Anales de botánica 105: 1141-1157, 2010

doi: 10.1093 / aob / mcq028, disponible en línea en www.aob.oxfordjournals.org

REVISIÓN: PARTE DE UN NÚMERO ESPECIAL SOBRE NUTRICIÓN VEGETAL

Absorción, asimilación y removilización de nitrógeno en plantas: desafíos

para una agricultura productiva y sostenible

Céline Masclaux-Daubresse *, Françoise Daniel-Vedele, Julie Dechorgnat, Fabien Chardon, Laure Gau fi chon
y Akira Suzuki
Institut Jean-Pierre Bourgin (IJPB) UMR 1318, INRA 78026 Versailles Cedex, Francia
* Por correspondencia. Correo electrónico masclaux@versailles.inra.fr

Recibido: 22 de septiembre de 2009 Devuelto para revisión: 13 de noviembre de 2009 Aceptado: 17 de diciembre de 2009 Publicado electrónicamente: 18 de marzo de 2010

Descargado de http://aob.oxfordjournals.org/ en la Universidad de Cape Breton el 20 de febrero de 2013

†Fondo La agricultura productiva necesita una gran cantidad de costosos fertilizantes nitrogenados. Por lo tanto, mejorar la eficiencia
del uso de nitrógeno (EUN) de las plantas de cultivo es de importancia clave. Las de fi niciones de EUN difieren dependiendo de si las
plantas se cultivan para producir biomasa o rendimiento de granos. Sin embargo, para la mayoría de las especies de plantas, la EUN
depende principalmente de cómo las plantas extraen el nitrógeno inorgánico del suelo, asimilan el nitrato y el amonio y reciclan el
nitrógeno orgánico. Se han realizado esfuerzos para estudiar la base genética, así como los mecanismos bioquímicos y enzimáticos
implicados en la absorción, asimilación y removilización de nitrógeno en cultivos y plantas modelo. La detección de los factores
limitantes que podrían manipularse para aumentar la EUN es el principal objetivo de dicha investigación.
†Alcance En esta revisión se presenta un examen general de los aspectos fisiológicos, metabólicos y genéticos de la
absorción, asimilación y removilización de nitrógeno. Se presentan las enzimas y los procesos reguladores manipulados
para mejorar los componentes NUE. También se discuten los resultados obtenidos de la variación natural y los estudios de
loci de rasgos cuantitativos.
†Conclusiones Esta revisión presenta la complejidad de NUE y apoya la idea de que la integración de los numerosos datos
provenientes de estudios de transcriptoma, genómica funcional, genética cuantitativa, ecofisiología y ciencia del suelo en
modelos explicativos del comportamiento de toda la planta será prometedora.

Palabras clave: Eficiencia en el uso de nitrógeno, removilización, loci de rasgos cuantitativos, variación natural, transportador de
nitrato, asimilación de amonio, glutamina sintetasa, senescencia foliar, reciclaje de nutrientes.

INTRODUCCIÓN envejecimiento, reciclaje y removilización. Para los cultivos, la EUN se ha

definido como el rendimiento de grano por unidad de nitrógeno disponible
Las plantas tienen una dependencia fundamental del nitrógeno inorgánico y
del suelo, incluido el fertilizante nitrogenado. ParaArabidopsis
anualmente se agregan al suelo entre 85 y 90 millones de toneladas métricas de
y otras plantas modelo, un índice de EUN fisiológico se expresa como la
fertilizantes nitrogenados en todo el mundo (Bien et al., 2004). El nitrógeno es uno
materia fresca o seca producida por contenido de nitrógeno en la
de los nutrientes más costosos de suministrar y los fertilizantes comerciales
planta (Bien et al., 2004). En ambos casos, NUE es el producto de la
representan el mayor costo en la producción de plantas. Además, existe una gran
eficiencia de absorción de nitrógeno (NupE) y la eficiencia de utilización
preocupación por la pérdida de nitrógeno en el campo, lo que da lugar a la
de nitrógeno (NUtE), que es la combinación óptima entre la eficiencia
contaminación del suelo y el agua. La captura incompleta y la conversión
de asimilación de nitrógeno (NAE) y la eficiencia de removilización de
deficiente de fertilizantes nitrogenados también provocan el calentamiento global
nitrógeno (NRE). Hasta ahora, la mayoría de los cultivares de plantas se
a través de las emisiones de óxido nitroso. Reducir el aporte de fertilizantes y la
han seleccionado en condiciones de nitrógeno no limitantes. La
reproducción de plantas con una mejor eficiencia en el uso de nitrógeno (EUN) es
reducción del aporte excesivo de fertilizantes sin afectar la
uno de los principales objetivos de la investigación sobre nutrición vegetal (Hirel
productividad plantea interrogantes sobre las respuestas adaptativas
et al., 2007). La capacidad de una planta para capturar nitrógeno del suelo
de tales cultivares a la baja disponibilidad de nitrógeno.
depende del tipo de suelo, el medio ambiente y la especie. Se ha estimado que del
Los mecanismos bioquímicos implicados en la captación, asimilación
50 al 70% del nitrógeno proporcionado al suelo se pierde (Hodge et al.,
y removilización de N se han estudiado ampliamente para identificar
los cuellos de botella asociados con la EUN. La genética cuantitativa
2000). Por lo tanto, mejorar la EUN es esencial para reducir los daños
también se lleva a cabo utilizando cultivos y plantas modelo para
debidos a la lixiviación de nitratos, la saturación del ecosistema y la
evaluar la base genética de la EUN. En esta revisión se presenta un
contaminación del agua. La NUE en las plantas es compleja y depende de la
examen general de los aspectos fisiológicos, metabólicos y genéticos
disponibilidad de nitrógeno en el suelo y de cómo las plantas usan el
de la EUN.
nitrógeno a lo largo de su vida. Como concepto, la EUN se expresa como
una relación de producción (N total de la planta, N de grano, rendimiento de
biomasa, rendimiento de grano) e insumo (N total, N del suelo o fertilizante
N aplicado). El aumento de la EUN y la limitación del uso de fertilizantes
FUENTES Y CONSUMO DE NITRÓGENO
nitrogenados son importantes y desafíos para preservar el medio ambiente Aunque generalmente es baja, la disponibilidad de nitrógeno del suelo puede
y mejorar una agricultura sostenible y productiva. fluctuar mucho tanto en el espacio como en el tiempo debido a factores como la
El uso de nitrógeno por las plantas implica varios pasos, incluida precipitación, la temperatura, el viento, el tipo de suelo y el pH. Por lo tanto, la
la absorción, asimilación, translocación y, cuando la planta está forma preferida en la que se absorbe el N depende de la adaptación de la planta.

