungi © gamplesm collections. Jn: Declerck, $., D, G. Strullu and JA. Fortin (eds.). fn vitro culture of S, 2004, The drum-Paris continuum of mycorrhizal symbioses. New Phytologist 163: 187-200, dot: 10:11114,1469-8137.2004.01095.x Je, D.D. 1997. A procedure for the establishment of Glomus mosseae in dual eulture with Ri T-DNA- | transformed carrot roots. Mycorthiza 7: 57-61. doi: 10.1007/005720050164 2006, Transpor of radiocaesium by Environmental and Fortin J. A. (eds. In vitro culture of mycorthizas. Springer Berlin Heidelberg, pp. 3-14. doi 10.1007/3-$40-27331-X_1+ orbaye Ind M. Terkka, 2007. The mcorshizn helper bacteria revisited. New Phytologist 176: i, oi 10 1111.1469-8137.2007.02591 x {Lavi and C, Sbrana, 2010. Fungal spore griinaion and pre-symbiotic relia growih - aspects, I: Kol H. and Y. Kapuli (eds). Arbwsular Myconizas Jeiologcal ond genetic 52, dois 10.1007/978-90-481-9489-6.1 sology and Function. Springer Netherlands, pp: 3~ SAL. b. Azali and A. 8. Ciernesi 1999. Anastomosis formation and nuclear and protoplasmic angel abuselar myconhizal fang. Applied and Environmental Microbiology 65: SSTL-S975. i, C Strana and L. Avio, 2002, Arbuscular myeorshizal fungal mycelium: From sgermlings to ‘and K. Haselwandier (eds,), Mycorhizal “eens ent ine Bal p38, 1OTOTESOMBAITS vas |W, and T, H. Nicolson, 1963. Spores of myoorthizal Endogone species exacted by wet sieving “oj decaming, Transactions of the British Mycological Society 46: 285-244 doi: 10101680007 ou; ¥ 1 Kuzovkin, HJ. Hawkins and E. George. 2000. Growth and sporulation of the arbuscular [ peubial fungus Glomus caledonian in dul culture with transformed caret rots, Mycortion 10 [B38 sn Loaorrsosrzansoa83 myeorthisation of papaya. African Crop Science TALC, 1 Ede Providence, A. Elsen and S. Declerck, 2009, Development of an in vitro culture System | atepied to banana mycomization. Aftican Journal of Biotechnology 8: 2750-2756, 11 6. Vou X Daye and, Delerk 201, Ee of Rzphag rears MUCL A133 othe eprotution of Redophohis sinify in banana planets grown under iv vie culture conditions Mycorthiza 23: 279-288, doi: 10.1007/300572-012-0467-6eRice, J. A. and NLA Pozo, 2013, Chemical signaling in the arbuscular mycorrhizal symbios Biotechnologieal applications. in: Aroca, R. (ed), Symbiotic Endophytes. Springer Berlin Heldelberg, ‘pp: 215-232, dois 10.1007/978-3-642-39317-4 11 | LC. and A. M. Yano-Melo, 2001 Germination and germ tube growth of the arbuscular mycorrhizal fun Gigaspora albida in different substrates, Bragilian Joumal of Microbiology 32: 281-285. dot 19.1590"S1517-83822001000400005 ile, T. P, M. HL Miller, D. G, Evans, G. L, Fairchild and J, A. Swan, 1990. A new method which gives an objective measure of colonization of roots by vesicular-arbuscular mycorrhizal fungi. New Phytologist 15: 495-501, doi: 10.1111/.1469-8137.1990 :b00476.x ri de J.C. C. and P. J. Haris, 1994, Effects of soil phosphorus on spore germination and hyphal growth of arbuscular mycorrhizal fungi, New Phytologist 128: 103-108, doi: 10.1111/.1469-8137.1994.603992.x dusk, G. and D. D. Douds Jr, 2005. Environmental ftctors that affect presymbiotic lyphal growth and tranching of arbuscular myeorthizal fungi. Jn: Declerck, S., J. A. Fortin and D. G. Strullu. In vitro Culture of Mycorshizas. Springer Berlin Heidelberg, pp: 95-110. dei: 10.1007/3-540-27331-X. 6 VAM fungus Gigaspora margarita directly and indirectly through ‘its effect on root exudation, Mycortiza 6: 403-408, doi: 10.1007/s008720050139 Physiology and Function. Springer Netherlands, pp: 33-56. doi: 10.1007/978-90-481-9489-6 2 es, A, A. Comprubi, V. Estain, V, Marti and C, Calvet. 