HISTOLOGIA

La Microscopía es la técnica de producir

imágenes visibles de estructuras o
detalles demasiado pequeños para ser
percibidos a simple vista.

En la microscopía se evidencia los

grandes aportes que la física ha hecho a
la biología.

La microscopia data desde el siglo XVII,

cuando se dieron las primeras
investigaciones, recién inventado el
microscopio.
En 1665 se descubre la existencia de
unidades pequeñas dentro de los tejidos
y reciben la denominación de células.

En 1830, acompañando a las mejoras que

se introducen en la microscopía óptica, se
logra distinguir el núcleo celular.

En 1838 se introduce el concepto de la

teoría celular.

En los años siguientes, Virchow introduce

el concepto de que toda célula se origina
de otra célula (omnis cellula e cellula).
El MICROSCOPIO es un instrumento
óptico diseñado para observar de
cerca los objetos que no pueden verse
a simple vista.

La palabra Microscopio se deriva del

griego:
ØMikros: Pequeño.
Øscopeo o skopein: Mirar.

Se disponen de varios tipos de

microscopios para el estudio del
material biológico.
Basicamente se pueden clasificar por el
Tipo de fuente luminosa que utilizan en:

Microscopios que utilizan una fuente de

luz visible.

Microscopios que utilizan una fuente de

luz invisible.

Entre los microscopios que utilizan una

fuente de luz visible se encuentran:

• Microscopio Óptico.
• Microscopio de Luz Polarizada.
• Microscopio de Contraste de Fases.
• Microscopio de Campo Oscuro.
• Microscopio de Fluorescencia.
ENTRE LOS MICROSCOPIOS QUE UTILIZAN
UNA FUENTE DE LUZ INVISIBLE SE
ENCUENTRAN:

1) MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA.

2) MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE
TRANSMISIÓN.
3) MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO.

SE ATRIBUYE SU INVENCIÓN AL FABRICANTE

DE LENTES HOLANDÉS, ZACARÍAS JANSEN EN
EL AÑO 1590 Y A GALILEO EN EL AÑO 1606,
PERO ANTON VAN LEEUWENHOECK FUE UNO
DE LOS PRIMEROS QUE APARTE DE
FABRICARLO LO USÓ CON FINES BIOLÓGICOS.
EL PRIMER MICROSCOPIO DE ANTÓN
VAN LEEUWENHOEK (1632-1723)
ERA UN MICROSCOPIO MUY
SENCILLO, PUES SÓLO LOGRABA 300
AUMENTOS.
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Microscopio Óptico
Presentan juegos de lentes que aumentan
o amplifican el tamaño de la imagen.
Tienen una capacidad hasta de 2500
aumentos.
Las Partes del microscopio óptico son:

Ø Ocular: Lente mediante la que se

observa la preparación.
Ø Brazo: Asa del microscopio.
Ø Revolver: Zona giratoria donde se
mueven y se seleccionan los objetivos.
Ø Objetivos: Grupos de Lentes que sirven
para aumentar la imagen.
Ø Pinzas: Piezas que inmovilizan la preparación.
Ø Platina: Soporte móvil para colocar la
preparación. Presenta un orificio central por
donde entra la luz.
Ø Condensador: Lente que concentra la luz que
llega a la preparación.
Ø Diafragma: Dispositivo regulador de la entrada
de luz.
Ø Macrométrico: Sirve para enfocar la imagen.
Sube y baja la platina.
Ø Micrométrico: Sirve para hacer el ajuste fino de
la imagen.
Ø Fuente de Luz: Se utiliza para iluminar la
preparación. Puede ser eléctrica o un espejo que
se debe dirigir hacia una fuente de luz.
Ø Pie: Soporte o base del microscopio.
OTROS TIPOS DE MICROSCOPIO QUE UTILIZAN FUENTE DE LUZ
VISIBLE

MICROSCOPIO DE LUZ POLARIZADA

Los microscopios de luz polarizada

son microscopios a los que se
les han añadido dos polarizadores (uno
entre elcondensador y la muestra y
el otro entre la muestra y el
observador), el material que se
usa para ello es un cristal de
cuarzo y un cristal de nicol
dejando pasar únicamente la
luz que vibra en un único plano
(luz polarizada).
• La luz proveniente de una fuente estándar de iluminación vibra y se
propaga en todas las direcciones, pero al pasar por un filtro polarizador
las ondas y su campo eléctrico oscilan todos en un mismo plano. El
polarizador es un dispositivo que solo deja pasar la luz que vibra en un
plano determinado denominado eje de polarización.