# The Author 2010. Publicado por Oxford University Press en nombre de Annals of Botany Company. Reservados todos los derechos.
Para obtener permisos, envíe un correo electrónico a: journals.permissions@oxfordjournals.org
1142 Masclaux-Daubresse et al. -Nitrógeno en plantas agrícolas
a las condiciones del suelo. En general, las plantas adaptadas a un pH bajo y
suelos reductores como las que se encuentran en los bosques maduros o la
tundra ártica tienden a absorber amonio o aminoácidos, mientras que las plantas
adaptadas a un pH más alto y suelos más aeróbicos prefieren el nitrato (para una
revisión, verMaathuis, 2009).
La absorción de nitrato ocurre a nivel de la raíz y se ha demostrado
que dos sistemas de transporte de nitrato coexisten en las plantas y
actúan de manera coordinada para absorber el nitrato de la solución
del suelo y distribuirlo por toda la planta (Fig. 1) (revisión en
Daniel-Vedele et al., 1998; Tsay et al., 2007).
Generalmente se asume que la familia de genes NRT1 media el
sistema de transporte de baja afinidad (LATS) de la raíz, con la
excepción de AtNRT1.1, que es a la vez un transportador de doble
afinidad (Wang et al., 1998; Liu et al., 1999) y un sensor de nitrato (Ho
et al., 2009). EnArabidopsis, 53 genes pertenecen a la familia
NRT1. Entre ellos, 51 genes se expresan y exhiben diferentes
patrones de expresión tisular en toda la planta (Tsay et al.,
2007), sugiriendo una función especializada y única para al menos
algunos de ellos. AtNRT1.1 (antes Chl1) es el gen más estudiado y
fue el primero en ser aislado (Tsay et al., 1993). La proteína se
encuentra en la membrana plasmática y el gen se expresa en la
epidermis de las puntas de las raíces y en la corteza y la
endodermis en la parte más madura de la raíz (Huang et al., 1999).
AtNRT1.2 se expresa constitutivamente solo en la epidermis de la
raíz y participa en el sistema constitutivo de baja afinidad (Huang
et al., 1999). Una vez absorbido por las células de la raíz, el nitrato
debe transportarse a través de varias membranas celulares y
distribuirse en varios tejidos. AtNRT1.5, ubicado en la membrana
plasmática de las células del periciclo de la raíz cerca del xilema,
participa en el transporte a larga distancia de nitrato desde la raíz
hasta el brote (Lin et al., 2008). LaAtNRT1.4 El gen solo se expresa
en el pecíolo de la hoja, y en el mutante el nivel de contenido de
nitrato en el pecíolo es la mitad que en el tipo salvaje (Chiu et al.,
2004). LaAtNRT1.6 Se cree que el gen, expresado en el tejido
vascular de la silicona y el funículo, libera nitrato del tejido
materno al embrión en desarrollo (Almagro et al., 2008). Una
propiedad sorprendente de la familia NRT1 es que ciertos
miembros pertenecientes a la
grupo II (revisado en Tsay et al., 2007) son capaces, en
NRT2.7
NRT1.6
NRT1.4
AMT1; 2
AMT1; 1
AMT1; 3
NRT1.2
NRT2.1 AMT1; 5
NRT1.5
NRT2.2
NRT1.1
NAR2
FYO G. 1. Presentación esquemática de la localización conocida de NRT1, NRT2 y
AMT genes en Arabidopsis. Se ha demostrado que dos sistemas de transporte de nitratos
coexisten en las plantas y actúan de manera coordinada para absorber el nitrato de la
solución del suelo y distribuirlo por toda la planta. El papel de cada transportador de
amonio ha sido demostrado por el estudio de simple, doble, triple y cuádruple
mutantes.
sistemas heterólogos, para transportar no solo nitrato sino también dipéptidos o
tripéptidos, mientras que las proteínas OPT (transportador de oligopéptidos)
transportan tetra / pentapéptidos.
El sistema de transporte de alta afinidad (HATS), que actúa
cuando la concentración externa de nitratos es baja, se basa en la
actividad de la llamada familia NRT2 (revisada en Williams y Miller,
2001). Aunque queda por hacer la caracterización funcional de casi
todos los transportadores superiores de NRT2 de plantas, ahora
está bien documentado que AtNRT2.1, en interacción con una
proteína NAR2 (Orsel et al., 2006), es un componente importante
de HATS en Arabidopsis, como lo demuestra el hecho de que un
mutante interrumpido para el AtNRT2.1 gen ha perdido hasta
75% del NO de alta afinidad2 3 actividad de captación y mostró una
contenido inferior de nitrato de la hoja (Filete et al., 2001). Como consecuencia, el
crecimiento de estos mutantes se ve gravemente afectado a bajas
Descargado de http://aob.oxfordjournals.org/ en la Universidad de Cape Breton el 20 de febrero de 2013
NO32concentraciónOrsel et al., 2004, 2006). Una baja
El contenido de nitrato también se encontró en un clce mutante,
afectado en una proteína perteneciente a la Arabidopsis Familia
AtCLC (ChLoride Channel). De Angeli et al. (2006) han demostrado
que otro miembro de la familia, el vacuolar AtCLCa
proteína, se comporta como un NO2 3 /Hþ intercambiador que permite
acumulación de nitrato dentro de la vacuola. Mutantes de inserción
dentro delAtCLCa El gen exhibe un desarrollo normal pero muestra
una capacidad reducida para almacenar nitrato pero no otros aniones.
Este fenotipo también se encontró recientemente cuando la expresión
deAtNRT2.7 fue afectado. EstoAtNRT2 El gen se expresa en órganos
aéreos y también es altamente inducido en semillas secas. En dos
alélicosatnrt2.7 mutantes, se acumula menos nitrato en la semilla. Por
el contrario, las semillas de plantas que sobreexpresan el
AtNRT2.7 región codificadora acumulan más nitratos y, como
consecuencia, están menos latentes que las correspondientes semillas
de tipo silvestre (Chopin et al., 2007).
Estudios electrofisiológicos junto con el pH-dependiente
equilibrio entre el NH sin carga3 y NH cargadoþ 4
formas sugieren que el ion es predominante en todos los aspectos fisiológicos
condiciones cal y es la especie dominante para el transporte de
membrana controlado (Ludewig et al., 2007). Con la complementación
funcional de un mutante de levadura defectuoso en la captación de
metilamonio y los recientes esfuerzos para secuenciar el genoma de
especies modelo, se encontraron 6 genes pertenecientes a la misma
familia de transportadores de amonio enArabidopsis
(Gazzarini et al., 1999), 10 en arroz (Sonoda et al., 2003) - una
especie adaptada a la nutrición con amonio (Yoshida, 1981) - y
14 en álamo (Modisto et al., 2007). Para analizar la función de
cada uno de los genes AMT (transportador de amonio) por
separadoen planta, Se llevaron a cabo estudios fisiológicos y
de flujo de amonio en mutantes simples, dobles, triples y
cuádruples, obtenidos por inserción de T-ADN o por enfoque
de RNAi, o complementando el mutante cuádruple con genes
simples (Yuan et al., 2007). Se demostró una contribución
aditiva de cada proteína al transporte de amonio,AMT1.1
y AMT1.3 confiriendo una capacidad similar de 30-35% mientras
AMT1.2 confirió una capacidad menor de 18-25%. Un segundo
sistema de transporte saturable con un bajo Kmetro de 4,5 mMETRO y se
cree que una capacidad muy baja está codificada por el AMT1.5
gene. De estos estudios surge ahora un panorama complejo. Existe una
organización espacial de las proteínas AMT1 (Fig.1), los transportadores que
poseen las mayores afinidades por el amonio se encuentran en las células
radiculares externas o en los pelos radiculares, donde pueden absorber el
amonio de la solución del suelo (AMT1.1,
 Masclaux-Daubresse et al. -Nitrógeno en plantas agrícolas
AMT1.3, AMT1.5). La menor afinidad de AMT1.1, y su ubicación
en la endodermis a lo largo de la zona del pelo de la raíz,
sugiere una función en la recuperación del amonio que se
libera de la corteza o que ingresa a la raíz a través de la ruta
apoplásica. El gradiente electroquímico entre la vacuola y
el citosol impulsaría el NH3 importar a y NHþ 4 exportar fuera de
la vacuola. De hecho, las proteínas intrínsecas de tonoplast del TIP
Se demostró que la familia desempeña un papel en la NH3
transporte a la vacuolaLoque et al., 2005). Carga al vacío con NHþ
4 principalmente en el plastidio / cloroplasto por el llamado ciclo
debe requerir un transportador de amonio electrogénico, que aún no
se ha identificado.
Hasta ahora, se han identificado supuestos transportadores de aminoácidos
de plantas como miembros de al menos cinco familias de genes. En
Arabidopsis Estos comprenden al menos 67 genes (revisados en
Rentsch et al., 2007). Las especificidades de sustrato, así como los patrones
de expresión génica o la localización subcelular de la proteína, pueden dar
una buena indicación de la función de cada proteína. Se utilizaron enfoques
genéticos directos e inversos para identificar los transportadores implicados
en la absorción de aminoácidos de la raíz (Hirner et al.,
2006; Svennerstam et al., 2007). Ambos estudios llevaron a la
conclusión de que LHT1 (transportador de lisina / histidina), que
pertenece a la familia ATF (transporte de aminoácidos), es crucial para
la absorción de aminoácidos ácidos y neutros por las raíces. También
se demostró que la proteína AAP1 (permeasa de aminoácidos 1)
transporta aminoácidos no cargados, pero solo cuando se suministran
en altas concentraciones en el medio externo (Sotavento et al.,
2007). Captación de aminoácidos catiónicos comoL-lisina o
L-La arginina está mediada por AAP5 dentro del rango de concentración
relevante para las condiciones de campo (Svennerstam et al.,
2008). La localización precisa de estos ARNm transportadores
dentro de diferentes tipos de células en la raíz llevóNäsholm et al.
(2009) proponer un modo hipotético de absorción de aminoácidos de
las raíces en plantas no micorrizadas.
ASIMILACIÓN DE NITRÓGENO: CROSS-TALK
CON METABOLISMO DE CARBONO
Las fuentes de nitrógeno absorbidas por las plantas superiores
son el nitrato o el amonio como fuentes de nitrógeno inorgánico y
los aminoácidos en condiciones particulares de composición del
suelo. La asimilación de nitrógeno requiere la reducción de nitrato
a amonio, seguida de la asimilación de amonio a aminoácidos (Fig.
2A).
La reducción de nitratos tiene lugar tanto en raíces como en
brotes, pero está espacialmente separada entre el citoplasma
donde tiene lugar la reducción y los plástidos / cloroplastos donde
se produce la reducción de nitritos. La reducción de nitrato a
nitrito es catalizada en el citosol por la enzima nitrato reductasa
(NR) (Meyer y Stitt, 2001). Esta enzima es un homodímero, cada
monómero está asociado con tres grupos protésicos: dinucleótido
de flavina y adenina (FAD), un hemo y un cofactor de molibdeno
(MoCo). La caracterización de mutantes resistentes al clorato, que
pueden ser reducidos a clorito tóxico por NR, identificó dos clases
de genes, elNia genes que codifican la apoenzima NR y la Cnx
genes que codifican el cofactor MoCo. Desde
1993, se ha realizado un trabajo considerable para caracterizar el
NR en diferentes especies (revisado por Meyer y Stitt, 2001).
Aunque se cree que la enzima NR está localizada en el citosol, se
ha encontrado una asociación con la membrana plasmática (PM-
NR) en las raíces del maíz y la cebada (pabellón et al., 1989).
1143
Después de la reducción de nitrato, el nitrito se transloca
al cloroplasto donde se reduce a amonio por la segunda
enzima de la vía, la nitrito reductasa (NiR). LaNii
Los genes que codifican la enzima NiR se han clonado
de varias especies, y el número de genes varía de una a
dos copias (Meyer y Stitt, 2001).
El amonio, procedente de la reducción de nitratos, y también de
la fotorrespiración o el reciclado de aminoácidos, se asimila
GS / GOGAT (Lea y Mi fl in, 1974; Lea y Forde, 1994). La glutamina
sintetasa (GS) fija el amonio en una molécula de glutamato para
formar glutamina. Esta glutamina reacciona posteriormente con
2oxoglutarato para formar dos moléculas de glutamato, este paso
es catalizado por la glutamina 2-oxoglutarato aminotransferasa (o
glutamato sintasa, GOGAT). La estructura decamérica del maíz GS
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fue descrita porUnno et al. (2006). Dos clases de genes nucleares
codifican GS: elGLN2 y GLN1
genes. GLN2, presente como un solo gen nuclear en todas las
especies estudiadas hasta ahora, códigos para el cloroplástico
GS2, que se cree que está involucrado en la asimilación primaria de
amonio procedente de la reducción de nitratos tanto en C3 y C4
plantas y en la reasimilación del amonio producido a partir de
fotorrespiración en C3 plantas. La magnitud del amonio
fl ujo a través de la vía de fotorrespiración en las hojas de C3
De hecho, se estimó que las plantas excedían a las producidas
reducción de nitratos de cinco a diez veces (Llaves et al., 1978). Por el
contrario, elGLN1 códigos de la familia de genes para las isoformas
GS1 citosólicas, presentes en diferentes órganos como raíces o tallos y
que se cree que están involucradas en el reciclaje de amonio durante
etapas particulares del desarrollo como la senescencia de la hoja y en
la síntesis de glutamina para el transporte a la savia del floema
Bernard y Habash, 2009). En las plantas están presentes dos formas
diferentes de glutamato sintasa: Fd-GOGAT y NADH-GOGAT usan
ferredoxina y NADH como donantes de electrones, respectivamente (
Vanoni et al., 2005). Fd-GOGAT se localiza predominantemente en
cloroplastos foliares, mientras que NADHGOGAT se localiza
principalmente en plástidos de tejidos no fotosintéticos, como raíces,
tejidos foliares etiolados y células acompañantes. Las propiedades
estructurales, mecánicas y reguladoras de las enzimas GOGAT y su
papel en el metabolismo de los aminoácidos han sido revisadas por
Suzuki y Knaff (2005).
Además del ciclo GS / GOGAT, probablemente tres enzimas
participan en la asimilación del amonio. La asparagina sintetasa
(AS) citosólica cataliza la transferencia dependiente de ATP del
grupo amido de la glutamina a una molécula de aspartato para
generar glutamato y asparagina (Fig.2A; Justicia et al.,
2003). Masclaux-Daubresse et al. (2006) proporcionó evidencia
que unaþS también puede usar amoníaco como sustrato. De hecho, proporcionando
NUEVA HAMPSHIRE4 a discos de hojas en presencia de azaserina, los autores
15
bloqueó la biosíntesis de glutamato pero no la biosíntesis de
asparagina, lo que demuestra que la producción de asparagina no
depende de la aminotransferasa. EnArabidopsis, tres genes codifican
AS (ASN1, ASN2 y ASN3). La asparagina tiene una relación N / C más
alta que la glutamina y puede usarse como un compuesto de
transporte y almacenamiento de largo alcance, especialmente en
legumbres (Rochat y Boutin 1991; Justicia et al., 2003). En determinadas
situaciones, el AS podría compensar la reducción de la actividad
asimiladora de amonio dependiente de GS.
La carbamoilfosfato sintasa (CPSasa) forma
carbamoilfosfato, un precursor de citrulina y arginina, dentro
1144 Masclaux-Daubresse et al. -Nitrógeno en plantas agrícolas

A
Citosol

glutamato
glutamato
aspartato
GOGAT

asparagina asparagina glutamato

glutamina
COMO COMO

glutamina GS2
glutamina
o NH +4 NiR NH 4+

GS1 O-2
norte
CPSase
translocación
Savia de floema

carbamoilfosfato

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NO-2

NR arginina (almacenamiento)