2010. J vitro interaction studies between Glomus intraradices and Armillaria mellea in vines. Spanish Journal of Agricultural Research 8: $62-S68, dot 10.5424/sjar!20100881-1223,‘Poxckowski, U. 2006. A journey through signaling in arbuscular mycorizal symmbioses 2006. New Phytologist 2012, Evaluacién de un sistema para le micorrizacién in vitro en plantas de mora de castle (Rubus slaucus, Benth). Universitas Seientiarum 17: 140-151 lips, J. M. and D. $ Hoyman. 1970, Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and ‘esiculararbuscular mycorhizal fungi for rapid assessment of infection, Transactions of the British Mycological Society 55: 158-161. da: 10.1016/S0007-1536(70)80110-3, “Pui, A. and A. Adholeya. 2013. A new system using Solanum tuberosum for the co-cutivation of Glomts Invraradices au its potential for mass producing spores of arbuscular mycorthizal fungi. Symbiosis 59: £87.07, doi: 10.1007/513199-012-0213-2 ‘Quidones-Aguilar, E. E., L. Lépez-Pérez, E. Hernindez-Acosta, R, Femera-Cerrato y G. Rincdn-Enriguez. 2014 Simbiosis micorriziea arbuscular y fuentes de materia orginica en el crecimiento de papaya, Inerciencia uez, Gu L. Hesnéndez-Cuevas, E, Quifones-Aguilar, L. LépezPérez y J. Trinidad-Cruz. 2012. ign de HMA en el cultive de Agave cupreata en Michoacin, Jn: VIL Aislamiento © identific Symposium Nacional y IV Reuniin Iberoamericana de la Simbiosis Micorrizica, 27-30 de Mayo. alopa, Veracruz, México.IE. Sauri D.,F. Espadas y G., R. Diaz P., A. Larque 8. and J. M. Santamaria, 2009. Postharvest ulices for maradol papaye, Interciencia 34: 583-588. N.C. and ¥. Pérez, 1990. Manual for the identification of VA myconthizal fungi (3 ed.) Synergistic © Publications. Gainsville. fering, E1991. Vesicular-arbusewlar mycorrhiza management in tropical agrosystems, Deutsche it (GTZ), Eschborn, Germany ica, J.0., D. H. Hubbell and N, C. Schenck. 1982. Spore germination and germ tube growth of a vesicular di: 10.10071978- arbuscular mycorthizal fungus in vitro, Mycological Society of America 74: 952 Artaud, M,C. Hamel, B. Vimard, M. Caron and J, A. Fortin, 1996. Enhanced! hyphal growth and spore production of the arbuscular mycorhizal fungus Glomus inuraradtces in an in vitro system in the | absence of host roots. Mycological Research 100: 328-332. doi: 10.1016/S0953-7562(96)80164-X ia-Goné, J. R. Ferrera-Cerrto, Lucia. Varela-Fregoso, J. C, Rodtiguez O., J. Lara M., J. C. Soria C., H. C ‘Tomes, M. A. Tiscarefo L. y R. Cisneros A. 2008, Carasterizacion ¢ identficacién mortologica de hongos formadores de micorriza arbuscular, en cinco suelos salinos del Estado de San Luis Potosi, Méxicg, Revista Mexicana de Micologta 26: 1-7 Hernindez-Castro, J. CibriinTovar and D. Téliz-Ortiz, 2011. Effect of Glomus mosseae and Entrophaspora colombiana on plank growth, production, and fruit quality of Maradol’ papaya (Carica ‘papaya 1.) Scientia Horticulturae 128: 255-260, dot: 10.1016) scienta.2011.01.031 60. i0, Av and J, Avines, 1992, The influence of aqueous extracts of burnt of heated soil on the activity of sila arbuscular mycomtiza fungi propagules, Myconiza 1: 79-82, doi 10.1007/F00206140 H. Dupré de Boulois, L, Renard, DG, Strlla and S, Declerck. 