UNIVERSIDAD LIBRE SECCIONAL PEREIRA

ASPERGILLUS NIGER COMO PRODUCTOR DE ÁCIDO CÍTRICO.

Presentado por: Carolina Marín, Estefani Pareja y Harold Lemus.

Presentado a: Daniel Arturo León Rodríguez y Victor Hugo Grisales Diaz.

Sexto semestre
Microbiología Industrial
Universidad Libre de Pereira
2021
 Resumen
La producción de ácido cítrico se realiza por procesos fermentativos, en donde se ha
determinado que unos de los factores más importantes son: la concentración y fuente de
carbono. Este proceso es realizado por el hongo filamentoso como Aspergillus niger. En el
presente laboratorio se aisló 3 cepas de hongos a partir de muestras de suelo entre los cuales
Aspergillus niger era el principal objetivo, los cuales fueron identificados morfológicamente
usando métodos de microscopia e identificación macroscópicas dependiendo a sus
características descritas.

Palabras claves: Apergillus niger, hongos filamenos, ácido cítrico, Agar saboraud.

Abstract
The production of citric acid is carried out by fermentation processes, where it has been
determined that some of the most important factors are: the concentration and source of
carbon. This process is carried out by the filamentous fungus such as Aspergillus niger. In
this laboratory, 3 fungal strains were isolated from soil samples, among which Aspergillus
niger was the main target, which were morphologically identified using macroscopic
microscopy and identification methods depending on their described characteristics.
Key words: Apergillus niger, filameno fungi, citric acid, Agar saboraud.

Introducción: fermentación sumergida por ser la más

El ácido cítrico es un ácido orgánico
tricarboxílico que está presente en la
mayoría de las frutas, sobre todo en
cítricos como el limón y la naranja. Su
fórmula química es C6H8O7 y su nombre
IUPAC (International Union of Pure and
Applied Chemistry), es ácido 2-hidroxi-1,
2, 3-propanotricarboxílico. En su forma
industrial es un polvo cristalino, blanco,
inodoro y con sabor ácido fuerte. Es un
producto bien cotizado a nivel mundial por
sus propiedades como acidulante y
preservante que contribuye a asegurar el
sabor original, la apariencia natural y la
consistencia de los productos. Este es
producido fundamentalmente por
efectiva para este proceso utilizando
diversos microorganismos capaces de
degradar materias primas como almidón,
sacarosa y residuos agro-industriales como
bagazo, mieles finales de caña, suero de
leche y otros. (1)
Entre los microorganismos capaces de
producir y acumular ácido cítrico se
encuentran las especies de los géneros
Aspergillus, Citromyces, Penicillium,
Monilia, Candida y Pichia. Las especies
de Aspergillus negros y especialmente
Aspergillus niger, son las más empleadas
en este tipo de producción; las más
efectivas son las que presentan baja
actividad de las enzimas isocitrato
deshidrogenasa y aconitasa hidratasa y una • Solución salina estéril
alta actividad del citrato sintetasa. La
• Agar saboraud dextrosa
producción de metabolitos con hongos
filamentosos se ve favorecida cuando se Equipos y material de laboratorio
presenta un crecimiento en forma de
• Tamiz con malla de 1,6 mm
pellets; en los pellets grandes la región
central sufre de autolisis debido a la • Matraz/ Erlenmeyer 100 mL-50 mL
limitación de nutrientes como el oxígeno;
• Cajas de Petri
por el contrario, los pellets pequeños son
deseables en el desarrollo de las • Tubos de ensayo
fermentaciones. En la producción de ácido
• Recipientes de vidrio
cítrico con Aspergillus niger los niveles de
los nutrientes y las condiciones • Incubadora
ambientales, como pH, agitación,
• Nevera
temperatura, iones metálicos,
concentración de fosfato, fuente de • Frascos de tapa azul
nitrógeno y carbono, alcoholes y aditivos,
METODOLOGÍA
son factores importantes que regulan la
morfología del microorganismo y el 1. Procesamiento de la muestra
proceso fermentativo. El Aspergillus niger
Tamizar la muestra de suelo (tamiz con
es utilizado para la obtención de enzimas a
malla de 1,6 mm) y del material obtenido
nivel industrial, como la α-Amilasa,
tomar 10 g y llevarlos a un matraz con 90
amiloglucosidasa, catalasa, celulasa, α-
mL de solución salina estéril (10-1),
Galactosidasa, βGalactosidasa, β-
homogenizar durante 20 minutos (Figura
Gluconasa, glucoamilasa, glucosa
1) y finalmente realizar una dilución en
aerodeshidrogenasa, glucosa oxidasa,
solución salina hasta 10-2 (tomar 10 ml de
αGlucosidasa, α-D-Glucosidasa, β-
la muestra homogenizada y llevarlos a un
Glucosidasa, hemicelulasa, hesperidinasa,
matraz o Erlenmeyer con 90 ml de
invertasa, lipasa, pectinasa, pitasa,
solución salina).
proteasa y tanasa (2)
El objetivo del presente trabajo fue aislar,
seleccionar y caracterizar, a partir de
muestras de suelo el hongo Aspergillus
niger y reconocer y aplicar los procesos de
detección, selección y mantenimiento

