UNIVERSIDAD CENTRAL DEL

ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

TEMA: ACONDICIONAMIENTO DE MATERIAL Y MÉTODOS DE

ESTERILIZACIÓN

PRÁCTICA No. 2

Nombres: Guayasamín Cristina

Pacheco Germán
Salas Ivana
Vaca Jael
Paralelo: 1
Profesor: Dr. Madgalena Díaz
Ayudante de cátedra: Emerson Vizuete

Quito,02 de Mayo de 2018

 RESUMEN

Identificación de los diferentes materiales y equipos que se

emplean frecuentemente en el laboratorio, su uso adecuado y
función, así como la preparación del material para su correcta
esterilización por medio de diferentes métodos. Para lo cual
primero se verificó que el material a utilizar se encuentre lavado y
seco; para proceder con el acondicionamiento se colocó tampones
de algodón, se envolvió completamente con papel empaque y se
colocó en el respectivo equipo de esterilización. En el siguiente
procedimiento se realizó una esterilización flameada para lo cual el
material se sometió directamente a la acción de la llama de un
mechero, finalmente procedimos a esterilizar el medio de trabajo.
Pudimos obtener una asepsia microbiológica adecuada de los
materiales empleados, así como del lugar de trabajo. Se concluye
que la preparación del material y su esterilización fueron realizadas
correctamente, al proteger dicho material de la contaminación se
tendrán resultados óptimos en los trabajos realizados en el
laboratorio.

Palabras clave: ESTERILIZACIÓN/ACONDICIONAMIENTO

_MATERIALES/ASEPSIA_MICROBIOLÓGICA
 PRÁCTICA N°2

ACONDICIONAMIENTO DE MATERIAL Y MÉTODOS DE

ESTERILIZACIÓN

1. OBJETIVOS
1.1. Reconocer, preparar los equipos y material de uso común en el
laboratorio.
1.2. Aprender a utilizar apropiadamente equipos de esterilización para evitar
la contaminación cruzada de muestras.
1.3. Conocer los métodos y técnicas de esterilización más comunes en el
laboratorio con el fin de obtener una asepsia microbiológica adecuada.
2. TEORÍA
2.1. Acondicionamiento de material de laboratorio
2.2. Esterilización
2.2.1. Definición: Proceso por el cual se obtiene un producto libre de
microorganismos viables. El proceso de esterilización debe ser diseñado,
validado y llevado a cabo para asegurar que es capaz de eliminar la carga
microbiana [ CITATION Elv04 \l 12298 ]
2.2.2. Fundamentos de esterilización
2.2.3. Tipos de esterilización (Físicos y Químicos)
 Métodos químicos: Los métodos químicos de esterilización son
aquellos que involucran el empleo de sustancias letales para los
microorganismos, tales como el óxido de etileno y el peróxido de
hidrógeno. El uso de este método es muy limitado para la Industria
Alimentaria pero muy utilizado en otras industrias como la
farmacéutica. [ CITATION Jua05 \l 12298 ]
 Métodos físicos: Los métodos físicos son aquellos que no involucran el
empleo de sustancias letales para los microorganismos, sino
procedimientos físicos como la radiación ionizante, el calor o la
filtración de soluciones con membranas que impiden el paso de
microorganismos, incluyendo virus. El método más usado en esta
categoría es el calor que mata microorganismos por la desnaturalización
de las enzimas; el cambio resultante en la forma tridimensional de las
proteínas las inactiva. [ CITATION Jua05 \l 12298 ]
2.2.4. Controles de calidad de esterilización
El control de calidad de los procesos de esterilización es imprescindible para
la corrección de fallos de manipulación y los fallos mecánicos. En los
centros hospitalarios este control es realizado por el personal de las Centrales
de Esterilización y por el Servicio de Microbiología, quienes utilizan los
indicadores biológicos como el control de calidad más fiable. [ CITATION
Elv04 \l 12298 ]
2.3. Equipos de esterilización
2.3.1. Autoclave
Aparato para esterilizar por vapor que consiste en un recipiente cilíndrico, de
paredes resistentes; metálico, y con cierre hermético autoclave, en cuyo
interior, que contiene un líquido, generalmente agua, el objeto se somete a
presiones y temperaturas elevadas sin llegar a hervir. [ CITATION Ivá12 \l
12298 ]
2.3.2. Estufa La estufa de secado es un equipo que se utiliza para secar y esterilizar
recipientes de vidrio y metal en el laboratorio. Se identifica también con el
nombre de Horno de secado. [ CITATION Ivá12 \l 12298 ]
2.3.3. Cámara de flujo laminar: Una cabina de flujo laminar, cámara de flujo
laminar o campana de flujo laminar es un recinto que emplea un ventilador
para forzar el paso de aire a través de un filtro HEPA o ULPA y
proporcionar aire limpio a la zona de trabajo libre de partículas de hasta 0.1
micras. [ CITATION Ivá12 \l 12298 ]
2.3.4. Mechero Bunsen : utilizado en los laboratorios científicos para calentar,
esterilizar o proceder a la combustión de muestras o reactivos químicos
[ CITATION Ivá12 \l 12298 ]
2.3.5. Baño maría: método empleado en las industrias (farmacéutica, cosmética, de
alimentos y conservas), en laboratorio de química y en la cocina, para
conferir temperatura uniforme a una sustancia líquida o sólida o para
calentarla lentamente, sumergiendo el recipiente que la contiene en otro
mayor con agua u otro líquido que se lleva a o está en ebullición. [ CITATION
Ivá12 \l 12298 ]
2.4. Materiales comunes en laboratorio de microbiología
 2.4.1 Mesas de laboratorio y fregadero
2.4.2 Vitrinas y armarios
2.4.3 Mechero Bunsen
2.4.5 Gradillas
2.4.6 Estufa de incubación
2.4.7 Frigorífico o cámaras refrigeradas
2.4.8 Microscopio
2.4.9 Centrífuga
2.4.10 Cámaras de seguridad biológica
3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. Materiales y Equipos
3.1.1. Autoclave
3.1.2. Estufa
3.1.3. Mechero de alcohol
3.1.4. Varilla de vidrio
3.1.5. Frascos autoclavables
3.1.6. Cajas petri
3.1.7. Matraces Erlenmeyer
3.1.8. Asa de cultivo
3.1.9. Aguja de cultivo
3.1.10. Papel empaque
3.1.11. Piola delgada
3.2. Sustancias y Reactivos
3.2.1. Agua destilada
3.2.2. Alcohol