2005. Development of an autotrophic © allure system forthe in vitro mycorthization ofpotato plantlets. FEMS Microbiology Letters 248: 111 “118. doi: 10,1016, femsle.2005.05.025 4 Li 1 E. de la Providencia, K, Perandez, M, Ido, S. Cranenbrouck and S. Deslerek. 2009. Extraradical ‘ayesliam network of arbuscular mycorrhizal fungi allows fast colonization of seedlings under in vitro -6 conditions. Mycorthiza 19: 347-356, doi: 10.1007/800572-000-02:CAPITULO 3 Jess Rafael Trinidad-Cruz, Evangelina Esmeralda Quifiones-Aguilar', Joaquin Alejandro Qui idapts!, Laura Ver6nica Heméndez-Cuevas’, Luis Lépez-Pérez' y Gabriel Rincén-Enrfquez!” : ind de Biotecnologia Vegetal, Centro de Investigacin y Asistencia en Teenologia y Diseto del Estado de ‘A.C. Guadalajara, Jalisco, México, Sshontorio de Micorrizes, Centro de Investigaciones en Ciencias Bioldgicas, Universidad Auténoma de jor para coresponencia: grincon@elatej.mx; Avenida Normalistas No. 800, Cotonia Colinas de la Normal 44270, Guadalajara, Jliseo México (Tel. 452 (33) 33455200 Ext, 1703).3.1 RESUMEN jcozrizicos arbusculares (HMA) promueven cl crecimiento de las plantas en la mayoria através del transporte de nutrientes def Suelo hacia las raices. En las iltimas décadas, se sambién como agentes de control bialégica contra diversos fitopatégenes y los resultados jnuci6n de ta incidencia y/o severidad de la enfermedad por efecto de la simbiosis de3.2 INTRODUCCION gave cupreata Trel. & Berger es una especie de importancia econémica para México, debido a que se la formentacién de las pitas de las planes adultas de A. cupreata se produce una bebida ica conocida como mezcal (Martinez-Palacios ef al, 2011). Alrededor de 29 municipios del poder exportar de su producto (Gobierno de Michoacén, 2012). Debido a ello, so espera un ento on ia superficie cultivada de A. cupreata, por lo que un mejor manejo agronémico y ervacién de las plantaciones de agave en adecuadas condiciones fitosanitarias, serdn importantes snantenet la sustentabilidad de este cultivo (Martinez-Palacios etal, 2011). Como, se ha realizado ets rs gaves (A. eupreatay A. potatorum) empleados en la produecién de mezealen el sureste [de sio (Aguire-Dugua y Eguiarte, 2013), Sin embargo, cl incremento en la supectcie dl eultivo itez en toda la planta (Avila-Miranda et al. 2010; Sanchez y Rebolledo, 2010; Qui-Zapata et al. O11; Vega-Ramos et al. 2013). Fsta problemiética fitosanitaria de la marchitez no es exclusiva del fequilero, igualmente se presenta en regiones productoras de mezeal como es el caso de A. ata en la regiones productoras de Michoacén. 