UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA

ESCUELA DE QUÍMICA BIOLÓGICA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
MICROBIOLOGÍA DESISTEMAS NATURALES

MUESTRA PROBLEMA NO. 1. BACILOS GRAM NEGATIVOS NO

FEMENTADORES

Yohana Mateo (201131229) Sección D

I. CASO CLINICO
Un hombre de 70 años que había ingresado 7 días antes en la unidad de cuidados intensivos
por disnea aguda y fiebre de 39 grados °C desarrollo un cuadro de tos productiva nuevo con
dolor torácico pleurítico asociado. En la auscultación torácica destacaba la presencia de
crepitantes en ambas bases pulmonares con roncus en ambos lóbulos superiores; en la
radiografía se apreciaban opacidades bilaterales compatibles con bronconeumonía. Se
realizaron hemocultivos.
Prueba Resultado
II. RESULTADOS Oxidasa +
Catalasa +
Tabla 1 Movilidad +

Medios de cultivos y Gram Agar TSI k/k G- H2S -

OF de glucosa Oxidación
Medio Crecimiento y características
OF de manitol Oxidación
Agar sangre Crecimiento de colonias blancas
con brillo metálico, borde en posición monótricos
de carnero Tinción de flagelos
irregular y elevación plana polares
Agar Indol -
Crecimiento de colonias
chocolate irregulares de color crema Hidrolisis de urea +

Agar Crecimiento leve de colonias Citrato de Simmons +

lactosa negativo del color del Descarboxilación de
MacConkey
medio -
Bacilos Gram negativo solos y en ornitina
Gram
parejas Descarboxilación de
+
Fuente: Datos experimentales obtenidos en arginina
el laboratorio virtual del curso de Descarboxilación de
-
Bacteriología II. lisina
Reducción de nitratos a
+
Tabla 2 nitritos
Producción de piocianina y
Pruebas Bioquímicas Agar Müller-Hinton
con luz UV de pioverdina
 Crecimiento a 42°C + bioquímicas (Ver tabla 1.) y entre los
Hidrolisis de esculina
hallazgos más importantes podemos
+: positivo
-: negativo mencionar los siguientes:
G: gas
H2S:
TSI: agar triple azúcar hierro
OF: oxidación fermentación
Una reacción de citocromo oxidasa
Fuente: Datos experimentales obtenidos en
el laboratorio virtual del curso de positiva, que hace sospechar de un no
Microbiología de Sistemas Naturales. fermentador, sin embargo, no todos los
bacilos gramnegativos oxidasa positivos
Tabla 3
son no fermentadores (Winn, Allen, Janda,
Otras Pruebas Koneman, Procop Woods, 2006)
Prueba Resultado
Taxo de Sensible
Polimixina B Seguidamente se realizaron pruebas que
Hidrolisis de
+ permitieron medir el modo de utilización de
acetamida
Hidrolisis de la glucosa y se determino crecimiento en la
la gelatina +
superficie del agar TSI pero no
DNAsa -
ONPG -
acidificación, lo que indica que no utiliza
Crecimiento ninguno de los tres hidratos de carbono
No hay
en NaCl al
crecimiento contenidos en el medio como fuente de
6%
Agar energía o los degrada a través de vías
Crecimiento
Cetrimida metabólicas distintas de la fermentación
Fuente: Datos experimentales obtenidos en (Winn, Allen, Janda, Koneman, Procop
el laboratorio virtual del curso de
Woods, 2006).
Microbiología de Sistemas Naturales.
La prueba oxidación-fermentación de

III. DISCUSIÓN glucosa y manitol mostro que el bacilo

Como se observa en la Tabla 1. Se gramnegativo posee un metabolismo

determino que la bacteria aislada es un oxidativo, lo que significa que es una

bacilo gramnegativo (Ver Anexo 1.), que bacteria aerobia ya que necesita oxígeno

creció en agar chocolate y agar sangre de para metabolizar la glucosa y el manitol

carnero mostrando un brillo metálico, en (Madigan, Martinko & Parker, 2003). El

agar MacConkey también se observó resultado obtenido del agar MacConkey,

crecimiento de colonias lactosa negativas. del TSI y del OF permite confirmar que

Para la identificación de dicha bacteria se efectivamente se trata de un bacilo gram

prosiguió a realizó una batería de pruebas negativo no fermentador.

