Tema 6.

Liberación de neurotransmisores
1. Liberación cuántica de neurotransmisores
1.1. Unión neuromuscular

Liberación cuántica de neurotransmisores. Unión neuromuscular. Potenciales

miniatura (MEPP)
Los experimentos realizados fueron sobre los años 50, no obstante, la confirmación de estos no se dio
hasta los años 80. El modelo que se usó fue cómo conexionan nervios con la fibra muscular en el SNP.

La fibra muscular se adapta de manera especial a la sinapsis, y

estas adaptaciones tienen algunas peculiaridades: se
producen invaginaciones y evaginaciones de la membrana. En
las evaginaciones es muy densa la presencia de canales
ionotrópicos, en este caso para Ach, que se agrupan en las
zonas donde va a tener lugar la liberación de
neurotransmisores, mientras que en las invaginaciones es
muy abundante la secreción de la enzima acetilcolinesterasa,
que rompe el neurotransmisor una vez que se ha liberado
para terminar su acción. Así si en esa placa motora llega un
pda a la terminal, ocurre que la membrana neuronal se va a
despolarizar y aquí son abundantes unos canales, los canales
de calcio dependientes de voltaje. Esos canales se van a abrir
haciendo que el calcio entre desde la hendidura hacia el
interior de la vesícula y esa fusión va a liberar Ach. La Ach se
va a unir al receptor del músculo y como consecuencia de su
apertura despolariza la membrana muscular y eso lleva como consecuencia una contracción. Esta acetil
colina difunde y la aceilcolinesterasa la va eliminando. La colina la recupera la neurona.

En los registros de potencial: en línea continua

están expresados cambios de potencial de la
membrana de la fibra muscular. A esos cambios de
potencial, como tienen lugar en la post-sinapsis se
les llama cambios de potencial postsinápticos. En
discontinuo está el cambio de potencial de la
neurona que va a inervar ese músculo. Cuando hay
un estímulo se produce en la neurona un pda que
tiene una respuesta inmediata en la célula
postsináptica con una despolarización de la mb. Sin
embargo, ese cambio de potencial de mb
postsinápica, cuando termina el pda también
termina y llega otra vez al potencial de reposo la
fibra muscular.
Lo que llamo la atención fue que en ausencia de estímulo se veían potenciales postsinápticos, que tenían
un valor muy pequeño (0,4 o 0,5 mV). A diferencia de lo que ocurría cuando hay estímulo, se producía en
ausencia de estímulo. A esos potenciales por tener esa intensidad tan pequeña los llamaron miniatura. Eso
es debido a que había canales que se estaban abriendo y si se abren es porque hay neurotransmisores que
se liberan, y por alguna razón esa liberación de neurotransmisores se produce en ausencia de calcio por
algún motivo (ya que no hay estímulo). La intuición les decía que esos potenciales en miniatura podían
estar relacionados con los postsinápticos de alguna manera.

Así lo primero que hicieron era ver si eran dependientes de la misma manera en esta repuesta. Lo primero
que hicieron fue añadir curare (veneno que sale de una rana), que es un bloqueante del canal ionotrópico
de Ach. Observaron que los potenciales no ocurría, así los potenciales en miniatura estaban relacionados
con los potenciales postisnápticos, que son los mismos responsables de los potenciales postsinápticos
normales.

Si tuvieran relación lo que ocurriría con los potenciales de acción es que no se producirían, los potenciales
están relacionados con los canales, que son los mismos que son responsables de los potenciales
postsinápticos normales.

Fueron más allá, viendo que ocurrían si añadían inhibidores. Si añadían inhibidores de la
acetilcolinesterasa, los potenciales postsinápicos normales se prolongaban en el tiempo, y a los potenciales
en miniatura les pasaba lo mismo (no cambiaba la intensidad) pero sí se mantienen en el tiempo (la caída
es mucho más lenta). Este efecto que se veía sobre el potencial postisináptico es lo mismo que se veía en
los potenciales en miniatura.

