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Universidad de La Frontera,
Temuco, Chile Microbiologic and molecular diagnostic of cariogenic bacteria in pregnant women
Facultad de Medicina
Departamento de Ciencias from the Araucania Region of Chile
Preclínicas (CLHG)
Estudiante de Odontología (PPF, TDLM)
Dental caries is a transmissible infectious disease in which Streptococcus mutans is a principal protagonist.
Departamento de Ciencias Básicas
(LASN) Although it is widely believed that pregnancy is harmful to teeth, the effect of pregnancy on the development
Facultad de Ingeniería, Ciencias y of caries is not clear. Considering this situation, the aim of the present study was to evaluate the levels of
Administración. Departamento de infection and to differentiate bacterial species with cariogenic potential in pregnant women from the
Matemática y Estadística (ASC)
Araucania region in Chile, by bacteriological and molecular analysis. In this work, we evaluated 51 pregnant
Financiamiento: Proyecto DIUFRO EP women aged 15 to 40 years. The results show that 100% of women are infected by mutans streptococci Group,
120335, Dirección de Investigación y
Desarrollo, Universidad de La
and 70.6% exhibited high levels of infection (> 500.000 cfu/mL). The molecular analysis shows that
Frontera y Programa "Aplicación Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus frequencies were 92.1% and 1.9%, respectively. In
Sistema Financiamiento de Tesis Pro conclusion, our data suggest that pregnant women are a high risk group for caries development.
Desarrollo IX Región-FNDR", año
Key words: Caries, Streptococci mutans, molecular diagnosis.
2004, Código BIP 20167359-0.
Palabras claves: Caries, Streptococcus grupo mutans, molecular diagnosis.
Recibido: 25 de noviembre de 2006
Aceptado: 16 de abril de 2007
Correspondencia a:
Luis A. Salazar Navarrete
lsalazar@ufro.cl
Introducción dramática, ya que la prevalencia de caries para los
niños de 6 a 8 años es de 96,7% y para los de 12 años es
RM, se hace necesario conocer cuál es la realidad de la El promedio de edad de este grupo fue de 25 ± 8
salud dentaria de estas mujeres. Esto, no sólo conside- años, y la edad gestacional de 18 ± 8 semanas. Todas
rando la trascendencia que tiene para ella misma, sino las pacientes provenían del Consultorio de Atención
que, más importante aún, el hecho de que la calidad de Secundaria Miraflores de la ciudad de Temuco (capital
la salud bucal de los niños, tiene relación con la salud de la Región de La Araucanía, Chile).
bucal de sus madres; se ha demostrado que la princi-
pal fuente de adquisición y transmisión de las bacte- Criterios de exclusión: Se excluyeron las mujeres
rias con potencial cariogénico en niños, es a partir de que estuvieran haciendo uso de terapia antimicrobiana,
la saliva de sus propias madres7,8. tanto al momento del estudio como dos meses previos
Alrededor de 300 especies bacterianas han sido a éste; que se encontraran en tratamiento con algún
asociadas con la placa dental, pero sólo la presencia otro medicamento; las que presentaban signos clíni-
de Streptococcus del grupo mutans ha sido relaciona- cos de xerostomia o la presencia de enfermedades
da con la formación de caries dental en humanos, metabólicas, como diabetes mellitus o diabetes gesta-
considerándose como el principal agente productor de cional.
caries, y dentro de este grupo, Streptococcus mutans El estudio contó con la aprobación del Comité de
(Streptococcus grupo mutans especie mutans) y Ética de la Facultad de Medicina, Universidad de La
Streptococcus sobrinus (Streptococcus grupo mutans Frontera. Todas las participantes firmaron voluntaria-
especie sobrinus) son los que aparecen con mayor mente un consentimiento informado.
frecuencia9,10.
En la actualidad, los métodos de detección e identi- Análisis clínico: Las condiciones de sus dentadu-
ficación fenotípica de bacterias cariogénicas y, ras fueron evaluadas mediante un examen clínico oral,
específicamente, de Streptococcus grupo mutans, uti- en el que se obtuvo el índice COPD, por medio de una
lizan pruebas como: manitol, resistencia a bacitracina, ficha clínica que tuvo la función de contener la infor-
arginina dehidrolasa, inulina, esculina y rafinosa, entre mación general del paciente: datos personales, antece-
otros, lo que los hace bastante laboriosos y exten- dentes mórbidos y médicos, junto con los anteceden-
sos11. Como consecuencia de esto, se han comenzado tes odontológicos personales. Además, contiene un
a aplicar técnicas de biología molecular basadas en la detalle del examen intraoral realizado y el índice COPD
reacción de polimerasa en cadena (RPC), técnica que arrojado.
