METODOLOGIA 9.

“ACTIVIDAD Y CINÉTICA ENZIMÁTICA”

- ACTIVIDAD DE ENZIMA PROTEASA (BROMELINA)

CORTAR TROZOS DE PIÑA ENVOLVERLOS EN UNA GASA O MANTA DE CIELO,

EXPRIMIR Y OBTENER EL JUGO.

OBTENER APROXIMADAMENTE 30ML DE TOMAR 15ML DE ESE JUGO Y PONER EN EBULLICIÓN

JUGO DE PIÑA. POR UN TIEMPO DE 40 SEG

LOS OTROS 15ML NO REALIZARLES NINGÚN PREPARAR GELATINA COMO LO INDIQUEN LAS

TRATAMIENTO. LAS INSTRUCCIONES DEL ENVASE Y DEJAR ATEMPERAR.

(A) (B)

EN DOS RECIPIENTES COLOCAR LO SIGUIENTE: EN UN RECIPIENTE (A), AGREGAR LOS 15 ML DE JUGO DE PIÑA
HERVIDO Y EN EL SEGUNDO RECIPIENTE (B) AGREGAR LOS 15 ML DE JUGO DE PIÑA SIN TRATAMIENTO TÉRMICO.
AGITAR Y REFRIGERAR DURANTE 15 MIN. PASADO EL TIEMPO, REGISTRAR CADA 7HRS LO

SUCEDIDO EN CADA RECIPIENTE.

OBSERVAR, ANALIZAR LA REACCIÓN, ASÍ COMO EL EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD

ENZIMÁTICA Y CONCLUIR.

- ACTIVIDAD DE ENZIMA OXIDOREDUCTASA. (CATALASA)

PONER AGUA EN EBULLICIÓN. PELAR UNA PAPA Y CORTAR EN CUBOS

APROXIMADAMENTE DE 5CM X 5CM

TOMAR APROXIMADAMENTE 5-8 CUBOS Y SACAR Y COLOCAR EN UN VASO PEQUEÑO

SUMERGIRLOS DURANTE 40S A 60S EN EL (TEQUILERO), DEJAR ATEMPERAR.

AGUA EN EBULLICIÓN DEL PUNTO

COLOCAR APROXIMADAMENTE 5-8 CUBOS DE AGREGAR APROXIMADAMENTE LA MISMA CANTIDAD

PAPA SIN EL TRATAMIENTO TÉRMICO EN UN DE PERÓXIDO DE HIDRÓGENO (AGUA OXÍGENADA)

VASO PEQUEÑO (TEQUILERO). A CADA UNO DE LOS VASOS.

 POR TU SEGURIDAD SIEMPRE DEBES USAR EL
EQUIPO CORRESPONDIENTE PARA
LABORATORIO

VIDEO DEMOSTRATIVO.HTTPS://YOUTU.BE/1HTYUSLX22I

OBSERVAR, ANALIZAR REACCIÓN, EFECTO DE LA TEMPERATURA Y CONCLUIR.

- POLIFENOLOXIDASA
EN ESTA ETAPA TRABAJAREMOS CON 2 FRUTOS (MANZANA, PLÁTANO) Y UNA HORTALIZA (LECHUGA)

REALIZAREMOS TRATAMIENTOS DIFERENTES A CADA MATERIAL BIOLÓGICO. (CAMBIO DE PH Y

TEMPERATURA)

REALIZAREMOS CORTES A LOS FRUTOS, OBTENIENDO CUBOS, APROXIMADAMENTE DE 8CM X 8CM Y EN EL

CASO DE LA LECHUGA REALIZAREMOS CORTES IRREGULARES.

VIDEO EXPLICATIVO DE LA ACTIVIDAD. HTTPS://YOUTU.BE/-JAG5ET2G6O

OBSERVAR, ANALIZAR REACCIÓN, EFECTO DE CADA FACTOR SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA Y

CONCLUIR.

- CINÉTICA ENZIMÁTICA. EMPLEANDO SIMULADORES.

1. ENCONTRAR EL PHOPT DE LA ENZIMA, REALIZANDO DIFERENTES CORRIDAS, AL IGUAL QUE LA T°OPT, COMO
SE DESCRIBE A CONTINUACIÓN. EMPLEAR EL SIMULADOR BIOMODEL.