3.3. Procedimiento

ACONDICIONAMIENTO DE MATERIAL
3.3.1. Verificar que el material este lavado y seco
Pipetas y caja petri
3.3.1.1. Envolver completamente el material con papel empaque.
3.3.1.2. Colocar el material empacado en el equipo de esterilización.

Vasos de precipitación, matraz Erlenmeyer y probetas

3.3.1.3. Realizar un tapón de algodón y gasa, para esto:
3.3.1.3.1. Abrir la gasa y colocar el algodón de forma uniforme sobre la misma.
3.3.1.3.2. Doblar los extremos y a la mitad
3.3.1.4. Enrollar conjuntamente y cubrir con un pedazo de papel empaque. El
empaque puede ser: Papel poroso, tela o polipropileno.
3.3.1.4.1. Taponar el material y asegurar el tapón con piola
ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL
3.3.2. PARTE A: Autoclave

CARGA DE DEPÓSITO DE AGUA:

3.3.2.1. El nivel del agua debe estar como máximo a 2cm de la base de la válvula
de seguridad.
3.3.2.2. La carga del agua del autoclave es de 350ml debe ser incrementada por el
frente del autoclave.
3.3.2.3. Sus laterales y tapa trasera deben estar despejados como mínimo 25mm
para su correcta ventilación.
3.3.2.4. El agua deber ser agua destilada o estéril para evitar problemas de
corrosión en el equipo.
3.3.2.5. El tamaño y la densidad de los paquetes deberá ser tal que permita una
penetración uniforme y completa del vapor, con un apreciable margen de
seguridad, en un tiempo promedio de 30 minutos a una temperatura de
121°C.

3.3.3. PARTE B: Estufa.MEMMERT

3.3.3.1. Mantener conectado el equipo a un tomacorriente estándar de 110V

3.3.3.2. Encender el equipo presionando el PULSADOR GIRATORIO
3.3.3.3. Fijar la temperatura de operación presionando la tecla SET y
PULSADOR GIRATORIO hasta que la pantalla indique la temperatura
deseada.
3.3.3.4. Dejar de presionar la tecla SET, girar EL PULSADOR GIRATORIO
hacia la izquierda hasta que titile el indicador del tiempo
3.3.3.5. Para fijar el tiempo, mantener presionada la tecla SET y girar EL
PULSADOR GIRATORIO hasta que la pantalla indique el tiempo deseado
3.3.3.6. Abrir la puerta metálica de la estufa halando la perilla negra delantera
3.3.3.7. Colocar el material a esterilizar dentro del equipo sobre las bandejas
3.3.3.8. No colocar las bandejas pegadas a la pared del fondo de la incubadora,
dejar un espacio de 1cm para que el aire circule fácilmente
3.3.3.9. Cerrar la puerta asegurándo la con la perilla delantera
3.3.3.10. Abrir o cerrar el paso de aire moviendo a la izquierda o a la derecha LA
REGLETA DE AIRE ubicado junto al PULSADOR GIRATORIO