- Plástido
NO3 H 4+
norte

B
GLU GLN ASN

Savia de floema

Cloroplasto

Desmantelamiento

Respiración

Vacuola
SAV
Proteólisis
Mitocondria

glutamina

Aminoácidos
glutamato NH 4+

GS1 GDH

glutamato NH 4+

GS1
NH 4+ NH 4+

N removilización
asparagina GLN
Citosol
COMO

FYO G. 2. Presentación esquemática de las enzimas clave involucradas en el manejo del nitrógeno en (A) hojas jóvenes y (B) senescentes. (A) La nitrato reductasa (NR) y la asparagina
sintetasa (AS) están localizadas en el citosol, y la nitrito reductasa (NiR), la glutamina sintetasa 2 isoenzima (GS2), la glutamato sintasa (GOGAT) y la carbamoilfosfato sintetasa (CPSasa)
dentro de los plástidos de células del mesófilo. La glutamina sintetasa isoenzima 1 (GS1) y AS se encuentran en el citosol de las células compañeras. (B) Los eventos asociados a la
senescencia incluyen la degradación del cloroplasto y la translocación de las proteínas de los plástidos a la vacuola central a través del tráfico de vacuola asociada a la senescencia
(SAV). El reciclaje de aminoácidos se produjo en las mitocondrias y el citosol de las células mesófilas y las células compañeras.
La glutamato deshidrogenasa (GDH), GS1 y AS son las principales enzimas implicadas en la síntesis de glutamina, glutamato y asparagina en el floema.

plastidios que utilizan bicarbonato, ATP y amonio o el grupo amida para GDH en células vegetales se ha informado que es la desaminación
de la glutamina. EnArabidopsis, una sola copia de cada uno de del glutamato (Masclaux-Daubresse et al., 2006; Purnell y Botella, 2007
cocheA y de cocheB codifican la subunidad pequeña y la subunidad ). Se demostró que la actividad de GDH es esencial para la
grande de CPSasa, respectivamente, para formar una sola enzima supervivencia de las plantas en condiciones de oscuridad (Miyashita y
heterodimérica (Potel et al., 2009). Good, 2008). NR, NiR y GOGAT requieren poder reductor como NADH o
Finalmente, la NADH-glutamato deshidrogenasa mitocondrial ferredoxina (Fdx) según la enzima. La glutamina sintetasa y la
podría incorporar alternativamente amonio en glutamato en asparagina sintetasa necesitan ATP. Además, los esqueletos de
respuesta a altos niveles de amonio bajo estrés (Skopelitis et al., carbono y especialmente los cetoácidos son esenciales para formar
2006). Sin embargo, la principal actividad catalítica nitrógeno orgánico como aminoácidos. La
 Masclaux-Daubresse et al. -Nitrógeno en plantas agrícolas
la disponibilidad de esqueletos de carbono para la condensación de
amonio y el suministro de ATP, Fdx y NADH como productos de las vías
de fotosíntesis, respiración y fotorrespiración son, por tanto, esenciales
para la asimilación de nitrógeno.
REMOBILIZACIÓN DE NITRÓGENO: UN FACTOR CLAVE
PARA UNA EFICIENCIA DE USO DE NITRÓGENO
Removilización de nitrógeno y dilema de rendimiento
Las proteínas de las hojas y, en particular, las proteínas fotosintéticas de los
plástidos se degradan en gran medida durante la senescencia, lo que
proporciona una enorme fuente de nitrógeno que las plantas pueden
aprovechar para complementar la nutrición de los órganos en crecimiento,
como hojas y semillas nuevas. La removilización de nitrógeno se ha
estudiado en varias especies de plantas mediante el método de
'removilización aparente', que es la determinación de la cantidad de
nitrógeno total presente en los diferentes órganos de la planta en diferentes
momentos de desarrollo y a través de15N etiquetado a largo plazo, que
permite la determinación de fl ujos (Gallais et al., 2006). EnArabidopsis y
colza, se ha demostrado que el nitrógeno se puede removilizar de las hojas
senescentes a las hojas en expansión en la etapa vegetativa, así como de las
hojas senescentes a las semillas en la etapa reproductiva (Malagoli et al.,
2005; Diaz et al., 2008;
Lemaˆı̂tre et al., 2008). EnArabidopsis, Para las cuales las fases de
senescencia secuencial (en la etapa vegetativa) y monocárpica
(después de la floración) se pueden distinguir fácilmente, se demostró
que la tasa de removilización de N se correlacionó con la severidad de
la senescencia de la hoja solo en la etapa vegetativa (Diaz et al., 2008).
Experimentos de15El rastreo de N en la etapa reproductiva mostró que
la tasa de removilización de nitrógeno de las rosetas a los órganos en
flor y a las semillas fue similar en las líneas de senescencia temprana y
tardía (Diaz et al., 2008). En la etapa reproductiva, la NRE se relaciona
principalmente con el índice de cosecha (C. Masclaux-Daubresse, res.
No publicada).
Estudios usando 15El rastreo de N en cereales, colza y legumbres
mostró que el inicio del llenado del grano fue un factor crítico.
fase porque la captación de N y N2 la fijación disminuyó durante la
maduración de la planta y el llenado de semillas (Salón et al., 2001).
Flujos de nitrógeno y 15N experimentos de removilización realizados por
Cliquet et al. (1990) demostraron que las láminas de las hojas, los tallos, la
mazorca, la cáscara y el vástago sirven sucesivamente como sumideros de N
y fuentes de N. La captación y asimilación de nitrógeno durante el período
de llenado del grano es generalmente insuficiente para la alta demanda de
las semillas, y los pasos de removilización progresivos y numerosos, que
ocurren sucesivamente en los diferentes órganos de la planta, son
necesarios para dirigir el nitrógeno a las semillas. La contribución de la
removilización de N de las hojas al contenido de N de los granos de arroz,
trigo o maíz depende del cultivo, variando del 50 al 90% (Masclaux et al.,
2001). La removilización de N también depende del medio ambiente y se
favorece si se limita el suministro de nitratos (Lemaˆı̂tre et al., 2008). Aunque
15La removilización de N es un mecanismo paso a paso que involucra a los
diferentes órganos de la planta, la evidencia muestra que el contenido de
nitrógeno del grano se correlaciona con la senescencia de la hoja de
bandera en el maíz, el trigo y la cebada. La senescencia de la hoja bandera
parece entonces tener un papel especial en la disponibilidad de nitrógeno
para el llenado del grano. Es probable que el inicio y la velocidad de la
senescencia de la hoja bandera sean esenciales para NRE (Martín et al., 2005
; Uauy et al., 2006). La senescencia foliar no solo es esencial para la
movilización de nitrógeno. La evidencia tiene
1145
demostró que la senescencia de las hojas también es importante para el
rendimiento. Retrasar la senescencia de las hojas resulta en una
prolongación de la fotosíntesis que aumenta el rendimiento de grano y el
llenado de carbono en las semillas. Las plantas reproductoras tienen que
afrontar el dilema de que el retraso en la senescencia podría conducir a
mayores rendimientos, pero también a una disminución de la NRE y a una
disminución del contenido de proteína del grano. Por otro lado, aumentar la
removilización de nitrógeno tiene la ventaja de reutilizar el nitrógeno de las
partes vegetativas y reducir la pérdida de nitrógeno en los restos secos.
Fuentes de nitrógeno para la removilización de N
Los cloroplastos son la principal fuente de nutrientes utilizados
durante la senescencia. Rubisco representa el 50% del total soluble
contenido de proteína en las hojas de C3 plantas y 20% en C4
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plantasMae et al., 1983; sabio et al., 1987). Juntos con
Otras proteínas relacionadas con la fotosíntesis, Rubisco es una fuente
importante de nitrógeno para la removilización. Por tanto, la sobreinversión
en Rubisco es importante para la gestión de fuentes de nitrógeno a nivel de
toda la planta.
Aunque los cloroplastos muestran los primeros síntomas de deterioro
durante la senescencia, mientras que otros orgánulos se degradan más
tarde, los mecanismos responsables de la degradación del cloroplasto son
en gran parte desconocidos. El desmantelamiento del cloroplasto no
significa una descomposición caótica. Se necesita una degradación
controlada y coordinada para prevenir el daño celular debido a la naturaleza
altamente fotodinámica de algunos de los productos de degradación y para
mantener la capacidad de exportación y la removilización. Es probable que
los pasos iniciales de la degradación de las proteínas de clorofila y
cloroplasto tengan lugar dentro del propio plastidio (revisión deMartinez et
al., 2008). Los pasos posteriores pueden tener lugar dentro de la vacuola
central.
La degradación de las proteínas del cloroplasto dentro del orgánulo
está respaldada por el hecho de que los cloroplastos contienen un
número bastante elevado de proteasas, algunas de las cuales se
regulan positivamente durante la senescencia. Las proteasas
cloroplásticas DegP y FstH parecen ser responsables de la degradación
de la proteína D1 durante la senescencia. La proteasa FstH6 puede
estar implicada en la degradación de LHCII (para una revisión, consulte
Martinez et al., 2008). Los procesos exactos que conducen a la
degradación de Rubisco siguen sin estar claros. Se demostró que los
plástidos aislados de las hojas senescentes pueden degradar las
proteínas fotosintéticas hasta cierto punto, particularmente a la luz (
Feller et al., 2008). La proteólisis podría iniciarse por los efectos nocivos
de las especies reactivas de oxígeno (ROS) sobreproducidas dentro del
orgánulo durante la senescencia (Zimmermann y Zentgraf, 2005). Los
efectos tóxicos de las ROS generalmente se equilibran con una batería
de enzimas antioxidantes. Durante la senescencia de la hoja, este
equilibrio se altera y puede ocurrir una sobreproducción de ROS. Se
demostró que la degradación de proteínas estromales como Rubisco y
glutamina sintetasa cloroplástica (GS2) generada a través de la acción
de ROS libera productos de degradación de 37 y 16 kDa y 39 y 31 kDa,
respectivamente (Ishida et al., 1997; Palatnik et al., 1999).
La proteasa aspártica inducida por la senescencia CND41
codificada por el genoma nuclear se ha localizado específicamente
en el cloroplasto y un in vitro El análisis con fi rmó que CND41
mostró una actividad proteolítica de Rubisco a pH fisiológico (Kato
et al., 2005). Sin embargo, los datos sugieren que CND41 no podría
actuar sobre Rubisco a menos que se desnaturalice su estructura.
Por tanto, Rubisco activo en el cloroplasto sería resistente
1146 Masclaux-Daubresse et al. -Nitrógeno en plantas agrícolas
a la degradación catalizada por CND41 hasta que comenzó la
senescencia de la hoja. Homólogos CND41 identi fi cados enArabidopsis
se acumulan con el envejecimiento. Su papel en la regulación
de la rotación y la senescencia de Rubisco enArabidopsis
queda por estudiarKato et al., 2005; Diaz et al., 2008).
Parece probable que la degradación de la proteína del cloroplasto
comience dentro del plastidio, pero es mucho menos claro si las
proteasas cloroplásticas conducen la degradación de la proteína hasta
el final. La vacuola central que permanece intacta y para la que se
mantiene la compartimentación durante la senescencia podría ser el
punto final de la degradación de las proteínas del cloroplasto. El
aumento de los niveles de ARNm de la proteasa vacuolar en las hojas
senescentes está bien de acuerdo con este escenario (Martinez et al.,
2008). Se proponen varias rutas posibles para la internalización de los
componentes del cloroplasto por la vacuola central, como el tráfico de
autofagosomas y vesículas asociadas a la senescencia (SAV).
La autofagia es un proceso bien conocido en levaduras y animales,
pero solo se ha establecido recientemente en plantas. La
macroautofagia implica la formación de autofagosomas, que son
estructuras de doble membrana unidas que encierran macromoléculas
y residuos de orgánulos. El análisis del transcriptoma ha demostrado
que la mayoría de los genes de autofagia se regulan positivamente
durante la senescencia y en respuesta a la limitación de nitrógeno (
Thompson y Vierstra, 2005; Wingler et al., 2009). Chiba et al. (2003)
demostró que Rubisco se libera del cloroplasto en cuerpos que
contienen Rubisco (RCB) en hojas naturalmente senescentes. La
concanamicina A es un inhibidor de vacuolar Hþ-Actividad ATPasa
que bloquea la degradación del autofagosoma. Cuando hojas de
transgénicoArabidopsis las plantas que expresan proteínas fl
uorescentes dirigidas al estroma se incubaron con concanamicina
A, se observaron cuerpos esféricos que exhibían fl uorescencia
específica de proteínas dentro de la luz vacuolar. Sin embargo,
estos cuerpos, que corresponden a los RCB, no se observaron en
las hojas tratadas con concanamicina A delatg5
Mutante de inserción de ADN-T alterado para la autofagia. Además, las
proteínas DsRed dirigidas al estroma yGFP-ATG8 Las proteínas de fusión se
observaron juntas en cuerpos autofágicos dentro de la vacuola. Los autores
concluyeron que Rubisco y las proteínas del estroma se pueden movilizar a
la vacuola a través de un proceso autofágico dependiente del gen ATG sin
destrucción previa del cloroplasto (Ishida y Yoshimoto, 2008). Actualmente
se acepta el papel de la autofagia en el reciclaje de proteínas celulares,
aunque la senescencia prematura de las hojas y la degradación acelerada
del cloroplasto observadas en las líneas de eliminación de autofagia no se
conocen bien. Como lo demuestran los estudios en animales y levaduras, la
autofagia podría tener un doble papel en la prevención o el
desencadenamiento de la muerte celular dependiendo de su ajuste fino. Al
eliminar los desechos celulares, la autofagia podría ser esencial para la
longevidad celular. Por el contrario, una actividad de autofagia excesiva
podría provocar la muerte celular.
Los SAV se diferencian de los autofagosomas en que ocurren solo en
células que contienen cloroplasto, mientras que se han observado
autofagosomas en células de hojas y raíces (Otegui et al., 2005;
Xiong et al., 2005). Al igual que con los RCB, la evidencia ha demostrado
que los SAV contienen proteínas de cloroplasto como Rubisco y GS2 (
Martinez et al., 2008). Debido a su alta actividad proteasa, los SAV son
un sitio probable para la degradación de las proteínas del cloroplasto.
La cisteína-proteasa asociada a la senescencia codificada por el
SAG12 (gen asociado a la senescencia) gen se ha detectado en
SAV (Otegui et al., 2005). SAG12 puede entonces participar en
la intensa actividad proteolítica contenida en este tipo de
vesícula. Debido a que SAG12 es el único SAG cuya expresión está
exclusivamente controlada por la senescencia natural, se ha propuesto
un papel específico de SAV en el proceso de senescencia natural. Es
probable que la regulación de la proteólisis durante la senescencia
integre la regulación de las proteasas cloroplásticas y vacuolares y la
regulación de varias vías de tráfico.Desclos
et al. (2009) mostró que durante la fase de removilización de nitrógeno
que ocurre en la senescencia de la hoja de colza, la regulación a la baja
de un inhibidor de proteasa llamado BnD22 es paralelo al aumento de
numerosas proteasas, incluida la SAG12. Por tanto, el estado de
activación de la proteasa podría controlarse estrictamente durante el
desarrollo de la hoja en relación con la removilización del NEtienne
et al., 2007; Desclos et al., 2009).
Absorción y metabolismo de nitrógeno vegetal durante la senescencia
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Dependiendo de la especie, la absorción de nitrógeno podría
regularse negativamente o incluso en algunos casos inhibirse
totalmente durante la producción de semillas. Por ejemplo, en la
colza, la transición entre las fases vegetativa y reproductiva se
caracteriza por una disminución drástica de HATS y HATS.þ
Actividades LATS (Malagoli et al., 2004). Este cambio se correlaciona
con una fuerte represión de la expresión génica, laBnNRT2
ARNm indetectable en la etapa de floración (Beuve et al.,
2004). Por el contrario, en el maíz, la absorción de nitrógeno posterior a la
formación de seda aporta entre el 30% y el 70% del N total en las semillas,
según el medio ambiente y el genotipo (Coque y Gallais, 2007). En
Arabidopsis, cuando las plantas se cultivan con un suministro de N no
limitante (10 mMETRO nitrato), entrada de nitrato (HATS þ LATS) es menor
en la etapa reproductiva que en la vegetativa, pero aún opera durante
la maduración de la semilla (Fig. 3). Este flujo de entrada residual se
correlaciona con una expresión disminuida pero significativa de ambos
NRT2.1 y NRT1.1 genes (Fig. 3B; J. Dechorgnat
et al., unubl. res.). Sin embargo, debido a esta disminución en las actividades
de absorción de N, es necesaria otra fuente de nitrógeno, como la
removilización, para hacer frente a la fuerte demanda de N del llenado de
semillas.
Existe evidencia de que las plantas comparten mecanismos comunes de
removilización de N, ya sean monocotiledóneas, dicotiledóneas
ledonous, C3 o C4 tipos de fotosíntesis. La acumulación de N en
el grano generalmente parece estar regulada por el N
fuente. En el trigo, la cinética del contenido de Rubisco y la acumulación de
N del grano sugieren que durante el llenado del grano, la translocación de N
de los órganos vegetativos está principalmente limitada por la
disponibilidad del sustrato en los órganos fuente (Bertheloot et al.,
2008y referencias en el mismo). Para investigar si la NRE está
controlada por la disponibilidad de la fuente o por los procesos de
transferencia ubicados en las hojas de la fuente y la eficiencia de la vía
del floema, se han utilizado enfoques genómicos funcionales y
mutantes.
Se han identificado genes que codifican enzimas implicadas en el
metabolismo del nitrógeno y que se inducen específicamente durante la
removilización del N (Masclaux et al., 2001; Buchanan-Wollaston et al.,
2003; Guo et al., 2004). Estas enzimas son un foco principal de los
fisiólogos vegetales, con especial énfasis en la glutamina sintetasa
citosólica (GS1), glutamato deshidrogenasa (GDH) y AS (revisado
porMasclaux-Daubresse et al., 2008). La asimilación y el reciclaje
de nitrógeno en las hojas jóvenes tiene lugar principalmente
dentro del cloroplasto donde se produce la reducción de nitritos y
el amonio es asimilado por el ciclo GS / GOGAT.
 Masclaux-Daubresse et al. -Nitrógeno en plantas agrícolas 1147

