TEMA:

 Aspectos generales. Definición de

Ingeniería Genética:
 Introducción de los vectores de
transformación génica.
 Introducción de los plásmidos
para la transformación génica.
 Distintos tipos de vectores.
 Relaciones entre el tamaño del
inserto y el vector.
Docente: Ing. Orly Cevallos
Grupo #3
Andrade Aldean Brandon Gustavo
Bermeo Mendez Michelle Alejandra
Chica Mendieta Regner Narciso
Hurtado Cobeña Erick Alexander
Zambrano Parrales Mirella Aracely
Zurita Barros Angy Lilibeth
La ingeniería genética es la manipulación directa de los genes de un
organismo usando la biotecnología para modificar sus genes, ya sea
eliminando, duplicando o insertando material genético por medio de las
diferentes tecnologías de edición genética.

Todo organismo, aún el más simple, contiene una enorme cantidad

de información. Esta información se encuentra almacenada en una
macromolécula que se halla en todas las células: el ADN.

Los genes controlan todos los aspectos de la vida de cada organismo,

incluyendo metabolismo, forma, desarrollo y reproducción.
 El vector puede ayudar
a multiplicar, aislar, o
expresar el inserto de
adn extraño, un vector
por lo general es un
vehículo para
transportar una
secuencia de adn

Una célula huésped

deseada, como parte de
un procedimiento de
clonación molecular
dependiendo de la
finalidad del
procedimiento de la
clonación.
Un vector es cualquier
vehículo, a menudo un
virus o un plásmido que
se utiliza para transportar
una secuencia de ADN.
 Vectores
Vectores cointegrados: Estos vectores son
construidos por la recombinación entre un
plásmido Ti desarmado que contiene el borde
izquierdo y un pequeño vector que contiene
el gen de interés flanqueado por el borde
derecho y una región homóloga al borde
izquierdo.
Vectores binarios: Estos son los vectores más
usados para la transformación de plantas y se
encuentran en una gran variedad. En este sistema
Agrobacterium tiene dos vectores: uno que
contiene la región del T ADN con el gen de interés
y otro vector que contiene la región vir.
El plásmido pBR322 de E. coli,
muy popular para los técnicos en
genética, se desarrolló a finales
de los años 1970. La p significa
plásmido, BR se refiere a los
científicos en él involucrados:
Bolívar y Rodríguez. El número
322 diferencia el plásmido de
otros del mismo laboratorio, como
pBR325, pBR327, etc.
pBR322 contiene genes para las
enzimas de resistencia a contienen pBR322 sin inserción
antibióticos: la tetraciclina y la
ampicilina.
Finalmente, también se
insertan allí los fragmentos de
ADN cortados. ). Las células
son, pues, resistentes a la
ampicilina, pero no a la
tetraciclina, y así pueden
seleccionarse fácilmente las
células que no han captado el
vector son sensibles a los dos
antibióticos las células que
son, en cambio, resistentes a
ambos antibióticos.
Plásmidos
Los plásmidos fueron los
primeros vectores que se
desarrollaron, y aún son
ampliamente usados.
Estos vectores proceden de
moléculas de ADN de doble
cadena extra cromosómicas
que se encuentran de manera
natural y que se replican
autónomamente dentro de las
células bacterianas.
Bacteriófagos Cósmidos
Se conoce la Son vectores
secuencia completa híbridos, que
de sus 48.502 pares combinan las
de nucleótidos y la características
función de sus ventajosas de los
genes. plásmidos
bacterianos y del
fago.
El tercio central del
cromosoma contiene
genes que son requeridos
Cos proviene de
para la lisogenia (estado
sitio cohesivo, en
integrado) pero no para
referencia a las
el ciclo lítico (ciclo
secuencias
productivo de nuevas
terminales de simple
partículas virales).
cadena de 12 bases
complementarias en
el cromosoma.
 YAC: Son mini cromosomas de levadura BAC: Se basan en el plásmido F de
creados por ingeniería genética que pueden
7kb de E. coli y pueden llevar insertos
contener insertos de ADN de 200 a 500 kb
y contienen un origen de replicación y un de 300 kb, aunque el promedio es de
centrómero de levadura. 100 kb.
Relaciones entre el tamaño del inserto
y el vector.

