Archivo de Graefe de Oftalmología Clínica y Experimental

https://doi.org/10.1007/s00417-019-04281-7

trastornos inflamatorios

Evaluación de la detección de adenovirus amplificado

de prueba inmunocromatográfica utilizando lágrimas incluyendo exudado conjuntival en
pacientes con queratoconjuntivitis adenoviral

Hironori Migita 1 y Tomohiro Ueno 2 & Tomoko Tsukahara-Kawamura 2 & Yusuke Saeki 2 & nozomu Hanaoka 3 &
Tsuguto Fujimoto 3 & Eiichi Uchio 2

Recibido: 19 Septiembre 2018 / revisada: 15 Febrero 2019 / Aceptado: 19 Febrero 2019

# Springer-Verlag GmbH Alemania, parte de Springer Naturaleza 2019

Resumen
Fondo Se evaluó una novela de prueba de inmunocromatografía de amplificación de plata para la detección rápida de adenovirus antígeno (ADV) equipado con un sistema
de lectura automatizada usando lágrimas incluyendo exudado conjuntival en pacientes con queratoconjuntivitis adenoviral.

métodos Dos tipos de kits inmunocromatográficas (IC), un kit de IC convencional para raspados conjuntivales (kit de control) y un kit de IC utilizando lágrimas incluyendo
exudado conjuntival recogido presionando una tira de papel de filtro en la conjuntiva (kit de ensayo), se ensayaron en 90 pacientes que asistido Eye Clinic Migita con sospecha
de conjuntivitis adenoviral. Los resultados de los kits de ensayo se obtuvieron automáticamente por un lector específico, que estaba basado en sistema de amplificación de
inmunocromatografía de plata, en 15 min. La detección de AdV se confirmó por el método de tiempo real de reacción en cadena de polimerasa (PCR), y la tipificación se
realizó por secuenciación directa. ensayo de dilución comparativo se llevó a cabo con los dos kits, utilizando AdV tipo 3 y tipo 54 cepas.

resultados La sensibilidad del kit kit de control y de ensayo fue 89,8% y 98,3%, respectivamente. La especificidad de ambos kits fue del 100%. Se observó una diferencia
significativa en la sensibilidad de los dos kits CI contra la positividad de PCR ( P < 0,01). Se encontró una correlación significativa entre el número de copias de ADN AdV en
una escala logarítmica obtenida con las dos pruebas ( P < 0,01). La sensibilidad del kit de la prueba fue de 32 - 64 veces más alta que la del kit de control sin amplificación de
plata para los dos tipos Adv.
conclusiones Estos resultados sugieren que esta novela amplificado kit de detección de AdV usando lágrimas incluyendo exudado conjuntival es útil, debido a que disminuye
los pacientes ' incomodidad de recogida de muestras y su sensibilidad es significativamente mayor que la del kit IC convencional.

Palabras clave Adenovirus. Inmunocromatografía. amplificación de plata. Lágrima

Introducción fiebre faringoconjuntival [ 1 ]. Teniendo en cuenta su alta contagiosidad en las

comunidades, las escuelas y las familias, y la actual falta de medidas específicas de

Adenovirus (AdV) es el microorganismo patógeno predominante inducir tratamiento, el diagnóstico preciso de AdV es de importancia crítica. Aunque la prueba

queratoconjuntivitis viral en todo el mundo, que se presenta como de neutralización ha sido aceptado como el método estándar de diagnóstico desde los

queratoconjuntivitis epidémica (EKC) o años 1950 [ 2 ], Recientemente, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) acoplado

con el método de secuenciación directa ha sido ampliamente utilizado en el laboratorio

para el diagnóstico de enfermedades infecciosas adenovirales [ 3 ]. Una prueba

* Eiichi Uchio inmunocromatográfica (IC) ha sido desarrollado por nuestro grupo para el diagnóstico
euchio@fukuoka-u.ac.jp
de queratoconjuntivitis adenoviral [ 4 ], Y ha sido ampliamente llevado a cabo en la

1 Clínica de Ojos migita, 15/02/13 Harisuri-Chuo, Chikushino 818 a 0.083, práctica oftalmológica debido a su conveniencia clínica. Sin embargo, tiene un

