M.Sc.

Astriht Ruiz Ríos

Principales razones
para controlar los
microorganismos

 Prevenir la transmisión de
enfermedades
 Evitar el deterioro de los
alimentos y otros
materiales
 Evitar la contaminación en
procesos industriales que
requieran cultivos puros,
en laboratorios de
diagnóstico o
investigación.
 Impedir la presencia de
lama bacterial en las
fábricas ( de papel y de
azúcar).
 Controlar las algas en las
piscinas recreacionales y
en los sistemas acuáticos
de refrigeración.
 Prevenir el deterioro
bacterial en las pinturas a
base de agua.
 Controlar las manchas y
la podredumbre de origen
micótico en las maderas.
 Impedir la incidencia de
enfermedades en las
cosechas agrícolas
causadas por patógenos
 Erradicar
microorganismos de un
hospedador que está
infectado.
DEFINICIONES
Y CONCEPTOS

Esterilización:
eliminación de toda
forma de vida, incluidas
las esporas.
Asepsia: técnicas
empleadas para
impedir el acceso de
microorganismos al
campo de trabajo.
 Higienización:
Agente que
reduce la
población
bacteriana hasta
niveles seguros
para las
exigencias de la
salud pública.

Se aplica a objetos inanimados y matan el 99% de los microbios en

crecimiento.
También se le da el nombre de Sanitización.
Antimicrobiano: agente que mata o inhibe
el crecimiento de los microorganismos
(antibacteriano, antifúngico, etc.).

Microbicida (Germicida): agente que mata

formas vegetativas, pero no necesariamente
las esporas de un microorganismo
(bactericida, fungicida, alguicida, etc.).

Microbiostático: agente que inhibe el

crecimiento de microorganismos
(bacteriostático, fungistático, etc.).
Desinfección: es el proceso de
destrucción de los agentes
infecciosos.
Desinfectante: Sustancias
químicas que matan las formas
vegetativas y no
necesariamente las formas de
resistencia de los
microorganismos patógenos.
Se refiere a sustancias
empleadas sobre objetos
inanimados.
Antisepsia: Operaciones o técnicas encaminadas a
crear un ambiente que impida el desarrollo de los
microorganismos e incluso pueda matarlos.
Antisépticos: Sustancias químicas que previenen el
crecimiento o acción de los microorganismos ya sea
destruyéndolos o inhibiendo su crecimiento y
actividad.
Se refiere a sustancias que se aplican sobre el
cuerpo
 Antibiosis: fenómeno biológico
que detiene o destruye el
crecimiento microbiano debido a
sustancias producidas por otro
ser vivo.

Antibióticos: sustancias producidas por un ser vivo que se

oponen a la vida de otro ser vivo.
Agentes terapéuticos:
antimicrobianos
empleados en
el tratamiento de
infecciones.

Agentes
quimioterapéuticos:
sustancias químicas
empleadas en el
tratamiento de
enfermedades
infecciosas o
enfermedades causadas
por la proliferación de
células malignas.
MUERTE DE LAS
POBLACIONES
MICROBIANAS Y
CURVAS DE
SUPERVIVENCIA
 Criterio de muerte de un microorganismo: pérdida
irreversible de la capacidad de reproducción en un
medio adecuado. También implica destrucción de la
célula.

Proliferación: desarrollo y crecimiento de los microorganismos y por lo tanto,

incremento de su población

Supervivencia: no hay ni muerte ni proliferación, permaneciendo los

microorganismos inactivos o inhibidos.
 100%

por unidad de volumen

por unidad de volumen

Logaritmo de los
sobrevivientes
Sobrevivientes

Tiempo (horas)

Cuando una población microbiana se expone a un

agente letal, la cinética de la muerte es casi siempre
exponencial ya que el número de supervivientes
disminuye de forma geométrica con el tiempo.
 Factores que afectan el control de
los microorganismos

 El número de microorganismos
 El tiempo de exposición.
 La concentración del agente de control
 Condiciones ambientales locales
 El tipo de microorganismos
 La temperatura
 El estado físico de el microorganismo
 El número de
microorganismos

A mayor número de
microorganismos y/o resistencia
de la población se necesitará
mayor tiempo de esterilización.