Los vectores de clonación o vector molecular son

moléculas transportadoras que transfieren y replican
fragmentos de ADN que llevan insertados mediante
técnicas de ADN recombinante. Para que sirva de
vector, una molécula debe ser capaz de replicarse junto
con el fragmento de ADN que transporta.
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UNIVERSIDAD TÉCNICA ESTATAL DE QUEVEDO

FACULTAD DE CIENCIAS PECUARIAS
CARRERA DE INGENIERÍA AGROPECUARIA

NOMBRE DEL ESTUDIANTE:

ZURITA BARROS ANGY LILIBETH

TEMA:

DOCENTE:
ING. ORLY FERNANDO CEBALLOS

CURSO:
10mo “A”

QUEVEDO – LOS RÍOS – ECUADOR

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ASPECTOS GENERALES DE LA INGENIERÍA GENÉTICA

La ingeniería genética es el proceso de la utilización de la tecnología del ADN recombinante (ADNr)

para alterar la composición genética de un organismo. Tradicionalmente, los seres humanos han
manipulado indirectamente los genomas mediante el control de la reproducción, así como
seleccionando aquella descendencia que tenga las características deseadas. La ingeniería genética
implica la manipulación directa de uno o más genes. Lo más común es que un gen de otra especie se
introduzca en el genoma de un organismo para producir el fenotipo deseado. (A Arana, 1995)

La ingeniería es una de las disciplinas más famosas del mundo, ya que es la base para una serie de
profesiones de gran impacto para la sociedad. De forma generalizada, puede definirse como el
conjunto de conocimientos y técnicas utilizadas para innovar y desarrollar productos o elementos que
ayuden a satisfacer las necesidades de las personas. (A Arana, 1995)

DEFINICIÓN DE LA INGENIERÍA GENÉTICA

La ingeniería genética es la manipulación directa de los genes de un organismo usando

la biotecnología para modificar sus genes, ya sea eliminando, duplicando o insertando material
genético por medio de las diferentes tecnologías de edición genética. (LM González, 1997)

 Todo organismo, aún el más simple, contiene una enorme cantidad de información. Esta
información se encuentra almacenada en una macromolécula que se halla en todas las células:
el ADN. Este ADN está dividido en gran cantidad de sub-unidades (la cantidad varía de
acuerdo con la especie) llamadas genes. Cada gen contiene la información necesaria para que
la célula sintetice una proteína. Así, el genoma1 va a ser el responsable de las características
del individuo. (LM González, 1997)

 Los genes controlan todos los aspectos de la vida de cada organismo, incluyendo
metabolismo, forma, desarrollo y reproducción. Por ejemplo, la síntesis una proteína X hará
que en el individuo se manifieste el rasgo "pelo oscuro", mientras que la proteína Y
determinará el rasgo "pelo claro". Vemos entonces que la carga genética de un determinado
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organismo no puede ser idéntica a la de otro, aunque se trate de la misma especie. (LM
González, 1997)

Sin embargo, debe ser, en rasgos generales, similar para que la reproducción se pueda concretar. Y
es que una de las propiedades más importantes del ADN, y gracias a la cual fue posible la evolución,
es la de dividirse y fusionarse con el ADN de otro individuo de la misma especie para lograr
descendencia diversificada. Otra particularidad de esta molécula es su universalidad. No importa lo
diferente que sean dos especies: el ADN que contengan será de la misma naturaleza: ácido nucleico.
(LM González, 1997)

INTRODUCCIÓN DE LOS VECTORES DE TRANSFORMACIÓN GÉNICA

Un vector génico es un agente que transfiere información genética, por algún medio, de un organismo
a otro. En biotecnología, un vector de clonación es utilizado para portar el ADN recombinante desde
una célula donadora hasta la célula receptora en la que se inserta el gen que se quiere transferir. A
continuación, se infecta la célula hospedadora con ese vector recombinante, obteniéndose la célula
transgénica. (C Díaz Granados, 2018)

Los vectores con los que los científicos experimentan son los plásmidos y transposones, con los que
es posible insertar genes foráneos al núcleo de una célula. Otros vectores génicos son
los bacteriófagos y cósmidos. También se puede considerar vectores genéticos a los virus, puesto que
en el curso de su ciclo insertan información genética en las células que invaden. (C Díaz Granados,
2018)