Japón inconveniente esencial en su sensibilidad a pesar de su alta especificidad, ya que un

2 Departamento de Oftalmología, Fukuoka Escuela Universitaria de anticuerpo monoclonal para un tipo específico se incorpora en cada kit de prueba de IC

Medicina, 7-45-1 Nanakuma, Jonan-ku, Fukuoka 814 a 0180, Japón [ 5 ]. En cuanto a la queratoconjuntivitis viral, es necesario limpiar el paciente ' s

3 conjuntiva con un algodón

Enfermedades Infecciosas Centro de Vigilancia del Instituto Nacional de Enfermedades
Infecciosas, 1-23-1 Toyama, Shinjuku-ku, Tokio 162-8640, Japón
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hisopo para la obtención de la muestra, causando un malestar considerable,

especialmente en los niños. Por lo tanto, dos tareas deben ser resueltos en

oftalmología clínica: la reducción de los pacientes ' molestias de la recogida de

muestras con la prueba de IC y mantener también la sensibilidad del kit mejorado. En

este trabajo, se presentan los resultados de una evaluación de un nuevo kit de ensayo

IC mediante lágrimas incluyendo exudado conjuntival. Este novedoso sistema de kit IC

es equippedwith un sistema lector automatizado que toma 15 min, basado en un

método de amplificación de plata [ 6 ] Que ha sido utilizado en aparatos de fotografía

basada en película convencional.

materiales y métodos

Los pacientes Figura 1 Método de recolección de muestra de kit de prueba. Un filtro de tira se coloca en la conjuntiva
tarsal durante 5 min para recoger lágrima incluyendo exudado conjuntival

Los sujetos fueron 90 pacientes que Clínica de Ojos attendedMigita, Chikushino,

Japón, entre junio y agosto de 2016, los cuales EKC se sospecha clínicamente
según los hallazgos clínicos típicos, tales como conjuntivitis viral unilateral o durante 15 min. Ambos lectores inmuno utilizados fueron los mismos productos de

bilateral aguda (con rasgos clínicos característicos, como la aparición repentina diferentes empresas. El principio de la amplificación de la plata es brevemente una

de conjuntivitis folicular aguda con secreción acuosa, la hiperemia y quemosis, y desviación del proceso de desarrollo de película convencional, que consiste en partículas

linfadenopatía preauricular). Los criterios de exclusión incluyeron una historia de de plata que rodean el anticuerpo monoclonal goldconjugated - AdV complejo antígeno y

uso de lentes de contacto, la enfermedad herpética ocular o cirugía ocular. desarrollo del color ampliada, informó de otros lugares con modificación [ 7 ]. El resultado

Cuarenta y tres varones y 47 mujeres con edad media ± desviación estándar de de la prueba se imprime automáticamente como positivo o negativo para Adv. En cuanto a

22,8 ± la orden de recogida de muestras de pruebas de CI, el kit de prueba se llevó a cabo en

primer lugar, seguido por el kit de control en todos los casos.

se matricularon 22,8 años de edad. Se obtuvo el consentimiento informado por

escrito para el uso de las muestras clínicas de todos los pacientes incluidos en
este estudio. Este estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la Universidad
de Fukuoka (16-2-15).
análisis virológico