permite obtener resultados altamente sensibles y es-
pecíficos, con rapidez y de forma relativamente senci- Análisis microbiológico: La detección de los micro-
lla12-14. organismos cariogénicos fue realizada mediante el mé-
La técnica de RPC tiene por finalidad amplificar todo descrito por Linossier y cols18. De acuerdo con el
segmentos específicos del ADN de una célula, lo que resultado de los recuentos, las pacientes se clasifica-
permite su detección e identificación. En el caso de ron dentro de tres rangos de riesgo cariogénico: bajo,
Streptococcus del grupo mutans se han utilizado va- medio y alto.
riados genes específicos para las diferentes especies
pertenecientes a este grupo; algunos ejemplos son: Análisis molecular: Para la detección e identifica-
gtfB, groESL, wapA y spaP12,15-17. ción de las bacterias S. mutans y S. sobrinus se ampli-
Por lo señalado anteriormente, esta investigación ficó un fragmento específico del ADN cromosomal de
busca dar a conocer el grado y la frecuencia de infec- estas bacterias, mediante la técnica de RPC, utilizando
ción por bacterias responsables de la producción de como templado saliva. Las secuencias de los partidores
caries en mujeres embarazadas, grupo de riesgo para el usados, el tamaño de los fragmentos amplificados, la
desarrollo de esta enfermedad, mediante análisis mi- posición en el gen y Tº de hibridación son descritos en
crobiológico y molecular, en una de las regiones de la Tabla 1.
Chile donde la prevalencia de caries es más elevada. Para evaluar los productos de la RPC, estos se
tiñeron con bromuro de etídio y se realizó electroforesis
en gel de agarosa, visualizando los productos de la
Material y Método RPC en un transiluminador UV.
Pacientes y muestras clínicas: Se estudiaron 51 Análisis estadístico: Los resultados fueron anali-
mujeres embarazadas, de nivel socioeconómico bajo, zados mediante el programa estadístico SigmaStat para
edades entre 15 y 40 años, con un promedio de edad de
27 ± 8 años, y una edad gestacional de 14 ± 8 semanas, *Definido por el criterio de dos apellidos mapuches y el reconocimiento por la
de las cuales 17 tenían ascendencia mapuche1.* paciente de su pertenencia a la etnia señalada.
Tabla 1. Secuencia de los partidores utilizados para la detección Windows, versión 2.0 (San Rafael, CA, EE.UU.). Las
e identificación de S. mutans y S. sobrinus en muestras de saliva por RPC variables continuas fueron evaluadas en forma des-
criptiva. Se procedió al cálculo de promedios, desvia-
Partidores Secuencia Localización Tº Fragmento
ciones estándar y la observación de valores máximos y
cADN hibridación (pb)
mínimos. La asociación entre las diferentes variables
SMUT5 5'-tgaaaccttgtctatctcctctttacc-3' 1.760 - 1.783 53 137
fue evaluada mediante los tests t de Student o ANOVA.
SMUT3 5'-tcagtttccaaagggctctg-3' 1.877 - 1.896 El nivel de significancia utilizado fue p < 0,05.
SSOB5 5'-gcagtctgacgatgcttctac-3' 184 - 204 50 198
SSOB3 5'-ccgtcagtccaacaaataatc-3' 361 - 381
Resultados
La secuencia de nucleótidos fue obtenida desde el GenBank, Número de acceso AE014854.1
para Streptococcus mutans y NAB083137.1 para Streptococcus sobrinus.
El análisis clínico mostró que las pacientes estudia-
das tenían un COPD de 10,2 ± 4,7, lo que indica una
historia de caries cercana al 30% de la dentadura.
Además, 100% de las mujeres embarazadas presenta-
Tabla 2. Grupos de riesgo clasificados de acuerdo
al recuento de ufc/mL de Streptococcus del grupo ba gingivitis.
mutans, obtenido por método semicuantitativo Los resultados de los recuentos microbiológicos
(Linoscreen) para S. grupo mutans muestran que la totalidad de las
mujeres estudiadas presentan estas bacterias en su
ufc/mL Riesgo n %
cavidad oral (> 10.000 ufc/mL). En la Tabla 2 se presen-
10.000-50.000 Bajo 9 17,6 ta la clasificación del riesgo de acuerdo al recuento de
100.000-250.000 Medio 6 11,8 colonias de S. grupo mutans en saliva.
500.000-1.000.000 Alto 36 70,6 Al evaluar el grupo de mujeres según trimestre de
Total 51 100 gestación y relacionarlo con los recuentos de colo-
nias, llama la atención que las mujeres que se encon-
n, número de individuos traban en el primer trimestre de embarazo presentaron
valores de ufc/mL mayores que aquellas que se en-
contraban en el segundo y tercer trimestre de gesta-
ción. Sin embargo, esta diferencia no fue significativa
(p = 0,184, Figura 1).
Al analizar los resultados de la clasificación de ries-
go según trimestre de gestación, 83,3% de las mujeres
que se encontraban en el primer trimestre (< 12 sema-
ufc/mL
Tabla 4. Comparación de los recuentos de colonias (media ± DS), clasificación del riesgo e índice COPD entre mujeres embarazadas
de origen mapuche y no mapuche
Discusión
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