LABORATORIO EN

INFECTOLOGIA
MARIA EDELMIRA CRUZ SALDARRIADA
ESPECIALISTA EN ENFERMEDADES INFECCIOSAS Y TROPICALES
Febrero 2022
SELECCION, RECOGIDA, TRASLADO
DE MUESTRAS Y PROCESAMIENTO
INICIAL
https://www.youtube.com/watch?v=Q-uXCgoYLH8

https://www.youtube.com/watch?v=_Ai4umWwiqo
Interpretación de pruebas de laboratorio en
infecto logia
• Es indispensable establecer la importancia de la orientación inicial de las
pruebas diagnósticas, dirigiéndolas hacia una sospecha clínica basada en la
anamnesis y en la exploración, que fundamentará su interpretación y
contextualización posterior.
• Es necesario interpretar y analizar, de forma detallada, los resultados
obtenidos, tratando de extraer toda la información disponible de las
pruebas solicitadas y LCR que pueden orientar acerca de etiología y la
gravedad de la infección y que pueden determinarse en las primeras horas
de la misma.
• El cultivo sigue siendo la técnica de elección para el Dx. Definitivo de
infecciones bacterianas, víricas y fúngicas; las nuevas técnicas moleculares
de amplificación genética son un importante avance por su mayor
sensibilidad y rapidez.
 Normas para la recogida y traslado de muestras remitidas para
tinciones y cultivos bacterianos y fúngicos
MUESTRA DIRECTRICES DE RECOGIDA OTROS COMENTARIOS
Absceso Se prefiere un aspirado de pus o líquido en vial de trasporte anaeróbico, También es aceptable una muestra remitida
las torundas suelen ser un material insuficiente para tinción Gram y inmediatamente en
cultivo. Limpie la superficie del absceso cerrado con alcohol al 70%, una jeringa con tapón después de haber
recoja las muestras en los bordes del absceso. eliminado el aire.
Los aspirados en tubos de transporte anaeróbico son aceptables para Especifique la localización del absceso para un
cultivo de bacterias aerobias y anaerobias, hongos y micobacterias. procesamiento
óptimo; aporte toda información extra
pertinente (p. ej.,
infección quirúrgica, traumatismo, herida por
mordedura).
Sangre para Cultivo

Bacterias aeróbicas y Desinfectar los tapones de los frascos con alcohol isopropílico al 70%; La recuperación óptima de bacterias de
anaeróbicas de rutina desinfectar el sitio de flebotomía con alcohol seguido de aplicación de pacientes que reciben
tintura antibióticos requiere el uso de caldos
de yodo o clorhexidina; esperar a que se sequen los antisépticos. suplementados con
Extraer 10-20 ml/adultosy 1-3 ml/niño en cada frasco de hemocultivo; resinas diseñadas para inactivar antibióticos.
dividir la Todos los frascos de hemocultivos deben ser
sangre en dos frascos de hemocultivo, preferiblemente un frasco para remitidos
aerobios inmediatamente para que comience la
y otro para anaerobios; recoger 2-3 cultivos por cada período de 24 incubación o el
horas. procesamiento
 Normas para la recogida y traslado de muestras remitidas para
tinciones y cultivos bacterianos y fúngicos
MUESTRA DIRECTRICES DE RECOGIDA OTROS COMENTARIOS
Sangre par examen Microscopico
Anaplasma, Ehrlichia Preparar extensiones gruesas y finas de un pinchazo en el pulpejo de un Traslado rápidamente para preparación de las
dedo o sangre con EDTA. extensiones; prueba inespecífica para especies de
Borrelia Preparar extensiones gruesas y finas de un pinchazo en el pulpejo de un Ehrlichia, Borrelia burgdorferi
dedo o sangre con EDTA.
Médula ósea Obtener para Hístoplasma, micobacterias, Brucella,
Recoger 1-2 mi asépticamente; inocular en un frasco de hemocultivo o en Salmonella
tubo entérica serotipo typhí; la aspiración de más de 2 mi
de lisis-centrifugación de 1,5 mi. diluye la médula ósea con sangre periférica.
Catéter

Intravascular Retirar asépticamente, cortar un segmento de al menos 5,5 cm desde la Trasladar rápidamente para prevenir que se seque
punta y colocar el segmento en un recipiente estéril.
Foley NO aceptable para cultivo El crecimiento representa microbios de la uretra
distal
Drenaje No se recomienda el cultivo del catéter de drenaje Los catéteres de drenaje pueden estar
contaminados en la superficie.
 Normas para la recogida y traslado de muestras remitidas para
tinciones y cultivos bacterianos y fúngicos
MUESTRA DIRECTRICES DE RECOGIDA OTROS COMENTARIOS
Oido
Interno Si el tímpano está intacto, limpiar el conducto auditivo con una solución Si se recoge la muestra por aspiración, inocular los medios en el
jabonosa o alcohol al 70%, luego aspirar con jeringa. momento de la recogida o trasladar in
Si el tímpano está perforado, recoger el drenaje con una torunda sin algodón mediatamente la jeringa al laboratorio.
El drenaje recogido de un tímpano perforado no debe ser cultivado
para anaerobios.

