Bioprocesos

Facultad De Ciencias Agrarias Y Del Medio Ambiente

Ingeniería Biotecnológica

MODOS DE OPERACIÓN DE UN BIOREACTOR BATCH

INTRODUCCION

Los biorreactores pueden operar en varios modos: Batch, Feed-Batch y Continuo. Gran parte de los
bioprocesos a gran escala operan en modo Batch. Este último consiste en agregar al fermentador un medio
que contiene los nutrientes necesarios para el crecimiento del microorganismo y/o para la producción de
un metabolito. El medio después de ser esterilizado y enfriado a la temperatura e fermentación, se inoculara
con el microorganismo para permitir su desarrollo y producción del metabolito hasta un tiempo en el cual
ocurre el agotamiento de uno o más nutrientes del medio de cultivo. Terminada la fermentación, se cosecha
la totalidad del volumen para recuperar el producto. La determinación de los parámetros cinéticos de un
cultivo por lote tiene la finalidad de conocer, predecir y controlar la fermentación misma.

OBJERIVOS.

• Conocer los parámetros de operación de un Biorreactor en Modo Batch.

• Determinar los parámetros cinéticos del modelo de Monod (Ks y μmáx.).
• Realizar Simulaciones a partir de modelos dinámicos y datos experimentales para proponer
mejorías en los bioprocesos.

MATERIALES Y METODOS

• Micropipeta de 1000μL
• Micropipeta de 200μL
• Micropipeta de 100μL
• Baño termostático
• Vórtex.
• Espectrofotómetro
• Baño de hielo
• Tubos tapa rosca
• Gradillas
• Balones volumétricos de 100 ml
• Glucosa
• DNS
• Solución madre de levadura
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• Biorreactor de 7,5 litros.

• Autoclave
• Centrífuga

METODOLOGIA

PREPARACIÓN DE INOCULO

Se preparó 350 ml de medio de cultivo y se reparte en un

Erlenmeyer de 500 ml.

Se ajustó el pH a 5.0 y se esterilizo por 15 minutos a una presión de 15 psi

y una temperatura de 121 °C

Se enfrió el medio y se activó la levadura y se incubo en el

medio de cultivo por 24 horas a 30°C y 150 rpm.

PREPARACION
DEL MEDIO DE
CULTIVO

MONTAJE DEL BIORREACTOR DE 7,5 LITROS

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Reactivo Cantidad (g/L)

Glucosa 186
MgSO4 3.1
KH2PO4 6.2
Extracto de levadura 12.4

SEGUIMIENTO DE BIOMASA Y CONSUMO DE Tomar muestra cada dos

SUSTRATO horas: 2 ml cada una
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RESULTADOS
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❖ BIOMASA

Tabla 1. Resultados de la absorbancia de la biomasa.

ABS biomasa [g/L]

0 0
0,005 0,1
0,147 0,2
0,308 0,3
0,382 0,4
0,459 0,5

ABS vs BIOMASA
0,6

0,5 y = 0,939x + 0,0464

R² = 0,9623
0,4

0,3

0,2

0,1

0
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5

Figura 1.

Tabla 2. Resultados de concentración de biomasa producida cada dos horas

Tiempo (horas) Absorbancia Factor de Dilución Biomasa (g/L)

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0 (8:00 am) 1
2 (10:00 am) 1
4 (12:00 m) 1/2
6 (2:00 pm) 1/3
8 (4:00 pm) 1/4
10 (6:00 pm) 1/5

❖ Cálculos

Y=1,354x - 0, 0286

Abs = 1,354x - 0, 0286

X= [(abs+ 0,0286)/1,354]*(𝐹𝐷)−1

𝑥0 = [(0,795+0,0286)/1,354]*(1) = 0,608 g/L

𝑥2 = [(0,928+0,0286)/1,354]*(1) = 0,706 g/L

𝑥4 = [(1,454+0,0286)/1,354]*(2) = 2,189 g/L

𝑥6 = [(2,301+0,0286)/1,354]*(3) = 5,161 g/L

𝑥8 = [(3,004+0,0286)/1,354]*(4) = 8,958 g/L

𝑥10 = [(4,040+0,0286)/1,354]*(5) = 15,024 g/L

Biomasa vs Tiempo
18
16 y = 0,5112e0,3502x
R² = 0,9826
14
12
10
8
6
4
2
0
0 2 4 6 8 10 12
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Figura 2.

Tabla 3. In DE BIOMASA VS TIEMPO

tiempo ln de biomasa
0 -0,497
2 -0,348
4 0,783
6 1,641
8 2,192
10 2,709

ln X vs t
3,5

3 y = 0,3501x - 0,6706
R² = 0,9729
2,5

1,5

0,5

0
0 2 4 6 8 10 12
-0,5

-1

Figura 3.

CALCULAR: 𝑴𝑴𝑨𝑿 Y 𝒀𝑿/𝑺

𝑋𝐹 − 𝑋𝐼
𝑌𝑥/𝑠 =
𝑆0 − 𝑆𝑓

15,024 − 0,608
𝑌𝑥𝑠 = = 0.3714
60−21.19
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𝐼𝑛 𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 2−𝐼𝑛 𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 1

µmáx = 𝑇𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 2−𝑇𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜 1

2,709 − 0,783
µmáx = = 0,321
10 − 4

Ks =0.01

❖ DETERMINACION DE SUSTRATO (AZÚCARES POR DNS)

Tabla 4. Absorbancia del sustrato

ABS glucosa [g/L]

0 0
0,6 0,2
0,989 0,4
1,48 0,6
1,98 1
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Figura 4.

Tabla 5. Determinación de sustrato cada dos horas

Tiempo (horas) Absorbancia Factor de Dilución Sustrato

0 (8:00 am) 0,710 10−3 1316,34-60
2 (10:00 am) 0,592 10−3 1077,66-60
4 (12:00 m) 0,335 10−2 55,78
6 (2:00 pm) 0,350 10−2 58,81
8 (4:00 pm) 0,225 10−2 33,53
10 (6:00 pm) 0,164 10−2 21,19

❖ CALCULOS

y = 0,4944x + 0, 0592

Abs = 0,4944x - 0, 0592

x= [(abs - 0,0592)/0,4944]*(𝐹𝐷)−1

𝑠0 = [(0,710 - 0,0592)/0,4944]*(103) = 1316,34 g/L

𝑠2 = [(0,592 - 0,0592)/0,4944]*(103) = 1077,66 g/L

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𝑠4 = [(0,335 - 0,0592)/0,4944]*(102) = 55,78 g/L

𝑠6 = [(0,350 - 0,0592)/0,4944]*(102) = 58,81 g/L

𝑠8 = [(0,225 - 0,0592)/0,4944]*(102) = 33,53 g/L

𝑠10 = [(0,164 - 0,0592)/0,4944]*(102) = 21,19 g/L

Sustrato vs Tiempo
70

60

50

40

30

20

10

0
0 2 4 6 8 10 12

Figura 6.

❖ SIMULACION
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❖ Análisis.

La velocidad de crecimiento máxima del microorganismo es 0,387776, por lo cual el

microorganismo crece 0.01615 en una hora.

Las condiciones de rendimiento de biomasa a partir de sustrato teórica corresponden a la calculada

en la simulación.

Con la curva de crecimiento microbiano se logro determinar que a las 15,24 horas el
microorganismo consumió todo el sustrato.
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