Tecnologías de Recombinación

Instituto Politécnico Nacional

Unidad Profesional Interdisciplinaria de Ingeniería Campus
Guanajuato

Ingeniería Farmacéutica
Electiva I
Vectores de clonación en plantas

7FM1
Hector Salvador Robles Zavala

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Factores que alteran el genoma en plantas.

Factores ambientales de crecimiento biológico siendo amenazas como virus y
organismos fungi pueden causar dañar genómico en el DNA de las plantas. La
exposición a la luz solar puede presentar daño en las células vegetales por la radiación
de UV e incluso procesos biológicos normales como replicación, recombinación, y
transcripción de DNA generan mutaciones o rompimiento de nucleótidos. Otro daño en
el DNA por la generación de radicales en procesos metabólicos y estrés genetóxico
como calor e infección por patógenos.(Que, Chen, et al., 2019). Para evitar mutaciones
los organismos eucarióticos tienen varias rutas para reparar las lesiones para preservar
la integridad genómica. La explotación de las rutas de reparación, rearreglos
cromosómicas inducidas, y gen objetivo son base de la mayoría de las aplicaciones en
ingeniería genómica. (Schmidt et al., 2019)´. Daños en DNA, rutas de reparación, y
regulación en plantas han sido revisadas para su modificación por ingenierías
genómica.
Es necesario revisar varias plantas editadas para identificar las líneas con variantes
mutantes deseadas para lograr características de eficiencia apropiadas.

Técnica de macromoléculas en células de plantas

Para tener modificaciones estables y hereditables en especies de planta, el DNA o la
maquinaría edición deben ser insertados en células que sean activas en división y
regeneradas dentro de las mismas plantas. Existen diversas técnicas para dirigir la
entrega de macromoléculas dentro de células vegetales como electroporación,
microinyección, bombardeo biobalístico, microheridas con fibras de carburo de silicio,
sonicación, e inyección por un haz de aerosol.
Plásmidos como vectores de entrega en plantas.
La adsorción en protoplastos sirve para desarrollar técnicas de entrega de genes, Krens
et al. Demostró por primera vez que el plásmido de DNA de Agrobacterium Ti puede ser
insertado dentro protoplastos de tobacco. Se ha entregado exitosamente transgenes de
neomicina fosfotransferasa a protoplastos de Petunia mediante Agrobacterium. A través
de electroporación y/o tratamiento con PEG son utilizadas para introducir DNA en los

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protoplastos por su rápida evaluación de funcionalidad, esta técnica ha dado exitosas

recuperaciones de plantas transgénicas de cosechas de maíz y arroz. La expresión
estable de transgenes en platas es un método útil para la producción de cosechas con
características de interés. Para expresar estos transgenes se requieren fragmentos de
DNA a clonar dentro del esqueleto del plásmido e introducir el DNA dentro de las platas
con técnicas de entrega como la transformación mediada por Agrobacterium o
bombardeo por biobalística(Mann et al., n.d.).
La transformación mediada por Agrobacterium es aplicada en diversas de plantas,
convirtiéndose en una herramienta indispensable tanto para biología de plantas e
investigaciones biotecnológicas en la agricultura. Los factores responsables están
codificados por seis loci transcripcionales en el plásmido Ti: virA, virB, virC, virD, virE, y
virG. Los genes vir pueden ser suministrados in trans de un plásmido separado
respecto al T-DNA, formando un sistema binario de vectores. Comprender el proceso
de transferencia del T-DNA tiene grandes ventajas para el desarrollo de mejores
tecnologías de transformación, para el uso de genes de virulencia para inducir la
acetoringona. La replicación de un vector viral en los pocos días de inoculación
rápidamente producirá grandes cantidades moléculas de RNA o DNA que permitirán
altos niveles de expresión vegetales de proteína. (Que, Chilton, et al., 2019)

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Figura 1. Expresión del gen ADN-Ti en el daño del tejido vegetal mediado por la acetoringona,
Regiones del vector de Agrobacterium para alteración y entrega de genes a plantas de células
vegetales de proteína.

Técnicas y tecnologías eficientes en la entrega de genes en células de plantas

La técnica de electroporación también puede ser usada para entregar genes través de
la pared celular hacia dentro de las células y tejidos como microesporas o embriones,
por ejemplo, una planta de maíz transgénico fértil fue regenerada a partir de un callo
embriogénico de una suspensión de cultivo de células con embriones alterados por
electroporación con vectores DNA codificados con neomicina fosfotransferasa. (Que,
Chilton, et al., 2019)

Otra técnica importante en las transformaciones de plantas después de uso de

Agrobacterium como vector fue el desarrollo de la tecnología de partículas disparadas a
alta velocidad conocida como biobalística. El virus de RNA del tobacco fue la primera
molécula usada para la demostración de la efectividad del bombardeo de partícula y ser
usado en entrega de macromoléculas a plantas. Numerosos cultivos como el maíz,
trigo, arroz, algodón y soya han tenido una estable transformación fértil gracias al
bombardeo o biobalística. Esta tecnología tiene como objetivo el introducir cualquier
macromolécula incluyendo DNA, RNA, y proteínas dentro del tejido de cualquier
especia de planta, donde la generación de plantas de transgénicas ha sido llevada a
cabo, teniendo ventajas sobre la entrega mediada por agrobacterium.
Otra tecnología llamada inyección por haz de aerosol, parecido a la biobalística ha sido
desarrollada para entregar moléculas de DNA dentro de tejidos de maíz y callo de soya
para generación de transgénicos.

Hay diversas formas para entregar moléculas biológicas dentro de plantas, con
propósitos en su mayoría para expresión transitoria. El DNA o RNA viral o vectores,

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tienen la posibilidad de ser entregados hacia dentro de la célula vegetal por medio de
bombardeo, infecciones con agrobacterium o el uso de inyección por haz de aerosol.

Bibliografía.
Mann, D. G. J., Bevan, S. A., Harvey, A. J., & Leffert-sorenson, R. A. (n.d.). Chapter 2.
1864, 19–35.
Que, Q., Chen, Z., Kelliher, T., Skibbe, D., Dong, S., & Chilton, M. (2019). Chapter 1 in
Genome Engineering. 1917.
Que, Q., Chilton, M. D. M., Elumalai, S., Zhong, H., Dong, S., & Shi, L. (2019).
Repurposing macromolecule delivery tools for plant genetic modification in the era
of precision genome engineering. Methods in Molecular Biology, 1864, 3–18.
Schmidt, C., Pacher, M., & Puchta, H. (2019). DNA break repair in plants and its
application for genome engineering. In Methods in Molecular Biology (Vol. 1864, pp.
237–266). Humana Press Inc.