Externo Eliminar los restos con costra y a continuación raspar firmemente o pasar
una torunda por el oído externo

OJO
Conjuntiva Haga rodar una torunda prehumidificada sobre la conjuntiva; se deben
preparar tinciones e inocular los medios en el momento de la recogida
Cornea Debe utilizarse una espátula estéril para raspar la superficie de la córnea; se deben preparar las
tinciones e inocular los medios en el momento de la recogida.
Humor vítreo y líquido de la Por la cantidad limitada de líquido que puede recogerse por aspiración, debe ser trasladada
cámara anterior del ojo inmediatamente al laboratorio en una jeringa de recogida apropiadamente sellada.
El número de tinciones preparadas y de los medios inoculados
debe ser limitado por la pequeña cantidad de material recogido.
El número de tinciones preparadas y de los medios inoculados
debe ser limitado por la pequeña cantidad de material
recogido. La anestesia puede inhibir el crecimiento de algunas
bacterias.

Heces Recoger la muestra directamente en un recipiente estéril y remitir No procesar para patógenos bacterianos si el paciente ha
inmediatamente al laboratorio; remitirla en medio de transporte Cary-Blair si hay retraso en el estado hospitalizado durante más de 3 días a menos que esté
traslado. aprobado por el director del laboratorio; considere Clostridium
difficile en el caso de los pacientes hospitalizados con diarrea; no está
indicado remitir múltiples muestras por día.
Notificar al laboratorio si se sospecha un patógeno específico (p.
ej.,Vibrio, Yersinia, Aeromonas, Escherichia coli enterohemorrágica).
 Normas para la recogida y traslado de muestras remitidas para tinciones y cultivos
bacterianos y fúngicos
MUESTRA DIRECTRICES DE RECOGIDA
Líquidos orgánicos distintos a sangre y orina
Pericárdico, Remitir al menos 2-5 mi para bacterias, >10 mi para hongos y/o micobacterias;
peritoneal, pleural, transportar en un sistema de recogida anaerobio
Sinovial
Cefalorraquídeo 1 - 2 mi para bacterias.
5-10 mi óptimo para micobacterias u hongos; más en caso de enfermedad
Crónica
Nariz Insertar una torunda prehumidificada 1 - 2 cm en ei interior de las fosas nasales
y rotar frente a la mucosa nasal.
Garganta o faringe Se pasa una torunda por la parte posterior de la faringe, evitando la saliva, para
la recuperación de Streptococcus pyogenes; apropiado para B. pertussis,
C. diphtheriae, N. gonorrhoeae, N. meningitidis.
La detección de levaduras queda restringida generalmente a microscopía
(p. ej., tinción de Gram, tinción blanco de calcoflúor).
Aspirado traqueal Aceptable para las mismas pruebas que el esputo aspirado; no seleccionado
en cuanto a aceptabilidad como los esputos Inducidos.
Esputo expectorado El paciente debe aclararse o hacer gárgaras con agua para eliminar el exceso
de mlcroblota oral; se Instruye al paciente para que tosa profundamente
y expectore las secreciones de las vías respiratorias Inferiores; se recoge y
traslada en un recipiente estéril.
Recoger 1 mi para cultivo bacteriano; 5 mi o más para cultivo de mlcobacterlas
y hongos.
Esputo inducido Inducido con solución salina estéril con empleo de un nebulizador
OTROS COMENTARIOS
Si se puede recoger material suficiente, inocular frascos de
hemocultivo aerobio y anaerobio para cultivos de bacterias
y de levaduras a menos que se sospeche Neisseria (que es
inhibida por los anticoagulantes de los frascos).
Remitir inmediatamente; notificar al laboratorio si se requiere
cultivo anaerobio o tinciones para microorganismos
ácido-alcohol resistentes. No inocular en frascos de hemocultivo.
Utilizado generalmente para la detección del estado de portador
de Staphylococcus aureus; Ahora SARS COV-2. especificar al lab.
Notificar al laboratorio si se considera un patógeno bacteriano
de difícil crecimiento
Es común la contaminación con bacterias orales; se procesa
la muestra para bacterias a pesar de la presencia de células
epiteliales
La presencia de abundantes células epiteliales Indica
contaminación con mlcroblota oral; una muestra contaminada
es Inaceptable para el cultivo bacteriano de rutina, pero puede
procesarse para micobacterias u hongos.
Algunos laboratorios no procesan estas muestras para hongos
aparte de los dimórflcos.
Es común la contaminación con bacterias orales; se procesa
la muestra para bacterias a pesar de la presencia de células
epiteliales.
Puede procesarse la muestra para Pneumocystis.
Hemograma
• Alrededor del 40% de los niños, con cifra total de leucocitos >25.000/microlitro, presenta una infección bacteriana grave.