1 control convencional de hongos fitopatégenos ao lo es la aplicacién de fungicidas no ha sido muy efestivo, ademds que generan problemas Uinbieniales, deterioran el suelo e incrementan los eostos de produceién (Bemal-Aleocer et al., 2005),Por lo que, la inoculacién con HMA provee beneficios tanto en Ia promocién del crecimiento como en joproteccidn contra fltopatégenos. AL respecto, Montoya-Martinez (2014) encontré que la én de algunos consorcios natives de HMA promovieron el crecimiento en 4. cupreata para Yatiables de biomasa fresca, area foliar y altura de planta, Asi también, se ha estudiado el efecto de 65plantas de A. angustifolia inoculadas con diferentes consorcios natives de son respecto a las plantas no inoculsdas. Rh inraradices (citado como G. intraradices) e alamo de los FIMA para la bioproteccién contra F. oxysporum ha sido probado en varios raportancia econémica; Steinkellney et af. (2012) encontraron wn efecto bioprotector de 12) en algunas variedades de tomate (Solanum mosseae BEG mis mosseae (citado como F. oxysporum £. sp. Iycopersici. Hage~Abmed et im 1.) con la reduccién de la infeccién por Jepconraton que la inoculacin de plantas de tomate con un inoculo comercial de HMA iad de la enfermedad provocada por F. oxysporum f. ,generd una dismminucién en la severid spore, Hu et cl. (2010) inocularon plantas de pepino (Cuewnis sativus L.) con Furneliformis {cto como G, caledonium) y con wn consorio nativo de HMA (Glomus SP. Sst ato fe 1a incidencia de F, ora spp), encontrando un efecto significativo en Ia disminucién scent noculocton del consorcio que euando se inocula con una sola especie de HMA. ait encontraron que la inoculacién con HMA en plantas de palma datilera (Phoenix ;én de ta mortalidad de las plantas de palma fora |.) tuvo un efecto positivo en la dist don Fonpsporum tp. albednis con respesto a las plantas no icorizadas siendo més slo de un consorsio native que la inoculacién de una sola especie de HMA. En papays pep cv Maral Herner- Montiel tal (2013) encontsarn teens signee a minueion de la severidad es for inoculadas con un consorcio de HMA. 0 en con de la enfermedad causada por F oxysporum cuando las plantas de unto con Pseudomonas putida con cho trabajo se propone que ambos microorganismos al control no inoculado, por lo que, en tudios citados se muestra por un lado el on un efecto bioprotector contra F. oxysporum. En los est s pensiico de los HMA en el crecimiento vegetal, y por otro el efecto bioprotector contra F. 663.4 OBJETIVOS ESPECIFICOS 3.3 OBJETIVO GENERAL. contra Fusarium oxysporum mercial (mmicorriza INIFAPS) en la bioproteccion contra Fusarium oxysporum. “dela wicorrzacién de plantas de Agave cupreata con cuatro consorcios nativos de or3.5 HIPOTESIS GENERAL, moviaion de plalas de Agave cupreata con diferentes honges mivorizicos arbusculaes Japromocién del crecimiento vegetal y en It bioproteecin contra Fusarium oxysporum. 3.6 HIPOTESIS ESPECIFICA ‘alo comercial (inicorriza INIEAP®) influirén en ta promocién orsios natives de HMA y el inoe to vegetal de plntulas de Agave eupreata. juarizacion de plantas de Agave cupreata con cuatro consorcios mativas de HMA y wn inoculo i ) influirdn en la bioproteccién contra Fusarium oxysporum.3.7 MATERIALES Y METODOS INIFAP® (MD). Las esporas de los consorcios natives fueron obtenidas de ‘uno a dos affos en propagacién, los cuales se iniciaron a partir de inoculo rizosférico bt F. ansporum con clave FPC utilizada fue de la coleccién de hongos fitopatégenos del la bide Biotecnologia Vegetal del Centro de Investigacién y Asistencia en Tecnologia y Diseto del {Jalisco (CIATED), eausante de la marchitez en A. requilana (Qui-Zapata et al, 2011) y ‘probado como fitopatdigeno en A, cupreata (Trinidad-Cruz et al., 2013). fiiz6 un cultivo padre de F, oxysporum FPC mantenido en tubos de vidrio con medio de cultivo, oBly pesteriomente cuatro dias en fotoperiodo de 1618 (lu/oscuridad), Después de 15 d de se realz6 In coleca de las esporas de F. oxysporum agregando 15 ml. de agua destilada dane 20 min) a cada placa Pet y con aya de un incl esti se i26 un barrido meso la soperfcie del medio de cultivo #8 recupers el agua desi con ls esporn con tniropipetay puntssestriles. La suspensi6n de esporas se almacené en rulbo tipo Fan ana concentracién de 1x10° esporas mi; después los botes fueron ineubados en oscuridad We ‘temperatura ambiente, Se determing e| ntimero de unidades formadoras de colonias yp oa rao de avena ness meta a erica de cisions seriadas y siembra en placa : wate de cultivo PDA + rose de bengala (25 mg L'), Las placas fueron incubadas 8 27 * 1 dios dias en cscuridad para posteriormente realizar el conteo, ef rosa de bengala fue a Iiatn por Gacion a wavés de una membrana de 0.2 um y se agrea6 desputs def estrizacion 1a infestada de F, sip PDA (121 °C durante 20 min). Finalmente se mezel6 vigorosamente Ia aven arena-turba de esfagno-agrolita (41:1, vz) para ajustar una con una mezcla de sustrato lelas de A. cupreata fueron obtenidas a través de semila, las cules fueron iniciaimente das con una solucién de cloro comercial al 3% (cloro activo al 6%) durante 10 min y después enjuagadas con agua destilada estéril (121 °C durante 20 min) tres veces durante $ min, Se 1ca Petri (90 mm de didmetro) con 25 mL. de medio de cultivo MS ester dwante 20 min) ala mitad de la concentracién (Murashige y Skoog, 1962), adicionado con 8 & 0‘permanecieton en condiciones de invernadero y fueron regadas con agua dé “semana, A los tres meses después de Ia siembra, fas pléntula fueron fertlizidas con lables de respuesta evaluadas mediante el paquete estadistico StatGraphies Centurion XV int Inc, 2005). e A. cupreata con y sin micorriza de siete meses de edad fueron trasplantadas con su eliinen vasos de unicel de aproximadamente 250 mL. de capacidad y se les agregé entre 65 75 g -w) esterilizada (121 °C durante 6 h) -yaso de unicel. Segin el tratamiento se agregé el sustrato infestado de F. oxysporum FPC a'una jon de 1x10" ufe g" 6 sustrato no infestado. Las plantas de fueron separadas para evitar la do de severidad de Ia enfermedad fue evaluado siguiendo Ia escala propuesta por De Cal et al. ), la cual fue: 1 (severidad de le enfermedad (SE) del 0%)= planta sana; 1.1 a 1,9 (SE de 1 a Rjas inferiores muertas y hojas superiores marchitas; y 5 (SE del fal avance jar tomando al azar una fento de la enfermedad, se realiz6 una evaluacion prelimin “aceupreca con y sin HMA y con y sn Fonsparon, para server Ja maxchte 2 nivel sj ep iceto completamente al azar donde se evaluaron 12 tratamientes, los cuales comsistieron nutes de A. cupreaia inoculadas con los cinco diferentes HMA (custo consorsios CM, PA, y la inoculacién con o sin F. axysportem )y€linoculo comercial Ml) y un contol (sin HMA) Ge vitvaron nuove repetiiones par los tratamientossniconizados con CM y paral con trol con Jizaron 10 repeticiones, cada plintula de 4. prueba de ppatégeno, en los demés tratamientos se util iy fue la unidad experimental, Se realizé un andlisis no paramétrico