Los vectores deben llevar, además del gen protagonista, otros genes llamados marcadores, que puedan
identificar a las células que sean resistentes al antibiótico marcado o que emitan luz, según los casos,
serán las portadoras del ADN recombinante. La probabilidad de fracaso en la formación del
transgénico es muy alta, debido al descontrol en la inserción de ADN foráneo, de manera que la célula
puede desorganizarse y morir. (C Díaz Granados, 2018)
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Vectores cointegrados. Por una parte, se dispone de un plásmido de E. coli donde se ha clonado
previamente el gen foráneo. Por otra, se tiene un plásmido Ti desarmado en el que se deben introducir
secuencias de ADN del plásmido de E. coli entre los bordes del T-DNA. Cuando el plásmido de E.
coli se transfiere a Agrobacterium, el ADN foráneo se integra entre los bordes del T-DNA
de Agrobacterium mediante recombinación homóloga. El resultado es un sólo plásmido donde se
encuentran la región vir y el T-DNA con el ADN foráneo. En este caso, se dice que la región vir actúa
en "cis" respecto al T-DNA, ya que ambos están en un mismo plásmido. (C Díaz Granados, 2018)

Vectores binarios. Aprovechan el hecho de que la región vir puede actuar en "trans" respecto al T-
DNA, es decir, reconocerlo, aunque se encuentre en un plásmido diferente. En este caso, el plásmido
Ti desarmado sólo tiene la región vir. Los bordes del T-DNA se encuentran en un segundo plásmido
que tiene además un origen de replicación funcional en E. coli y en Agrobacterium. Este segundo
plásmido es mucho más pequeño que el plásmido Ti y, por tanto, mucho más fácil de manipular para
introducir los genes foráneos entre los bordes del T-DNA. Es importante que entre ambos bordes
haya lugares para poder cortar el ADN con enzimas apropiadas (enzimas de restricción) y ligar (con
otras enzimas que se llaman ligasas) el ADN foráneo que se quiere introducir en la planta. (C Díaz
Granados, 2018)
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INTRODUCCIÓN DE LOS PLÁSMIDOS PARA LA TRANSFORMACIÓN GÉNICA

Los vectores más utilizados en la transformación de plantas son plásmidos, donde fueron clonados
los genes que serán introducidos en el genoma vegetal. La construcción quimérica, usualmente, se
encuentra acompañada con otra construcción funcional, que corresponde a un gen marcador de
selección. La introducción de este gen responde a la necesidad de identificar las plántulas que hayan
sido regeneradas, a partir de células que insertaron el transgen dentro del conjunto del material vegetal
sometido al proceso de transformación. (Fonseca, 2012)

Los métodos de transformación utilizados, en la actualidad, se basan en la obtención de células

transgénicas y posterior recuperación de plantas completas y fértiles, a través del cultivo de tejidos y
selección in vitro. En la mayoría de especies, se observa una importante influencia del genotipo en la
respuesta al cultivo in vitro. Por ello, cuando se usa esta tecnología, con fines de mejoramiento
genético es muy importante conocer la respuesta morfogenética de los distintos genotipos. (Fonseca,
2012)

Una vez se logra la regeneración de las plantas transgénicas a partir de células transformadas, se debe
realizar la verificación del estatus transgénico de estas plantas, mediante el uso de técnicas
moleculares, como PCR o "Southern blot", para determinar la inserción del transgen, RT-PCR o
"Northern blot", para verificar su transcripción y "Western Blot" o ELISA, para detectar la producción
de la proteína. (Fonseca, 2012)

Se denominan plantas transgénicas a aquellas plantas que fueron modificadas genéticamente por la
introducción de uno o varios genes (con sus respectivas secuencias reguladoras), por técnicas
moleculares, que les confieren una(s) nueva(s) característica. Las plantas transgénicas fueron
desarrolladas por primera vez a comienzos de los 80, por cuatro grupos que trabajaban de manera
independiente. Se produjeron células de plantas de tabaco y plantas de petunia resistentes a
kanamicina; también, por primera vez, se insertó un gen del fríjol en una planta de girasol. (Fonseca,
2012)
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La obtención de plantas transgénicas ha permitido desarrollar nuevas variedades de plantas,

cultivadas con características de interés, como son resistencia a factores bióticos y abióticos, aumento
en la calidad y rendimientos más altos. También, se ha demostrado la utilidad de las plantas
transgénicas para producir vacunas u otras sustancias terapéuticas y para la producción de materias
primas de interés industrial, como plásticos biodegradables. De acuerdo a lo anterior es claro el alto
potencial y la amplia aplicabilidad de las plantas transgénicas, no solo en la agricultura sino en la
industria en general. (Fonseca, 2012)

DISTINTOS TIPOS DE VECTORES

Plásmidos

Los plásmidos fueron los primeros vectores que se desarrollaron, y aún son ampliamente usados.
Estos vectores proceden de moléculas de ADN de doble cadena extracromosómicas que se
encuentran de manera natural y que se replican autónomamente dentro de las células bacterianas.
(Klug, 2019)

Bacteriófago lambda

El genoma del fago lambda se ha cartografiado y secuenciado completamente. Para ser utilizado de
vector, el tercio central de su cromosoma puede ser reemplazado por ADN exógeno, sin que ello
afecte a la capacidad del fago de infectar células y formar cápsides.