• La interpretación del hemograma en enfermedades infecciosas es complicada, debido a su baja sensibilidad y especificidad como
prueba aislada, pero puede ser de gran utilidad en combinación con otras pruebas y valorada en cuanto a la situación clínica y la
sospecha diagnóstica.
• Serie roja. En algunas enfermedades infecciosas se observan alteraciones en las cifras de hemoglobina, bien por alteración de la
producción hematopoyética producida en determinadas infecciones o por la destrucción periférica de hematíes. La anemia puede
ser propia de algunas infecciones virales específicas (como la anemia aplásica producida en la infección por parvovirus) o de otras
infecciones como la leishmaniasis
• Plaquetas. Son consideradas un “reactante de fase aguda”, ya que su cifra se eleva en determinadas infecciones. Es frecuente
encontrar trombopenia en algunas infecciones bacterianas graves y sepsis en el contexto de coagulación intravascular diseminada,
así como en infecciones parasitarias agudas o subagudas, como la leishmaniasis o la malaria. Puede tener relevancia clínica en
forma de púrpura o hemorragias.
• Serie blanca. Se debe interpretar de forma cualitativa y cuantitativa. La cifra total de leucocitos puede utilizarse como predictor de
una infección bacteriana grave. Diversos estudios han mostrado mayor riesgo de bacteriemia neumocócica en pacientes con cifras
mayores de 15.000 células/microlitro y mayores de 1.500 cayados/microlitro, pero tras la introducción de las vacunas conjugadas,
estos puntos de corte presentan menor sensibilidad y especificidad para el diagnóstico de esta entidad.
• La extensión de sangre periférica aporta información cualitativa sobre el componente celular, y tiene su principal utilidad en el
diagnóstico diferencial con enfermedades hematológicas.
Reactantes de fase aguda
• Mediante este término se engloba a las proteínas de fase aguda y la velocidad de
sedimentación globular determinados en sangre. Se denominan proteínas de fase aguda
a aquellas que aumentan o disminuyen en un 25% durante la infección, en respuesta al
efecto de las citoquinas sobre los hepatocitos.
• Proteína C reactiva: se trata de una proteína sintetizada en el hígado en respuesta a
diversas citoquinas liberadas durante los procesos inflamatorios, especialmente la IL-6 y
la IL-1β. Su liberación induce, a su vez, la activación del complemento, la apoptosis
celular y la amplificación de la señal inflamatoria. Se eleva a las 12-14 horas de la
agresión y tiene un pico aproximado a las 24-48 horas de su inicio.
• Procalcitonina: en situación basal, se trata de la proteína precursora de la calcitonina y se
sintetiza en la glándula tiroidea, en respuesta principalmente a hipercalcemia. En
situaciones de sepsis o estrés grave, pasa a ser sintetizada por múltiples tejidos y deja de
escindirse en calcitonina, respondiendo su síntesis principalmente al estímulo de
citoquinas como la IL-1, IL-6 y TNF. Su función biológica no está del todo bien establecida,
pero parece estar implicada en la inducción de la migración monocitaria. Puede
detectarse en plasma en las 2-3 primeras horas tras la introducción de una endotoxina, y
presenta un pico a las 12 horas del inicio de la infección.
Examen de Orina
Líquido Cefalo raquídeo
Interpretación de antibiograma
• El estudio de la sensibilidad a antimicrobianos de las diferentes
bacterias aisladas en muestras biológicas tiene 2 objetivos
fundamentales:
• guiar al clínico en la elección del mejor tratamiento individual, y
• monitorizar la evolución de la resistencia bacteriana con objeto de
revisar el espectro del antimicrobiano y poder actualizar los
tratamientos empíricos.
• Este estudio se realiza mediante el antibiograma, que mide la
sensibilidad de una bacteria frente a diferentes antimicrobianos in
vitro y a partir de estos resultados predice la eficacia in vivo.
Técnicas de estudio de sensibilidad a los
antimicrobianos
• El estudio de la sensibilidad in vitro de las bacterias a los antimicrobianos
se realiza mediante métodos fenotípicos (técnicas de dilución y de
difusión), bioquímicos y genéticos.
• Los métodos fenotípicos (antibiograma) son los más utilizados. Consisten
en enfrentar un inóculo bacteriano estandarizado a una única o a
diferentes concentraciones de antibiótico. La interpretación de los
resultados obtenidos permite clasificar a los microorganismos en
categorías clínicas: sensibles, intermedios o resistentes.
• Hay que tener en cuenta que no siempre un valor de CMI más bajo indica
mayor actividad de este antimicrobiano, ya que las CMI que definen la
sensibilidad o resistencia son diferentes para cada especie bacteriana y
