DETERMINACION DE RETICULOCITOS

ELABORACION: MARZO 2020 CODIGO: MET-PAR-01 PAGINA 1 de 7

ELABORÓ REVISÓ APROBÓ

Q.F.B. HERMES DAVID T.L.C. MIRIAM Q.C. CECILIA AGUILAR SORIA

PALESTINA PEREZ SORIA CRUZ
RESPONSABLE SANITARIO
QUIMICO ANALISTA ADMINISTRADOR GENERAL

1. OBJETIVO
 Realizar la tinción de reticulocitos.
 Realizar un recuento de reticulocitos.

2. SIGNIFICADO CLÍNICO
Los valores normales de reticulocitos se sitúan entre el 0.5% y el 2% del total de hematíes
presentes en la sangre. La cifra obtenida permite catalogar una anemia como
regenerativa o arregenerativa. Se trata de un parámetro útil para comprobar la respuesta
del organismo al tratamiento de algunas anemias.
Un valor superior al 2% implica la existencia de una reticulocitosis. Podemos encontrarnos
este valor en hemorragias, anemias carenciales tratadas y hemólisis. Por el contrario, un
valor inferior al 0.5% implica la existencia de una reticulopenia. Podemos encontrar un
valor de estas características en aplasias medulares y en déficits de factores de
maduración de los hematíes (hierro, vitamina B12 y ácido fólico).

3. FUNDAMENTO
Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros presentes en sangre periférica, lugar donde
terminan su maduración a hematíes. Contienen restos de ARN y ribosomas que precipitan
en presencia de los coloranes vitales como el azul de metileno o el azul de cresil brillante.
En los reticulocitos incubados con el colorante se ven imágenes gránulo-filamentosas
identificables con el microscopio óptico, que corresponden a los restos de ARN.
El recuento de reticulocitos puede realizarse mediante método manual o por citometría de
flujo.
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4. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Tipo de muestra: Sangre anticoagulada con EDTA.
Estabilidad. La muestra podrá conservarse a temperatura ambiente hasta por 4 horas.
Sin embargo, se sugiere mantener en red fría entre 2°C y 8°C hasta su envío y llegada al
laboratorio.

5. PREPARACIÓN DEL PACIENTE

 El paciente se debe presentar al laboratorio de 7 a 12 de la mañana.
 El paciente para este tipo de muestras debe presentarse en ayuno de al menos 8
horas y máximo de 12 horas.
 En caso de pacientes hospitalizados, ambulatorios graves, bebes, muestras únicas
o muestras de alto valor biológico, las muestras serán tomadas y analizadas en las
condiciones que el medico solicite y crea conveniente para su diagnóstico,
vigilancia médica y/o tratamiento.

6. MATERIAL
 Tubos de ensayo 10 mL
 Pipetas automátizadas
 Puntas para pipeta 100-1000l
 Recipiente metálico.

7. EQUIPO
 Cronometro
 Baño maria.
 Portaobjetos

8. EQUIPO DE BIOSEGURIDAD
 Bata blanca
 Zapato cerrado antiderrapante
 Lentes de seguridad
 Cubrebocas
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9. REACTIVOS

 Azul de cresil brillante

ESTABILIDAD: Los componentes del reactivo son estables hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta del frasco cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2 – 8°C,
protegidos de la luz y se evita su contaminación.

10. PROCEDIMIENTO
10.1 Condiciones del ensayo
 Tipo de ensayo: Cualitativo
 Volumen de la muestra: 500 µl.
 Temperatura: 37° C

10.2 PROCEDIMIENTO DE PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

 Las muestras sanguíneas deben mantenerse a temperatura de 2- 8°C y
transportase al área de proceso.

10.3 PROCEDIMIENTO
1.- En un tubo de debidamente rotulado, se mezclan 100 µl de sangre con 100 µl
de colorante azul de cresil relación 1:1.
2.- Mezclar suavemente, para evitar la hemólisis de los hematíes.
3.- Incubar durante 15 minutos a 37° C.
4.- Homogeneizar la mezcla.
5.- Realizar una fina extensión sanguínea.
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6.- Rotular el portaobjetos.

7.- Dejar secar al aire.
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8.- Realizar el recuento de reticulocitos utilizando el objetivo de inmersión del

microscopio óptico.
9.- Realizar el cálculo de porcentaje de reticulocitos de la siguiente manera

No .de reticulocitos encontrado

Reticulocitos %= ∗100
No. de eritrocitos contados(incluye reticulocitos)

10. En casos de anemia muy intensa, el número de reticulocitos circulantes no

expresa la intensidad de la regeneración eritroblastica porque, debido al
estímulo de la eritropoyesis por la eritropoyetina, salen a sangre periférica más
reticulocitos de lo normal (desviación reticulocitaria y fenómeno de shiff). Debido
a ello los reticulocitos maduran por más tiempo en la periferia que en la medula
ósea y aparentan un recuento mayor en casos de anemia. Para corregir el error
se debe aplicar un factor de corrección, para ello está la siguiente formula:

Hematocrito ( paciente % )
IRC=( Recuento de reticulocitos (%))( )
Hematocrito normal ( 0.45 )
IRC= Indice de Reticulocitos Corregido

Ejemplo:
Reticulocitos del paciente= 2.5 %
Hematocrito del paciente= 0.25 %
Hematocrito normal= 0.45 %
IRC= 2.5 X (0.25 / 0.45) = 1.3

}
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11. CONTROL DE CALIDAD

Un examen completo de frotis de sangre, como la exploración de frotis de sangre,

comienza con una inspección visual de la calidad aceptable del frotis y la mancha
y de la ausencia de rasguños macroscópicos y precipitados de manchas

12. RESULTADOS

El número de reticulocitos aumenta en todas las circunstancias en las que existe

un incremento de la eritropoyesis, tales como en la hemólisis, como respuesta a
sangrados o tras el inicio de un tratamiento antianémico que ha resultado eficaz.
Como la producción de reticulocitos es necesaria para compensar las pérdidas
fisiológicas de glóbulos rojos maduros, una disminución de su número es la
expresión de un estado arregenerativo o hiporregenerativo de la serie roja. Esta
circunstancia es típica de anemias aplásicas, anemias carenciales y
enfermedades inflamatorias y neoplásicas.

13. VALORES DE REFERENCIA

Recién nacidos: 3 – 6 %
Adultos: 0.5 – 1.5 %

14. LIMITACIONES
Los pacientes con bajos recuentos eritrocitarios o de hemoglobina suelen reflejar
problemas en el recuento por el bajo contenido de los mismos.

15.BIBLIOGRAFIA
Rodak Carr. Hematologia Fundamentos y aplicaciones, 2da Edicion. Capítulo 13 Pruebas
de rutina en hematología, “Recuento de reticulocitos” pagina 166-167.