kits de diagnóstico rápido

Independientemente del resultado de las pruebas de CI, las muestras restantes de
ambas pruebas de CI se congelaron y se almacenaron a - 30 ° C hasta que se
prueba de inmunocromatografía para AdVwas lleva a cabo en todas las materias en
utilizaron para la amplificación por PCR en tiempo real. Secuenciación y análisis
su primera visita a la clínica de ojo Migita para evitar la influencia del tratamiento
filogenético para detectar la presencia de AdV y escribiendo se llevaron a cabo como
médico. El primer kit fue una prueba IC convencional (Quick Navi Adeno, Denka
sigue. DNAwas extraído de estas muestras utilizando un kit QIAamp® ADN Mini
Seiken Co., Ltd., Tokio, Japón) inwhich se obtuvieron los raspados conjuntivales de
(QIAGEN, Venlo, Países Bajos), y el número de copias fue medido con PCR en
los ojos afectados usando hisopos de algodón bajo anestesia local (kit control). El otro
tiempo real basado en los cebadores y las condiciones en un informe anterior [ 8 ].
kit era una novela amplificado de pruebas de CI (Quick Chaser Auto Adeno Eye
Cebadores directo e inverso fueron
(Nitten Pharmaceutical Co., Ltd., Nagoya, Japón), FUJI DRI-CHEM IMMUNO AG
cartucho Adeno OPH (FUJIFILM Corp., Tokio, Japón)) (kit de prueba ) en el que la
muestra se recogió presionando suavemente un dispositivo de tira de filtro de papel
en la conjuntiva tarsal afectada durante 5 s (Fig. 1 ). Los dos nuevos kits utilizados
fueron los mismos productos que se compraron de diferentes empresas. Después de
obtener una muestra de lágrima incluyendo exudado conjuntival, el papel de filtro se
puso en líquido de extracción y se comprime en el interior del tubo de extracción. La
muestra de ensayo se separó por destilación en el cartucho de prueba (Fig. 2 ) Y
conjunto dentro de un lector de inmuno (Quick Chaser® Immuno Reader (Mizuho
Medy Co. Ltd., Tosu, Japón), FUJI DRI-CHEM IMMUNO AG1 (FUJIFILM Corp.)) (Fig. 3
) Para la plata amplificado reacción

Figura 2 cartucho de prueba del equipo de prueba. El cartucho de prueba contiene un lugar de aceptar una

dilución de la muestra, situada en el interior del lector inmuno

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análisis estadístico

el software SPSS 19.0 se utilizó para el análisis de datos. Se utilizó la prueba de

Chi-cuadrado para evaluar la sensibilidad de los dos kits. Lancero ' Se utilizó la prueba de

correlación de rango s para establecer la importancia de la correlación entre pares de

grupos. emparejado t Se utilizó la prueba para comparar la media de grupos apareados.

Un valor de

P < 0,05 fue aceptado como estadísticamente significativo.

resultados

La sensibilidad y la especificidad de los kits de prueba

Entre todas las muestras, 53 (58,9%) fueron positivos para AdV con el kit de
control, 58 (64,4%) con el kit de prueba, y 59 (65,6%) con qPCR. En cuanto a
los tipos de AdV confirmados por qPCR, AdV54 ( n = 55; 93,2%) fue
Fig. 3 lector automático de kit de prueba. El cartucho de prueba se inserta y se establece dentro de la

apertura de la puerta hacia arriba en el lado delantero derecho, y la reacción de amplificación de plata se predominante entre el 59 AdV aísla, seguido de AdV3 ( n = 2; 3,4%) y el tipo
procesa automáticamente en este aparato durante 15 min AdV 19/64 (AdV19 / 64) ( n = 2; 3,4%). La sensibilidad y especificidad del kit de
control y kit de prueba contra-PCR en tiempo real fueron 89,8% y 100% y
98.3% y 100%, respectivamente (Tabla 1 ). No se observó diferencia sexual en
la sensibilidad o especificidad de cada kit. Los valores predictivos positivo
GACATGACTTTCGAGGTCGATCCCATGGA y
predictivo, predictivo negativo, y el total de las dos pruebas de CI fueron del
CCGGCTGAGAAGGGTGTGCGCAGGTA, respectivamente [ 8 ]. Se llevaron
100% (53/53),
a cabo cuarenta ciclos de PCR, y cada ciclo consistió en la incubación a 95
° C durante 10 s y a 56 ° C durante 30 s. Secuenciación para la tipificación
86,5% (32/37) y 94,4% (85/90), respectivamente.
se llevó a cabo de acuerdo con un informe anterior [ 9 ]. Los cebadores se
DGF (hacia delante): AGACATGACHTTYGAGGTGGAYCC y DGR
cambio secuencial en la sensibilidad de las dos pruebas de CI contra positividad
(reversa): CGCAGGTASACBGYYTCRA, y una sonda específica para las
de la PCR
especies D AdV era 98D: TCAGAGTGCACCAG CCGCACC [ 9 ]. Se
realizaron cincuenta ciclos de PCR, y cada ciclo consistió en la incubación a
La sensibilidad de cada kit se determinó de forma secuencial en el día de la
95 ° C durante 5 s y a 60 ° C durante 30 s. Las secuencias se analizaron
recogida de muestras en 59 casos AdV-positivos por el método de PCR en tiempo
usando un secuenciador (Gene Codes Corporation, Ann Arbor, MI, EE.UU.)
real (Tabla 2 ). La positividad de ambos kits permaneció 100% hasta el día 2. La
y Bioedit versión 7.2.1 (Ibis Therapeutics, Carlsbad, CA, EE.UU.). Se
sensibilidad del kit de prueba fue mayor que la del kit de control en los días 3 y 4.
realizaron análisis filogenéticos, y los árboles se generaron utilizando
Se obtuvo un resultado positivo hasta el día 4 con el kit de control; por el contrario,
MEGA5 [ 10 ] (CEMI, Tempe, AZ, EE.UU.).
un resultado positivo se pudo observar hasta el día 6 con el kit de prueba.

