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Maca
Maca
ESCUELA DE POSGRADO
UNIDAD DE POSGRADO
LIMA – PERÚ
2013
Mira que te mando que te esfuerces y seas valiente; no temas ni desmayes,
(Josué 1: 9)
AGRADECIMIENTOS
PAG
RESUMEN I
ABSTRACT II
LISTA DE FIGURAS IV
LISTA DE ABREVIATURAS V
1. INTRODUCCIÓN 1
2. ANTECEDENTES
2.3 CICLOFOSFAMIDA 9
3. HIPÓTESIS Y OBJETIVOS 13
4. MATERIALES Y MÉTODOS
5. RESULTADOS
6. DISCUSIÓN 67
7. CONCLUSIONES 78
8. RECOMENDACIONES 79
9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 80
10. ANEXOS 92
RESUMEN
In the present study, Balb/c mice were orally treated with aqueous extract
(EAc) of maca at the doses of 200 mg/kg for two months prior to
immunosuppression (IS) with a single doses of cyclophosphamide (CF) (130
mg/kg) to evaluate the mRNA production of hematopoietic cytokines:
interleukin 3 (IL-3), granulocyte-monocyte colony stimulating factor (GM-CSF)
and interleukin-7 (IL-7) in spleen and bone marrow, both in treated and controls
mice. Murine bone marrow cells were isolated and co-incubated with aqueous
extract (EAc) of yellow maca to evaluate its effects on the cells proliferation
and mRNA production of the three hematopoietic cytokines.
The aqueous extract of maca stimulates the mRNA production for three
hematopoietic cytokines. The administration of EAc to immunocompromised
mice can reverse the suppressive effects of cyclophosphamide.
1
Lepidium meyenii Walpers (maca) es una especie nativa adaptada a las
condiciones extremas existentes en los pisos ecológicos más altos de la
cordillera de los Andes Centrales del Perú. Es apreciada por su alto valor
nutritivo y energético, por lo que su importancia económica está vinculada
principalmente a sus propiedades revitalizantes, vigorizantes y estimulantes de
la reproducción (Obregón, 1998).
2
2. ANTECEDENTES
3
las características de Lepidium meyenii Walpers, razón por la cual planteó la
necesidad del cambio del nombre a Lepidium peruvianum Chacón (Chacón,
1990), por lo que el nombre científico de la maca fue cuestionado a partir de
ese momento. Sin embargo en el 2011, el Doctor Destéfano y colaboradores,
determinaron mediante el análisis de código de barras de DNA del cloroplasto,
que ambos "especímenes" cultivado y silvestre, eran prácticamente lo mismo,
por lo que señalaron que no habría necesidad de cambiar el nombre
designado por el doctor Walpers (Destéfano, 2011).
5
antioxidantes del cerebro en ratas recién destetadas, proponiendo a la maca
como un adaptógeno (Oré et al., 2011).
Las células progenitoras son las que proliferan a gran escala, proveyendo
billones de células sanguíneas por día que son necesarias para mantener la
homeostasis en el individuo; pero cuando el número de estas células
disminuyen, por ejemplo a causa de una terapia mieloablativa, las células
madre hematopoyéticas son liberadas de su inhibición y comienzan a dividirse
y diferenciarse según los requerimientos del organismo (Mera et al., 2007;
Welsch, 2010).
8
El Factor estimulador de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-
CSF) induce la diferenciación y proliferación de las células progenitoras
hematopoyéticas de granulocitos/macrófagos. Además, regula la
supervivencia y función de varias líneas celulares maduras (granulocitos,
neutrófilos y células dendríticas) y funciona como un mediador inflamatorio,
actuando sobre un número de diferentes tipos celulares y modulando su
función celular como presentadora de antígeno. Un amplio rango de tipos
celulares puede producir GM-CSF, pero a menudo requieren de estímulos.
Células T, macrófagos, células endoteliales, fibroblastos y mastocitos son
ejemplos de células que secretan GM-CSF luego de una estimulación. En el
ratón, el gen para GM-CSF está ubicado en el cromosoma 11, con 4 exones y
su mRNA posee un tamaño de 1,033 bp. Pertenece a la misma familia de la
IL-3 (Guthridge et al., 1998; Shi et al., 2006; Hercus et al., 2009).
2.3 CICLOFOSFAMIDA
11
inmunosuprimidos con 50 mg/kg de CF redujo la hipocelularidad inducida por
CF en el bazo, médula ósea y sangre periférica, lo que se correlaciona con la
reducción de células hiploides e incremento de los niveles de enzimas anti-
oxidantes, reduciendo el estrés oxidativo hepático y medular producto del
metabolismo de la CF. Otro estudio señaló que el extracto acuoso de Polygoni
multiflori rico en polisacáridos, es capaz de incrementar significativamente los
niveles de IL-2, parámetros hematológicos, perfil anti-oxidante y promover la
hematopoyesis esplénica mediante la sobreexpresión del receptor de la
eritropoyetina y el factor de transcripción GATA-1 en animales
inmunosuprimidos por aplicación de 40 mg/kg/día de CF durante 5 días
consecutivos (Chen et al., 2012).
12
3. HIPÓTESIS Y OBJETIVOS
3.1 Hipótesis
13
4. MATERIALES Y MÉTODOS
14
Figura 2. Elaboración del EAc de maca.
A. Sobrenadante proveniente del hervido de la harina de maca.
B. Residuo seco de maca, después de la evaporación total del agua.
15
mediante el método colorimétrico fenol/H2SO4. Para ello se diluyó 10 µl de la
solución de trabajo con 990 µl de H2Odd, a la dilución se le adicionó 500 µl del
reactivo fenol (fenol al 5% en H20dd) y 2,5 ml de H2SO4, después de mezclar se
dejó reposar por 10 minutos en oscuridad, para luego llevar los tubos a baño
maría por 30 minutos a 30°C. Cumplido el tiempo se realizó la lectura a 492
nm. La concentración de carbohidratos en mg/ml se determinó usando como
estándar una curva de glucosa.
Donde:
A = Absorbancia
V = Volumen total del extracto en ml
W = Peso de la muestra en gramos
16
Alcaloides. Se disolvieron 0,5 gramos del extracto acuoso deshidratado en 10
ml de HCl 10% y se calentó la mezcla por 10 minutos a 60 °C. Después de
dejar enfriar, se filtró la mezcla con papel Whatman N°1 y se procedió a lavar
el papel filtro con 10 ml de HCl 10%. El filtrado resultante se utilizó para las
pruebas de alcaloides, en donde a cada 2 ml del filtrado se añadió 3 gotas del
reactivo de Hager (ácido pícrico saturado) o Mayer (MgCl2 al 1.4% y KI al 5%
en H2Odd). Se consideran como positivas, las pruebas en las que aparece una
turbidez definida (Mayer) o precipitado blanquecino (Hager y Mayer).