3.3.4. PARTE C: Esterilización del medio de trabajo

3.3.4.1. Lavarse las manos con jabón

3.3.4.2. Colocarse los guantes y desinfectarlos con alcohol
3.3.4.3. Limpiar el área de trabajo con alcohol
3.3.4.4. Colocar el papel empaque sobre el área de trabajo
3.3.4.5. Colocar los mecheros en la mitad de área de trabajo para mantener un
área estéril( Radio=15cm).
3.3.4.6. Encender el mechero y seguir con la parte D

3.3.5. PARTE D: Mechero y esterilización de asa y aguja de cultivo

3.3.5.1. Encender el mechero
3.3.5.2. Poner en contacto directo el asa de cultivo hasta que adquiera una
tonalidad de rojo vivo que indicará esterilización (realizarlo antes y después
de su uso)
3.3.5.3. Realizar el procedimiento anterior para la aguja de cultivo.
3.3.5.4. Apagar el mechero, retirar el papel y dejar limpia el área.
4. DISCUSIÓN
El método cualitativo realizado en la práctica no fue valido, se realizaron varios
tipos de método de esterilización sin ningún inconveniente, pero no se pudo
determinar si el material que se esterilizo cumple las condiciones de calidad
requeridas.
Durante la práctica se cometieron errores que pudieron haber afectado la técnica
de esterilización, errores aleatorios como el no desinfectar los guantes y al estar
en constante contacto con material no esterilizado implica que el material luego
de esterilizar vuelva a infectarse de microorganismos que afecten posteriormente
a un cultivo, el material después de haber sido empaquetado no se transportó de
manera que garantice la integridad total del envoltorio. Errores sistemáticos al
utilizar un papel de empaque sin un grado médico, ya que dependiendo si el
material es desechable o reutilizable y de la técnica de esterilización se necesita
un papel de empaque especifico.
Se recomienda realizar el control de esterilización para verificar que el material
se encuentre en el medio apto y poder realizar el estudio y cultivo de
microorganismos de manera adecuada, esto se lo puede hacer con controladores
biológicos, fisicoquímicos, etc. Tener en cuenta el tipo de material que se esté
esterilizando ya que cada material tiene una manera específica de transportación.
5. CONCLUSIONES
5.1 Se conoció y diferencio los métodos que cada instrumento necesita para ser
esterilizado, es de relevancia conocerlos ya que si no se ocupa el correcto o de
igual manera no se hace correctamente consecuentemente podemos ser factores
que afecten con la contaminación del laboratorio.
 5.2 Es importante el empaquetar los materiales previamente la esterilización ya
que así procuramos que después de haber sido esterilizado no se contamine al
momento de sacar del proceso de esterilización.
5.3 Todo objeto esterilizado tiene un tiempo de caducidad, al momento de
realizar cualquiera de las técnicas es imprescindible tener mucho cuidado en la
transportación del objeto y las condiciones en las que este se almacene para
lograr conservar el objeto el mayor tiempo de esterilización posible.

6. RECOMENDACIONES
6.1 Para la esterilización de instrumentos de vidrio se recomienda que para
envolverlos de manera correcta, el espacio utilizado se encuentre totalmente
despejado y previamente desinfectado.
6.2 Para la esterilización de instrumentos metálicos se recomienda tener mayor
cuidado al momento de colocar el instrumento al fuego y no ponerlo de manera
vertical hacia él o de otra manera ya que podría causar un accidente con el
mismo.
6.3 Previamente ante cualquier esterilización se recomienda no pasar por alto el
lavado de manos y la utilización de guantes nuevos.

7. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
7.1. Citas bibliográficas
 Garcia, E. L. (2004). Manual de Seguridad en Los Laboratorios de
Microbiologia Molecular. Mexico: Departamento de Microbiologia de
Mexico.
 Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case. (2007).
Introducción a la microbiología. Panama: Médica Panamericana.
 Romero, J. C. (2005). Manual para la formación de nivel superior en
prevención de riesgos laborales. Colombia: Díaz de Santos.
 Salas, I. R. (2012). Nanociencia y Biotecnología. Análisis de Riesgo
Ambiental. Colombia: U.Extarnado de Colombia.
7.2. Bibliografía
(Garcia, 2004)
(Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case, 2007)
(Romero, 2005)
 (Salas, 2012)