ensayo de dilución comparativo El análisis de correlación de copias de ADN entre los kits de prueba

Dos cepas clínicas de recientes epidemias de AdV, Adv tipo 3 (AdV3 (confirmado copias de ADN en una escala logarítmica se compararon entre el kit de ensayo y el kit

por la prueba de neutralización utilizando anti-AdV3 antisueros neutralizantes; de control en cada caso (Fig. 4 ). Se encontró una correlación significativa entre estos

Denka, Seiken)) y tipo (AdV54 (número de acceso AB333801)), se utilizaron 54. números de copias, con un coeficiente de correlación de 0,843 ( P < 0,01). Los valores

PCR en tiempo real se utilizó para determinar el número de copias del genoma del medios de copias de ADN en una escala logarítmica de estos dos kits también se

virus (vGCN) antes de la dilución en serie. VGCN primaria de AdV3 y AdV54 fue de analizaron por emparejado t se observó prueba, y no hubo diferencia significativa ( P = 0,31)

5,15 × 10 10 y 2,48 × 10 10 copias / ml, respectivamente. Cada solución viral se diluyó (datos no mostrados). A partir de estos resultados, se demostró que las cantidades de

8000 (AdV3) o 16.000 (AdV54) veces con solución salina normal. Entonces, los dos partículas de virus obtenidos por los dos métodos diferentes (raspados conjuntivales y

kits fueron probados en cada tipo con la misma cantidad de AdV por el método de el muestreo de uso) no mostraron ninguna diferencia. Cinco casos dieron positivo para

diluciones dobles en serie hasta que ambos kits mostraron resultados negativos. los adv con el kit de prueba y negativa para los adv con el kit de control.
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tabla 1 La sensibilidad y la especificidad de los kits

de prueba contra el método de PCR en tiempo real kit Control (hisopo conjuntival) Kit de ensayo (desgarro incluyendo exudado conjuntival) Total