17
4.2 INMUNOSUPRESIÓN EXPERIMENTAL CON CICLOFOSFAMIDA
20
Dosis Extracto
MES SEMANA
(200 mg/kg p.c.)
1 Si
2 Si
1
3 Si
4 Si
5 Si
6 Si
7 Si
1 Si
Si / Inmunosupresión con CF
2
(130 mg/kg pc)
2
3 Si
Si / Evaluación de grupos
8 DÍA 4
IS2d – EAc e IS2d – Sin EAc
5 Si
6 Si
Si / Evaluación de grupos
7
IS5d – EAc e IS5d – Sin EAc
21
Las transaminasas son enzimas que catalizan la transferencia reversible de
un grupo amino entre un aminoácido y un cetoácido. La transaminasa
glutámico pirúvica (TGP) es una enzima citosólica que se encuentra en altas
concentraciones en el hígado. La lesión hepatocelular desencadena la
liberación de esta enzima en la circulación, por lo que constituye un excelente
marcador de la lesión hepatocelular (Alvarez, 2005).
Las suspensiones del bazo fueron obtenidos por presión del órgano con
ayuda de un émbolo para disgregar el tejido y liberar las células, dentro de una
placa petri con 5 ml de medio RPMI. Se juntaron las suspensiones celulares
de 3 ratones por grupo (se tomaron 500 µl de suspensión del bazo de cada
ratón), para proceder a extraer el RNA con Trizol, determinar su integridad por
22
electroforesis, su pureza y concentración por espectrofotometría y realizar la
transcripción reversa para la síntesis de DNA complementario.
24
Pureza de RNA = A260 / A280
Valores entre 1,8 - 2 considera que el RNA extraído está libre de
contaminantes (proteína, sales)
25
transcritos de los genes murinos de IL-3, IL-7, GM-CSF y Gliceraldehído 3
fosfato deshidrogenasa (GAPDH), donde el último fue considerado como
control de expresión constitutiva (housekeeping) para normalizar los
resultados del PCR en tiempo real (Ullmannovi y Haakovec, 2003; Willems et
al., 2006).
26
Figura 5. Resultado del análisis de los primers para IL-3 mediante el
Software Primer-Blast.
Tamaño del
Nombre N° de acceso
Secuencias de los primers (5´ - 3´) amplicón esperado
del Gen Gen Bank
(pares de bases)
FW: TGCACCACCAACTGCTTAGC
GAPDH 258 NM_008084
RV: GGCATGGACTGTGGTCATGAG
27
Con el fin de evaluar la especificidad de los primers sintetizados, se
realizaron amplificaciones por PCR convencional de los genes evaluados, esto
además permitió corroborar la calidad de los RNA totales obtenidos, así como
analizar la eficiencia de la transcripción reversa. Las amplificaciones
obtenidas se evaluaron mediante electroforesis en gel de agarosa 2%, teñido
con bromuro de etidio. Las condiciones de amplificación por PCR convencional
se explican más adelante.
28
4.3.1.5 Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
29
Nivel de gris Gen de estudio
% cambio en la expresión = x 100
Nivel de gris Gen de referencia
30
4.3.2.1 Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real
IL – 3 : 75,5 °C
GM – CSF : 80,3 °C
IL – 7 : 75,6 °C
GAPDH : 84,4 °C
32
La recolección y análisis de los datos generados fueron realizados
mediante el Rotor Gene Software (versión 1.7) y se utilizó el Método de
Cuantificación Comparativa incluido en el software. Utilizando éste método ya
no es necesario escoger arbitrariamente el nivel del umbral para generar los Ct
(valor umbral de ciclo) y tampoco realizar una curva estándar de eficiencia por
cada gen analizado, requeridos para calcular la expresión génica. Este
programa utiliza el criterio del máximo de la segunda derivada, para calcular el
punto inicial y final de la fase exponencial de la amplificación de cada reacción,
y obtener matemáticamente la eficiencia de amplificación (AE) y el Take Off
Point (TOP) por cada muestra, éste último equivalente al Ct otra ventaja es
que ambos valores son calculados dentro de la fase exponencial de cada
reacción. TOP es definido como el ciclo en el que la segunda derivada de la
fluorescencia está al 80% del valor máximo de la curva, y AE es el incremento
promedio de cuatro ciclos de amplificación después del TOP, es determinado
a partir de la pendiente de la curva entre TOP y el valor máximo (Figura 9)
(McCurdy et al., 2008).
33
Los valores AE y TOP generados, fueron usados en el modelo matemático
descrito por Pfaffl, M. (2001) para calcular la cuantificación relativa de la
expresión génica, según la fórmula:
Donde:
34
Figura 10. Gráfico de la segunda derivada generado por el software Rotor
Gene, para los fragmentos amplificados del transcrito del gen IL-7.
35
4.4.1.2 Obtención de células mononucleares de médula ósea
36
4.4.1.3 Cultivo de células mononucleares de médula ósea
37
Al cabo del periodo de incubación, se añadió a cada pocillo 50 µl de MTT
(Sigma Chemical Co., St Luis, Mo) a la concentración de 5 µg/ml, y las placas
volvieron a la incubadora toda la noche en las mismas condiciones de cultivo.
Al día siguiente se retiró cuidadosamente todo el medio de cultivo de cada
pocillo, se añadió 1 ml de alcohol isopropílico y se mezcló hasta disolver los
precipitados formados (formazán), producto del metabolismo de MTT.
Después de 4 horas de incubación a oscuridad, se realizaron las lecturas a
540 nm para determinar sus absorbancias (Abs). El porcentaje de proliferación
se obtuvo con la siguiente fórmula:
Se volvieron a realizar los cultivos con la dosis de EAc que mejor estimuló
la proliferación y en las mismas condiciones señaladas, para la obtención de
los RNA totales en tres periodos de tiempo: 2 horas, 18 horas y 48 horas de
cultivo. Se consideraron estos tiempos con el fin de observar el curso del nivel
de expresión génica: 0 horas es el nivel basal donde aún no se registra una
expresión significativa, 18 horas es donde se da el mayor porcentaje de
expresión génica (70%) y 48 horas donde no se registraría una expresión
significativa, porque los mRNA fueron traducidos a proteínas (Denzler et al.,
2010).
38
por espectrofotometría y realizar la transcripción reversa para la síntesis de
DNA complementario, utilizando la metodología anteriormente señalada.
40
Figura 13. Colonias macroscópicas formadas en la superficie del bazo de
ratones inmunosuprimidos con ciclofosfamida.
41
estreptomicina 100 µg/ml), se realizó el recuento de células vivas de la
suspensión obtenida mediante el colorante vital azul de Tripán en una cámara
de Neubauer y se diluyó la suspensión celular a la concentración de 1 x 10 6
células /ml.
42
4.6 ANÁLISIS ESTADÍSTICO
43
5. RESULTADOS
44
La cantidad de carbohidratos totales y proteínas por gramo de extracto
acuoso, resultó ser 636.7 mg y 8.4 mg respectivamente. Además se
registraron 0,108 mg de antocianinas y 1,47 mg de flavonoles por cada gramo
del extracto acuoso de maca.