Para determinar el número de sobrevivientes es necesario conocer el

tamaño inicial de la población.
Para establecer los
procedimientos de
control hay que
considerar dos
factores:
la tasa de mortalidad
y
el tamaño de la
población inicial
 El tiempo de exposición.
D: tiempo requerido para reducir
la población microbiana un 90%

Disminución progresiva en el número de microorganismos

sobrevivientes en función del tiempo de exposición al agente
Efecto de la concentración del
agente de control

Tiempo (minutos)
Efecto de diferentes concentraciones de fenol sobre
una población de E.coli
Condiciones Ambientales

El calor es más eficaz en un medio

ácido que en uno alcalino.
La consistencia del material, acuoso
o viscoso, influye marcadamente en
la penetración del agente.
• Las concentraciones altas de
carbohidratos aumentan, por lo
general, la resistencia térmica de los
organismos.
La presencia de materia orgánica extraña
reduce notablemente la eficacia de los agentes
antimicrobianos :
No permite que el agente llegue al
microorganismos
Se combina con el desinfectante y lo
precipita
Se combina con el desinfectante y lo
inactiva dejando libres concentraciones tan
bajas que no logran el efecto deseado sobre
la población microbiana
La naturaleza del microorganismo

Desinfección por UV
http://www.cepis.ops-oms.org/eswww/fulltext/aguabas/ultravio/ultravio.html
 Estado fisiológico de
las células: las células
jóvenes son más
vulnerables que las  Tipo de
viejas. microorganismo: las
células vegetativas en
desarrollo son mucho
más susceptibles que las
esporas.
La temperatura

Tiempo

Efecto de la temperatura en el control de E.coli con fenol a una

concentración de 4,62 g/l
Modo de acción de los
agentes microbianos:

 Alteran la
permeabilidad de
la membrana
 Dañan las
proteínas y los
ácidos nucleicos
FACTORES FISICOS DE CONTROL DEL
CRECIMIENTO MICROBIANO
 Altas Temperaturas

 A.- Esterilización por calor húmedo:

 Autoclave
 Tindalización
 Pasteurización
 Hervir
 B.- Esterilización por calor seco:
 Horno
 Incineración
Hay que distinguir entre calor húmedo y
calor seco:

 La alta temperatura  El calor húmedo mata los

combinada con un alto grado
de humedad es uno de los
métodos más efectivos para
destruir microorganismos.
microorganismos porque
coagula sus proteínas siendo
más rápido y efectivo que el
calor seco que los destruye al
oxidar sus constituyentes
químicos.

Las esporas de Clostridium

botulinum son destruidas:
En 4 a 20 minutos a 121° C en calor
húmedo.
En 2 horas de exposición al calor
seco.
Autoclave:
 El calor en
forma de
vapor a
saturación y
a presión
proporciona
temperaturas
superiores a
El aparato utilizado se llama
las que se
autoclave (una olla que
obtienen por
regula la presión interna y el
ebullición.
tiempo).
Los autoclaves de laboratorio :
Presión de vapor de una atmósfera por
encima de la presión atmosférica lo cual
corresponde a una temperatura de
120°C.

El tiempo de exposición depende del

volumen del líquido, de tal manera que
para volúmenes pequeños (hasta unos 3
litros) se utilizan 20 minutos a 121° C; si
los volúmenes son mayores debe
alargarse el tiempo de tratamiento.

Usualmente 15 minutos a 121°C

No se deben esterilizar en el autoclave:
Sustancias que no se mezclan con el
agua porque no pueden ser alcanzadas
por el vapor sobreviviendo los
microorganismos que contengan.
Sustancias que se alteran o son
destruidas por tratamientos prolongados
de calor.
 La esterilización comienza cuando se ha
alcanzado la temperatura óptima en el interior del
aparato (autoclave o estufa)
 Según el contenido, un autoclave puede requerir
tiempos más largos para alcanzar la temperatura
de esterilización.
Pasteurización:
Es un proceso que reduce la población microbiana de un
líquido.
La leche, nata y ciertas bebidas alcohólicas (cerveza y
vino), los jugos, se someten a tratamientos de calor
controlado que sólo matan a ciertos tipos de
microorganismos pero no a todos.
Mycobacterium tuberculosis es el
patógeno más resistentes al
calor que puede transmitirse
por la leche cruda y se destruye
en 15 minutos a 60° C.
Coxiella burnetti, agente causal de
la fiebre Q, se encuentra a
veces en la leche, es más
resistente al calor que
Mycobacterium tuberculosis por
lo que la pasteurización de la
leche se realiza:
• A 62,8° C durante 30
minutos
• A 71,7° C durante 15
minutos
Pasteurización tradicional: 63 a 65°C por 30 min
Pasteurización Flash: el líquido se calienta a 72 ºC por
15 seg y rápidamente se enfría. Puede ser adaptada a
flujos continuos.
Ultrapasteurización: 150 oC por 1-3 seg
Esterilización por
calor seco:
Horno :