A B NRT2-1
1200

Entrada de nitrato (µmol 15N h–1 gramo–1 de raíz d. peso)

30

1000
25

Expresión (% TUB4)
800
20

600
15
NRT1-1
10 400

5 200

0 0

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Veg. Repro. Veg. Repro. Veg. Repro.

FYO G. 3. Absorción de nitratos (HATS þ LATS) es menor durante la maduración de la semilla que en la etapa vegetativa, pero aún opera. (A) In fl ujo de nitrato de raíz en plantas en el
etapa vegetativa (Vegetal) y reproductiva (Repro.). La entrada de nitrato se midió suministrando 6 m15NO2 METRO
3 durante 5 min a plantas cultivadas con 10 mMETRO nitrato. (B)
Expresión de NRT1-1 (izquierda) y NRT2-1 (derecha) genes, en la etapa vegetativa (Vegetal) y reproductiva (Repro.). La expresión de genes transportadores de nitratos fue
medido mediante PCR cuantitativa y expresado como porcentaje del gen de la tubulina 4, utilizado como control.

que involucra al cloroplástico GS2 y Fd-GOGAT (Fig. 2A). La células y que las plantas mutantes acumulan amidas en sus hojas
descomposición del cloroplasto durante la senescencia implicade facto viejas. Sin emabargo,15Los experimentos de marcaje con N no
Proteólisis de NiR, GS2 y GOGAT. En las hojas senescentes, el reciclaje y la mostraron diferencias significativas entre el mutante y el tipo salvaje
reasimilación del nitrógeno deben ser catalizados por enzimas distintas de para la removilización de N (J. Lothier et al., INRA, Versalles, Francia,
las cloroplásticas. El modelo metabólico propone que la glutamina se inédito. res.).
sintetiza principalmente en las hojas senescentes por las isoformas GS1 Entre los cinco genes que codifican GS1 (Gln1-1 a Gln1-5) en
recién expresadas (Fig.2B). Usando la reserva de aminoácidos liberada a maíz, solo Gln1-4 se regula al alza durante la senescencia (Martín
través de la proteólisis de las proteínas del cloroplasto, una serie de et al., 2005, 2006). Gln1-3 y Gln1-4 se han aislado
reacciones de transaminación conduciría a un aumento en la reserva de mutantes knockout (Martín et al., 2006). Lagln1-3, gln1-4
glutamato que podría servir inmediatamente como sustrato para GDH, y gln1-3.gln1-4 los mutantes dobles mostraron una fuerte reducción
desaminando la actividad proporcionando 2oxoglutarato y amoníaco. El del rendimiento de los granos mientras que la concentración de
amoníaco liberado de esta manera es a su vez reasimilado por GS1 para nitrógeno en los granos aumentó. Lagln1-3 y gln1-4.gln1-3 Los
producir glutamina para la exportación. La importancia de GS1 en el manejo mutantes acumularon gran cantidad de aminoácidos y amoniaco en la
del nitrógeno, la tasa de crecimiento, el rendimiento y el llenado de granos hoja de origen ubicada debajo de la mazorca y dedicada a la
ha sido enfatizada por los enfoques de genómica funcional y loci de rasgos alimentación del grano. La acumulación de aminoácidos en la hoja se
cuantitativos (QTL) realizados principalmente en arroz y maíz (Hirel et al., debió principalmente a un aumento en los niveles de glutamato y
2001; Obara et al., asparagina como consecuencia de una disfunción en la exportación de
2004; para una revisión verBernard y Habash, 2009). La correlación N que redujo la concentración total de aminoácidos y especialmente
entre la actividad de GS y la cantidad de N removilizado desde el las cantidades de glutamina en la savia del floema de los mutantes.
brote hasta el grano se demostró en trigo utilizando cultivares que Curiosamente, elGln1-4 locus co-localizado con un QTL de maíz para el
exhibían NUE (Kichey et al., 2007) y utilizando un enfoque genético peso de mil granos, y el Gln1-3 locus co-localizado con dos QTL para un
cuantitativo (Habash et al., 2007). Sin embargo, el papel de la peso y rendimiento de mil granos. Más recientemente,15N
enzima GS1 es complejo: existen numerosas isoformas codificadas experimentos de rastreo mostraron que el Gln1-2 y Gln1-4 loci co-
por una familia multigénica. En el arroz, se han identificado tres localizados con un QTL para la removilización de N (Hirel et al.,
genes, mientras que el maíz y elArabidopsis 2001; Coque et al., 2008). El rol deGln1-2 queda por
contener cinco GLN1 genes que codifican GS1 (Bernard y Habash, determinar.
2009). Estos genes no están regulados de manera similar y las En el arroz, carecen de mutantes OsGS1.1 se vieron gravemente afectados en
isoformas GS1 se encuentran en diferentes tejidos vegetales y no la tasa de crecimiento y el llenado de granos. La concentración total de
tienen las mismas propiedades cinéticas (Ishiyama et al., 2004). aminoácidos libres se redujo en las láminas de las hojas de este mutante debido a
Por tanto, está claro que no todas las isoformas de GS1 participan los bajos niveles de glutamina. LaOsGS1.1 El producto génico, que se encuentra
por igual en la removilización del N. en las células acompañantes y en las células del parénquima de los tejidos de las
En Arabidopsis, Los datos transcriptómicos muestran que todos GLN1 hojas, probablemente sea responsable de la generación de glutamina para la
genes excepto GLN1.5 son inducidos por la senescencia de las hojas (Guo removilización a través del floemaObara et al., 2001, 2004).
et al., 2004). GLN1.1 fue inducida más de cinco veces. La genómica Los esfuerzos para estudiar el manejo del nitrógeno durante la
funcional está en progreso para determinar el grado de participación senescencia de las hojas se han centrado principalmente en GS1 y, en
de cada uno de los cuatro factores inducidos por la senescencia. menor medida, en GDH. Sin embargo, muchos datos apoyan la idea de que
GLN1 genes en la removilización de N. Nuestros resultados recientes en GS1 y GDH no son los únicos factores limitantes en la removilización de N
gln1.2 mutantes muestran que GLN1.2 se expresa en compañero (para una revisión, consulteMasclaux et al., 2001). Transcriptómica
1148 Masclaux-Daubresse et al. -Nitrógeno en plantas agrícolas