45
Figura 14. Efecto de diferentes dosis de ciclofosfamida sobre el porcentaje de
células nucleadas de la médula ósea. Los ratones fueron inmunosuprimidos con 2
dosis diferentes de ciclofosfamida (65 y 130 mg/kg pc) y las evaluaciones se realizaron a los 2
y 5 días después de la inmunosupresión. Los valores del día 0 corresponden a los ratones no
inmunosuprimidos y representan el 100% de normalidad. Los datos están expresados en
porcentajes respecto al día 0, y fueron obtenidos de 3 ratones por grupo.
CF: Ciclofosfamida
Los ratones del grupo IS2d-Sin EAc mostraron los mayores promedios de
TGP que fue superior a los demás grupos experimentales (p<0,05). A 5 días
post-IS el grupo IS5d-Sin EAc mostró mayor promedio respecto a los grupos
IS2d-EAc, IS5d-EAc y los no inmunosuprimidos. No hubo diferencia
significativa entre los niveles de TGP de los grupos IS2d-EAc e IS5d-EAc, ni
tampoco de los grupos no inmunosuprimidos (Tabla 4).
46
TGP
GRUPOS DE TRATAMIENTO
(UI/L)
Tabla 4. Efecto del extracto acuoso de maca sobre los niveles séricos de la
enzima transaminasa glutámico pirúvica en los ratones inmunosuprimidos con
ciclofosfamida. El experimento tuvo una duración de 2 meses. Los valores representan la
media ± SD de dos experimentos independientes. Las diferencias significativas (p<0,05) entre
los grupos fueron determinados con la prueba t – Student.
a
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS2d – Sin EAc EAc : Extracto acuoso de maca
b
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS5d – Sin EAc IS : Inmunosuprimidos
c
p<0.05 cuando es comparado con el grupo Sin EAc CF : Ciclofosfamida
d
p<0.05 cuando es comparado con el grupo EAc
47
5.3 EFECTO DEL EAc DE MACA SOBRE LA PRODUCCIÓN DE mRNA
PARA IL-3, GM-SCF e IL-7 EN CÉLULAS DEL BAZO Y LA MÉDULA
ÓSEA DE RATONES INMUNOSUPRIMIDOS
a
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS2d – Sin EAc EAc : Extracto acuoso de maca
b
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS5d – Sin EAc IS : Inmunosuprimidos
c
p<0.05 cuando es comparado con el grupo Sin EAc CF : Ciclofosfamida
d
p<0.05 cuando es comparado con el grupo EAc
49
Figura 16. Efecto del extracto acuoso de maca sobre la expresión de mRNA
de GM-CSF por esplenocitos de ratones inmunosuprimidos con ciclofosfamida.
A. Imagen de un gel representativo de los productos obtenidos por RT-PCR.
B. Representación gráfica de las intensidades relativas de cada una de las bandas
cuantificadas por análisis de imagen. Los datos fueron normalizados con los valores de
GAPDH y representan la media ± SD de dos experimentos independientes. Prueba t –
Student.
a
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS2d – Sin EAc EAc : Extracto acuoso de maca
b
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS5d – Sin EAc IS : Inmunosuprimidos
c
p<0.05 cuando es comparado con el grupo Sin EAc CF : Ciclofosfamida
d
p<0.05 cuando es comparado con el grupo EAc
50
Figura 17. Efecto del extracto acuoso de maca sobre la expresión de mRNA
de IL-7 en el bazo de ratones inmunosuprimidos con ciclofosfamida.
A. Imagen de un gel representativo de los productos obtenidos por RT-PCR.
B. Representación gráfica de las intensidades relativas de cada una de las bandas
cuantificadas por análisis de imagen. Los datos fueron normalizados con los valores de
GAPDH y representan la media ± SD de dos experimentos independientes. Prueba t –
Student.
a
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS2d – Sin EAc EAc : Extracto acuoso de maca
b
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS5d – Sin EAc IS : Inmunosuprimidos
c
p<0.05 cuando es comparado con el grupo Sin EAc CF : Ciclofosfamida
d
p<0.05 cuando es comparado con el grupo EAc
51
5.3.2 Niveles de expresión de los genes IL-3, GM-SCF e IL-7 de la médula
ósea
La Figura 19 muestra que los ratones del grupo IS5d-EAc presentan mayor
expresión de GM-CSF con respecto al grupo IS5d-Sin EAc (aunque solo fue
1,2 veces más). No se encontraron diferencias de expresión entre los grupos
IS2d-EAc e IS2d-Sin EAc, ni tampoco entre los grupos no inmunosuprimidos
(EAc y control).
Los ratones tratados con el extracto y evaluados dos días post-IS (grupo
IS2d-EAc) tuvieron mayor expresión de IL-7 con respecto al grupo IS2d-Sin
EAc (aunque solo fue 1,2 veces más). No se observaron diferencias de
expresión para IL-7 entre los grupos IS5d-EAc e IS5d-Sin EAc. Entre los
grupos no inmunosuprimidos, los ratones tratados con EAc mostraron mayor
expresión génica de IL-7 (2,5 veces más), al compararlo con el grupo Sin EAc.
El grupo EAc también registró mayor expresión de IL-7 que los ratones
evaluados 5 días post-IS (grupos IS5d-EAc e IS5d-Sin EAc) (Figura 20).
52
Figura 18. Efecto del extracto acuoso de maca sobre la expresión de mRNA
de IL-3 en la médula ósea de ratones inmunosuprimidos con ciclofosfamida.
Los niveles de expresión se determinaron mediante RT-PCR en tiempo real. Los datos fueron
normalizados con los valores de GAPDH y representan la media ± SD de dos experimentos
independientes. Prueba t – Student.
a
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS2d – Sin EAc EAc : Extracto acuoso de maca
b
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS5d – Sin EAc IS : Inmunosuprimidos
c
p<0.05 cuando es comparado con el grupo Sin EAc CF : Ciclofosfamida
d
p<0.05 cuando es comparado con el grupo EAc
53
Figura 19. Efecto del extracto acuoso de maca sobre la expresión de mRNA
de GM-CSF en la médula ósea de ratones inmunosuprimidos con
ciclofosfamida. Los niveles de expresión se determinaron mediante RT-PCR en tiempo real.
Los datos fueron normalizados con los valores de GAPDH y representan la media ± SD de dos
experimentos independientes. Prueba t – Student.
a
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS2d – Sin EAc EAc : Extracto acuoso de maca
b
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS5d – Sin EAc IS : Inmunosuprimidos
c
p<0.05 cuando es comparado con el grupo Sin EAc CF : Ciclofosfamida
d
p<0.05 cuando es comparado con el grupo EAc
54
Figura 20. Efecto del extracto acuoso de maca sobre la expresión de mRNA
de IL-7 en la médula ósea de ratones inmunosuprimidos con ciclofosfamida.