Ellos podían concluir así, que el origen es el mismo, que es la liberación de neurotransmisores. La
diferencia entre estos es, por tanto, la ausencia de estímulos y la intensidad. Atribuyeron los potenciales
de miniatura a un error, es decir, por error en ausencia de entrada de calcio, una vesícula que está en la
zona activa y activada... Los cambios de potencial de 0,5 mV son insuficientes para generar una contracción
muscular. El estímulo entonces lo que hace es que muchas vesículas liberen los neurotransmisores de
forma sincrónica, a la vez, es lo que se denomina cuanto. La entrada de calcio tiene como consecuencia la
liberación sincrónica del contenido de n vesículas de neurotransmisores.

1.3 Relación entre MEPP y potenciales postsinápticos

Si esto estuviera relacionado con el calcio, y este es el responsable de la
sincronía, lo que pasaría si igualo la concentración de calcio en el interior y
exterior no habría gradiente de calcio, así aunque los canales se abran no
ocurrirá nada.

Así dieron estímulos y vieron qué ocurría. En el registro 2 se observa que no

ocurre nada, no hay potencial postsináptico. Otras veces tenían un potencial en
miniatura y daban el estímulo y observaban otro en miniatura (registro 3). Otras
veces tenían uno en miniatura y daban estímulos y se obtenían 4 miniaturas (el
más largo del registro 1).

Hicieron un registro de frecuencia y observaron que los dos eventos más

probables, cuando el calcio de la terminal sináptica y de la hendidura están a
iguales concentraciones y no hay gradiente de calcio, por tanto, lo más
frecuente son cuando no ocurre nada o el del potencial en miniatura (0,4 mV). Eso es con estímulo. De vez
en cuando, cada vez menos frecuente que sea una intensidad del doble del potencial de miniatura, lo que
es que en lugar de una vesícula ha fusionado dos, o tres o cuatro, siendo cada vez menos probable.

Es decir, el único responsable de la sincronización y del aumento del número de vesículas que fusionan es
la presencia de corriente de calcio (la corriente de calcio y la liberación de neurotransmisores no es lineal,
es exponencial).

El estímulo ábrelos canales con los canales abiertos se observa este historial de procesos, que
comparamos con valores de mV. Se dan potenciales postsinápticos normales y no en miniatura a pesar de
la presencia de estímulo porque hay una vesícula. En ausencia de estimulo se producen errores de vez en
cuando y en presencia de estímulo, mayoritariamente los canales también se comportan como error, pero
los canales están abiertos pero no entra calcio, lo que sigue siendo un error, pero de vez en cuando hay
sensibilidad, no como en los potenciales en miniatura. El único responsable de que se sincronice y de que
la intensidad de los potenciales postsinápticos tengan un valor es la corriente de calcio.

El estímulo permite una corriente de entrada de calcio en la terminal sináptica que tiene como
consecuencia un cuanto de libración de NT, es decir que sincrónicamente, n vesículas que estaban en la
zona activa y están activadas liberan a la vez. Esto es un potencial postináptico y es múltiplo de un
potencial en miniatura. La gran diferencia es que un potencial en miniatura no da lugar a una contracción
muscular, es un cambio muy pequeño. Pero un cambio de potencial mayor sí, y eso es mediado por la
corriente de entrada de calcio en la terminal sináptica.

La corriente de calcio y la liberación de NT no es lineal, es exponencial, y no es igual dependiendo de la

localización de los canales.

1.4 Relación entre cuanto y vesícula sináptica

En ausencia de estímulos en potenciales de miniatura, de vez en cuando alguna vesícula fusiona (están
alineadas).
2. Papel del calcio en el proceso de liberación
En este experimento no estaba claro que el responsable fuera el calcio, sino que se intuía. Dos
experimentos:

Unos en los que se medían las corrientes directamente usando el modelo del axón gigante del calamar
(poseen ganglios estrellados que son neuronas que son muy grandes con calibre importante de axón que
permitían introducir el electrodo, y lo que hacían era introducir un par de electrodos en la presináptica y
otros electrodos en la neurona post, teniendo así un modelo de conexión neurona con neurona-neurona,
aunque antes era neurona con fibra muscular, pero el mecanismo podría ser el mismo y mediante técnicas
de fijación de voltaje podían hacer medidas de cómo varía el potencial de membrana de la pre y
postsináptica en diferentes condiciones de la pre a la post)

Lo más simple, si ellos dan un estímulo se produce en todos los registros que están aquí. En negro están
los valores del potencial de la célula presináptica, y en rojo los valores del potencial de membrana de la
postsinápica. En línea discontinua negra están las corrientes presinápticas y en línea discontinua en rojo
están las corrientes postinápticas.

