Aplicaciones Ultravioleta

visible
Análisis Cuantitativo.
1. Determinacion directa
2. Determinacion mezclas
Estudio de reacciones
Cualitativo
 Análisis cuantitativo

Calculo de la concentración por interpolación en recta calibrado

Adición standard
CM CM CM CM
CM +C1 +C4
+C2 +C3

Ejemplo
 Calculo de la concentración
adición estandard
•Lento y tedioso:
(curva de calibrado para todas las
muestras)
• Puede usarse una adición
simple si la muestra es
conocida:
• A1 = εb(Cmuestra)
A1 C muestra
• A2 = εb(Cmuestra + Cadicion)
A2 = C muestra + C añadida

A1C añadido
CMuestra = (A2 ! A1 )
 Mezclas
• Espectros no superpuestos
A
M N

!1 !2

Medidas a λ1 para M y λ2 para N

Espectros superpuestos
parcialmente

M+N
A
M
N

!1 !2

La elección de λ es función del grado

de superposición
Espectros completamente
superpuestos

A M+N

!1 !2

A1 = εM1 b CM + εN1 b CN (a λ1)

A2 = εM2 b CM + εN2 b CN (a λ2)
 Mezclas
Ejemplo . Una muestra de dos compuestos , X and Y, necesita ser analizada.
Se sabe que la λmax para el compuesto X es 632 nm, y λmax para el
compuesto Y es 447 nm.
• A partir d Standards preparados para X e Y y a partir de la curva de
calibrado se obtienen los siguientes valores de ε

• Las absorbancias a las dos longitudes de onda obtenidas para una muestra
son:
• A632 =0.771 y A447 = 0.815. ¿ cual será la concentración de los dos
compuestos?
 mezclas

En lugar de medir A, εM y εN solamente a dos longitudes de onda, se

miden estas magnitudes a varias longitudes de onda
A !
i = C + Ni C
! b M ! Mi N
Mi

Ai
! Mi b pendiente=CN

CM =ordenada origen

!
Ni
!
Mi
 Ejemplo mezcla

0,002
0,0018 y = 0,0001x

0,0016
0,0014

Amez/eper
0,0012
Serie1
0,001
Lineal (Serie1)
0,0008
0,0006
0,0004
0,0002
0
0 10 20
edicro/eper

!! ,nm MnO 4 - Cr2 O72- Mezcla e,per e,dicro e,dicro/e,p Ame/eman

er
266 0,042 0,41 0,766 420 7660 18,2380952 0,00182381
288 0,082 0,283 0,571 820 5710 6,96341463 0,00069634
320 0,168 0,158 0,422 1680 4220 2,51190476 0,00025119
350 0,125 0,318 0,672 1250 6720 5,376 0,0005376
360 0,056 0,181 0,366 560 3660 6,53571429 0,00065357

C=
0,0001

pendiente 0,0001
intersecion 4,33681E-19

0,002
y = 0,0001x
0,0018
0,0016
0,0014
per

0,0012
Hoja excell
 Resolución con Mathcad
Se forma una matriz de datos X-Y para analizarla donde :
X es Absorbanciapatron2/Absorbancia patron1 e
Y es Absorbancia Mezcla/ Absorbancia patron1 % 0.94 2.51 (
(X coordenada 1» column, Y coordenada en la 2» columna): & 2.5 5.3
)
& )
data := & 3.23 6.5 )
+, +,
X := data 0 Y := data 1 & 3.45 6.96 )
Number of data points:
& )
' 9.76 18.23 *
1
n := rows ( data) n=5 n
Standard deviation: o
r
t
n a
SD ( x) := stdev ( x) ! 19
n" 1 p 19
0
X-Coordinates Y-Coordinates s
b
Mean mean ( X) = 3.976 mean ( Y) = 7.9 A 15.2
/
a
Median median ( X) = 3.23 median ( Y) = 6.5 l
c
z 11.4
Standard dev. SD ( X) = 3.379 SD ( Y) = 6.028 e
my
2 2
Variance SD ( X) = 11.421 SD ( Y) = 36.341
s 7.6
Regression Statistics b
A
Intercept b0 := intercept ( X , Y) b0 = 0.808 intersepcion es C1

pendiente C2 3.8
Slope b1 := slope ( X , Y) b1 = 1.784

Correlation coeff. corr ( X , Y) = 1 0

!0 0
2 0 2 4 6 8 10
R2 corr ( X , Y) = 1
0 x 10
Covariance cvar ( X , Y) = 16.298 Abs patron2/Abs patron1
$$$$ # trazo 1
Plots r ( x) := b0 + b1 !x (
scale := max r ( X) " Y !1.1 )
% 0.94 2.51 (
& 2.5 5.3
)
& )
Coords := & 3.23 6.5 ) +,
x := Coords 0
& 3.45 6.96 )
& ) +,
y := Coords 1
' 9.76 18.23 *
Default range for plot: r := 1
 Valoraciones fotométricas
La ley de Beer se cumple
Al menos una de las especies debe absorber la Radiación