Positivo Negativo Positivo Negativo

PCR en tiempo real

positivo 53 6 58 1 59

Negativo 0 31 0 31 31

Total 53 37 58 32 90

Sensibilidad 89,8% 98,3%

especificidad 100% 100%

número de copias de ADN de estos casos osciló entre 2,60 × 10 6
y 3,96 × 10 7 copias / ml en muestras obtenidas del kit de prueba.
ensayo de dilución comparativo
El kit de prueba mostró resultados positivos para AdV3 hasta dilución
256,000fold; en contraste, el kit de control mostró positividad hasta dilución 8000
veces de la máxima (Tabla 3 ). La sensibilidad del kit de ensayo para AdV3 era 32
veces mayor que la del kit de control, a partir de este resultado. El kit de prueba
mostró un resultado positivo para AdV54 hasta dilución 1.024.000 veces,
mientras que el kit de control mostró un resultado positivo hasta dilución 16000
veces de la máxima (Tabla 3 ). La sensibilidad del kit de ensayo para AdV54 era
64 veces mayor que la del kit control. El gap de sensibilidad entre el kit de ensayo
y el kit de control fue similar para estos dos tipos.
que queratoconjuntivitis adenoviral se propaga principalmente por transmisión por
contacto a través de los pacientes ' lágrimas o descarga [ 15 , dieciséis ], Y la
presencia de partículas adenovirales en muestras de lágrima se ha demostrado por
electrones estudio microscópico [ 17 ]. Se ha informado de que inmany pacientes,
AdVDNAwas detectado en el período de 10 años después de un episodio anterior
de la queratoconjuntivitis adenoviral, que parece estar asociada con evidencia de
persistencia a largo plazo de ADN AdV en la película lagrimal [ 18 ]. En un estudio
reciente, la resonancia magnética mostró agrandamiento de la glándula lacrimal
acompañada por obstrucción del conducto nasolagrimal en un paciente con
queratoconjuntivitis adenoviral florido confirmó usando un anticuerpo fluorescente
directa contra el antígeno AdV, lo que sugiere la presencia de una respuesta
inflamatoria grave en la glándula lagrimal Además de la infección de la superficie
conjuntival en pacientes con queratoconjuntivitis adenoviral en la fase temprana, y
la glándula lagrimal que podría ser la fuente de partículas AdV en lágrimas [ 19 ].
Estos informes apoyan la posibilidad de demostrar en AdVantigen

Discusión

Un kit de diagnóstico rápido para la conjuntivitis viral se ha diseñado usando muestras

virales obtenidas de pacientes ' conjuntiva en muestras de secreciones, porque se ha

creído que el virus está presente principalmente en las células epiteliales de la conjuntiva

sobre la base de varios estudios anteriores con tinción inmunológica [ 11 - 13 ] O

microscopía electrónica [ 14 ] De las células conjuntivales. Sin embargo, es bien conocida

Tabla 2 cambio secuencial en la sensibilidad de los kits de prueba contra positividad de la PCR después de la

aparición

Día 0 Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6

Kit de control

positivo 12 21 10 7 3 0 0

Falsos negativos 0 0 2 1 0 0 3

Sensibilidad (%) 100 100 83,3 87,5 100 - 0

Kit de Prueba

positiva 12 21 11 8 3 0 3

Falsos negativos 0 0 1 0 0 0 0 Fig. 4 El análisis de correlación de copias de ADN entre dos kits. copias de ADN en una escala
Sensibilidad (%) 100 100 91,7 100 100 - 100 logarítmica de la kit control, y el kit de prueba en cada caso mostraron una correlación
significativa, con un coeficiente de correlación de
La sensibilidad de ambos kits en el día 5 no se pudo calcular 0,843 ( P < 0.01)
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Tabla 3 Los resultados de ensayo de dilución comparativos entre dos kits con dos tipos de adenovirus proceso de recogida, el kit IC ensayo usando muestras de lágrima tiene una ventaja sobre el

kit de IC convencional, con una sensibilidad similar pero menos molestias de la colección de la

relación de dilución copias de genoma de virus / mL Kit de prueba kit de control muestra.

Un sistema de lector automático similar (BD Veritor Sistema Adeno, BD, Tokio,
AdV tipo 3 Japón), basado en densitometría para AdV está disponible comercialmente, y su
8000 6,44 × 10 6 Nuevo Testamento + sensibilidad y especificidad contra el método de cultivo celular eran similares a los
16000 3,22 × 10 6 + - del kit IC convencional [ 21 ]. Aunque el proceso del lector inmuno en nuestro kit
32000 1,61 × 10 6 + Nuevo Testamento novela también se basó en la densitometría, que se basa en el sistema de
64000 8,05 × 10 5 + Nuevo Testamento inmunocromatografía de amplificación de plata que proporciona 32 veces o 64
128.000 4,03 × 10 5 + Nuevo Testamento veces mayor sensibilidad que la del kit IC convencional sin amplificación de plata y
256.000 2.01 × 10 5 + Nuevo Testamento el sistema lector , con todos los tipos AdV probados (Tabla 3 ). Considerablemente,
512.000 1.01 × 10 5 - Nuevo Testamento una mayor sensibilidad frente al tiempo real PCRmethod se muestra con el kit de