B: Con estímulo, en negro se ve un potencial de acción y en rojo una

despolarización postsináptica con una forma muy peculiar, es un
potencial postsináptico muy similar al presináptico (que es un pda), así
un potencial presináptico ha tenido la intensidad para producir un
potencial postsináptico.

C: en esa no se ve el potencial de acción postsinápticos, ya que aquí hay un voltaje-clamp, de manera que
se fuerzan para que a través de los electrodos postinápticos no se generara el
potencial de acción en la postisnapsis. A través, de los electrodos se está forzando
a que no se genere potencial postsináptico. Así vemos potencial presináptico pero
no hay postsináptico porque el investigador ha fijado para que no se dé. Hay
corriente postisnáptica que tiene una dirección de entrada (hacia abajo), que se da
por los canales como consecuencia del presináptico ha liberado neurotransmisores.
Las posibles especies que pueden participar son: K, Na, calcio.

D: Quitamos la de sodio y potasio con TTX y TEA y se produce

un potencial, un cambio de estímulo y se produce un cambio
de potencial en la membrana presináptica. En continuo hay una corriente
presináptica, que ni es Na ni K. Así la única posibilidad es calcio.

E: en las mismas condiciones que antes se fija el potencial

post-sinápticas que no cambie. Y el presináptico que cambie
como si fuera un pda aunque haya TTX y TEA, es decir, lo que vemos en la gráfica lo
ha forzado el investigador. El cambio presináptico es artificial, y no hay corriente de
Na ni de K. Así hay un potencial presináptico artificial y una corriente postsináptica.
Así en ausencia de corriente de sodio y de potasio ha habido liberación de
neurotransmisores, que tendrá que ser otra especie que no sea ni sodio ni
potasio. Así la única posible es calcio.

En estas condiciones e empezaron a usar fluoróforos para calcio, que

permiten identificar dónde se producen corrientes de calcio (como fura).

Es una molécula que uniendo calcio cambia sus propiedades ópticas y este
cambio de color permiteidentificar las corrientes de calcio. En esa sinapsis se
ve que durante los potenciales de acción se produce una entrada de calcio
presináptica y que la concentración de calcio sigue un gradiente, mucho más intensa próximo a la zona
donde está la sinapsis y cada vez menos concentración de calcio cuando se va desplazando hacia el exterior
y es la corriente de calcio la responsable de la liberación de neurotransmisores.

Relación temporal. Distribución discreta de la entrada de calcio. Efecto de

calcio y mecanismos de acción. Canales de calcio. Finalización de la señal de
calcio
La entrada de calcio tiene propiedades muy singulares:

1. La dependencia con la concentración es lineal. La corriente de

entrada de calcio y la cantidad de liberación de neurotransmisores no
es lineal, es exponencial (es la sexta potencia). Desde el punto de vista
funcional significa que en la zona de baja concentraciones de calcio
prácticamente no hay respuesta de aumento de liberación de
neurotransmisores, así bajas concentraciones de corriente de calcio
no tiene respuesta de entrada de neurotransmisor, prácticamente
nada. Así cuanto mayor corriente de calcio, hay mayor liberación de
neurotransmisores. No obstante, cuando se duplica la concentración de calcio no se duplica la
liberación de neurotransmisores (no es lineal).
2. Con un estímulo bajo si hay liberación de calcio, pero no por ello hay respuesta, así no todos los
estímulos van a lleva a cabo a la liberación de neurotransmisor, porque la entrada de calcio no
produce liberación de neurotransmisor, hay una cierta insensibilidad. Así lo que se produce es una
liberación sinérgica, una respuesta explosiva. Eso a la consecuencia funcional.
El porqué es exponencial es porque cuando varios elementos intervienen en la misma dirección (cooperan)
sobre una misma señal (en este caso calcio). Cuando hay procesos que son dependientes de forma
exponencial hablamos de mecanismos que cooperan bajo el mismo estímulo. Hemos visto dos proteínas
que van a amplificar la señal (sinaptotagmina y rabfilina). Es como un fenómeno cooperativo (característico
de proteínas alostéricas), varias proteínas alostéricas cooperan para liberar neurotransmisores. Siempre
que vemos un efecto así hablamos de cooperación: sinergia para, de ahí que sea un proceso cónico,
cuántico. Es un efecto cooperativo (sincronía en un efecto). Esto está mediado por canales de calcio
dependiente de voltaje. Y estos canales se rigen como los canales que ya hemos visto.