A B

T1
TT0 15
1 Plantas marcadas con N
Hojas nuevas
15norte

Rosetón Rosetón

Raíces Raíces
Período de persecución
Col0 asn1 Col0 asn1
2 semanas 14norte

Periodo de etiquetado
5 semanas 15norte

Descargado de http://aob.oxfordjournals.org/ en la Universidad de Cape Breton el 20 de febrero de 2013

Día 0 Col0
Período de persecución
120 T0 14norte asn1
C T1

(como% de toda la planta)

partición en brotes
0·7
100
2·5
0·6 80
PESO 2·0
0·5 METRO 60
0·4 15 40
0·3
1·0 20
15N

0·2
0
0·5 Rosetón Rosetón Hojas nuevas
0·1
(mismas hojas (T0-T1)
0 0 como T0)
Índice de cosecha (HI) PAG% 15norte PAG% 15N / HI

FYO G. 4. La asparagina sintetasa AS1 podría desempeñar un papel en el reciclaje y la movilización de nitrógeno. (A) Fenotipos deasn1 mutante (Gabi 829B05) y Col0 de tipo salvaje
cultivado en invernadero con 10 mMETRO nitrato. (B) Cultivado hidropónicamenteasn1 mutante (Gabi 829B05) y Col0 se marcaron usando 15NO2 3 -que contiene sol nutritivo
ución durante 4 semanas (desde la siembra hasta el final del período de pulso T0). A T0, las plantas fueron transferidas a un 15NO2 3 -La solución libre y el período de persecución se realizaron durante 2
semanas (T1 ¼ T0 þ 2 semanas). AT1, partición de 15N (15N%, como porcentaje de la planta entera) en raíces, roseta (ya surgida en T0) y hojas nuevas (surgieron
Entre T0 y T1) fue monitoreado en ans1 mutante y Col0. Removilización de nitrógeno de la roseta a las hojas nuevas que se producen durante el período de persecución (T0 a T1)
fue más alto en asn1 mutante que en el tipo salvaje, como lo demuestra la mayor disminución de 15N% en roseta y mayor 15N% en hojas nuevas de mutante. (C) nitrógeno
La removilización de los tejidos vegetativos a las semillas se controló de acuerdo con Diaz et al. (2008). 15El marcado con N se realizó una vez en la etapa vegetativa. Al final del ciclo de
la planta, se registró el peso seco de las semillas y los restos secos y se utilizó para calcular el índice de cosecha (HI, peso seco de la semilla como porcentaje del peso seco de la planta
entera). La cantidad de15El N removilizado de la roseta a las semillas se estimó mediante el cálculo de 15Partición de N en semillas (P%15NORTE;
15N en semillas como porcentaje del total 15N en toda la planta). Comparando P%15Las relaciones N / HI facilitan la comparación entre plantas con diferentes HI. El mutante (M) mostró

un HI significativamente más alto que el tipo salvaje (WT) y podría verse afectado por la removilización de N en las semillas, como se muestra por su nivel ligeramente más bajo
PAG%15Relación N / HI. Tal hallazgo preliminar necesita con fi rmación usando un segundo alelo mutante.