Los niveles de expresión se determinaron mediante RT-PCR en tiempo real. Los datos fueron
normalizados con los valores de GAPDH y representan la media ± SD de dos experimentos
independientes. Prueba t – Student.
a
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS2d – Sin EAc EAc : Extracto acuoso de maca
b
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS5d – Sin EAc IS : Inmunosuprimidos
c
p<0.05 cuando es comparado con el grupo Sin EAc CF : Ciclofosfamida
d
p<0.05 cuando es comparado con el grupo EAc
55
5.4 EFECTO MODULADOR DEL EAc SOBRE LA PROLIFERACIÓN
CELULAR Y PRODUCCIÓN DE mRNA PARA IL-3, GM-CSF E IL-7 EN
CULTIVOS DE CÉLULAS MONONUCLEARES DE LA MÉDULA ÓSEA
Figura 21. Efecto del extracto acuoso de maca sobre la proliferación de las
células mononucleares de la médula ósea. Las células (1 x 106 cells/ml) fueron
cultivadas con diferentes dosis del extracto (0, 50, 100 y 200 µg/ml) durante 48 horas y por
triplicado. Los valores representan la media ± SD de 2 experimentos independientes. Todos
los grupos mostraron diferencias significativas entre ellos (p<0,05). ANOVA y prueba TUKEY
post hoc.
Los niveles de mRNA para los genes de IL-3, IL-7 y GM-SCF, se realizaron
en cultivos de 0, 18 y 48 horas y con 100 µg/ml del extracto acuoso, dosis que
resultó más efectiva en la prueba de proliferación. Los resultados de expresión
génica relativa se presentan en la Tabla 5; se observa que a 18 horas de
56
cultivo, el extracto a la dosis de 100 µg/ml provocó un aumento significativo en
los niveles de expresión de IL-7 respecto a su nivel basal (0 horas) (p<0.05), el
incremento observado en los otros genes (IL-3 y GM-CSF) no fue significativo.
Los cultivos que no recibieron el extracto, por el contrario registraron, una
disminución en la expresión de los 3 genes evaluados, que fue significativa
para IL-3 e IL-7 con respecto a su nivel basal. A 48 horas de cultivo con/sin el
EAc de maca se observa una disminución significativa en la expresión de los 3
genes evaluados.
Citoquinas hematopoyéticas
Tratamiento EAc (µg/ml)
IL - 3 GM - CSF IL - 7
57
5.5 INFLUENCIA DEL TRATAMIENTO CON EL EAc DE MACA SOBRE LA
PROLIFERACIÓN DE LAS CÉLULAS HEMATOPOYÉTICAS DE
RATONES INMUNOSUPRIMIDOS
a
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS2d – Sin EAc EAc : Extracto acuoso de maca
b
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS5d – Sin EAc IS : Inmunosuprimidos
c
p<0.05 cuando es comparado con el grupo Sin EAc CF : Ciclofosfamida
d
p<0.05 cuando es comparado con el grupo EAc
59
Figura 23. Efecto del extracto acuoso de maca sobre el recuento de células
nucleadas de sangre circulante en ratones inmunosuprimidos con
ciclofosfamida. El experimento tuvo una duración de 2 meses. Los valores representan la
media ± SD de dos experimentos independientes. Las diferencias significativas (p<0,05) entre
los grupos fueron determinados con la prueba t – Student.
a
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS2d – Sin EAc EAc : Extracto acuoso de maca
b
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS5d – Sin EAc IS : Inmunosuprimidos
c
p<0.05 cuando es comparado con el grupo Sin EAc CF : Ciclofosfamida
d
p<0.05 cuando es comparado con el grupo EAc
60
Tabla 6. Efecto del extracto acuoso de maca sobre el recuento diferencial de
sangre circulante en ratones inmunosuprimidos con ciclofosfamida. El
experimento tuvo una duración de 2 meses. Los valores representan la media ± SD de dos
experimentos independientes. Las diferencias significativas (p<0,05) entre los grupos fueron
determinados con la prueba t – Student.
a
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS2d – Sin EAc EAc : Extracto acuoso de maca
b
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS5d – Sin EAc IS : Inmunosuprimidos
c
p<0.05 cuando es comparado con el grupo Sin EAc CF : Ciclofosfamida
d
p<0.05 cuando es comparado con el grupo EAc
61
5.5.2 Hematopoyesis en el bazo
62
Figura 25. Efecto del extracto de maca sobre el recuento de las unidades
formadoras de colonia esplénica (CFU-S) de ratones inmunosuprimidos con
ciclofosfamida. El experimento tuvo una duración de 2 meses. Los valores representan la
media ± SD de dos experimentos independientes. Las diferencias significativas (p<0,05) entre
los grupos fueron determinados con la prueba t – Student.
63
5.5.3 Respuesta proliferativa de los linfocitos del bazo a mitógenos
policlonales
64
Figura 26. Efecto del extracto acuoso de maca sobre la respuesta proliferativa
a concanavalina A de los linfocitos del bazo de ratones inmunosuprimidos con
ciclofosfamida. Las células (1x106 cells/ml) fueron cultivadas en presencia y ausencia de
Concanavalina (5 µg/ml) por 48 horas. La proliferación celular fue medida con el ensayo del
MTT. Los resultados se expresaron como % de proliferación con respecto al cultivo control (sin
mitógeno). Los valores representan la media ± SD de dos experimentos independientes.
Prueba t – Student.
a
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS2d – Sin EAc EAc : Extracto acuoso de maca
b
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS5d – Sin EAc IS : Inmunosuprimidos
c
p<0.05 cuando es comparado con el grupo Sin EAc CF : Ciclofosfamida
d
p<0.05 cuando es comparado con el grupo EAc
65
Figura 27. Efecto del extracto acuoso de maca sobre la respuesta proliferativa
a Lipopolisacárido de los linfocitos del bazo de ratones inmunosuprimidos con
ciclofosfamida. Las células (1x106 cells/ml) fueron cultivadas en presencia y ausencia de
Lipopolisacárido (0,5µg/ml) por 48 horas. La proliferación celular fue medida con el ensayo del
MTT. Los resultados se expresaron como % de proliferación con respecto al cultivo control (sin
mitógeno). Los valores representan la media ± SD de dos experimentos independientes.
Prueba t – Student.
a
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS2d – Sin EAc EAc : Extracto acuoso de maca
b
p<0.05 cuando es comparado con el grupo IS5d – Sin EAc IS : Inmunosuprimidos
c
p<0.05 cuando es comparado con el grupo Sin EAc CF : Ciclofosfamida
d
p<0.05 cuando es comparado con el grupo EAc
66
6. DISCUSIÓN
67
mayoría de ellas se quedaron en el pellet no utilizado después de la
centrifugación. Los flavonoides son compuestos fenólicos con demostrada
acción antioxidante y eliminadora de radicales libres, entre ellos destacan los
flavonoles y las antocianinas; el extracto acuoso presentó antocianinas y
flavonoles en concentraciones reportadas por otros investigadores (Sandoval
et al., 2002). También resultó positiva para triterpenos/esteroles, taninos y
saponinas, metabolitos que estarían relacionados al efecto antioxidante de la
maca (Castaño, 2008). Es importante mencionar que algunos investigadores
recomiendan para la detección de saponinas, esperar la persistencia de la
espuma por 30 minutos; como en este trabajo sólo se consideró 3 minutos, es
necesario repetir el ensayo para confirmar su presencia en el extracto acuoso.