Así tenemos fenómenos cooperativos pero no simultáneos, el efecto no va a ser el mismo. El efecto es
mucho mas cooperativo si es simultaneo y esto va a depender de cómo va a estar localizado los elementos
que dependen de calcio, así va a depender del tiempo y del espacio, de cómo estén organizados

Desde el punto de vista funcional, concentraciones pequeñas de calcio siguen una distribución lineal, pero
su aumento de concentración, a partir de un rango, ocurre todo lo contrario, la dependencia es
exponencial.

Se trata de un canal de calcio dependiente de voltaje que se rectifica, es decir, que es susceptible de ser
inactivado. La estructura es muy similar, la que vimos para el canal de sodio dependiente de voltaje.

La selectividad: cuánto es selectivo este canal para calcio, es decir, conduce algo más que calcio se
obtendría liberación de NT si en lugar de calcio se incluyera otra especie iónica. Efectivamente este canal
además de calcio puede conducir estroncio y bario, y lo hace con menos intensidad de corriente, pero
puede conducirlo. Este estroncio y bario hace lo mismo con la liberación de neurotransmisor, pero esta
respuesta es muy tenue, prácticamente es lineal, lo que indica que solo algunas de las proteínas serían
sensibles, no tanto como con calcio, pero si sensibles (todos los canales lo conducen pero la maquinaria de
liberación de neurotransmisor solo participa algunas proteínas).

Inhibidor de canal de calcio es uno de los componentes de la papaverina, que van junto con el opio y son
los responsables de los procesos de arritmita. Tienen también inhibidores iónicos, como el níquel, cadmio,
y los lantánidos bloquean el canal, son bloqueantes de canal, son competidores, tienen un sitio de unión
en la entrada del canal y lo tapan, compitiendo con el calcio. Se cura con soluciones de Ringer. El
envenenamiento por níquel y cadmio se daban con algunos de los compuestos que se daban antes en la
construcción.

Otro aspecto importante es el tiempo. Un pda que llega a la terminal sináptica, produce una
despolarización abriendo los canales de calcio. El tiempo que transcurre entre la entrada de calcio y la
liberación de neurotransmisores (también está el tiempo del que el NT se una a los receptores
postsinápticos y comunique la información). Son tiempos muy rápidos.

En negro, como se comporta el potencial y las corrientes en la membrana

presináptica y en rojo corrientes que se van a producir en célula
postsináptica.

Primer caso: una despolarización pequeña. El potencial de membrana

cambia del potencial de reposo hasta un valor de unos -25 mV, lo que no es
una situación fisiológica (lo que libera normalmente el proceso de liberación
es el potencial de acción). Inmediatamente que cambia el potencial
encontramos el registro que es la corriente de calcio, que es una entrada de calcio (el cambio de potencial
relativamente pequeño, mantenido durante el tiempo). La probabilidad de apertura de los canales a esta
intensidad será baja, entonces, hay tanta entrada de calcio porque los pocos canales que están abiertos,
antes de inactivarse, pasan mucho calcio ya que este se encuentra muy lejos de su potencial de equilibrio.

El tiempo que tarda en verse efecto en la postsinaptica es aproximadamente de 1ms.

Una despolarización con un pda, el potencial de la membrana presináptica de la

terminal llega a +50 mV y permanece un poco. La probabilidad de apertura de los
canales de calcio cuando el potencial es +50mV es 1, todos están abiertos, y sin
embargo no hay corriente, porque el calcio está en su equilibrio, y como
consecuencia no hay liberación de NT. Cuando este potencial se repolariza, sale del
equilibrio, y antes de que vuelvan a cerrarse o inactivarse hay un pequeño pico de
entrada de calcio que lleva en la célula postisnáptica a generar un cambio de su
potencial. El tiempo desde que empieza la corriente de calcio hasta que se observa
el proceso en la célula postisináptica es de menos de 200 microsegundos. Esto sí es
un tiempo real, cuando llega un pda hasta que se observa un cambio de potencial en la postsináptica es de
200 microsegundos, muy rápido.