mediante la vais (p < 005) y se calcularon intervalos de confianza para ta medians (p = 005) jel paquoteestaistico StatGraphics Centurion XV. B3.8 RESULTADOS Y DISCUSION o de los HMA en el erecimiento de Agave cupreata as de A. eupreata fueron evaluadas a ls site meses después de Ia inocula con los natives ye inoculante comercial (MI) de HMA. fn et Cudro$ se muestra Jos resultados sziniento de las plantulas de A. cupreata por efecto de los HMA. fr 5 ecto dels diferentes consorios natives ¥ un inoclante comercial sobre el crecimiento piinulas de A. cupreata a los siete meses despuds de su inoculcion con los HMA en ‘Nimero de Peso freseo (@) ‘Biomasa Hojas Fane Bale Total (g) Tea Taa SBTC Spi zugow THT OA aw sab 1041. Lats0dpbe 17340198 67a 2096268 posso2ad «2520328 66a 16.6449. Lsse0eDabe 2210649 bab 174041835 aa2engia 230.378 43b 6142266 psssorec 0710286 FH: Fl Huizachal; AD: Agus Dulce; MI: Micorriza, TNIFAP™, * Letras dbl Meaie; PA: Paso Ancho: Gis poy clu ican diferencias signiicatves (Tukey, p $005) Desviacion estindar; 1, 8 y P sip Jtinco ses, set y tes repeticiones para tods as variables de respuesta, respectivaneni fcamente superior (Tukey, p < 0.05) en el crecimiento de sorvio nativo El Huizachal fue estadi iis de A cupreata yaa todas la variables de respuesta con respeto al contol (Six HMA) -aron inerementar dos 5), Respecto al nimero de hojas (NH) Ia inoculaci6n eon EH y MI logr nis qe el tratamiento contro, para el peso fresco de fll, la inoculacén de EH, AD (Agua 146 y 158%, rospectivamente, respecto al tratamiento | MI obtuvieron inerementos del 210, ol Con respect al peso fresco de races, la inoeuaeion de CM FHL MI mostraron incrementos 5,262 y 314%, Yespectivamente, mirol. Finalmente, todos cen comparacién con el tratamiento, co "4 4sorcios natives y el inoculo comercial, incrementaron significativamente la biomasa seca total on respecto al control (Cuadro 5), este incremento varié entre 143 y 254%. Entre los ies nativos, EH fue ol que presenté el mayor incremento de biomasa seca total (254%) siendo icamente igual con los demas consorcios, excepto pita el consorcio native PA (Paso Ancho), . to, Montoya-Martinez. (2014) no encontr6 diferencias significativas en la variable de biomasa 8lca inoculaciOn on diferente nivel eon respecto al control en todas la variables de crecimiento como el fresco de follgje (Figura 11a), peso fresco de rafces (Figura 11b), debido a la simbiosis (Figura 110). yocién. 11. Ffecto de diferontes consorcias nativos y un inoculante comercial de HMA en la prom« Jecimiento en plantas de 4, cupreata a ls sites meses después de la inoeulacién, a: Crecimiento 1: Colonizacién intrarradical. C: Jos ogaves micorrizados y control, b: Crecimiento de la raices, onvok EH: EI Huizachal; Ml: Micorriza INIFAP®; AD: Agua Dulles PA: Paso Ancho; CM: Cero de] metate; longo miconiieo arbuscular; H: Hite; A: Arbiseulo; Barra en a-b= 5 em; Barra en c= 50 i 16a {a respuesta variable en el crecimiento de las plantas asociadas a los IMA. puede deberse a varios {ficiores como la disponibitidad de P en los sustratos, a la composicién en especies de los consorcios ‘atvos 6 a la inoculacién de una especie de HMA en particular, asi como, Ja respuesta con cada ‘Abiel Fatah y Asrar, 2012; Camprubi et al., 2011; Lozano-Contreras