Los estudios de senescencia foliar han demostrado que durante la La removilización de nitrógeno de las hojas viejas a las más
senescencia también se inducen varios genes de aminotransferasa jóvenes fue mayor en el asn1 mutante que en el tipo
y AS. En girasol, la expresión de dos genes AS (HAS1 y HAS1.1) salvaje. Tal hallazgo está de acuerdo con la relación entre la
detectado solo durante la senescencia de la hoja, cuando aumentaron las severidad de la senescencia foliar y la NRE en la etapa
cantidades de asparagina, sugieren un papel de estas enzimas en la vegetativa descrita porDiaz et al. (2008) y sugiere que la N-
removilización del N (Herrera-Rodríguez et al., 2006). EnArabidopsis, entre removilización de hoja a hoja no depende solo de
los tres genes de la asparagina sintetasa ASN1. Por el contrario, encontramos que 15La removilización de N de la
ASN1, ASN2 y ASN3, solo uno se sobreexpresa durante la senescencia roseta a las semillas se vio ligeramente afectada en el asn1 mutante
de la hoja (Justicia et al., 2003; Buchanan-Wollaston et al., (Fig. 4C). Aunque la partición de15N en semillas (P%15N) no difirió entre
2005). Un estudio de laasn1 mutante en nuestro laboratorio reveló los asn1 mutante y de tipo salvaje, el índice de cosecha (HI; reparto de
fenotipos de senescencia temprana (Fig. 4A). AunqueJusticia et al. materia seca en semillas) fue significativamente más alto para el
(2003) informó que las concentraciones de proteínas y aminoácidos mutante que para el tipo salvaje. Como resultado, la relación (P%15N /
aumentaron en las semillas de ASN1 líneas sobreexpresoras, no hay HI) pareció ser ligeramente más bajo en el mutante que en el tipo
diferencia significativa entre el tipo salvaje y asn1 Se pudo encontrar salvaje, lo que indica que ASN1 podría tener un papel en el índice de
un mutante para la concentración de proteína de la semilla. El papel de cosecha y en la removilización de N de los tejidos vegetativos a las
ASN1 en la removilización de nitrógeno de hoja a hoja y de roseta a semillas. Este resultado preliminar muestra que el papel de la
semillas se investigó utilizando15N seguimiento descrito por Diaz et al. ( asparagina sintetasa es ciertamente complejo y las investigaciones
2008). Los resultados presentados en la Fig.4B muestra eso posteriores tienen en cuenta la contribución de los otros
 Masclaux-Daubresse et al. -Nitrógeno en plantas agrícolas
Las asparagina sintetasas, ASN2 y ASN3, son necesarias para
comprender el papel de AS en el reciclaje y la movilización de nitrógeno
a nivel de toda la planta.
El floema, un factor clave para la translocación de aminoácidos de las fuentes a los
sumideros
Antes de la carga del floema, la vacuola central de las células de mesofila
podría ser un sitio para el almacenamiento transitorio de los aminoácidos
liberados por la degradación de las proteínas. En el tabaco, la cantidad total de
aminoácidos exportados de las láminas foliares se multiplicó por cinco durante el
envejecimiento de las hojas (Masclaux-Daubresse et al., 2006). La asparagina es el
principal aminoácido translocado en el guisante. En cereales, tomate y tabaco, la
glutamina es el compuesto N que se exporta preferentemente. En
Arabidopsis, La savia del floema contiene principalmente asparagina,
glutamato y glutamina (J. Lothier, INRA, Versailles, Francia, res. no
publicada). Durante la senescencia, las concentraciones de asparagina
y glutamina aumentan en la savia del floema y es probable que ambos
aminoácidos jueguen un papel clave en hacer que el nitrógeno esté
disponible para la removilización de la hoja senescente. LaArabidopsis
El genoma codifica 67 (putativos) transportadores de aminoácidos
pertenecientes a 11 familias de genes (revisado por Rentsch et al., 2007). Sin
embargo, la naturaleza del transportador de aminoácidos involucrado en la
carga del floema durante la senescencia es poco conocida.
(van der Graaff et al., 2006; por a revisión
Masclaux-Daubresse et al., 2008).
El almacenamiento de N y la removilización son esenciales para supervivencia de la planta
El potencial de almacenamiento y removilización de N es importante tanto para las
plantas anuales como para las perennes. Para las plantas anuales, como se mencionó
anteriormente, la removilización de nitrógeno es importante para la producción de
semillas y el contenido de nitrógeno de las semillas. El contenido de nitrógeno en las
semillas determina además la eficiencia de la germinación y la supervivencia de las
plántulas jóvenes.
La removilización de nitrógeno también es importante para la supervivencia de las
plantas perennes. Los árboles, que crecen en ambientes bajos en nitrógeno la mayor
parte del tiempo, tienen dos fases de removilización de nitrógeno. El nitrógeno se vuelve
a movilizar de las hojas senescentes en otoño para almacenarse en los troncos durante
el invierno. El N se vuelve a movilizar por segunda vez desde los troncos hasta los
órganos en desarrollo en primavera antes de que la absorción de N de la raíz se
convierta en el proceso principal para satisfacer las necesidades de N de los árboles. A
medida que los árboles envejecen, el ciclo interno de N se vuelve cada vez más
importante en el presupuesto de N de todo el árbol. Tanto la extracción de nitrógeno de
las hojas senescentes como la absorción de N de las raíces contribuyen a la acumulación
de depósitos de almacenamiento de N y al manejo eficiente del nitrógeno que son
esenciales para la supervivencia de las plantas durante años (Millard et al., 2006, 2007).
Los pastos forrajeros están sujetos a defoliaciones frecuentes por parte
de herbívoros o recolección mecánica. La recuperación de gramíneas
después de la defoliación está relacionada con la disponibilidad de reservas
de carbono y nitrógeno en los tejidos restantes (Volenec et al., 1996). Se
demostró que la disminución del suministro de N mineral antes de la
defoliación disminuye la disponibilidad de reservas de N en las hojas y,
como resultado, la cantidad absoluta de N posteriormente removilizado a
las raíces.
Curiosamente, se demostró que la removilización del N y la senescencia
pueden ser inducidas prematuramente por factores ambientales, como el
ataque de patógenos o metales pesados. La evidencia corrobora que el
proceso de removilización de N se ve reforzado por
1149
tensiones abióticas y abióticas a través de la inducción de
GLN1, GDH y ASN genesPérez-García et al., 1998a, B; Olea
et al., 2004). Chaffei et al. (2004) demostraron que la toxicidad por cadmio
inducía síntomas similares a la senescencia y la expresión de las enzimas de
removilización de N GS1 y GDH en hojas de tomate. La inducción de AS en
las raíces podría facilitar el reciclaje de aminoácidos y el almacenamiento de
asparagina en este órgano. La removilización coordinada de N de las hojas y
el almacenamiento de N de las raíces es sin duda esencial para la
recuperación de las plantas.Pageau et al. (2006) mostró que GS1 y
GDH los genes de las hojas de tabaco respondieron al etileno, ácido
jasmónico y varios otros inductores de defensa de las plantas, así como
a infecciones bacterianas y víricas. La movilización de N promovida por
la infección podría considerarse, por un lado, como parte de una
estrategia de roza y quema que debería privar al patógeno de
nutrientes mediante la exportación de nutrientes fuera del sitio de
Descargado de http://aob.oxfordjournals.org/ en la Universidad de Cape Breton el 20 de febrero de 2013
infección en desarrollo y, por otro lado, como una estrategia para
ahorrar nutrientes. en órganos sanos implicados en la recuperación.
REGULACIÓN DE LA CAPTACIÓN, ASIMILIZACIÓN Y
REMOBILIZACIÓN DE NITRÓGENO POR
DISPONIBILIDAD DE NITRATO Y CARBONO
La absorción de N por las raíces y una mayor asimilación de N se
integran en la planta para satisfacer la demanda de nutrientes de todo
ver el organismo. Los estímulos o estreses externos, así como el estado
nutricional de la planta, modulan la expresión y / o la actividad de los
sistemas de transporte y enzimas mediante diversos mecanismos
reguladores. El primer mecanismo opera a nivel transcripcional e
incluye la inducción por los sustratos y la represión ejercida por los
asimilados endógenos de N. Esto da como resultado una regulación al
alza cuando N es bajo y una regulación a la baja cuando N es alto. En
consecuencia, variosNRT2 y AMT1 transportadores así como
Nia y Nii Se descubrió que los genes estaban reprimidos transcripcionalmente por
metabolitos N como los aminoácidos como la glutamina (Tsay
et al., 2007; Meyer y Stitt, 2001). Por otro lado, en respuesta a la
privación de N, se induce o reprime la expresión de muchos
transportadores de nitrato de amonio y de alta afinidad (revisado
porTsay et al., 2007). En respuesta a la privación de N, la expresión
deGLN y GDH los genes también se regulan hacia arriba o hacia
abajo. En el tabaco, se demostró que el amonio y los aminoácidos
regulanGLN y GDH niveles de transcripciónMasclaux-Daubresse et
al., 2005). Aumento de la alimentación de glutamato durante 5 h
GLN1 ARNm mientras que tanto la alimentación con glutamato
como con prolina disminuyeron GLN2 ARNm. Aumento de amonio,
prolina, glutamina y glutamatoGDH transcripciones. Efectos de los
N-metabolitos enGLN y GDH Los niveles de transcripción
demostraron ser sensibles a los bloqueadores de calcio y al
inhibidor de la proteína quinasa K252a. La evidencia mostró que el
amonio mismo regulaGLN genes a nivel transcripcional. En la soja,
la cooperación entre tres regiones promotoras distintas es
necesaria para la expresión estimulada por amonio delGS15 gene.
La interacción entre estas regiones puede ser facilitada por una
proteína similar a HMG A (grupo de alta movilidad A) que se une a
las regiones promotoras proximales y distales de la soja.GS15 gen
Reisdorf-Cren et al.,
2002y referencias en el mismo). Estudios de transcriptomas globales
después de la inducción de nitratos (Scheible et al., 2004) confirmó la
regulación de la absorción y asimilación de N por el nitrato en el nivel
de expresión y mostró un amplio espectro de acción del nitrato como
regulador de la expresión génica, coordinando, por ejemplo, C y N
1150 Masclaux-Daubresse et al. -Nitrógeno en plantas agrícolas
metabolismo. Usando mutantes NR, se demostró que gran parte de
esta regulación es ejercida por el propio nitrato (Wang et al., 2004). La
estimulación de la captación y asimilación de N mediante la
fotosíntesis (para una revisión, véaseLillo, 2008) asegura que la
absorción de N esté correlacionada con el estado de C. Por ejemplo, la
absorción y la reducción de nitratos están reguladas de manera
coordinada por un control circadiano. Este control se ha atribuido a
menudo a la acción reguladora de la expresión génica de los azúcares
producidos por la fotosíntesis y transportados hacia las raíces. Esto se
ha demostrado para los transportadores de amonio y nitrato, NR y NiR.
La regulación de la absorción y los transportadores de nitratos parece
ser independiente de las vías conocidas de regulación del azúcar, como
la señalización de hexoquinasa (Lillo, 2008). Wirth et al.
(2007) mostró que la regulación al alza de los transportadores de
nitrato (AtNRT2.1 y AtNRT1.1) estaba relacionado con la concentración
de glucosa 6-fosfato. Por el contrario, la regulación diurna de
Nia transcripciones se rige no solo por los azúcares sino también
por la regulación de la luz a través del fitocromo (Lillo, 2008).
Además, se observó queNia La expresión está controlada por
señales del flujo de electrones fotosintéticos, que agrega una
nueva faceta a la diafonía intracelular entre los cloroplastos y el
núcleo (Lillo, 2008).
HY5 y su homólogo HYH, dos factores de transcripción de la
familia bZIP, son esenciales para la expresión activada por luz
dependiente de fitocromos de NR (Lillo, 2008). Los análisis de
chips mostraron un sitio de unión para HY5 en el
Nia2 promotorLillo, 2008). LaNRT1.1 El promotor también tiene
tres sitios de unión para HY5, aunque HY5 parece tener un efecto
negativo sobre la transcripción en este caso (Lillo, 2008).
Castaings et al. (2009) identificó a NLP7 como un regulador de Nia
expresión en Arabidopsis. Arabidopsis nlp7mutantes son
defectuosos en la inducción de nitrato de Nia genes y NRT2.1
y NRT2.2. Curiosamente, los mutantes en el CIPK8 gen, que
codifica una proteína quinasa (Hu et al., 2009), tampoco pueden
inducir completamente la expresión de varios genes por el nitrato,
como el Nia genes, NRT2.1, NRT1.1 y varios otros. Es tentador
especular que CIPK8 podría estar involucrado en la misma vía de
regulación que NLP7.NLP7 pertenece a una familia de genes con
nueve miembros diferentes, pero aún se desconocen las funciones
de las otras proteínas NLP.
En Arabidopsis, La evidencia convincente muestra que las SnRK1
(proteína quinasas relacionadas con Snf1) son integradores centrales de las
redes de transcripción en el estrés de las plantas y la señalización de energía
que son inactivadas por los azúcares (Baena-González et al., 2007). Se
demostró que las proteínas SnRK1 regulan específicamente la
ASN1 gen, que codifica la asparagina sintetasa inducida por la
oscuridad también conocida como DIN6. ASN1 / DIN6es inducida
por la oscuridad, hipoxia, DCMU [3- (3,4-diclorofenil) -1,1-
dimetilurea] y otro estrés dentro de las 3-6 h. El inhibidor de la
proteína quinasa K252a anula dicha inducción y los dos miembros
expresados de manera ubicua del grupo SnRK1, Kin10 y Kin11,
activan específicamente unPromotor DIN6 :: LUC fusión. La
mutación de la caja G (CACGTG, G1) proximal a la caja TATA abolió
la mayor parte de la activación dePromotor DIN6 :: LUC por KIN10,
hipoxia, oscuridad y DCMU.
La regulación postraduccional rápida, como la modificación de
proteínas, es el segundo mecanismo que controla la absorción y
asimilación de nitrógeno. Recientemente se ha descrito la regulación
postranscripcional de los transportadores de nitrato por fosforilación
para el transportador de nitrato NRT1.1. Cuando se fosforila,
AtNRT1.1 funciona como un transportador de alta afinidad
mientras que está activo en el rango de baja afinidad cuando se
desfosforila (para una revisión, ver Tsay et al., 2007). Tsay y sus
colaboradores obtuvieron información significativa sobre el papel
de la quinasa CIPK23 en la fosforilación específica de la proteína
AtNRT1.1 en respuesta a los niveles de nitrato, lo que demuestra la
detección mediada por AtNRT1.1 en la respuesta primaria de
nitrato (Ho et al., 2009).
La regulación postraduccional mejor estudiada en el
metabolismo del N es la regulación de NR en plantas superiores.
NR se inactiva mediante un proceso de dos pasos que implica la
fosforilación de ser543, como se muestra en las espinacas, seguido
de la unión de una proteína quinasa inhibidora 14-3-3. Además,
tanto CDPK (proteína quinasas dependientes de calcio) como
proteína quinasas SnRK1 son capaces de fosforilar NR al menosin
Descargado de http://aob.oxfordjournals.org/ en la Universidad de Cape Breton el 20 de febrero de 2013
vitrorevisado por Lillo, 2008). Cuando se sobreexpresó una forma
modificada de NR, que ya no era susceptible a la inactivación
oscura postraduccional, la proteína resultante no disminuyó en la
segunda parte del fotoperíodo. La forma fosforilada inactiva se
reactiva por desfosforilación, probablemente por PP2A. Además, la
evidencia mostró que existe una correlación entre el estado de
fosforilación o el estado de activación de NR y la velocidad a la que
disminuye la proteína NR.
Glutamina sintetasa plastídica de Medicago truncatula también
se regula a través de la fosforilación y las interacciones 14-3-3. El
sitio de fosforilación GS2 ser97, crítico para la interacción con 14-3-3
y la proteólisis posterior, se identificó mediante mutagénesis
dirigida. Glutamina sintetasas citosólicas deM. truncatula también
están reguladas por la fosforilación pero por quinasas
independientes del calcio (Lima et al., 2006y referencias en el
mismo). La fosforilación se produce en más de un residuo y
aumenta la afinidad por el sustrato glutamato. Además de la
fosforilación, varias enzimas cloroplásticas de asimilación de
nitrógeno como NIR, GS2 y Fd-GOGAT también están reguladas
por redox a través del sistema de tiorredoxina (para revisiones ver
Lemaire et al., 2007; Lillo, 2008).
ESFUERZOS TRANSGÉNICOS PARA MANIPULAR NUE
Con el objetivo de mejorar la NUE, se han manipulado muchos genes
candidatos críticos, sobreexpresándolos o utilizando mutaciones
knockout, para probar sus efectos sobre la biomasa y el estado del
nitrógeno de la planta. Se han escrito varias buenas críticas sobre este
tema que brindan más detalles que los mencionados en esta sección (
Andrews et al., 2004; Bien et al., 2004; Pathak
et al., 2009).
Hasta ahora, probablemente debido a fuertes controles
postranscripcionales (ver arriba), manipulando la absorción de nitrato a
través de la sobreexpresión de HATS-like NRT2.1 condujo a un aumento de
la entrada de nitratos en algunas condiciones, pero no cambió la EUN
fenotípica o la utilización de nitratos (Fraisier et al., 2000). Durante mucho
tiempo se ha considerado que la NR es el paso que limita la velocidad en la
asimilación de nitratos. La utilidad de la sobreexpresión transgénica de NR /
NiR para mejoras importantes de NUE, sin embargo, sigue siendo incierta.
Nicotiana tabaccum plantas que expresan constitutivamente NR de N.
plumbaginifolia mostraron un retraso en la pérdida de actividad de NR bajo
sequía, lo que les permitió presentar una recuperación más rápida después
de un déficit de agua a corto plazo (Ferrario-Mery et al., 1998). Entonces, en
condiciones de campo de disponibilidad de agua fluctuante, la expresión
constitutiva de NR puede
 Masclaux-Daubresse et al. -Nitrógeno en plantas agrícolas
confieren alguna ventaja fisiológica. Sobreexpresión de NR o NiR en
Arabidopsis, la papa o el tabaco redujeron los niveles de nitrato en los
tejidos de las plantas, pero no aumentaron el rendimiento de biomasa, el
número de tubérculos ni el rendimiento de semillas. Sobreexpresión deNia
o Nii Los genes en las plantas aumentaron los niveles de ARNm y, a
menudo, afectaron la absorción de N sin modificar el rendimiento o el
crecimiento de la planta, independientemente de la fuente de nitrógeno
disponible. Se cree que esto se debe en parte a la compleja regulación
postranscripcional de NR (revisada porPathak et al., 2009).
Sobreexpresión de glutamina sintetasa citosólica GS2
genes se realizó en N. tabaccum y Oryza sativa utilizando el
promotor de subunidad pequeña Rubisco y el promotor CaMV
35S, respectivamente (Hoshida et al., 2000; Migrar et al.,
2000). EnN. tabaccum, tasa de crecimiento mejorada de
sobreexpresión y en O. sativa aumentó la fotorrespiración y la
tolerancia a la sequía. Intenta sobreexpresarGS1 Los genes son más
numerosos y han utilizado diferentes combinaciones de promotores,
incluidos CaMV 35S, RolD y la subunidad pequeña de Rubisco (rbcS).
Los efectos sobre la biomasa vegetal y el rendimiento de grano
también fueron más exitosos. Por ejemplo, la sobreexpresión del
Phaseolus vulgaris GS1 gen bajo el control del rbcS
El promotor en el trigo dio como resultado un rendimiento de raíces y
granos significativamente más alto con un mayor contenido de N en el
grano en algunas líneas (Habash et al., 2001). Sobreexpresión de la
Pisum sativum GS1 gen bajo el control del promotor CaMV 35S en
N. tabaccum resultó en aumentos de biomasa y proteína foliar (Oliveira
et al., 2002). Más recientemente, la sobreexpresión de una isoenzima
GS1 de maíz en maíz bajo el control del promotor CsVMV aumentó el
número de granos y el tamaño de granos, aumentando así el
rendimiento en un 30% [patente AU2007306040 (A1); http://
v3.espacenet.com/publicationDetails/biblio?CC=AU& NR =
2007306040A1 & KC = A1 & FT = D & date = 20080417 & DB = EPODOC
& locale = en_EP]. En resumen, varios estudios han demostrado una
correlación directa entre una actividad mejorada de GS en plantas
transgénicas y la biomasa o el rendimiento (Bien
et al., 2004y referencias en el mismo). Aunque la sobreexpresión de
GOGAT genes ha sido raro, Yamaya et al. (2002) informó de un efecto
espectacular de la sobreexpresión de NADH-GOGAT bajo el control de
su propio promotor en el arroz. Las plantas transgénicas mostraron un
aumento (hasta un 80%) en el peso del grano. En conclusión, los
estudios muestran que la sobreexpresión deGS o GOGAT
los genes pueden mejorar la biomasa y los rendimientos de grano
según el alelo del gen y los promotores que se utilicen. Esto indica que
se requiere una caracterización adicional para demostrar los efectos
beneficiosos de tales estrategias para los cultivos y las condiciones del
campo.
Los intentos de sobreexpresar AS se llevaron a cabo en el tabaco y
Arabidopsis (para una revisión ver Bien et al., 2004). Curiosamente, la
sobreexpresión deASN1 en Arabidopsis mayor contenido de proteína de semilla
soluble y proteína total y mayor aptitud de las plantas cultivadas en condiciones
de limitación de nitrógeno (Justicia et al., 2003). La alanina es un aminoácido
importante para el almacenamiento de nitrógeno en situaciones de estrés
anaeróbico, como las inundaciones. La sobreexpresión de la alanina
aminotransferasa de cebada bajo el control de los promotores de la raíz en canola
y arroz tuvo efectos interesantes, aumentando considerablemente la biomasa de
la planta, el rendimiento de semillas, la EUN y la concentración de nitrógeno de
los brotes cuando las plantas se cultivaron con bajo suministro de nitrato (Bien
et al., 2007; Shrawat et al., 2008). Estos resultados son de particular interés,
ya que muestran que es posible mejorar la NUE mediante la manipulación
de los pasos posteriores en la removilización de N.
1151
Además de manipular las enzimas implicadas en la asimilación de
nitrógeno del metabolismo de los aminoácidos, también se ha intentado la
generación de plantas modificadas para la expresión de factores de
transcripción. Por ejemplo, la expresión ectópica del factor de transcripción
Dof1 del maíz, que regula la expresión de genes implicados en el
metabolismo de los ácidos orgánicos, condujo aArabidopsis a la
acumulación de aminoácidos y al aumento del crecimiento en condiciones
limitantes de N. Estos efectos sugieren que la NUE también podría
mejorarse manipulando las vías del metabolismo del carbono. Las proteínas
similares a PII, NLP7 y TOR (diana de la rapamicina), que están
potencialmente vinculadas a la detección de C y N en las plantas, son otras
candidatas para la ingeniería adicional, como lo demuestra el aumento del
crecimiento de las plantas, el rendimiento y la resistencia al estrés
adquiridos por las plantas que sobreexpresan TOR (Ferrario-Mery et al., 2006
; Deprost et al., 2007; Castaings
Descargado de http://aob.oxfordjournals.org/ en la Universidad de Cape Breton el 20 de febrero de 2013
et al., 2009).
Hibberd et al. (2008) sugirió que la ingeniería C4 arroz o C4 el
trigo sería una buena forma de mejorar la EUN. El rubisco
Se sabe que la proteína se usa como proteína de almacenamiento en C3
plantas y árboles herbáceosMillard et al., 2006). En atmósferas elevadas
CO férico2, La actividad carboxilasa de Rubisco aumenta y el contenido
de proteína de Rubisco disminuye. La pérdida selectiva de
Enzima Rubisco bajo CO elevado2 por lo tanto, beneficia a la NUE sin
necesariamente cambiar significativamente la asimilación de C de la hoja.
Tasa de ción. Los niveles más bajos de Rubisco en C4 plantas explica por qué
la NUE es más alta en C4 cultivos que en C3.
VARIACIÓN NATURAL DE LA CAPTURA DE NITRÓGENO
Y REMOBILIZACIÓN DE NITRÓGENO EN
ARABIDOPSIS
Más de 300 accesiones de Arabidopsis, procedentes de varios lugares
del mundo, están disponibles en los centros de stock. Probablemente
debido a una adaptación selectiva a ambientes edáficos y climáticos
originales, muestran variación natural de su desarrollo y constituyen
grandes recursos genéticos y fenotípicos (McKhann et al., 2004). Varios
artículos recientes han presentado la primera evidencia de que existe
una variación natural para el metabolismo del nitrógeno, incluida la
absorción y removilización del nitrógeno. La primera pista la
proporcionó el análisis de la plasticidad de las raíces. Estudios en
Arabidopsis han demostrado la estimulación del crecimiento de las
raíces por una fuente localizada de nitrato (Robinson, 1994; Forde y
Lorenzo, 2001). Walch-Liu y Forde (2008) ensayó el grado de
estimulación de la raíz utilizando una pequeña colección de seis
accesiones. Se obtuvo una amplia gama de respuestas desde un
extremo, que no se vio afectado significativamente, hasta el otro
extremo que mostró un aumento del 90% en el crecimiento de las
raíces primarias. Esta variación observada de la adaptación de las
raíces a la disponibilidad de nitrógeno debería tener consecuencias
para la absorción de nitrógeno en las plantas.
Nuestra reciente investigación de la variación natural en la
absorción de nitratos y la removilización de nitrógeno en
Arabidopsis da la segunda pista (Fig. 5; C. Masclaux-Daubresse y F.
Chardon, inédito. res.). Una colección básica de 18 accesiones de
Arabidopsis se cultivó en condiciones limitantes y abundantes de
nitrógeno nutritivo. El objetivo de este estudio fue recolectar datos que
nos permitieran monitorear la variación natural de la absorción de N
en la etapa vegetativa y la removilización de N a las semillas en la etapa
reproductiva dependiendo de la disponibilidad de nitrógeno, y también
medir rasgos relacionados con EUN como biomasa de
1152 Masclaux-Daubresse et al. -Nitrógeno en plantas agrícolas