Para clonar ADN utilizando este vector, se purifica el ADN del fago y se corta con una enzima de
restricción, con la misma enzima de restricción cortamos el fragmento de ADN de interés y los
unimos con un ADN ligasa. Las vectores lambdas recombinantes se empaquetan in vitro en las
cápsides proteicas del fago, y se introducen en células huésped bacterianas. Dentro de las bacterias,
los vectores se replican y forman muchas copias del fago infectivo, llevando todas ellas el fragmento
de ADN de interés en la clonación. Los vectores fágicos pueden transportar fragmentos de hasta 20
kb. (Klug, 2019)

Cósmidos
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Los cósmidos son vectores híbridos utilizando partes del cromosoma de lambda y de plásmidos.
Tienen la secuencia cos del fago lambda, necesaria para el empaquetamiento del ADN del fago dentro
de su cubierta proteica, además contienen secuencias plasmídicas necesarias para la replicación y
genes de resistencia a antibióticos. Los cósmidos pueden transportar casi 50 kb de ADN insertado.
(Klug, 2019)

YAC

Los YAC son cromosomas artificiales de levadura. Un YAC tiene telómeros en sus extremos, un
origen de replicación y un centrómero. Estos componentes están unidos a genes marcadores de
selección y a un grupo de enzimas de restricción para insertar ADN exógeno.

Estos cromosomas artificiales de levadura permiten clonar grandes trozos de ADN, de 100 a 1000
kb. (Klug, 2019)

BAC

Un BAC es un cromosoma artificial bacteriano, basado en el plásmido de fertilidad (factor F) de

bacterias. Es el más utilizado.

El factor F es un plásmido que se replica independientemente y que transfiere información genética

durante la conjugación bacteriana.

Los BAC son circulares y muy estables, con lo que no se rompen. Tienen un tamaño de 100 kb y
pueden transportar insertos de entre 100 y 300 kb. Solo permiten una copia del cromosoma por célula.
(Klug, 2019)

Fagémidos

Es un tipo de vector de clonación empleado en biotecnología, compuesto por un plásmido al que se

le ha incorporado el origen de replicación de un fago filamentoso, tales como el fago M13 o F1.
(Klug, 2019)
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RELACIONES ENTRE EL TAMAÑO DEL INSERTO Y EL VECTOR

El tamaño de los insertos que se pueden clonar puede ser considerable; sin embargo, si son mayores
de 10 kb, el plásmido se hace generalmente inestable. Vector molecular
son moléculas transportadoras que transfieren y replican fragmentos de ADN que llevan insertados
mediante técnicas de ADN recombinante. Para que sirva de vector, una molécula debe ser capaz de
replicarse junto con el fragmento de ADN que transporta. También tiene que tener secuencias de
reconocimiento que permitan la inserción del fragmento de ADN a clonar. (Dolores, 2019)

Para insertar un fragmento de ADN a un vector, se utiliza una enzima de restricción que se mezcla
con fragmentos de ADN producidos con la misma enzima, posteriormente, se adiciona la enzima
Fosfatasa Alcalina, la cual es la encargada de evitar la recircularización del vector, ya que adiciona
un extremo 3' Fosfato que evita la unión de ambos extremos así como la complementariedad y
formación de un enlace fosfodiéster. Inmediatamente se adiciona el ADN que pretende insertarse en
el vector, donde uno de los extremos se une por complementariedad y se utiliza una ligasa para
generar la unión y su recircularización. (Dolores, 2019)
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Referencias
A Arana, A. T. (1995). Aspectos de la ingieneria genetica . 20-20.
C Díaz Granados, A. C. (2018). introduccion de los vectores de transformacion genica. 1-10.
Dolores, A. P.-R. (2019). RELACIONES ENTRE EL TAMAÑO DEL INSERTO Y EL VECTOR. 1-25.
Fonseca, V. (2012). introduccion de los plasmidos para la transformacion genica. 1-25.
Klug, W. S. (2019). Distintos tipo de vectores . 1-20.
LM González, M. G. (1997). Definicion de la 8ngieneria genetica . 1-30.