Cuando se abre un canal de calcio, el

flujo de calcio a través de este canal,
crea un gradiente de calcio, que está
circunscrito a la zona que rodea a este
canal. Esto da lo que se conoce como un
vulcano de calcio, donde la
concentración grande de calcio está
centrada en la salida del poro, y según
se va alejando, esta concentración de calcio es mucho menor. En un canal cuando está cerrado, no ocurre
nada. En un canal donde las concentraciones de calcio son menores por cualquier motivo, la corriente
menor.

Solo algunos canales de calcio se van a abrir con el pequeño estimulo, es

decir, solo algunas proteínas sensibles a calcio, aquellas que estén cerca
de los canales van a sentir el aumento de concentración de calcio, y por
tanto, solo las vesículas que estén ancladas próximas a los canales que se
han abierto van a liberar el neurotransmisor. Es muy importante que las
vesículas estén localizadas cerca de las zonas activas de la terminal
sináptica, que no va a
contener solo vesículas de
neurotransmisores ancladas y
activadas, sino que van a estar rodeando canales de calcio
dependientes de voltaje

En la despolarización grande, todos los canales se han abierto,

y solo cuando empieza a repolarizarse empieza a haber
corriente, poca corriente en cada uno de ellos pero esto afecta
a mucha más de la zona activa, luego no es solo el tiempo que
dura sino el cómo está localizado. La arquitectura de la terminal sináptica con las vesículas están localizas
alrededor de los canales por lo que no es necesario mucho voltaje para activar el proceso de liberación de
NT y cuanto mayor sea el número de canales que se abran mejor será esta señal, pues afectará a más
vesículas con poca corriente.

La señal de calcio en la terminal sináptica acaba a través de las bombas, como la calcio ATPasa, la cual
presenta una baja velocidad, por lo que no podría ella sola, así necesita mas mecanismos como la
mitocondria que es un almacén importante (en terminal sináptica hay muchas mitocondrias, el
intercambiador Na/k de la membrana, este y la bomba van a restablecer los valores iniciales de calcio.
Estas bombas junto a la mitocondria son los mecanismos más importantes en la restablecimiento de la
homeostasis de calcio, terminándose la sinapsis .

3. Procesos de plasticidad asociados a la liberación de NT. Potenciación,

facilitación y depresión.
La propia terminal sináptica aprende de su actividad, y su propia actividad modifica el comportamiento en
la liberación de NT. A estos procesos en los que la actividad cambia con la experiencia le llamamos
plasticidad. Son la base de nuestros diferentes coomportamientos. Los tres primeros atañen solo a la
terminal sináptica, es decir, una terminal sináptica después de cierta actividad modifica su
comportamiento, lo que se denomina plasticidad homosináptica, que vamos a diferenciarlo de otros
procesos de plasticidad que se denominan heterosinápticas, es decir, una sinapsis modifica el
comportamiento de otra. Las sinapsis heterosinápticas están muy relacionadas con el aprendizaje
asociativo (perros de Paulov).

Una terminal sináptica es capaz de modificar el mecanismo de sí misma. Los tres procesos que hacen esto
se denominan: facilitación, potenciación y depresión.
Todos transcurren bajo un mismo patrón. Una determinada frecuencia de potenciales de acción constante
produce una determinada liberación de NT constante, que se libera en la terminal sináptica. Cuando
aumenta, (y solo se produce cuando aumenta) la frecuencia de potenciales de acción entonces se puede
producir en este terminal sináptica estos tres cambios:

La facilitación aumenta liberación de neurotransmisor mientras dura el cambio de frecuencia. La

potenciación es el aumento en la liberación de neurotransmisor que se prolonga más allá del tiempo que
dura el cambio de frecuencia. Este aumento de potencial de acción conduce a un aumento de la liberación
de NT en la terminal sináptica y esta cantidad permanece mucho más allá en el tiempo que dura el cambio
en los trenes de potenciales de acción

La depresión es la disminución de la liberación de NT cuando se produce el cambio en los trenes de

potenciales de acción, esto es lo que llamamos entrenamiento.