Col-0 Sha Stw-0 Bur-0 Tsu-0

DW DW DW DW DW
4 4 4 4 4

15NHI 2 15NHI 2 15NHI 2 15NHI 2 15NHI 2

NORTE% NORTE% NORTE% NORTE% NORTE%

0 0 0 0 0
-2 -2 -2 -2 -2
-4 -4 -4 -4 -4
HOLA NupE HOLA NupE HOLA NupE HI NupE HI NupE

% NDR % NSEED % NDR % NSEED % NDR % NSEED % NDR % NSEED % NDR % NSEED

FYO G. 5. Perfil de absorción y removilización de nitrógeno de cinco Arabidopsis accesiones. Una colección básica de 18 accesiones deArabidopsis crecido con 10 mMETRO El nitrato se
utilizó para medir las características relacionadas con la biomasa, la absorción de N, la removilización de N y la EUN (C. Masclaux-Daubresse y F. Chardon, res. no publicada). Se
presentan cinco accesiones representativas de las principales clases encontradas. Los rasgos medidos en la etapa vegetativa (40 d después de la siembra) son el peso seco de la roseta
(DW), la concentración de nitrógeno en la roseta (N%) y la e fi ciencia de absorción de N (NupE) como la cantidad de15N absorbido a los 40 d después de la siembra dividido por
biomasa vegetal. Los rasgos medidos al final del ciclo de la planta son la eficiencia de la removilización de N (15NHI) expresado como la partición de 15N en semillas en comparación
con la planta entera (semillas þ restos secos; verDiaz et al., 2008), índice de cosecha (HI) expresado como el reparto de biomasa (materia seca) en semillas (MS de semillas / MS de la

Descargado de http://aob.oxfordjournals.org/ en la Universidad de Cape Breton el 20 de febrero de 2013

planta entera), concentración de N en restos secos (% NDR) y concentración de N en las semillas (% NSEMILLA). Los valores individuales oscilaron entre [24; þ 4] y centrado
en el valor medio de la colección principal (valor 0). La pequeña muestra de accesiones destaca la variación de los rendimientos. Plantas, como Col0 o
Sha, tiene una absorción de N relativamente buena. La puntuación más alta de removilización de N se encontró en Stw-0, mientras que las plantas con alto porcentaje de N y alta biomasa fueron
Bur-0 y Tsu-0.