En caldo tripticasa soya se determino que el
bacilo gramnegativo no fermentador posee
movilidad y se determinó la presencia de
flagelos monótricos polares por medio de la
tinción de Leifson.
Por medio de la prueba de Indol se termino
que el bacilo gramnegativo no hidroliza
triptófano, ya que no posee la enzima
triptofanasa. Se observo una coloración
rosa en la prueba de urea, lo que indica que
el no fermentador posee la enzima ureasa
que permite la hidrolisis de la urea
contenida en el medio. Se determino que de
los tres aminoácidos ornitina, arginina y
lisina únicamente descarboxila la arginina.
La prueba de reducción de nitratos también
dio un resultado positivo.
Es importante mencionar que los no
fermentadores producen ciertos pigmentos,
algunos de los cuales son útiles para
realizar la identificación de una especie
(Winn, Allen, Janda, Koneman, Procop
Woods, 2006). Por medio del agar Müller-
Hinton se determinó la presencia de
piocianina, un pigmento verdoso
posteriormente se irradio con
ultravioleta poniendo de manifiesto la
presencia de pioverdina un pigmento
amarillo fluorescente, también
determinó que el bacilo gramnegativo no
fomentador tiene la capacidad de crecer a
42 °C.
La presencia de pigmentos específicamente
de piocianina permite inferir que la bacteria
problema aislada posiblemente es
Pseudomonas aeuriginosa ya que ningún
otro no fermentador sintetiza este pigmento
(Winn, Allen, Janda, Koneman, Procop
Woods, 2006).
Otras de las características adicionales que
fueron de gran utilidad para identificar que
efectivamente la muestra problema es de P.
aeruginosa fueron, el color metálico de las
colonias en agar sangre de carnero (Ver
Anexo 2.), la utilización de oxígeno para
metabolizar la glucosa, la presencia de la
enzima citocromo oxidasa, el crecimiento
a 42 °C y la presencia de movimientos y
flagelos polares y monotricos
En la tabla 3. Podemos observar otras
pruebas complementarias como el taxo
Polimixina B, la hidrolisis de acetamida, la
hidrolisis de la gelatina (Ver anexo 3.) y
específicamente el crecimiento de colonias
verde-amarillentas, fluorescentes en agar
y cetrimida. Este es un medio selectivo
luz utilizado para identificar a Pseudomonas
aeruginosa. El medio estimula la
producción de fluoresceina y piocianina
se con lo cual permite el viraje de color del
medio (Prescot, Harley y Klein, 2002).
Estas pruebas permitieron confirmar que
efectivamente la bacteria problema es
Pseudomonas aeuriginosa.
 IV. CONCLUSION
• Se determinó que la bacteria
aislada es Pseudomonas
aeuriginosa

V. REFERENCIAS
BIBLIOGRÁFICAS
Fuente: Datos experimentales obtenidos en
Madigan, M., Martinko, J., & Parker, J. el laboratorio virtual del curso de
(2003). Brock. Biología de los Bacteriología II
microorganismos. España:
Anexo 2
Editorial Pearson
Colonias en Agar Sangre de Carnero
Prescot, M., Harley, P., y Klein, A. (2002)
Microbiologia. España: McGraw-
Hill

Winn, W., Allen, S., Janda, W., Koneman,

E., Procop, P. y Woods, G. (2006).
Koneman Diagnostico
Microbiologico: Texto y atlas en
color. México: Editorial Medica
Panamericana

Fuente: Datos experimentales obtenidos en

VI. ANEXOS el laboratorio virtual del curso de
Bacteriología II
Anexo 1

Anexo 3
Tinción de Gram

Tabla de identificación de no
fermentadores fluorescentes
Fuente: Winn, W., Allen, S., Janda, W.,
Koneman, E., Procop, P. y Woods,
G. (2006). Koneman Diagnostico
Microbiologico: Texto y atlas en
color. México: Editorial Medica
Panamericana