Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Químicas

Carrera: Química y Farmacia

Análisis Químico Clínico I

1er parcial – Paper #2:

CENTRIFUGACIÓN

ESTUDIANTE:
Edward Omar Veliz Suarez

DOCENTE:
Erazo López Dolores Beatriz

CURSO:
G3
Ciclo I 2021 – 2022

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INTRODUCCIÓN
Los procedimientos de extracción sean de nematodos o de cualquier otro microorganismo
están siempre en continuo a remodelación, añadiendo reactivos, pasos o utilizando tecnología
nueva para poder aumentar su eficiencia al momento de poder retener y separar
microorganismo de una muestra. Este método fue modificado por De Grisse a partir del método
creado por Seinhorst, agregando una centrifuga.

The extraction procedures, whether of nematodes or any other microorganism, are always
being remodeled, adding reagents, steps or using new technology to be able to increase their
efficiency at the time of being able to retain and separate microorganisms from a sample. This
method was modified by De Grisse from the method created by Seinhorst, adding a centrifuge.

OBJETIVOS GENERAL
 Organizar la información obtenido del paper sobre extracción de nematodos para poder
comprender como los métodos son constantemente actualizados.

OBJETIVO ESPECIFICOS
 Explicar detalladamente como se realiza el proceso de extracción utilizando los
materiales y equipos de laboratorio.
 Contrastar los resultados obtenidos por los investigadores del métodos normal y el
método modificado con centrifugación.

DESARROLLO DEL TEXTO

Para el cultivo de los nematodos se necesita aislarlos primero de muestras obtenidas del suelo
y las raíces, el proceso se entiendo por eficiente cuando mayor número de nematodos es
capaz de obtener eliminando los componentes del suelo sin interés.
El proceso se modificó y se explicaría en breve, el proceso clásico y etapas a seguir rutinarias
son las siguientes: procesos previos y extracción de las fracciones suelo, pero-radicular y raíz.
Procesos previos a la extracción:
El muestreo debe llegar al laboratorio en bolsas de plástico impermeables perfectamente
selladas, con información clara sobre los síntomas de la planta, el cultivo, y otros datos
importantes, a parte se puede tener un cuaderno con datos de interés. En un cuaderno se debe
llevar registro y datos como las coordenadas, provincia, fecha de recolección, recolector etc.
Las muestras se deben conservar a 5ºC.
Las muestras deben ser procesadas primero en un papel filtro para separar las raíces del
suelo. El suelo se tamiza en 2mm para eliminar gravas y se debe proceder a tomar datos
destacables como su humedad, fauna, textura etc. Se toma del tamizado 100gr y se los vierte
en un capsula de agua la cual luego será llenada hasta el tope de agua, se esperará mínimo 4h
para realizar la extracción. La raíz es limpiada con agua a presión sobre un tamiz de 2mm, el
agua del lavado es transportado a un recipiente de 4L y es etiquetado como PR. La raíz por su
parte, lavada, se pesa y se rotula como R junto con los síntomas anotados previamente. Los
síntomas se cuantifican junto con los síntomas vistos en el laboratorio. Si se ve presencia de
nematodos en las raíces, se extrae la porción infectada. Se analiza en microscopio para
confirmar infestación. Se corta la raíz cuyo peso debe ser menor a 25 gr en trozos, se añade
agua y se deja macera por 1 o 2 dias. Lo que quede de suelo se deja secar y es utilizado un
150gr para realizar determinaciones de materia orgánica y pH.
Extracción de nematodos de la fracción suelo:
Para eliminar el área de la muestra, esta es agitada con movimientos circulares para luego
inclinarla y dejar decantar 1 o 2 segundos, luego se vierte el líquido sobrenadante en un bocal
de vidrio, este proceso de repite hasta que la arena este perfectamente lavada.
Si el bocal no está del todo lleno, se completa con agua. Se deja reposar 2 horas. Si se
sospecha la existencia de heterodera, se coloca precisamente una tira de papel filtro de una
anchura de 10cm alrededor del borde del bocal antes de llenarlo para que los quistes se

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adhieran. estas tiras son revisadas en un microscopio. Una vez acabada la sedimentación se
filtra en un tamiz de 28 um reducimiento el volumen 300cc los cuales se distribuyen en 4 tubos
de centrifuga. Se someten a 1800 revoluciones durante 3minutos. El líquido sobrenadante se
recoge y se agrega azúcar al 30%, se homogeniza con una espátula y se vuele a dar
revoluciones por 30 segundos. El líquido sobrenadante se recoge y se filtra por un tamiz de
28um para que a así el contenido sea llevado a una placa Petri. De esta forma se obtiene la
muestra para su análisis y recuento bajo el microscopio estereoscopio. Si la placa es muy
contaminada se puede repetir el proceso o repartir el contenido en más placas Petri. Si hay
gran cantidad de nematodos, se divide en dos la placa con un lápiz graso y el resultado se
multiplicará por 2. Si el resultado se expresa en kilogramos o litros el recuento se multiplica por
10.
Extracción de la fracción raíz
Después de dos días se toma la maceración y se reduce el agua por filtración en un tamiz
28um hasta obtener un volumen 150 cc y se vierten 2 cucharaditas de caolín para retener las
fibras vegetales. Se bate en un batidor eléctrico por 1,5 min para después repartir el contenido
en tubos de centrifuga. El producto de las dos centrifugaciones es tamizado en 2mm de malla
con el fin de separar las fibras vegetales, porque estas pueden interferir al momento del conteo.
Si hay un exceso de fibras vegetales se pasa por un tamiz de 28um y se recoge el contenido en
una caja Petri. (Bello Pérez & Nombela, 1983)

CONCLUSIONES
Este método modificado mostro una mayor eficiencia al momento de la obtención y separación
de los nematodos, esto se debe en gran medida a la adición de la centrifuga como un equipo
adicional el cual aporta el factor de poder aumentar el porcentaje de nematodos inmóviles en
las muestras.

RECOMENDACIONES
Entender la naturaleza de los mapas con simbología que explican de forma simple y sin teoría
como realizar los pasos de la extracción.

BIBLIOGRAFÍA
Bello Pérez, A., & Nombela, G. (1983). Modificaciones al método de extracción de nematodos
fitoparásitos por centrifugación en azúcar. Boletín de Sanidad Vegetal. Plagas, 9(2), 183–
189.