AdV tipo 54 ensayo (98,3%) en comparación con el kit de control (89,8%) (tabla 1 ). Esta

16000 1,55 × 10 6 Nuevo Testamento + diferencia fue, sin duda, deriva del proceso de amplificación de la sensibilidad del

32000 7,75 × 10 5 + - lector systemwith casi el 100% frente al método de PCR en tiempo real. Queda una

64000 3,88 × 10 5 + Nuevo Testamento pregunta que una mayor sensibilidad del kit de prueba podría reflejar denominado

128.000 1,94 × 10 5 + Nuevo Testamento

AdV diseminación asintomática como se mencionó anteriormente [ 18 ]. Sin embargo,
teniendo en cuenta el resultado de que el número de copias de ADN de los casos
256.000 9,69 × 10 4 + Nuevo Testamento
con conjuntivitis adenoviral diagnosticada clínicamente que muestran resultado
512.000 4,84 × 10 4 + Nuevo Testamento
positivo para el kit de ensayo y el resultado negativo para el kit de control osciló
1024000 2,42 × 10 4 + Nuevo Testamento
entre 2,60 × 10 6 y 3,96 × 10 7
2048000 1,21 × 10 4 - Nuevo Testamento

ADV adenovirus; Nuevo Testamento, no probado

pacientes ' lágrimas por prueba IC, si una cantidad suficiente de desgarro puede ser recogido copias / ml en muestras obtenidas a partir del kit de prueba, es difícil concluir que

usando papel de filtro, que se ha utilizado para probar la función de la secreción lagrimal en asintomática AdV vertimiento se detectó en nuestro estudio. Con IC convencional,

la práctica oftálmica durante mucho tiempo. Se añadió una empuñadura de manipulación tenemos que esperar a que el desarrollo del color en la placa de prueba durante 10

hecha de papel rígido a papel de filtro en este kit para garantizar la recogida de lágrimas minutos o más, y si la muestra contiene menos antígeno, tenemos que esperar aún

eficiente dentro de un corto tiempo para evitar que los pacientes ' incomodidad tanto como más tiempo, y esto podría interferir con el trabajo clínico, especialmente en la consulta

sea posible (Fig. 1 ). Desde un punto de vista pragmático, un kit de IC sin la necesidad de una externa. Un sistema de lector automático puede reducir estas tareas; Sin embargo,

etapa de raspado conjuntival podría disminuir molestias a los pacientes durante la recogida hay varios problemas. En primer lugar, una muestra ocupa un lector durante 15 min

de muestras que tienen síntomas de irritación ocular debido a la inflamación de la conjuntiva. para procesar la reacción y los próximos muestra debe ser suspendidos. El segundo

Sin embargo, este tipo de novela kit IC para queratoconjuntivitis adenoviral usando muestras inconveniente del kit de prueba es que requiere un cierto coste inicial del equipo lector.

de lágrimas incluyendo raspados conjuntivales obtenidos con sólo pulsar una tira de papel de El lector inmuno para este kit cuesta 3.000 dólares (2.600 euros). La tasa de

filtro durante el tiempo de 5 s en pacientes ' conjuntiva palpebral no ha sido desarrollado para inspección de inmunocromatografía está aprobado para ser pagado por el seguro

el diagnóstico de conjuntivitis viral. Un kit IC similar a detectar usando papel de filtro lágrima nacional de salud, y este tipo de prueba se usa ampliamente en la práctica clínica que

IgE total, llamada Allerwatch de prueba (Wakamoto Pharmaceutical Co., Tokyo, Japan) [ 20 ], resulta en la reducción de las epidemias en Japón. Un lector se puede utilizar para el

Ha sido desarrollado e introducido en la práctica oftálmica en Japón, pero el médico necesita ensayo de otros virus, tales como virus de la influenza virus andrs. Thismultipurpose

colocar un papel de filtro de largo en el centro del párpado inferior durante 10 min para propiedad de este sistema puede proporcionar eficacia clínica.