MATERIALES
Muestras y Reactivos
• 100 g de suelo agrícola
 Figura 1. Homogenización de la mezcla tamaño de la hifa y sus estructuras de
durante 20 min. Fuente: Propia reproducción.
2. Aislamiento e identificación de
Aspergillus niger
Resultados y Discusión
Tomar un alícuota de la dilución 10-2 y
Se sembraron en 3 cajas de Petri muestras
sembrarla por agotamiento y estría sobre
de suelo y estos fueron los resultados
agar Dextrosa Sabouraud en cajas de Petri
obtenidos.
e incubar las placas a temperatura
ambiente (30 ºC) por 6 días (Figura 2). En la primera caja según su morfología
Una vez transcurrido los 6 días seleccionar estaríamos hablando de Aspergillus niger
las colonias características de Aspergillus
Morfología de las colonias de Aspergillus
niger
niger

Colonias de rápido desarrollo Agar

saboraud dextrosa a 25°C y 37°C. El
color de las colonias al principio es
blanco a amarillo, luego es negro (Figura
3). La textura de las colonias es granular.
El reverso de la colonia es incoloro o
crema. (3)

Figura 2. Siembra por estría. Fuente:

Propia

3. Identificación
Las colonias obtenidas se hace frotis de los
cultivos en placa y se tiñen con azul de
lactofenol para posterior observación de
estructuras en microscopia óptica. El
análisis macroscópico comprende: textura
y color de la colonia, presencia de surcos,
exudado, producción de pigmento. Figura 3. Crecimiento de colonias
Microscópico: presencia de septos, después de incubar. Fuente: Propia.

Características microscópicas de las
colonias de Aspergillus niger
Los conidióforos son de pared lisa, hialina
o pigmentada y miden de 1,5 a 3 mm de
largo y de 15 a 20 mm de diámetro. La
vesícula es globosa con 50-100 mm de
diámetro y produce fiálides alrededor de
ella. Las fiálides son biseriadas, las ramas
primarias miden 30 mm de largo y pueden
estar tabicadas, mientras que las
secundarias son cortas y miden 8 mm de
longitud, a partir de las cuales brotan los
conidios, los cuales son globosos y
rugosos con 4 a 5 mm de diámetro, de
color castaño o marrón a negro (Figura
4). (3)
Figura 4. Microscopia de Aspergillus
niger con azul de lactofenol. Fuente:
Propia.
En la segunda caja no se obtuvo un buen
crecimiento de las colonias. Lo
recomendable es haberla dejado
incubando por más tiempo.
Para este segundo análisis podríamos
estar hablando de Candida albicans según
su morfología.
Macroscópicamente, en agar Sabouraud
crece formando colonias blancas, blandas,
cremosas y lisas. (Figura 5)
Figura 5. Crecimiento de colonias
blancas en agar Sabouraud. Fuente:
Propia
Candida albicans es un hongo dimórfico,
es decir, se desarrolla de forma distinta en
función de la temperatura de crecimiento,
como levadura, normalmente a 37ºC en el
huésped, y como hongo de aspecto
filamentoso, a 25ºC en la naturaleza.
Pertenece al filo Ascomycota y se
reproduce de forma asexual por gemación.
En forma de levadura presenta un aspecto
de células redondas u ovaladas, de 3-8 x 2-
7 micras de tamaño, agrupadas en
pequeños grupos, mientras que, en forma
de hongo filamentoso, las células se
alargan y se diversifican tomando la
apariencia de filamentos, pseudo-hifas o
pseudo-micelio. (4)
Para el tercer análisis de crecimiento
microbiano, según su morfología
podríamos decir que se trata del genero
Fusarium.
El género Fusarium es un grupo de hongos Conclusión
filamentosos ampliamente distribuidos en
Finalmente se cumplió con el objetivo de
el suelo y plantas. Debido a su capacidad
la práctica de poder aislar e identificar el
de crecer a 37°C, son considerados
hongo Aspergillus niger mediante
oportunistas. Pueden causar infecciones
descripciones morfológicas tanto
sistémicas en pacientes
macroscópicas y microscópicas
inmunocomprometidos, con una alta
mortalidad. Algunas de sus especies La principal vía de obtención de ácido
producen toxinas que afectan al hombre y cítrico es la fermentativa y el proceso de
animales. De las más de 100 especies de producción se conduce más eficientemente
Fusarium descritas, sólo 12 de ellas por vía mediante Aspergillus niger
pueden considerarse patógenas para el
Podríamos decir que esta especie de
humano, entre ellas destacan F. solani, F.
hongos son muy comunes de encontrar en
oxysporum y F. verticilloides, en orden
medios como el suelo.
decreciente de frecuencia. Los agares PDA
y Sabouraud permiten observar el Otros hongos aislados como candida
diámetro de la colonia, morfología y según la literatura también son productores
pigmento (café, rojo, violeta, naranja, gris, de ácido cítrico así que se podría ampliar
blanco) difusible al medio (Figura 6). (5) la variedad de microorganismos para
obtener mayores beneficios y aumentar sus
estudios.

Bibliografía
1. Oportunidades de producción de ácido
cítrico por vía fermentativa a partir de
sustratos azucarados en cuba. Pérez navarro,
omar, y otros. Villa clara : s.n., 2016.

2. Producción de ácido cítrico con aspergillus

niger nrrl 2270 a partir de suero de leche.
López ríos , carlos andrés , y otros. Medellin :
s.n., 2006.
Figura 6. Crecimiento de colonias 3. Manual de procedimientos y técnicas de
blancas en agar Sabouraud. Fuente: Propia laboratorio para la identificación de los
principales hongos oportunistas causantes de
micosis humanas. Salud, instituto nacional de. 5. Género fusarium. Amaro, cecilia tapia y
Edimeco : s.n., 2010, vol. 16. josé. Chile : s.n., 2014.

4. Candida albicans. Databio. 2012.