TÉCNICA DE FICOLL: SEPARACIÓN CELULAR POR GRADIENTE DE

DENSIDAD

Técnica

1) Realizar una dilución de sangre y suero salino fisiológico en una proporción 1:1
2) Dispensar en el tubo de cristal 3 ml de Ficoll y 4 ml de la dilución anterior con cuidado para
que no se mezclen
3) Centrifugar 1800 rpm durante 25 minutos (rpm/s2=150 en aceleración y 20 en deceleración).
4) Recoger la fracción de leucocitos con una pipeta pasteur con mucho cuidado para no llevarnos
la capa superior y depositarlo en un eppendorf
5) Realizar una extensión y dejar secar
6) Teñir la extensión con panóptico rápido:

a) 5 inmersiones de un segundo en la solución fijadora.

b) 5 inmersiones de un segundo en eosina
c) 5 inmersiones de un segundo en azul de metileno
d) 5 inmersiones de un segundo en agua destilada.

7) Dejar secar y observar al microscopio

Observaciones

➔ Proporción 1:1 nos indica que serán 2ml de sangre y 2ml de suero fisiológico.
➔ Incidencia en el paso número 2 por una pequeña mezcla entre el Ficoll y la dilución de sangre
debido a que la pipeta no funcionaba correctamente y el líquido no se expulsaba de forma
suave y continua. Aún así, el procedimiento salió correctamente y se pudieron ver las células
mononucleares. (Fotografía 1 y 2).

➔ Procedimiento de la cámara de Neubauer. (Fotografía 3 y 4).

◆ Añadimos una pequeña parte de los leucocitos obtenidos a un eppendorf.
◆ En otro eppendorf incorporamos 10uL de trip and blue, y posteriormente agregamos
10uL de los leucocitos del primer eppendorf.
◆ Dejamos reposar 5 minutos, se recogen los 20uL con una micropipeta y añadimos a la
cámara de Neubauer.
◆ Observamos al microscopio
Fotografía 1 Fotografía 2

Fotografía 3 Fotografía 4