A A A

punto final
punto final punto final

Volumen Volumen Volumen A

a b c
Punto final
del Cu
A A A

Punto final
del Bi

punto final
punto final punto final

vol. de AEDT
Volumen Volumen Volumen
d e f
 Determinacion de constantes de disociacion de ácidos
y bases .
– + HA
– + A H pK a = pH + log
–
HA <—> A + H Ka = A
HA
A B C D E F
615 nm 1 calculo de pK de un acido
2 Parametros conocidoos ea1 ea2 eb1 eb2
A 3 908,00 352,00 104,00 1646,00
4
5 Datos A,1 mezcla A,2mezcla
6 0,47000 0,35000
7
punto isosbéstico 9 8 Solucion
8 9 Concentracion b 0,000105
7.5 10 Concentracion a 0,000506
7 Concentracion b=(C6*B3-
6.5 11 C3*B6)/(E3*B3-C3*D3)

6 12 Concentracion a=(B6-D3*B9)/B3
13
400 500 600 700 6 7 8 9
! 14
pH 15 datos indicador
16 C= 5,00E-04
17 A,485 A,625 e,485 e,625
18 InH(pH=0) 0,45 0,18 908,00 352,00
19 In(pH=14) 0,05 0,82 104,00 1646,00
20 pH=5 0,47 0,35
21
22
23 K= 2,17002E-06 pK= 5,66353685
24
25
26 pH
 #5
c := 4! 10 #8
k := 10
x := 0 , 0.2 .. 14 k=cnstante
c= concentacion total
x=pH
c c CinH<----> Cin +H+
CinH( x) := Cin( x) :=
$1 + k ' $ #x
10 '
% # x( %1 + (
& 10 ) & k )

77 3 3
a1 := ! 10 a2 := 1.5! 10 Coeficientes de absorptividad a "1(a1 y a2)y
4 "2(a3 y a4)
3 3 4
a3 := ! 10 a4 := 1.5! 10
4
A1=absorbancia a "1
A1( x) := a1! CinH( x) + a2! Cin( x) A2= absorbancia a "2
A2( x) := a3! CinH( x) + a4! Cin( x)
x= A1( x) = A2( x) =
0 .7
0
a .2
0 .7
0
i 1
c 0.9 .4
0 .7
0
n .6
0 .7
0
a 0.8
b .8
0 .7
0
0.7
r 1 .7
0
o A1( x) 0.6
.2
1 .7
0
s 0.5
b A2( x) .4
1 .7
0
A 0.4
.6
1 .7
0
0.3 .8
1 .7
0
0.2 2 .7
0
0.1 .
2 .7
0
0 .4
2 .7
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011121314
.6
2 .7
0
x
pH .8
2 .7
0
3 .7
0
 Determinación de la estequiometría de complejos

• Método de las variaciones continuas

Se preparan mezclas de diferentes concentraciones de M y L, pero
manteniendo constante la concentración final
Se representa la absorbancia frente a la fraccion molar de L =L/M+L

A
B

0.66 xL
Estequiometría variaciones continuas
 Método de la relación molar

• Se mantiene constante la concentración de uno de los componentes

(a menudo, el ión metálico) mientras que el otro se hace variar.
• Se representa la absorbancia frente a las relaciones molares de L y M:
L/M o M/L
.

1.2 ML
A
1.0

0.8
ML2 .
0.6

0.4

0.2

0
1 2 3 [L] /[M]
Determinación de constantes
 Error fotométrico

La ley de Beer la podemos escribir;

Derivando esta ecuación

Dividiendo esta ecuación por la primera

Representando el eror reletivo en c para una incertidumbre relativa en la medida

Frente a la transmitancia se obtiene el error
instrumental que se comete para cada T
 Curva de Ringbon
error de método espectrofotométrico
• Se define una nueva unidad
Absortancia concentracio
Absorbancia Transmitancia Absortancia n ppm
• AbsT = 100-%T.
• A=εbc=-logT ; 10-εbc=T 0,1 100 0 1