No se pudo confirmar la presencia de alcaloides con las dos reacciones
empleadas, ya que sólo reaccionó frente al reactivo de Hager, pero no sucedió
con el reactivo de Mayer. La detección de alcaloides mediante reacciones de
precipitación pueden dar falsos positivos y negativos, por lo que se conviene
realizar varias reacciones de detección para confirmar los resultados (López-
Casamayor, 2007).
70
descendencia, el hemograma y los niveles de enzimas hepáticas de los
roedores (Canales et al., 2000; D'Arriago et al., 2004; Castañeda et al., 2007).
73
cultivos in vitro de médula ósea, demuestran que la maca estimula la actividad
hematopoyética.
74
Existen muchos reportes que señalan que las células de sangre periférica
siguen un ritmo circadiano. En los ratones, animales nocturnos por naturaleza,
los leucocitos alcanzan su punto máximo en las primeras horas de la mañana
y van decreciendo a lo largo del día (Pelegri et al., 2003). Esto podría explicar
la gran magnitud de desviación estándar observada en el recuento total de
leucocitos (Figura 26, grupos No IS) y que se vio reflejada en el recuento
diferencial de sangre periférica (Tabla 6), por lo que se midió su coeficiente de
variación y resultó menor del 50% (datos no mostrados). Una forma de medir
el error muestral es a través del coeficiente de variación, que permite evaluar
la calidad estadística de las estimaciones, un coeficiente menor del 50% indica
que la media aritmética es representativa (Mitacc, 1996).
75
parámetros hematológicos y el contaje de progenitores hematopoyéticos en
ensayos clonogénicos.
77
7. CONCLUSIONES
78
8. RECOMENDACIONES
79
9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
80
Bafna AR, Mishra SH. 2005. Immunomodulatory activity of methanol extract
of roots of Cissampelos pareira Linn. Ars Pharm, 46 (3): 253 - 262.
Bhushan P, Manish G. 2007. Ethnopharmacology Approaches for Botanical
Immunomodulators and Chemoprotectants in Cancer Therapy. Alternative
Treatment For Cancer, 1: 255 - 284.
Bianchi A. 2003. MACA LEPIDIUM MEYENII. Boletín Latinoamericano y del
Caribe de Plantas Medicinales y Aromáticas, 2(003): 30 - 36.
Brooks NA, Wilcox G, Walker KZ, Ashton JF, Cox MB, Stojanovska L. 2008.
Beneficial effects of Lepidium meyenii (Maca) on psychological symptoms
and measures of sexual dysfunction in postmenopausal women are not
related to estrogen or androgen content. Menopause, 15(6): 1157 - 1162.
Calder PC, Kew S. 2002. The immune system: a target for functional
foods? Br J Nutr, 88(2): 165 - 177.
Canales M, Aguilar J, Prada A, Marcelo A, Huamán C, Carbajal L. 2000.
Evaluación nutricional de Lepidium meyenii (MACA) en ratones albinos y su
descendencia. Arch Latinoam Nutr, 50(2): 126 - 133.
Cano J, Flores A, Martínez J, Aguilar C, Rodríguez R. 2010. Diseño de
iniciadores para la amplificación del gen de penicilina G acilasa de Mucor
griseocyanus. Revista Científica de la Universidad Autónoma de Coahuila,
Volumen 2, No. 4.
Castañeda B, Castro de la Mata R, Manrique R, Ibañez L. 2007. Efectos
metabólicos de Lepidium meyenii Walpers “MACA” y Lupinus mutabilis
Sweet, “CHOCHO” en ratas. Revista Horizonte Médico, 7(1): 32 - 38.
Castaño MP. 2008. Maca (Lepidium peruvianum CHACÓN): composición
química y propiedades farmacológicas. Revista de Fitoterapia, 8(1): 21 -
28.
Ceredig R, Rolink A. 2012. The key role of IL-7 in lymphopoiesis. Review.
Seminars in immunology, 24: 159 - 164.
Chacón G. 1990. La Maca (Lepidium peruvianum Chacón sp.nov.) y su
hábitat. Rev Per Biol, 3(2): 169 - 272.
Chen Q, Zhang S, Ying H, Dai X, Li X, Yu C, Ye H. 2012. Chemical
characterization and immunostimulatory effects of a polysaccharide from
81
Polygoni multiflori radix praeparata in cyclophosphamide-induced anemic
mice. Carbohydrate Polymers, 88(4): 1476 - 1482.
Chen X, Chen J, Zhang P, Du J. 2006. Angelica stimulates proliferation of
murine bone marrow mononuclear cells by the MAPK pathway. Blood Cells
Mol Dis, 36(3):402 - 405.
Cisnero R, Oré R, Arnao I, Suárez S. 2011. Relación de glutatión
reducido/oxidado (GSH/GSSG) en ratas diabéticas tratadas con maca
(Lepidium meyenii walp). An Fac med, 72(2): 107 - 111.
Córdova A. 2003. Fisiología Dinámica. MASSON S.A. Barcelona, España.
Cui B, Zheng BL, He K, Zheng QY. 2003 Imidazole alkaloids from Lepidium
meyenii. J Nat Prod, 66: 1101 - 1103.
D´Arrigo G, Benavides V, Pino J. 2004. Preliminary Evaluation Effect of
Lepidium meyenii Walp on the embryonic development of mouse. Rev peru
biol, 11(1): 103 - 106.
Denzler K, Waters R, Jacobs B, Rochon Y, Langland J. 2010. Regulation of
inflammatory gene expression in PBMC by immunostimulatory Botanicals.
PloS One, 5(9): 1 - 15.
Destéfano L. 2011. Determinación del Código de barras de ADN para la
diferenciación taxonómica entre Lepidium meyenii y Lepidium peruvianum.
Congreso Peruano de Medicina tradicional alternativa y complementaria.
Colegio Médico del Perú, Lima, Perú.
Dini A, Migliuolo G, Rastrelli L, Saturnino P, Schettino O. 1994. Chemical
composition of Lepidium meyenii. Food Chem 49, 347 - 349.
Dini I, Tenore GC, Dini A. 2002. Glucosinolates from Maca (Lepidium
meyenii). Biochemical Systematics and Ecology, 30: 1087 - 1090.