8. ANEXOS
8.1. Reporte fotográfico ( Ver Anexo1)
9. CUESTIONARIO
9.1 ¿Qué ocurre en cada método de esterilización?
El método de esterilización por autoclave se produce utilizando un recipiente
metálico de paredes gruesas con cierre hermético que permite trabajar con
vapor de agua a alta presión y alta temperatura que sirve para esterilizar
material médico o de laboratorio. Esto inactiva todos los virus y bacterias, se
ha llegado a saber que algunos microorganismos, así como los priones,
pueden soportar las altas temperaturas, sin embargo la esterilización por
vapor es el método más efectivo, actuando como coagulante de las proteínas
de los microorganismos llevando así a su destrucción. (Jan Huys, 1999).
La utilización del esterilizador Memmert, por aire caliente produce la
esterilización por calor seco dando como resultado la destrucción de los
microorganismos por oxidación de sus componentes celulares. Éste es un
proceso menos eficiente que la esterilización por calor húmedo, porque los
microorganismos mueren con mayor rapidez cuando se encuentran en
presencia de agua, ya que éste permite que se altere con mayor facilidad la
configuración de sus proteínas y proporciona un medio para distribuir el
calor uniformemente en toda la cámara interna del equipo de esterilización.
Por esta razón, para lograr la esterilización del material empleando el calor
seco, se deben aplicar temperaturas más altas durante mayor tiempo.
(Clavell, 1992).
El material y los medios de cultivo donde vamos a crecer a los
microorganismos deben de ser utilizados en condiciones asépticas para evitar
su contaminación con los microorganismos presentes en el medio ambiente.
El mechero Bunsen no sólo permite crear una zona aséptica de trabajo,
también nos permite esterilizar instrumentos como el asa de siembra o el asa
de vidrio, mediante la aplicación directa de calor. Se debe de esterilizar
después de su uso para evitar que los microorganismos que hemos tomado
contaminen el laboratorio o sean incluso un riesgo biológico. Para esterilizar
el asa de siembra ponerla lo más vertical posible y acercar el filamento a la
 llama del mechero Bunsen. Cuando todo el filamento se haya puesto al rojo
vivo se habrá conseguido la esterilización. (D'Aquino, 1995).

9.2 ¿Cuál es la diferencia entre bacteriostático y bactericida?

La acción de algunos agentes, físicos o químicos sobre las bacterias pueden
generar dos posibilidades: Por un lado, nos encontramos con los agentes
bactericidas que hacen referencia a las sustancias capaces de acabar con éste
tipo de microorganismos, en otras palabras, son capaces de provocar la
muerte de todo tipo de gérmenes en general. Por otro lado, nos encontramos
con productos bacteriostáticos, cuyo fin son la detención, o que no cambia
porque está estático, por lo que los agentes químicos bacteriostáticos en
medicina se utilizan para reducir o detener el metabolismo bacteriano,
inhibiendo el crecimiento de bacterias que permanecen vivas, de tal modo
que, al suprimir el elemento bacteriostático por disolución o neutralización,
las bacterias se seguirán desarrollando.
9.3 ¿Cuál es el propósito de la presión en la autoclave?
La presión de vapor presente en el interior será saturada y libre de impurezas
utilizando agua tratada. La pureza del vapor, la saturación y la disponibilidad
del vapor son importantes variables del proceso. Ya que este tiene que estar
en contacto directo con el material a esterilizar (por lo que la carga de los
elementos es muy importante). De la calidad del vapor depende que la
esterilización sea efectiva o no. Estas impurezas pueden oxidar el
instrumento. (Matachana, 2007)

9.4 ¿Qué método de esterilización es el más común en los alimentos?

Para la esterilización de alimentos la técnica más común es la de
conservación por calor que consiste en someter los productos a temperaturas
de entre 115 y 127 grados centígrados durante un tiempo determinado. De
esta manera, se destruyen los microorganismos que habitan en ellos, tanto
los patógenos (aquellos que pueden causar enfermedades) como los no
patógenos. El objetivo no es otro que hacer más seguros los alimentos antes
de su consumo, así como alargar su vida útil y conservar mejor sus
nutrientes.
Cada producto tiene unas características distintas y eso determina el tipo de
técnica de esterilización al que deben ser sometidos, y las combinaciones de
temperatura y tiempo. La esterilización de alimentos se utiliza sobre todo en
mermeladas, almíbares, escabeches y guisados, entre otros.
 Fuente:
A: Soporte
Laboratorio
UniversaldeY Fisico-Quimico
Pinzas
8. ANEXOS
C A B
B: Kitasato
8.1 Reporte Fotográfico
C: Dos Pipetas

Figura 8.1-2 Material de Vidrio

NOMBRE FECHA UNIVERSIDAD CENTRAL DEL

ECUADOR
REALIZA Grupo N° 24-04-2018 FACULTAD DE INGENIERIA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍAN QUÍMICA
REVISA Vizuete E. 03-05-2018

ESCALA TEMA: ACONDICIONAMIENTO DE MATERIAL Y LÁMINA

MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN 01