rosetas en la etapa vegetativa, rendimiento de semilla, índice de cosecha y
concentraciones de nitrógeno en los diferentes materiales vegetales
recolectados (en etapas vegetativa y reproductiva). Utilizando todos los
datos recopilados con un suministro de nitrógeno bajo y alto, los grupos de
accesiones pueden agruparse, ensamblando plantas que tienen respuestas
similares dependiendo de la disponibilidad de nitratos. Sorprendentemente,
para la mayoría de los rasgos medidos o calculados, la variación fue mayor
con un alto suministro de nitrato cuando la absorción de N y la
removilización de N no son forzadas por la limitación de nitratos. Figura5
muestra esquemáticamente la gran variación observada entre las clases de
accesiones. Las diferencias entre las accesiones de rendimiento más bajo y
más alto fueron tres veces para la absorción de N y seis veces para la
removilización de N. También notamos correlaciones interesantes entre
cómo las plantas manejan la absorción de N y el metabolismo de N y su
biomasa. Considerando la EUN relativa en la etapa vegetativa como la
relación DW / N% (EUN óptima: plantas con gran biomasa y baja
concentración de nitrógeno), encontramos que la EUN estimada en la
colección de núcleos no fue diferente en la limitación y el amplio suministro
de nitrógeno lo que sugiere que la NUE en la etapa vegetativa se determinó
únicamente genéticamente (C. Masclaux-Daubresse y F. Chardon, res. no
publicada).
La última pista la proporciona el Arabidopsis Base de datos eFP-
Browser, que combina análisis de microarrays (Invierno et al.,
2007). Algunos experimentos incluidos en esta base de datos
utilizaron varias accesiones (Lempe et al., 2005). Es posible
seleccionar específicamente el patrón de genes implicados en el
metabolismo primario del N. Aunque las plantas se cultivaron en
las mismas condiciones (plántulas de 4 días cultivadas en el suelo
del invernadero), las intensidades de señal de algunos genes N de
hecho variaron entre estas accesiones (Fig.6), revelando la
existencia de variación genética para el nivel de transcripción de
genes N. Queda por determinar si dicha variación se correlaciona
con la dependencia de N y la NUE.
Los experimentos presentados anteriormente brindan ideas sobre los
diversos rasgos que se pueden medir para explorar NUE (niveles de
transcripción del gen N, eficiencia de absorción de N, NRE, contenido de
nitrógeno, actividades enzimáticas, biomasa) y fomentan la computación de
datos de acuerdo con un enfoque de biología de sistemas, con el fin de
revelar el funcionamiento de los diferentes módulos que constituyen la
adaptación del metabolismo del nitrógeno en las plantas. Un mejor
caracterización de ambientes edáficos y el metabolismo de
diferentes Arabidopsis Consecuentemente, las accesiones
permitirían comprender mejor cómo se regulan estos módulos de
acuerdo con la disponibilidad de nitrógeno en el suelo.
La variación natural también existe en los cultivos. Los enfoques que
actualmente realizan los obtentores para mejorar las variedades de muchas
características agronómicas incluyen el mapeo QTL y la selección asistida
por marcadores. Sin embargo, vale la pena señalar que los experimentos
realizados enArabidopsis presentados anteriormente se han llevado a cabo
en plantas silvestres, lo que significa que las plantas estudiadas no han sido
modificadas por criterios agronómicos y que ninguna selección adaptativa
ha disminuido las diferencias entre ellas. Utilizando
Arabidopsis en lugar de plantas muy seleccionadas, como cultivos para
tales enfoques, deberían ser más informativas. Variación natural de la
absorción de N y la removilización de N identi fi cadas en la planta
modeloArabidopsis es una fuente de conocimiento que puede ser útil
para transferir a los cultivos.
BASES GENÉTICAS Y GENÉTICAS CUANTITATIVAS DE
LA CAPTACIÓN Y ASIMILACIÓN DE NITRÓGENO
Y REMOBILIZACIÓN
Los QTL para NUE y otras características agronómicas se han
cartografiado en numerosas especies de plantas, incluidos maíz, arroz y
Arabidopsis (Hirel et al., 2001; Obara et al., 2001; Loudet
et al., 2003). El mapeo de QTL para actividades enzimáticas
relacionadas con el nitrógeno, como la nitrato reductasa o la glutamina
sintetasa, es más raro. Aún más raro es el mapeo de QTL de N-
removilización o N-in fl ujo debido a la dificultad para realizar15N
rastreo en grandes poblaciones.
El primer informe de mapeo de QTL para la removilización de N fue
en cebada usando el método de balance de N, que requiere
monitorear la diferencia en el contenido de N de la hoja bandera entre
antesis y madurez [DN (mg) por hoja] (Mickelson et al., 2003). Los QTL
que explican la variación de este rasgo se mapearon en los
cromosomas 6 y 7.Mickelson et al. (2003) también mapeó dos QTL para
la concentración de proteína de grano en los cromosomas 2 y 6. No
hubo co-localización entre los QTL para DN por hoja y contenido de
proteína de grano. Sin embargo, el QTL más prominente para el
contenido de proteína de grano en el cromosoma 6 de cebada pareció
 Masclaux-Daubresse et al. -Nitrógeno en plantas agrícolas
Gene Bahía-0 C24 Col-0 Cvi-1
NRT2.1
NIA1
NIA2
NIR
ASN1
GDH1
GDH2
GLU2
GS1.1
la variación natural en
FYO G. 6. Mapa de calor que ilustra expresión de genes implicados en el nitrógeno metabolismo. Los niveles de señal de los genes N en diez accesiones fueron
obtenido de la Arabidopsis eFP-Browser. Para cada gen, alta expresión
ser un homólogo potencial de la proteína de grano QTL del trigo
duro mapeado por Joppa et al. (1997). Recientemente, se clonó un
QTL de trigo mediante clonación posicional y mapeo fino (Uauy
et al., 2006). El locus codifica un factor de transcripción NAC, NAM-
B1, que acelera la senescencia de las hojas y aumenta el llenado de
nutrientes en los granos en desarrollo. El alelo ancestral del trigo
salvaje es funcional, mientras que las variedades modernas de
trigo llevan un alelo NAM-B1 no funcional. El papel de NAM-B1 se
confirmó al reducir los niveles de ARN de múltiples homólogos de
NAM por interferencia de ARN, lo que provocó un retraso en la
senescencia (más de 3 semanas) y una reducción del contenido de
proteína, zinc y hierro del grano de trigo (más del 30%). El efecto
del cromosomaGpc-B1 región incluyendo el
NAM-B1 El gen fue estudiado más a fondo mediante la introgresión del
Gcp-B1 locus en líneas hexaploides casi isogénicas. Como resultado de
Gcp-B1 introgresión, se midió significativamente la concentración
de N de la paja en la madurez y el índice de cosecha de nitrógeno
(NHI) más alto, lo que sugiere que el Gcp-B1 alelo mejora la
removilización de N y disminuye la cantidad de nitrógeno perdido
en los restos secos residuales (Brevis y Dubcovsky,
Universidad de California, Davis, CA, no publicado. res.).
Comparando NAM-B1 Knockdown RNAi y control mostraron líneas
resultados similares (Aguas et al., 2009). En la misma
población de cebada utilizada porMickelson et al.
(2003) para determinar el almacenamiento de proteína de grano y N de hoja y remo-
bilización, se determinaron los QTL para las actividades de amino, carboxi y
endopeptidasa de la hoja (Yang et al., 2004). La co-localización de QTL
sugirió fuertemente que las principales endo- o amino-peptidasas no
estaban involucradas en la removilización del N de las hojas o en el control
del contenido de proteína del grano. Por el contrario, la co-localización de
QTL sugirió que las isoenzimas de carboxipeptidasa vacuolar están
involucradas en la removilización de N de la hoja.
Más recientemente, se han cartografiado los QTL de absorción y
removilización de N en el maíz (Coque y Gallais, 2007; Coque
et al., 2008). Los autores monitorearon un número impresionante
de rasgos de EUN, senescencia foliar, actividades enzimáticas,
rendimiento, biomasa, absorción de N y removilización de N, que,
junto con los datos anteriores deHirel et al. (2001) y la clonación
posicional de genes adicionales, proporcionan una gran cantidad
de información sobre la coincidencia de rasgos agronómicos,
fisiológicos, bioquímicos y genómicos. El estudio deCoque et al.
(2008) es también el primer y hasta la fecha el único estudio que ha utilizado
el 15Método de rastreo de N para mapear los QTL de N-removilización. La
agrupación de QTL mostró un antagonismo entre la removilización de N y la
captación de N en varios loci. Coincidencias positivas entre la absorción de
N, la arquitectura del sistema radicular y el verdor de las hojas
1153
Est Kin-0 Ler-2 Nd-1 Sha Van-0
se representa con un sombreado oscuro y la expresión baja se representa con un sombreado claro.
también se encontraron en ocho grupos, mientras que los QTL de
Descargado de http://aob.oxfordjournals.org/ en la Universidad de Cape Breton el 20 de febrero de 2013
removilización de N coincidieron principalmente con los QTL de
senescencia foliar. La co-localización con genes relacionados con N
mostró que los dos loci NR (cromosomas 1 y 4, verHirel et al., 2001)
coincidió con los QTL que afectaron el número de granos con un
aporte alto de N y el peso del grano tanto en niveles bajos como altos
de N.Los rasgos relacionados con el rendimiento del grano
coincidieron con los tres loci GS1 correspondientes a Gln1-2, Gln1-3 y
Gln1-4. El locus GS2 (cromosoma 10) coincidió con un QTL de
senescencia foliar (Coque et al., 2008).
Los QTL para actividades NUE y N-enzima también se exploraron
recientemente en trigo (Habash et al., 2007; Laperche et al., 2007;
Fontaine et al., 2009). Curiosamente,Habash et al. (2007)
mostró que los QTL para la actividad de GS estaban invariablemente co-
localizados con los del N del grano, y que el aumento de la actividad se
asoció con un mayor N del grano. Este hallazgo fue confirmado por
Fontaine et al. (2009) en otra población. A diferencia del maíz, no
hubo correlación entre la actividad de GS y los componentes del
rendimiento en el trigo.
CONCLUSIONES
Mejorar la productividad global de la planta y la calidad del producto
junto con el cuidado de la calidad ambiental y el bienestar humano son
los principales desafíos para el futuro inmediato (Vitousek et al., 2009).
Ese objetivo depende del desarrollo y la política agrícolas y puede
lograrse proporcionando la fuente de nutrientes adecuada en la
proporción adecuada, en el momento y lugar adecuados. Para mejorar
la producción agrícola sostenible, también es necesario cultivar cultivos
que puedan eliminar los nutrientes aplicados al suelo de manera
eficiente y, por lo tanto, requieran menos fertilizantes. Esta "eficiencia
en el uso de recursos" global requiere tener una visión global de la
fisiología vegetal, la capacidad de absorción de la planta, el
metabolismo de la planta y la respuesta de la planta a las restricciones,
así como una visión de las propiedades físicas y químicas del suelo.
Esta revisión ofrece una descripción general de las diferentes pistas
metabólicas y fisiológicas que ha proporcionado la investigación
agronómica. Se presentan las enzimas y los procesos reguladores que
pueden manipularse para controlar la NUE. Los últimos resultados
obtenidos de los estudios de variación natural y QTL muestran la
complejidad de la EUN y abren nuevas perspectivas. En cuanto a la
complejidad del desafío que tenemos que afrontar y en cuanto a los
numerosos enfoques disponibles, la integración de datos provenientes
de estudios transcriptómicos, genómica funcional, genética
cuantitativa, ecofisiología y ciencia del suelo en
1154 Masclaux-Daubresse et al. -Nitrógeno en plantas agrícolas
Deben fomentarse los modelos explicativos del comportamiento de toda la
planta en el medio ambiente.
RECONOCIMIENTO
Agradecemos a la Dra. Heather I. McKhann (INRA, París,
Francia) por leer atentamente el manuscrito.
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