Dolgova EV, Proskurina AS, Nikolin VP, Popova NA, Alyamkina EA,
Orishchenko KE, Rogachev VA, Efremov YR, Dubatolova TD, Prokopenko
AV, Chernykh ER, Ostanin AA, Taranov OS, Omigov VV, Zagrebelniy SN,
Bogachev SS, Shurdov MA. 2012. "Delayed death" phenomenon: a
synergistic action of cyclophosphamide and exogenous DNA. Gene, 10;
495(2): 134 - 145.
Erali M, Wittwer C. 2010. High resolution melting analysis for gene
scanning. Methods, 50: 250 - 261.
82
Fairlie T, Morales M, Holle M. 1999. Raíces y Tubérculos Andinos Avances
de Investigación. Centro Internacional de la Papa, Lima, Perú.
Fry T, Mackall C. 2005. The many faces of IL-7: From lymphopoiesis to
peripheral T cell maintenance. The journal of immunology, 174: 6571 -
6576.
Gonzalez GF, Córdova A, Vega K, Chung A, Villena A, Góñez C. 2003.
Effect of Lepidium meyenii (Maca), a root with aphrodisiac and fertility-
enhancing properties, on serum reproductive hormone levels in adult
healthy men. Journal of Endocrinology, 176(1): 163–168.
Gonzales GF, Gasco M, Córdova A, Chung A, Rubio J, Villegas L. 2004.
Effect of Lepidium meyenii (Maca) on spermatogenesis in male rats acutely
exposed to high altitude (4340 m). Journal of Endocrinology, 180(1): 87–95.
Gonzales GF. 2012. Ethnobiology and Ethnopharmacology of Lepidium
meyenii (Maca), a Plant from the Peruvian Highlands. Review Article,
Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 1 - 10.
Guthridge MA, Stomski FC, Thomas D, Woodcock JM, Bagley CJ, Berndt
MC, Lopez AF. 1998. Mechanism of activation of the GM-CSF, IL-3, and IL-
5 family of receptors. Stem Cells, 16(5): 301 - 313.
Gutiérrez J, Montaño K, Bracho J, Rodríguez C, Chang A. 2009.
Caracterización de esteroles en la fracción lipídica de la maca (Walp.)
mediante técnicas cromatográficas. Rev Rev Soc Quím Perú, 75 (2): 254 -
265.
Hara T, Miyajima A. 1996. Function and signal transduction mediated by
the interleukin 3 receptor system in hematopoiesis. Stem cell, 14(6): 605 -
618.
Haubitz M. 2007. Acute and Long-term Toxicity of Cyclophosphamide.
Transplantationsmedizin, 19: 26 - 31.
Herbert K, Levesque JP, Haylock DN, Prince M. 2008. The use of
experimental murine models to assess novel agents of hematopoietic stem
and progenitor cell mobilization. Biology of blood and marrow
transplantation, 14: 603 - 621.
Hercus TR, Thomas D, Guthridge MA, Ekert PG, King-Scott J, Parker MW,
Lopez AF. 2009. The granulocyte-macrophage colony-stimulating factor
83
receptor: linking its structure to cell signaling and its role in disease. Blood,
114(7): 1289 - 1298.
Huang HY, Luther SA. 2012. Expression and function of interleukin-7 in
secondary and tertiary lymphoid organs. Review. Seminars in immunology,
24: 175 - 189.
Huang WY, Cai YZ, Zhang Y. 2010. Natural phenolic compounds from
medicinal herbs and dietary plants: potential use for cancer prevention. Nutr
Cancer, 62 (1):1 - 20.
Huyan XH, Lin YP, Gao T, Chen RY, Fan YM. 2011. Immunosuppressive
effect of cyclophosphamide on white blood cells and lymphocyte
subpopulations from peripheral blood of Balb/c mice. Int Immunopharmacol,
11(9):1293 - 1297.
Janeway C, Travers P, Walport M, Shlomchik. 2003. Inmunobiología. El
sistema inmunitario en condiciones de salud y enfermedad. MASSON S.A.
2da Edición, Barcelona, España.
Jena G, Vikram A, Tripathi DN, Ramarao P. 2010. Use of chemoprotectants
in chemotherapy and radiation therapy: the challenges of selecting an
appropriate agent. Integr Cancer Ther, 9(3): 253 - 258.
Kim CH. 2010. Homeostatic and pathogenic extramedullary hematopoiesis.
Review. Journal of blood medicine, 1: 13 - 19.
Kim SH, Lee IC, Lim JH, Moon C, Bae CS, Kim SH, Shin DH, Park SC, Kim
HC, Kim JC. 2011. Protective effects of pine bark extract on developmental
toxicity of cyclophosphamide in rats. Food Chem Toxicol, 50(2):109-115.
Krawczenko A, Kieda C, Dus D. 2005. The biological role and potential
therapeutic application of interleukin 7. Arch Immunol ther Exp, 53(6): 518 -
525.
Lee KJ, Dabrowski K, Rinchard J, Gomez C, Guz L, Vilchez C. 2004.
Supplementation of maca (Lepidium meyenii) tuber meal in diets improves
growth rate and survival of rainbow trout Oncorhynchus mykiss (Walbaum)
alevins and juveniles. Aquaculture Research, 35(3): 215 - 223.
Lees, D. H. y Francis, F. J. 1972. Standardization of pigment analysis in
cranberries. HortScience, 7: 83 – 84.
84
Liang QD, Gao Y, Tan HL, Guo P, Li YF, Zhou Z, Tan W, Ma ZC, Ma BP,
Wang SQ. 2006. Effects of four Si-Wu-Tang's constituents and their
combination on irradiated mice. Biol Pharm Bull, 29(7):1378 - 1382.
Liberman AC, Druker J, Refojo D, Arzt E. 2008. Mecanismos moleculares
de acción de algunas drogas inmunosupresoras. MEDICINA, 68: 455 - 464.
Llopis C. 2009. Modelado farmacocinético de ciclofosfamida en pacientes
con cáncer de mama. Tesis. Departamento de farmacia y tecnología
farmacéutica. Universidad de Barcelona, Barcelona, España.
Lock O. 1994. Investigación fitoquímica. Métodos en el estudio de
productos naturales. 2da edición, Fondo editorial de la Pontificia
Universidad Católica del Perú, Lima, Perú.
López-Casamayor E. 2007. Estudio fitoquímico y aproximación genética en
especies de la sección Plinthine del género Arenaria (Caryophyllaceae).
Tesis doctoral. Departamento de Botánica. Universidad de Granada,
Granada, España.
Marcano D, Hasegawa M. 2002. Fitoquímica orgánica. 2da edición,
Editorial Torino, Venezuela.
Marimuthu K, Varadhan KK, Ljungqvist O, Lobo DN. 2012. A meta-analysis
of the effect of combinations of immune modulating nutrients on outcome in
patients undergoing major open gastrointestinal surgery. Ann Surg,
255(6):1060 - 1068.
Massbereg S, Von Andrian UH. 2009. Novel trafficking for hematopoietic
stem and progenitor cells. Hematopoietic stem cell VII, 1176: 87 - 93.