ef al, 2013), Ademés, Ia te diferentes especies) e intracspecifico (entre cepas/morfoespecies de una misma especie) en Ia 42 Efecto de los HIMA en Ia bioproteceiin contra de Fusarium oxysporum FPC “Los sintomas de la enfermedad fueron observados desde los 20 d después de 1a inoculacién eon F. _appponon. a te somo i severidad de la enfermedad (SE) en los tratamientos eon F, oxssporum fue “pa pomedio care 1.08 91.52 (rime hoa inferior amar, dao de Ja planta entre 2.8 a 8%), La ‘oacion de los sintomas de la enfermedad expresados en el follaje de las plantas de 4. cupreatr ‘con F. oxysporum, 1a ben las plantulas de 4. cupreata varié en promedio entre 1.3 y 1.82 (primera hoje inferior aarilla, | ato de la planta entre 8 a 21.3%). FA los 20 d después de la inoculacién con F. oxysporum se encontraron diferencias significativas 0.05) entre el tratamiento control con F. oxysportm y los tratamientos sin F. sosporu (Pigura 12a). Posteriormente, a 1os 90 d después de la inoculaei6n eon F. onsporum se = diferencias significativas entre los tratamientos CM, EH y MI eon F. oxysporum con ‘spect a los tratamientos sin fitopatégeno (Figura 126), Se observ que Ja SE en el follae de Jas © phn de A. sqrete eva este on espe ep, Since, se sac Fgs {2b una distribucién de 10s datos (plantas de A. cupreata) de los tratamientos AD, CM, MI, PA y 25% de daft en el follaje de las plantas)AD + EPC. ‘AD -FPC cM + FPG. cM-FPC Contol + FPC Control FPC EH+ EPC @ EH-FPC MisFEC MI-FPG PA+FPC PA-FPC 3 E2001 AD + FPO. ‘AD - FPG OM + EPC M- FRC Control + FPC ‘Control -FPC EH+FPC EH-FPC M+ FRC MI-FPC PA+FPC. PA-FPC ‘everidad de la enfermedad a los 90 d después de Ia inoculacién. +FPC: Con “aysporum; -PPC: Sin F. axysporum; AD: Agua Dulce; CM: Cero del Metate; Control: Sin micorriza; EH: El achil; MI: Micorriza INIFAP®; PA: Paso Ancho.tiollamiento y marchitez a los 200 d después de la ino’ulacién, a este tiempo aun no habian plantas 8 pletamente marchitas (muertas). Por lo que la fisiologia de la plantas de agave, como el poder wir sin raices por un tiempo profongado y por lo tanto sin requerir de agua, puede retardar los oa lo anterior, se eligieron al azar cuatro pléntulas de 4. cupreata micorrizadas y no scorrizadas parasobservar de manera visual el dafto en la raiz causado por F, oxysporum. Las jmicorrizadas inoculadas con y sin F. aysporum FPC. Se observé en las plintules micorrizadas no micorrizadas e inoculadas con el fitopatégeno un menor niimero de raices con respecto a las piees sin fitopatégeno, por lo que, pudo observarse la marchitez a nivel de raiz causada por F. ‘apsporum FPC (Figura 13). Al respecto, Gardezi et af. (2001) evaluaron el efecto de un consoreio “tetivo (Glomus sp. Zac-19) y Glomus aggregatum en la bioproteccién de plantas de glat | (Gladiolus grandiflorus) contra Fusarium sp., y encontraron que los HMA disminuyeron | sgnitictivamente la pudricion radical con respeto alas plantas sin HMA. Zin este estudio, no se observ6 Ia bioproteccién de las plintulas de 4. cupreata micorrizadas con el im visual de las raices muestra el datio causado por F. oxysporum | ices de las plintulas micorrizadas con los demés consorcios (EH, PA y AD) y el inoeulante comercial _ (MI) para poder establecer si hubo un efecto de bioproteccién de los HMA contra F, oxysporum.