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Al fenómeno de extinción de luz causado por
estos planos atómicos y orientaciones
moleculares se llama birrefringencia .

Este tipo de microscopio se usa para poder

identificar mejor sustancias cristalinas o
fibrosas (como el citoesqueleto), sustancia
amiloide, asbesto, colageno, cristales de
uratos, queratina, silice, y otras de origen
exogeno.
• Aplicaciones del microscopio de luz
polarizada

• Identificar sustancias cristalinas o

fibrosas intracelulares (como el
citoesqueleto) y extracelulares
(sustancia amiloide, asbesto,
colágeno, cristales de uratos y otras
de origen exógeno).

• • Identificar y estimar
cuantitativamente los componentes
minerales.

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 OTROS TIPOS DE MICROSCOPIO QUE UTILIZAN FUENTE DE LUZ VISIBLE

MICROSCOPÍA EN CONTRASTE DE FASES:

Se usa principalmente para aumentar el

contraste entre las partes claras y oscuras
de las células sin colorear.

Es ideal para espécimenes delgados, o

células aisladas.

Este tipo de microscopio es muy útil a la

hora de examinar tejidos vivos, por lo que
se utiliza con frecuencia en biología y
medicina.
La Microscopia de Contraste de Fases resulta muy útil para el examen
de células y tejidos transparentes vivos, cristales, plásticos,
emulsiones, etc.

Se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes

claras y oscuras de las células sin colorear. ...
El microscopio de fases ilumina el espécimen con un cono hueco de
luz,tiene un disco anular en el condensador para limitar la luz
a un cono hueco sintético, con el que queda enfocado en el
Objetivo como un anillo brillante de luz si no hay ninguna
preparación.

•El microscopio de contraste de fases es un tipo de microscopio que

permite observar muestras vivas sin necesidad de usar técnicas de
tinción.

•La principal dificultad en la observación de células vivas es que estas

son prácticamente transparentes. Por esto, si se miran a través de
un microscopio convencional con luz transmitida resulta muy difícil o
incluso imposible observar sus detalles y estructuras microscópicas.
Se utiliza cuando se necesitan ver objetos incoloros.
 OTROS TIPOS DE MICROSCOPIO QUE UTILIZAN FUENTE DE LUZ VISIBLE

MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

Se le llama también ultramicroscopio y

es un microscopio óptico ordinario
cuyo sistema condensador ha sido
modificado para dirigir la luz a la
preparación desde los lados, de tal
modo que sólo la luz difractada por
la preparación pasa al ocular y se
hace visible.
La microscopía de campo oscuro hace
posible la observación en estado vivo de
partículas y células que de otra manera
estarían por debajo de los límites de
resolución del microscopio óptico,
aunque resulten visibles pocos detalles
estructurales.
La Microscopia de campo oscuro se
utiliza para la deteccion de cristales de
la orina, como los de acido urico y
oxalato.

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La microscopia de campo oscuro ha
sido ampliamente usada en el
estudio de pequeñas células móviles
tales como Treponema pallidum, la
espiroqueta causante de la sífilis,
que es invisible con la microscopía
óptica ordinaria.

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MICROSCOPIO DE LUZ FLUORESCENTE:

La muestra se tiñe con una sustancia

fluorescente que absorbe la energía
de las ondas cortas de la luz (azul) y
emite la luz de longitudes de ondas
más largas (verde).

Se utiliza en inmunofluorescencia,
técnica en la cual una sustancia
fluorescente se une a un anticuerpo
específico de ciertos microorganismos.
Si el anticuerpo fluorescente se une al microorganismo, este
microorganismo emite fluorescencia y se pued iidentificar.

No usa filtros y se observa en placas fotográficas.

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Algo que marcó cambios
cualitativos importantes en la
Histología fue el surgimiento
del Microscopio Electrónico el
cual permitió adentrarnos en la
ultraestructura de células y
tejidos; y de esta forma estudiar
profundamente los fenómenos
celulares.
 TIPOS DE MICROSCOPIO QUE UTILIZAN FUENTE DE LUZ INVISIBLE

Entre los microscopios que utilizan una fuente

de luz invisible se encuentran:

•Microscopio de Luz Ultravioleta.

•Microscopio Electrónico de Transmisión.
•Microscopio Electrónico de Barrido.

MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA

La imagen en el microscopio de luz ultravioleta
depende de la absorción de esa luz por las
moléculas de la muestra.
La microscopia ultravioleta no es muy
diferente del funcionamiento de un
Espectrofotómetro pero sus resultados son
registrados en fotografías.
La muestra no se puede observar
directamente a través del ocular porque
la luz ultravioleta no es visible y puede
dañar la retina.

El método sirve para detectar ácidos

nucleicos, proteínas que contienen
determinados aminoácidos.

Además, dado que la radiación

ultravioleta es invisible, la imagen se
muestra con fosforescencia, en fotografía
o con un escáner electrónico.
 TIPOS DE MICROSCOPIO QUE UTILIZAN FUENTE DE LUZ INVISIBLE

MICROSCOPIO ELECTRONICO

En este microscopio se utilizan electrones en vez de

rayos de luz, y como lentes funcionan unos
electroimanes.

Un microscopio electrónico es aquél que utiliza

electrones en lugar de fotones o luz visible para formar
imágenes de objetos diminutos

Cuando los electrones pasan a través de la preparación

algunos son difractados creando entonces una imagen
que se hace visible en una pantalla sensible a los
electrones.

Los microscopios electrónicos permiten alcanzar

ampliaciones hasta 5000 veces más potentes que los
mejores microscopios ópticos, debido a que la longitud
de onda de los electrones es mucho menor que la de
los fotones "visibles".
Con el microscopio electrónico es
posible ver muchas sustancias incluso
de tamaño molecular.

Sin embargo, a causa de la naturaleza

de este instrumento sólo pueden
examinarse objetos muy delgados: si se
está interesado en ver estructuras
internas, incluso una sola bacteria es
demasiado gruesa para ser observada
directamente.

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Por consiguiente, para preparar
muestras para el microscopio
electrónico se necesitan técnicas
especiales de cortes ultrafinos.

Después de la deshidratación, la
muestra es incluida en plástico
y en este plástico se cortan
secciones finas utilizando un
ultramicrotomo, por lo general
equipado con una cuchilla de
diamante.
Una sola célula bacteriana, por
ejemplo,puede cortarse en cinco
seis secciones muy finas, que son
examinadas después individualmente
con el microscopio electrónico.

Para obtener suficiente contraste,

Las preparaciones se tratan con
colorantes especiales de la
microscopia electrónica, tales como
ácido ósmico, permanganato,
uranio, lantano o plomo.
Estos materiales están compuestos por
átomos de elevado peso molecular y, por
ello, dispersan bien los electrones.

Las estructuras celulares teñidas con uno

de esos materiales presentan un
Contraste muy aumentado y; por tanto,
se ven mejor.

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 TIPOS DE MICROSCOPIO QUE UTILIZAN FUENTE DE LUZ INVISIBLE

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO

Es aquel que usa electrones en lugar de luz

para formar una imagen tiene una gran
profundidad de campo, la cual permite que se
enfoque a la vez una gran parte de la
muestra.

Inventado en 1931 por Ernst Ruska, Gerd

Binnig y Heinrich Rohrer, permite una
aproximación profunda
al mundo atómico.
La luz se sustituye por un haz de
electrones, las lentes por electroimanes
y las muestras se hacen conductoras
metalizando su superficie.

Los electrones secundarios se asocian a

una señal de TV.

Los microscopios electrónicos sólo

pueden ofrecer imágenes en blanco y
negro puesto que no utilizan la
luz.

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Este instrumento permite la
observacióny caracterización
superficial de materiales inorgánicos
y orgánicos, entregando información
morfológica del material analizado.

Este tipo de microscopio es muy útil

porque produce imágenes
tridimensionales realistas de
la superficie del objeto.
 TIPOS DE MICROSCOPIO QUE UTILIZAN FUENTE DE LUZ INVISIBLE

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE
TRANSMISION

El microscopio electrónico de
transmisión emite un haz de electrones
dirigido hacia el objeto que se desea
aumentar.

Una parte de los electrones rebotan o

Son absorbidos por el objeto y otros
lo atraviesan formando una imagen
aumentada de la muestra.
Para utilizar un microscopio electrónico
de transmisión debe cortarse la muestra
en capas finas, no mayores de un par de
miles de ángstroms.

Los microscopios electrónicos de

transmisión pueden aumentar un objeto
hasta un millón de veces.