Mayani H, Flores E, Pelayo R, Montesinos J, Flores P, Chávez A. 2007.
Hematopoyesis. Cancerología, 2: 95 – 107.
McCurdy, R, McGrath, J, Mackay, A. 2008. Validation of the comparative
quantification method of real-time PCR analysis and a cautionary tale of
housekeeping gene selection. Gene Ther Mol Biol, Vol 12: 15 - 24.
Meenu RT. 2008. Haematopoietic growth factors and their therapeutic use.
Thromb Haemost, 99: 863 - 873.
Mera C, Roa A, Ramirez S. 2007. Células madres hematopoyéticas,
generalidades y vías implicadas en su mecanismo de auto-renovación. Rev
Cienc Salud, 5(1): 67 – 89.
85
Mitacc M. 1996. Tópicos de estadística descriptiva y probabilidad. 1era
edición. Editorial Thales S.R.Ltda. Lima, Perú.
Mosmann T. 1983. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival:
application to proliferation and cytotoxicity assays. J Immunol Methods, 65:
55 - 63.
Moura DJ, Richter MF, Boeira JM, Pêgas Henriques JA, Saffi J. 2007.
Antioxidant properties of beta-carboline alkaloids are related to their
antimutagenic and antigenotoxic activities. Mutagenesis, 22(4):293 - 302.
Muhammad I, Zhao J, Chuck D, Khan I. 2002. Constituents of Lepidium
meyenii (maca). Phytochemistry, 59:105 – 110.
Nimer S, Uchida H. 1995. Regulation of granulocyte - macrophage colony -
stimulation factor and interleukin 3 expression. Stem cells, 13(4): 324 - 335.
Obregón L. 1998. “Maca” Planta medicinal y nutritiva del Perú. 1era
edición, Instituto de Fitoterapia Americano, Lima, Perú.
Oré R, Suárez S, Rojas L, Valdivieso R, Oriondo R. 2011. Efecto del
extracto acuoso de maca sobre la función cognitiva en ratas recién
destetadas. An Fac med, 72(1): 13 - 16.
Oré R. 2008. Efectos hipolipémico y antioxidante de Lepidium meyenii
Walp en ratas. Tesis de doctorado. Facultad de Ciencias Biológicas,
Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú.
Oziemlak AM. 2005. Development origins of the murine hematopoietic
system. Tesis de doctorado, Departamento de Biología Celular.
Universidad de Erasmus, Rotterdam, Paises Bajos.
Parekkadan B y Yarmush M. 2009. Methods in Bioengineering: Stem Cell
Bioengineering. Artech House, United States.
Patra K, Bose S, Sarkar S, Rakshit J, Jana S, Mukherjee A, Roy A, Mandal
DP, Bhattacharjee S. 2012. Amelioration of cyclophosphamide induced
myelosuppression and oxidative stress by cinnamic acid. Chem Biol
Interact, 195(3): 231 - 239.
Penel N, Adenis A, Bocci G. 2012. Cyclophosphamide-based metronomic
chemotherapy: after 10 years of experience, where do we stand and where
are we going? Crit Rev Oncol Hematol, 82(1):40 - 50.
86
Pelegrí C, Vilaplana J, Castellote C, Rabanal M, Franch A, Castell M. 2003.
Circadian rhythms in surface molecules of rat blood lymphocytes. Am J
Physiol Cell Physiol. 284 (1):C67-76.
Pfaffl, M W. 2001. A new mathematical model for relative quantification in
real-time RT-PCR. Nucleic Acids Res, 29: 2002 - 2007
Piacente S, Carbone V, Plaza A, Zampelli A, Pizza C. 2002. Investigation of
the tuber constituents of maca (Lepidium meyenii Walp.). J Agric Food
Chem, 50: 5621 - 5625.
Rajput ZI, Hu SH, Xiao CW, Arijo AG. 2007. Adjuvant effects of saponins on
animal immune responses. J Zhejiang Univ Sci B, 8(3):153 - 161.
Rapley R, Manning D. 1998. RNA isolation and characterization protocols.
Editorial Hummana Press, USA.
Reddy EP, Korapati A, Chaturvedi P, Rane S. 2000. IL3 signaling and the
role of Src, JAKs and STATs: a covert liaison unveiled. Oncogene, 19: 2532
- 2547.
Roitt I, Delves P, Martin S, Burton D. 2008. Inmunología de Roitt:
Fundamentos. 11ava edición, Editorial médica panamericana, Buenos
aires, argentina.
Rosas J, Pino A. 2005. Efecto antioxidante de cuatro ecotipos y dos tipos
de harina del Lepidium peruvianum CHACÓN (Maca) in vitro. Encuentro
científico internacional ECIPERU, 2(1): 1 - 3.
Rubio J, Riqueros MI, Gasco M, Yucra S, Miranda S, Gonzales GF. 2006.
Lepidium meyenii (Maca) reversed the lead acetate induced-Damage on
reproductive function in male rats. Food and Chemical Toxicology, 44(7):
1114 - 1122.
Ruiz GJ. 2009. Fundamentos de Hematología. Editorial Médica
Panamericana. 4ta Edición. México.
Salem ML, Al-Khami AA, El-Nagaar SA, Zidan AA, Al-Sharkawi IM, Marcela
Díaz-Montero C, Cole DJ. 2012. Kinetics of rebounding of lymphoid and
myeloid cells in mouse peripheral blood, spleen and bone marrow after
treatment with cyclophosphamide. Cell Immunol, 276(1-2): 67 - 74.
87
Sandhar HK, Prasher S, Tiwari P, Salhan M, Sharma P. 2011. A review of
phytochemistry and pharmacology of flavonoids. Internationale
Pharmaceutica Sciencia 1: 25 - 41.
Sandoval M, Okuhama N, Angeles F, Melchor V, Conddezo L, Lao J, Miller
M. 2002. Antioxidant activity of the cruciferous vegetable Maca (Lepidium
meyenii). Food Chemistry, 79: 207 - 213.
Santiago E, Ledesma E, Weiss B, Muñoz L, Domínguez V, Aguiñiga I,
Córdova Y, Moreno L, Tiburcio R. 2010. Avances en la regulación de la
proliferación y diferenciación de células hematopoyéticas, tanto normales
como leucémicas, por la caseína y sus componentes. Hematología,
11(4):193 – 198.
Sefc L, Psenák O, Sýkora V, Sulc K, Necas E. 2003. Response of
hematopoiesis to cyclophosphamide follows highly specific patterns in bone
marrow and spleen. J Hematother Stem Cell Res, 12(1):47-61.
Serrano T, Alberti E, Lorigados L, Díaz I, Blanco L, Vallejo A. 2005.
Caracterización inmunofenotípica de las células de la médula ósea de
ratas. Biotecnología Aplicada, Vol.22, No.3. 234 - 236.
Sharapin N. 2000. Fundamento de tecnología de productos
fitoterapeúticos. 1era edición, Convenio Andrés Bello, Colombia.