cada antimicrobiano.
Técnicas de estudio de sensibilidad a los
antimicrobianos
• Si un microorganismo es sensible indica que con las dosis habituales
se espera una evolución favorable de la infección, siempre que se
alcancen valores adecuados en el lugar de la infección, lo que en
ocasiones no es posible (p. ej., en el sistema nervioso central). Por el
contrario, si el microorganismo es intermedio o resistente, es
probable que la evolución sea desfavorable. La interpretación de la
sensibilidad predice mejor el fracaso (cuando es resistente) que el
éxito de un tratamiento.
Técnicas de estudio de sensibilidad a los
antimicrobianos
• Las técnicas de difusión emplean discos de papel impregnados con
una solución estandarizada de antibiótico que se disponen sobre la
superficie de un medio sólido previamente inoculado en su superficie
con una suspensión bacteriana.
• Tras un período de incubación de 18 h, el diámetro del halo formado
está en relación con el grado de sensibilidad del microorganismo. La
carga del disco está ajustada para que los halos de inhibición
permitan diferenciar los microorganismos sensibles de los resistentes
y pueda establecerse una correlación con los valores de CMI: halos
pequeños se relacionan con valores altos de CMI (resistentes) y halos
grandes con CMI bajas (sensibles)
Técnicas de estudio de sensibilidad a los
antimicrobianos
• Otra técnica de difusión es el E-test, que además permite la
determinación directa del valor de la CMI. Utiliza tiras de plástico
impregnadas con un antibiótico en concentraciones decrecientes. Al
contacto de la tira con el agar, el antibiótico difunde e impide el
crecimiento del microorganismo. Después de la incubación se observa
una zona de inhibición en forma de elipse: el valor de la CMI es el
punto de intersección de la elipse con la tira y está indicado en la
escala impresa sobre la superficie de la tira.
• Esta técnica puede utilizarse directamente sobre muestras clínicas
para obtener resultados preliminares en menos de 24 h, que siempre
deben confirmarse mediante pruebas de sensibilidad estandarizadas
con bacterias en cultivo puro
 Técnicas de estudio de sensibilidad a los
antimicrobianos
Antibiograma por difusión con discos en el que se observa la
presencia de halos de inhibición. B) Antibiograma por E-test en
el que se observa una elipse de inhibición. El punto donde la
elipse corta con la tira es el valor de CMI, en este caso 0,5 mg/l.
Antibiograma mediante E-test directo de una muestra de LCR
de un paciente con meningitis por Streptococcus pneumoniae.
El medio utilizado contiene sangre de carnero necesaria para el
crecimiento de S. pneumoniae. Se observa una elipse de
inhibición con la tira de cefotaxima. El punto donde la elipse
corta con la tira es el valor de CMI, en este caso 0,75 mg/l.
Lectura interpretada del antibiograma
• El análisis de los resultados de sensibilidad es un aspecto esencial para una
adecuada información del antibiograma y tiene una gran trascendencia clínica.
• La lectura interpretada del antibiograma analiza los fenotipos de sensibilidad y
permite deducir posibles mecanismos de resistencia.
• Este proceso permite inferir la sensibilidad de antibióticos no estudiados en el
antibiograma y la corrección, en su caso, de falsas sensibilidades observadas in
vitro, como ocurre en el caso del antibiograma de una enterobacteria con una
BLEE, en el que no siempre aparecen como resistentes todas las cefalosporinas, si
bien, en la práctica debe evitarse su uso.
• Favorece la adecuación del tratamiento, el control de las políticas de
antimicrobianos, la detección de nuevos mecanismos de resistencia y el
conocimiento de su epidemiología.
Lectura interpretada del antibiograma
• Hay que conocer la identidad del microorganismo estudiado, tanto el
género como la especie,
• Así, una cepa de S. aureus con CMI de cloxacilina de 1 mg/l es sensible a
cloxacilina y a todos los β-lactámicos, mientras que si se trata de un
estafilococo coagulasa negativa la CMI de 1 mg/l indica resistencia a
cloxacilina.
• Otro ejemplo es que una CMI de ampicilina de 8 mg/l frente a una
enterobacteria indica sensibilidad, pero frente a un estafilococo esta misma
CMI indica resistencia, ya que un estafilococo es ya resistente a ampicilina
con una CMI de 0,5 mg/l. De esta manera, CMI más bajas no siempre
indican mayor actividad y, además, son variables dependiendo del
microorganismo y del antibiótico, como se ha indicado anteriormente.
• https://www.youtube.com/watch?v=1XJ4iG4aTSk|

• https://www.youtube.com/watch?v=XWcFq19SNB8

• https://www.youtube.com/watch?v=2fhMcOCCHbY