 Faciliitación
El mecanismo de facilitación es muy simple. Cuando se produce el aumento en la frecuencia de pda, el
sistema de retirada de calcio no es suficiente para bajar el calcio en la terminal sináptica y como
consecuencia de ello los niveles de calcio permanecen elevados más tiempo, produciéndose más
liberaciónd e NT. Puede llegar a producir agotamiento.

Cuando el 100% de los canales están inactivados están al límite del periodo refractario, y cuando está
frecuencia está al límite (tetania) el sistema no es capaz de eliminar el calcio de la terminal sináptica. Esto
se da aumentando la frecuencia. EL 100% de canales inactivados supone el periodo refractario absoluto, y
si se repite esto 1000 veces se ha aumentado la frecuencia.

 Potenciación
Aquí intervienen dos proteínas dependientes de calcio: la proteína quinasa que es la calcio-calmodulina
quinasa (CAMquinasa) en la que en algunas terminales sinápticas es una proteína muy mayoritaria (casi el
1% total de proteínas). Es una proteína multimedia constituida por 12 subunidades, y cada monómero
tiene una subunidad de calmodulina, y esta subunidad de calmodulina es la responsable de unir calcio.
Cuando aumentan los trenes de potencial de acción el calcio se ve aumentando y el mecanismos de
homeostasis de calcio no llega a ponerlo bajo, y en estas terminales sinápticas donde está presente la CaM
quinasa el calcio se va a unir a calmodulina y va a activar a la CaM quinasa, y esta cuando está activa lo que
va a hacer es fosforilar a una serie de proteínas.

Hay una que nos interesa, la sinapsina 1. La sinapsina 1 es una proteína que se asocia a la membrana de las
vesículas de NT, y tiene otro domino que lo asocia a tubulina. En condiciones normales, cuando sinapsina 1
no está fosforilada está anclado las vesículas de neurotransmisor a los microtúbulos y los está alejando de
la zona activa.

Las vesículas están ancladas a microtúbulos. Cuando se da un cambio de frecuencia de potenciales de

acción, el calcio se mantiene elevado, se activa la CaM quinasa y esta fosforila a sinapsina 1, y esta
fosforilada pierde afinidad por la tubulina y desancla la vesícula del citoesqueleto que va a hacia la terminal
sináptica. Es decir que lo que hace la CaM qinasa es aumentar la cantidad ee vesículas que pueden ir hacia
la zona activa, y como consecuencia de ello, aumenta la cantidad de vesículas que pueden responder al
estímulo de alta frecuencia, es decir aumenta la cantidad de NT liberado.
Esto permanece en el tiempo, más allá de que termine el estímulo. La homeostasis de calcio se puede
regular, y esto es debido a la propia CaM-quinasa. La CaM quinasa cuando está mucho tiempo activa lo que
hace es autofosforilarse y cuando se autofosforlia ya su actividad no depende de que tenga calcio
calmodulina unida, sino que es activa sin calcio calmodulina unido, y como consecuencia es capaz de seguir
fosforilando a sinapsina 1 aunque no se den los tresnes de potencial de acción. Esto ocurre en las
terminales sinápticas donde se han dando trenes de potenciales acción muy seguidos (esto es lo que
ocurre cuando volvamos todo el conocimiento en un examen). Si se potencia mucho con trenes de
potenciales de acción una acción, pocos minutos o una hora después no se recuerda, para que quede para
siempre, se necesita que esta acción se tenga que volver a enseñar días después varias veces.
Dependiendo de si es más o menos listos necesitara más o menos tiempo, pero esto depende de otra cosa
(así darse atracón de estudiar solo se potencia, no se aprende).

La potenciación por tanto depende de: calcio y de que se vuelva independiente de este.

 Depresión
Depende de Ras3, porque moscas que carecen de Ras3 ante un aumento de la frecuencia de liberación de
NT responden liberando menos NT. Un aumento de la frecuencia de trenes de potencial de acción
responde liberando menos en NT. Así hay un mecanismo por el que la cantidad de Ras 3 unidos a vesículas
es menor. En conjunto, estos mecanismo de facilitación, potenciación y depresión suponen antes o
después una modificación del comportamiento, es decir, un paso más allá en cuanto a cómo se codifica el
mensaje, un aumento de frecuencia no ha tenido solo como consecuencia un aumento de liberación de NT
sino que puede permanecer en el tiempo (potenciación) o incluso que puede disminuirse (depresión).