Shathish K, Reena D, Guruvayoorappan C. 2012. Chemoprotective effect
of Decalepis hamiltonii against cyclophosphamide induced toxicity. J Exp
Ther Oncol, 9(4):291 - 301.
Shi Y, Liu CH, Roberts AI, Das J, Xu G, Ren G, Zhang Y, Zhang L, Yuan
ZR, Tan HS, Das G, Devadas S. 2006. Granulocyte-macrophage colony-
stimulating factor (GM-CSF) and T-cell responses: what we do and don't
know. Cell Res, 16(2): 126 - 133.
Shin JW, Lee MM, Son JY, Lee NH, Cho CK, Chung WK, Cho JH, Son CG.
2008. Myelophil, a mixture of Astragali radix and Salviae radix extract,
moderates toxic side effects of fluorouracil in mice. World J Gastroenterol,
14(15):2323 - 2328.
Soto I, Cáceres J, Mendoza J, Weiss B. 1999. Citoquinas en la
hematopoyesis y el sistema inmunológico: mecanismos celulares y
moleculares. 1era edición, Plaza y Valdéz editores, México.
88
Stoecker CA, Rickard BM, Abel CA. 1978. Effect of T- and B-lymphocyte
mitogens on interactions between lymphocytes and macrophages. Cell
Immunol, 35(2):362 - 377.
Suárez S, Oré R, Arnao I, Rojas L, Trabucco J. 2009. Extracto acuoso de
Lepidium meyenii Walp (maca) y su papel como adaptógeno, en un modelo
animal de resistencia física. An Fac med, 70(3): 181 - 185
Tello J, Hermann M, Calderón A. 1992. La maca (Lepidium meyenii Walp.)
cultivo alimenticio potencial para las zonas altoandinas. Bol Lima, vol 14:
59 - 66.
Torres D. 2008. Efecto modulador de la respuesta inmune humoral de
extractos de Lepidium peruvianum Chacón (Maca) en ratones
inmunosuprimidos con ciclosfosfamida. Tesis para Titulación, Facultad de
Ciencias Biológicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima,
Perú.
Tripathi DN, Jena GB. 2009. Intervention of astaxanthin against
cyclophosphamide - induced oxidative stress and DNA damage: a study in
mice. Chem Biol Interact, 180(3): 398 - 406.
Ullmannovi V, Haakovec C. 2003. The Use of Housekeeping Genes (HKG)
as an Internal Control for the Detection of Gene Expression by Quantitative
Real-Time RT-PCR. Folia Biologica (Praha), 49(6): 211 - 216.
Valentová K, Buckiová D, Kren V, Peknicová J, Ulrichová J, Šimánek V.
2006. The in vitro biological activity of Lepidium meyenii extracts. Cell
Biology and Toxicology, 22(2): 91 - 99.
Valentová K, Ulrichová J. 2003. Smallanthus Sonchifolius and Lepidium
meyenii-Prospective andean crops for the prevention of chronic diseases.
Biomed Papers, 147(2): 119 – 130.
Vecera R, Orolin J, Skottova N, Kazdova L, Oliyarnik O, Ulrichov J,
Simanek V. 2007. The Influence of Maca (Lepidium meyenii) on Antioxidant
Status, Lipid and Glucose Metabolism in Rat. Plant Foods for Human
Nutrition, 62(2): 59 – 63.
Vilchez JP. 2001. El cultivo de la maca y su consumo. CONCYTEC. Lima,
Perú.
89
Wang Y, Gao B, Tsan MF. 2005. Induction of cytokines by heat shock
proteins and concanavalin A in murine splenocytes. Cytokine, 32(3-4): 149 -
154.
Wang H, Wang M, Chen J, Tang Y, Dou J, Yu J, Xi T, Zhou C. 2011. A
polysaccharide from Strongylocentrotus nudus eggs protects against
myelosuppression and immunosuppression in cyclophosphamide-treated
mice. Int Immunopharmacol, 11(11): 1946 - 1953.
Wanga Y, Wanga Y, McNeilc B, Harveyc L. 2007. Maca: An Andean crop
with multi-pharmacological functions. Review. Food Research International,
40(7): 783 - 792.
Wu X, Zhou QH, Xu K. 2009. Are isothiocyanates potential anti-cancer
drugs? Acta Pharmacologica Sinica, 30: 501 - 512.
Welsch U. 2010. Histología. 2da Edición, Editorial Médica Panamericana,
México.
Willems E, Mateizel I, Kemp C, Cauffman G, Sermon K, Leyns L. 2006.
Selection of reference genes in mouse embryos and in differentiating
human and mouse ES cells. Int J Dev Biol, 50: 627 - 635.
Wintergerst ES, Maggini S, Hornig DH. 2007. Contribution of selected
vitamins and trace elements to immune function. Ann Nutr Metab, 51(4):
301 - 323.
Xiang Wu, Qing-hua Zhou, Ke Xu. 2009. Are isothiocyanates potential anti-
cancer drugs? Acta Pharmacologica Sinica, 30: 501 - 512.
Ye J, Coulouris G, Zaretskaya I, Cutcutache I, Rozen S, Madden T. 2012.
Primer-BLAST: A tool to design target-specific primers for polymerase chain
reaction. BMC Bioinformatics, 18; 13(1): 134.
Yllescas MG. 1994. Estudio Químico y Fitoquímico comparativo de 3
ecotipos de Lepidium meyenii Walp. “Maca” procedentes de Carhuamayo
(Junín). Tesis para Titulación, Facultad de Farmacia y Bioquímica,
Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú.
Zhang Y, Yu L, Ao M, Jin W. 2006. Effect of ethanol extract of Lepidium
meyenii Walp. on osteoporosis in ovariectomized rat. Journal of
Ethnopharmacology, 105(1-2): 274 - 279.
90
Zhao J, Muhammad I, Chuck D, Mustafa J, Khan I. 2005. New Alkamides
from Maca (Lepidium meyenii). J Agric Food Chem, 53 (3): 690 - 693.
91
10. ANEXOS
92
Figura 28. Posible mecanismo de acción del extracto acuoso de maca sobre
las células hematopoyéticas. El EAc de maca tendría un efecto (directo o
indirecto) sobre las células hematopoyéticas (E, SC, P, T) estimulando la
producción de citoquinas hematopoyéticas como IL-3, GM-CSF e IL-7 que a su
vez actuarían sobre ellas mismas u otras células, induciendo la hematopoyesis
(Linaje linfoide y mieloide) y ofreciendo protección frente a CF.
EAc: Extracto acuoso de maca
CF: Ciclofosfamida
E: Células estromales
SC: Célula madre
P: Célula progenitora,
T: Linfocitos T
L: Células del linaje linfoide
M: Células del linaje mieloide
IL-3: Interleuquina 3
IL-7: Interleuquina 7
GM-CSF: Factor estimulador de colonias de granulocitos y monocitos
93