recoger una muestra de lágrima adecuada con este kit. copia de ADN prueba de

comparación recuento ha demostrado que Quick Chaser Auto Adeno Eye (kit de prueba)

tiene una sensibilidad similar en comparación con un kit de IC convencional usando un

hisopo de algodón (kit control) (Fig. 4 ). Una posible criticismwith este resultado es el orden de El cambio secuencial en la positividad de la prueba de IC puede ser explicado por

recogida de muestras; es decir, el uso del kit de prueba primero, seguido por el kit de control, una estrecha relación con el cambio secuencial de números de copias de ADN de AdV a

en todos los casos podría haber tenido alguna influencia en los resultados de cada kit IC. Sin partir de muestras oculares. En cuanto al cambio secuencial de número de copias de

embargo, el collectionmethod muestra de prensado de papel de filtro durante 5 s se ADN de ADV EKC, se han reportado pocos estudios; sin embargo, la de AdV54 en una

considera que causan poco daño al epitelio conjuntival para el proceso de hisopado más epidemia regional ha sido informado recientemente por nuestro grupo [ 22 ]. El coeficiente

tarde. Basándose en estos resultados, en relación con la muestra de correlación entre las copias de ADN en una escala logarítmica y el día de la recogida

de muestras después de la aparición era -

se observó 0.237, mostrando una disminución gradual, pero ninguna correlación significativa

[ 22 ]. Teniendo en cuenta la mayor sensibilidad del kit de prueba con la amplificación en

comparación con la de los convencionales


kit de control, el secuencial mayor positividad del kit de prueba y su positividad prolongado
hasta el día 6 podría explicarse si bien el número de caso en finales de los días fue
limitada (Tabla 2 ). En conclusión, la novela amplificado kit IC para detectar AdV tiene
varias ventajas sobre el kit de IC convencional para el diagnóstico de queratoconjuntivitis
adenoviral. En primer lugar, puede disminuir pacientes ' malestar debido a que el método
de obtención de la muestra se compone sólo de la colocación de una tira de filtro en la
conjuntiva durante varios segundos, en lugar de hisopado conjuntival con el kit de IC
convencional. En segundo lugar, se podría obtener estadísticamente mayor sensibilidad
contra en tiempo real resultados de la PCR que el kit de IC convencional, a través de un
proceso de amplificación de plata automático.
Expresiones de gratitud Las cepas clínicas de adenovirus de tipo 3 y tipo 54 utilizado para el ensayo de
dilución comparativo fueron amablemente proporcionados por el Instituto de Salud Kobe.
información sobre financiación Este trabajo fue apoyado por una subvención-en-Ayudas para
el estímulo de Científicos (18K09466) del Ministerio de Educación, Ciencia, Deportes y
Cultura de Japón.
Cumplimiento de las normas éticas
Conflicto de intereses Autores migita, Tsukahara-Kawamura, Saeki, y Uchio se
proporcionaron pruebas de inmunocromatografía (Quick Auto Chaser adeno ojo (Nitten
Pharmaceutical Co., Ltd., Nagoya, Japón), FUJI DRICHEM IMMUNO AG cartucho adeno
VPO (FUJIFILM Corp., Tokio, Japón )) y un lector de inmuno (Quick Chaser® inmuno
Reader (Mizuho Medy Co. Ltd., Tosu, Japón), FUJI DRI-CHEM IMMUNO AG1 (FUJIFILM
Corporation)) de cada empresa. Autor Ueno declara que no tiene ningún conflicto de
intereses. Autor Hanaoka declara que no tiene ningún conflicto de intereses. Autor Fujimoto
declara que no tiene ningún conflicto de intereses.
Aprobación ética Todos los procedimientos realizados en los estudios con seres humanos
estaban de acuerdo con las normas éticas del comité de investigación institucional y / o
nacional y con la declaración de Helsinki 1964 y sus modificaciones posteriores, o las normas
éticas comparables.
Consentimiento informado El consentimiento informado se obtuvo de todos los individuos
los participantes incluidos en el estudio.
Editor ' s nota Springer Naturaleza se mantiene neutral con respecto a las reclamaciones jurisdiccionales en
los mapas publicados y afiliaciones institucionales.
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