2. REALIZAR TRES CORRIDAS COMPLETAS, EMPLEANDO TODO EL RANGO DE PH DE 3 HASTA 11, MANTENIENDO
CONSTANTE LAS SIGUIENTES TEMPERATURAS:

A) TO DE 30°C Y REALIZAR CORRIDA COMPLETA CON TODOS LOS VALORES DE PH, GRAFICAR EN EXCEL,
OBTENIENDO EL PHOPT.

B) TO DE 45°C Y REALIZAR CORRIDA COMPLETA CON TODOS LOS VALORES DE PH, GRAFICAR EN EXCEL,
OBTENIENDO EL PHOPT.

C) TO DE 60°C Y REALIZAR CORRIDA COMPLETA CON TODOS LOS VALORES DE PH, GRAFICAR EN EXCEL,
OBTENIENDO EL PHOPT.
3. REALIZAR DE IGUAL MANERA TRES CORRIDAS, PERO AHORA FIJANDO TRES VALORES DE PH Y REALIZANDO
CORRIDAS EN TODO EL RANGO DE TEMPERATURAS, DESDE 30°C HASTA 80°C. DE LA SIGUIENTE MANERA.

D) PH 4 Y REALIZAR CORRIDA COMPLETA CON TODO EL RANGO DE TEMPERATURAS, GRAFICAR EN EXCEL,

OBTENIENDO LA T°OPT.

E) PH 6 Y REALIZAR CORRIDA COMPLETA CON TODO EL RANGO DE TEMPERATURAS, GRAFICAR EN EXCEL,

OBTENIENDO LA T°OPT.

F) PH 8 Y REALIZAR CORRIDA COMPLETA CON TODO EL RANGO DE TEMPERATURAS, GRAFICAR EN EXCEL,

OBTENIENDO LA T°OPT.

- SIMULADOR. BIOMODEL

HTTP://BIOMODEL.UAH.ES/LAB/ABS/AE/INICIO.HTM (LINK DEL SIMULADOR PARA CINÉTICA DE PH Y

TEMPERATURA)

HTTPS://YOUTU.BE/AWN56COS2OM (VIDEO EXPLICATIVO DEL USO DEL SIMULADOR)

- CINÉTICA DE CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO

DE ESTE ENLACE: HTTP://BIOMODEL.UAH.ES/METAB/ENZIMAS/INICIO.HTM ÚNICAMENTE REALIZAR LOS

SIGUIENTES EJERCICIOS. HTTP://BIOMODEL.UAH.ES/METAB/ENZIMAS/INICIO.HTM

A) FIJAR UN VALOR DE KM Y UNO DE VMÁX. TRAZAR LA GRÁFICA CAPTURAR LA IMÁGEN, Y COMPROBAR

SOBRE LA CAPTURA DE PANTALLA COMO SE CALCULA KM Y VMÁX DE FORMA MANUAL, TOMAR LA FOTO.
REALIZAR 2 EJERCICIOS CON VALORES DIFERENTES DE KM Y VMAX.
HTTP://BIOMODEL.UAH.ES/METAB/ENZIMAS/MM-SUSTRATO.HTM
B) FIJAR UN VALOR DE KM Y VMÁX EN LA GRÁFICA DE MICHAELLIS-MENTEN. TRAZAR LA GRÁFICA Y
COMPARAR LOS VALORES OBTENIDOS DE LAS CTTES CINÉTICAS KM Y VMÁX ENTRE EL MÉTODO DIRECTO
CON RESPECTO A LOS TRATAMIENTOS DE LINEALIZACIÓN. TOMAR CAPTURA DE PANTALLA A DOS
EJERCICIOS QUE REALICEN, ANALICEN Y COMPAREN LOS DIFERENTES TRATAMIENTOS DE LINEALIZACIÓN.
HTTP://BIOMODEL.UAH.ES/METAB/ENZIMAS/GRAFICAS.HTM

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLAN

BIOQUIMICA DIAGNOSTICA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA GENERAL

PRACTICA 7: ACTIVIDAD Y CINÉTICA ENZIMÁTICA

METODOLOGIA PRACTICA 7

REYES CRUZ MISAEL DAZAETH PROFESORAS A CARGO:

L.F Miriam Álvarez Velasco
Q. Imelda Jaramillo Ugarte
I.A Yésica Natali Álvarez Pacheco