‘recomLine HIV-1 & HIV.2 1g Manual derstrvecones (spat) 4 Los reactivos cantienen Ia sustancia antmicrdbica y conservante azida s0dica, MIT (metilsotiazoinona), Oxypyion, oroacetamica ¥ petexido de hidrogeno, Debe evitarse el contacto con lapel O13 Mucosa. La azida sédica puede formar azides explosives al contacto con metal pesado come cabre y plomo. 4 Todos los iquidos sucsionados deben recogerse. Todos los recipientes colectores deben contener desinfectantes adecuados pera la inactvacién de virus patégenos humanos y otros agentes atbgenos. Todos los reactivos y materiales que Nan tenido ‘contacto con muestias polencialmenteinfecciosos debentratarse ‘con un desinfeciante adecuad o eiminarse correspondiente a ‘8 normas de higlene. Deben tenerse en cuanta las indieaciones e concentradoy ls lempos de incubacion de los fabricantes, Les cajas de incubacién deben utiizarse una sola vez ‘rate las tras cuidadosamente con una pinza de piasten, "No susituye 0 mezcle los reactvos can los reacts de otros fabricantes. ‘Antes de levar a cabo la prueba, lea atentamente el manual de instucciones completo y sig la instrucciones detidamente, El no ‘seguir el protocolo de prueta del manual de Instueciones puede llevar a resultados incortectos. 7_ Toma de muestras y preparacion de reactivos 7.4 Material de muestra El material de muestra puede ser suera o plasma (ctato, dcido Celienciaminotetraacéico, heparing, CPD) que debe separarse rapidamente del codguiosanguineo despues de la toma de muestras para evitar una hemdlsis. Debe evilase le contaminacion mierabiana {ela muestra, Las sustancias no solubles deben siminarse de ia. ‘muestra antes de la incubecién. ‘No se recomiende la ullizacién de muestras inactwadas por calor, ‘ctéricas, hemolzadas, ipémicas o emparadas iAtencién! Silas determinaciones no se van a realizar inmediatamento, 06 posible guardar el material de muestra hasta dos semanas a2 °C =8°C. Es posible realizar un almaceniamiento prolongado ‘muestra 2-20 °C o menos. No se recomienda la congelacion y Udescongelacion repetida de la muestra debido al peligro de resultados incorrectos. Avoid mors than 2 cycles of freesing and thawing. 7.2. Preparacién de las soluciones 72.1 Preparacién del buffer de lavado A listo para el uso Este buffer se necesta para ladle del sera y dol conjugado, asi come los pasos de avade Antes de ctr dabe determinarse ol volumen del buffer de lavado A, Pata el numero correspondiente de pruebas que se van a realizar Lalleche en polvo desnatada so dicuelve previamente en ‘oncentrado de bufier de lavado A, Esta mezcle se completa Posteriocmente con aqua desionzzade hasta el volumen final (dlucén, 1+ 9) Las cantades necesarias para un ndmere defiido de tras de ‘ensayo se calculan sogin la siguiente formula (nose iene en cuenta ‘elvolumen muerio espectfice del aparat) Fiemior Resctivo Formula Stas Leche en sch desta Sninerodeiasxoi | 05g. [Soncenvage de oer de wade ATE soe Agus desiorizads [re] Sort Butler de evodo A Ist-para el uea i= nero de asx 20 —[ io) El buffer de lavedo Allsto para e uso puede almacenarse durante ‘quato semanas a2 °C 8 °C. El bute: de lavado A listo para el uso fe inodoro y esta ligeramente empafiadd, 7.2.2 Preperacién de las soluciones de conjugado La solucion de corjugado debe prepararse sto antes del uso: no es Posibie un almacenamiento de ls solucon de eonjugado lista para 6! Una parte del concentrado de conjugaco se ciluye con 100 partes de buffer de lavaco A liso para al uso (1 + 100), Le cantidades necesaras para un riumre dafinido de tras de ensayo ‘se caloulan segin la siguiente formula Ejemple: Resctve Formula stra [Corcervade de sojegago i mero detaexa—| 100 Bufo de evade Aliso pars el so fa[|= nimere de Wasx2 —[ 10m] {Las cantiades del conjugado se han calculado sin volumen must Depenaiendo de! procesamien (manualmente 0 con un aparato) ‘debe prepararse la solucin de conjugaco para entre 1y 3 tras, ‘GARLHID05ES_2014.03 MIKROGEN Realzacion| Nas 8 _Procedimiento de prueba W ies de cmensarconTa prueba, Ge La prueba Gabe [SaTSE 8 cabo a femplrooos os rearsvora eC | tenpersiveatlenal 25°C (erperature ember) Surana ‘0 miutce coms mise, | Prparacn oss rss = aay Moje tras en 27 ce buffer de lavage A sto para usa To aque as a con as TTS tice unas praae el ndmero de Intra debe apuntar has arb Por cada tra se necesa una concavidad en une ca do neubanon (veste 42) Lae tas eben surmargres por moll, 3 | pecans moa 12) | Se pipetean 20 pe une muesra no tua (sve humane o paama) oun conel px aaa Baque de ncubacon feria tre ce ensayo. alueon 1 100) Pipetee i muesvaleontto en un ‘rome dela ra sume en Slbuterselavacoky messes ‘ano antes agen {uidadosamerts a chara do irewtacen >) |incubar durante 3 horas agtando | Cuba cja de ineubacin con Igeramen ate eps png on [ae Realce os pasos de avado end ces veces, 2) | Rete culdadcsameme a taps de | Eve la contarsnactn evzeds pemico dels aa de neubacen 1») | Scecone cuadosamente fa clusion Se sro oe las concedes En casa de prosesamiento con (s sparato,Sebentonerse on Slants oe aioe del ebriare, 2) | Pete 2m ce puter de tavado A stop eso en cada soncaice, ave rare 5 minutos agtanco Tgerarariey a entation sucione bates delavedo A, /5 meunacon con conwaada Cabra el Se nS ST AtaGa 2 mice a slucion de Istana de lashes ypengala en conlugado latapereciuscencwbe |i meatagor scree 4s minutos Stance ipermente f[bareco Tale os pSSDE de RSS Wes vseetlasanado 4 seoes lane Bae 7 | Rescatn de subarate /Afads 151i es eolucin do Substeaio ence’ durante frinutos eptdndole werament ave Brevemente 3 veces come rina con agus desioninads fo Sesarlas bas | See ras arta de a evaluacn Surare 2 hore erie dos capas ce Sapel absorbent "Ateneo teas tes cldedararente a gua con unas inane So pastes Guarcelactras | Doteaiéndoas am sz concavidades. eben evtarse chispas eepeciaiments al abrirycerar ls taps, 9 Resultados Ateneisa [No uilie i nterpretacion automatic sin seguir ias incicaciones escites a continuacion en cuanto a la interpretacon 9.4 Validacién y control de calidad Se puede proveder al anisis de una procba siempre que se cumplan los siguientes citerios 41. Barra de control de reaccicn (linea superior: claramente ted, barra oscura 2. Cetegorfa de anticuerpos (segunda barra): a barra de control de la conjugacion \gG debe aparecer tenia en un color diferente 3. Contiol de corte (tercera barra: tehics en un color mas d8bi pero vsible No es nacasato realizar contoles posttvo y negative para evalvar la prueba. Sies necesario, se pueden realizar para ol contol de ealdod Inter. Los contoles deben mostrar las siguientes bandas de antigenos reactvas: ‘Control positvo: 99120, gp41, p51, p31, p24, p17: {99108 y 9938 pueden reaccionar, pero no ecosariament. ‘Cont negative: ninguna 28