 La esterilización seca se logra a 160-170 °C por 2-3

hrs.
 El calor seco se utiliza principalmente para esterilizar
material de vidrio y otros materiales sólidos estables al
calor.
 Para el material de vidrio de laboratorio se consideran
suficientes dos horas de exposición a 160° C.
 Incineración:

 La destrucción de los
microorganismos por combustión
o cremación.
 En los laboratorios, las asas de
siembra se calientan a la llama
de mecheros Bunsen.
 La incineración también se utiliza
en la eliminación de residuos
hospitalarios.
 Bajas Temperaturas

 En general, el metabolismo de las

bacterias se inhibe a temperaturas
por debajo de 0° C.
 No matan a los microorganismos
sino que pueden conservarlos
durante largos períodos de tiempo.
 Circunstancia aprovechada por los
microbiólogos para conservar los
microorganismos indefinidamente.
 Los cultivos de microorganismos
se conservan congelados a -70° C o
incluso mejor en tanques de
nitrógeno líquido a -196° C.
Radiaciones

 A.- Radiaciones ionizantes

 Rayos gamma
 Rayos catódicos
 B.- Radiaciones no ionizantes
 Luz ultravioleta
Radiaciones
ionizantes
Rayos gamma
Las radiaciones gamma tienen mucha energía y son emitidas
por ciertos isótopos radiactivos como es el Co60.
Son difíciles de controlar porque este isótopo emite
constantemente los rayos en todas direcciones.
Estos rayos pueden penetrar materiales, por lo que un
producto se puede empaquetar primero y después esterilizar.
Rayos catódicos

Radiación con haz de electrones

Se usan para esterilizar material quirúrgico, medicamentos y otros
materiales.
Ventaja: el material se puede esterilizar después de empacado (ya que
éstas radiaciones penetran las envolturas) y a la temperatura
ambiente.
Radiaciones no
ionizantes
Luz ultravioleta:
 Radiaciones con longitudes de
onda alrededor de 265 nm son
las que tienen mayor eficacia
como bactericidas (200 - 295
nm).
 La luz UV tiene poca
capacidad para penetrar la
materia por lo que sólo los
microorganismos que se
encuentran en la superficie de
los objetos que se exponen
directamente a la acción de la
luz UV son susceptibles de ser
destruídos.
Ondas ultrasónicas
(sonicación)
 En general, los microorganismos suspendidos en un líquido y sometidos a
la acción de ondas ultrasónicas de altas intensidades (20,000 ciclos/seg.)
durante cierto tiempo se destruyen porque se rompe la pared celular y
se pierde el contenido de la célula.
 Se usan en tratamiento de pequeños volúmenes de agua
Filtración

 Membranas con poros de un

tamaño determinado o
materiales filtrantes. El tamaño
del poro dependerá del uso al
que se va a someter la muestra.
 Los microorganismos quedan
retenidos en parte por el
pequeño tamaño de los poros
del filtro y en parte por adsorción
a las paredes del poro durante
su paso a través del filtro debido
a la carga eléctrica del filtro y de
los microorganismos.
Existen tres tipos básicos de
filtros:
 Filtros profundos o Filtros
de profundidad:
Son filtros elaborados
generalmente de acetato de
celulosa o nitrato de celulosa
y contienen poros de tamaño
uniforme.
Dadas sus características
los filtros de profundidad se
usan principalmente como
prefiltros, ya que permiten
eliminar las partículas
grandes pero no la
eliminación total de los
microorganismos.
 Filtros HEPA

 Un filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air)

 Está compuesto por pliegues de acetato de
celulosa que retienen las partículas (incluidos
los microorganismos) del aire que sale de una
campana de flujo laminar.
 Membranas filtrantes: tienen una estructura
continua, y la retención se debe principalmente al
tamaño de la partícula.
Los filtros de membranas son discos de ésteres de
celulosa con poros tan pequeños que previenen el
paso de los microorganismos
 Estos filtros son desechables.
Perseverar es permanecer
constante a un propósito
idea o tarea