• De los datos de la curva de calibrado 0,15 82,3908741 17,6091259 1,5

se calcula para cada concentración el
valor de absortancia que se obtiene a 0,2 69,8970004 30,1029996 2
partir de la transmitancia y se
representa en una escala 0,4 39,7940009 60,2059991 4
semilogaritmica la absortancia ( eje de
ordenadas frente a la concentracion 0,6 22,184875 77,815125 6
(log c)eje de abscisas.
• El error se obtiene de la pendiente en 0,8 9,6910013 90,3089987 8
cada punto de la curva obtenida
0,89 5,06099934 94,9390007 8,9
• Se debe utilizar unicamente aquella
zona de menor error de metodo
0,9 4,57574906 95,4242509 9

0,98 0,87739243 99,1226076 9,8

ESPECTROFOTOMETRIA DE DERIVADAS
La primera derivada de un espectro original tambien puede definirse
como la representación gráfica de la pendiente de la curva de absorción
a cada longitud de onda

dA
para la primera derivada
d!
2
d A
para la segunda derivada
2
d!
A A

1ª derivada 2ª derivada
 Ventajas de la
espectrofotometría de derivadas
• Medida exacta de λ max.
• Mejor resolución de los
espectros
– En el espectro normal, la estructura fina
puede ser difícil de ver. En estos casos al
emplear la segunda derivada, puesto que los
máximos y mínimos del espectro normal y de
la segunda derivada aparecen prácticamente
a las mismas longitudes de onda y por tanto
la estructura fina del espectro normal se pone Espectro normal
mejor de manifiesto lo que tiene gran
importancia con fines de identificación, como
criterio de pureza o para control de calidad.
• Determinaciones cuantitativas
en presencia de dos o más 1ª derivada
componentes.

a) b)
 Instrumentacion UV
• Los componentes básicos son:
– Fuentes de energía (lámpara)
– Seleccionador de longitud de onda (filtros,
monocromadores)
– Recipiente porta muestras (cubeta)
– Detector
– Procesador de señales
 Instrumentos
Filtros
- Fotómetros
Fototubos
Monocromadores
Espectrofotómetros
Fototubos o tubos multiplicadores
 Fotómetros
• fotómetros, son instrumentos sencillos
que permiten medir la intensidad de
radiación, ya que van provistos de filtros
para seleccionar un rango estrecho de
longitudes de onda, y como detectores,
usan fototubos.
 Espectrofotómetros
• Los espectrofotómetros, son instrumentos más
o menos sofisticados que usan
monocromadores para seleccionar estas bandas
estrechas de longitud de onda. El
monocromador permite una variación continua
al seleccionar las longitudes de onda, y también
permite realizar un barrido en una zona amplia
de longitud de onda. Como detectores usan
fototubos o tubos multiplicadores.
 Fuente de energía
• Una fuente de radiación ideal debe ser continua en una amplia
zona del espectro, tener una intensidad elevada y que no varíe
esta intensidad con la longitud de onda.
• Fuentes térmicas :
– lámpara de filamento de Wolframio,
• Fuentes de descarga eléctrica:
– Lámpara de H- UV próximo.
– Lámpara de φH (Deuterio) UV próximo
– Lámpara de descarga de Xe : 250 y 600 nm,
– Lámpara de arco de Hg se utiliza para el calibrado de instrumentos
 Selección de λ
• Filtros de absorción:
– absorción selectiva de λ que no interesan
• Filtros de interferencia
– una parte de la radiación que llega es absorbida y
otra, se refleja
• monocromador
– dispositivo que genera un haz de radiación de gran
pureza espectral (anchura de banda estrecha) y que
permite ir variando la λ de manera continua.
 detectores.
• elementos que convierten la radiación en
un flujo de electrones y posteriormente, en
una corriente o voltaje en el circuito de
lectura.
– Células fotovoltaicas
– Fototubos (Tubos fotoemisores)
– Tubos fotomultiplicadores
Haz sencillo
Doble Haz en espacio
Doble haz en tiempo
Diodo Array
 calibrado del instrumento
• Instrumento de haz simple :
– Poner un obturador de manera que no llega radiación
al detector, se ajusta el detector a cero (en unidades
de transmitancia) o máxima (en unidades de
absorbancia).
– Con la disolución del blanco, ajusto a cero la
absorbancia.
– Con otra cubeta de disolución incógnita, mido la
absorbancia.
Si trabajamos a más de una λ estas tres
etapas se deben repetir para cada λ
 Calibrado instrumentos de doble haz.

• Se pone el blanco en ambas cubetas y se

ajusta a cero la absorbancia.
• Se quita la cubeta de la muestra, cerramos este
obturador para ajustar de nuevo a cero la
transmisión o al máximo la absorbancia.
• Colocamos la muestra y medimos la
absorbancia.