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Hierro
FerroZine. Colorimétrico
Determinación cuantitativa de hierro 5. Leer las absorbancias (A) del Patrón y la muestra frente al Blanco de
IVD reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.
Conservar a 2-8ºC
CALCULOS
PRINCIPIO DEL METODO ((A) Muestra - (A) Blanco Muestra) - (A) Blanco Reactivo
El hierro se disocia del complejo sérico hierro-transferrina en medio x 100 (Conc. Patrón) = µg/dL de hierro
(A) Patrón - (A) Blanco Reactivo
ácido débil. El hierro libre se reduce a ión ferroso mediante el ácido
ascórbico. Los iones ferrosos enpresencia de FerroZine forma un Factor de conversión: µg/dL x 0,179= µmol/L.
complejo coloreado:
CONTROL DE CALIDAD
Ácidoascórbico
Transferrina (Fe3+)2 + e- 2 Fe2++ Transferrina Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
2+ FerroZine SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Fe Complejo coloreado Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de instrumento, los reactivos y el Patrón.
hierro en la muestra ensayada1, 2. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
SIGNIFICADO CLINICO (Nota 5)
El hierro es el constituyente de un gran número de enzimas. La VALORES DE REFERENCIA
Hombres 65-175 µg/dL 11,6-31,3 µmol/L(Nota 5)
mioglobina, proteína muscular, contiene hierro, así como el hígado.
Mujeres 40-150 µg/dL 7,16-26,85 µmol/L(Nota 5)
El hierro es necesario para la producción de hemoglobina, molécula
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
que transporta el oxígeno en el interior de los glóbulos rojos. Su
establezca sus propios valores de referencia.
déficit causa anemia ferropénica. Se encuentran niveles elevados de
hierro en la hemocromatosis, cirrosis, hepatitis aguda y en
CARACTERISTICAS DEL METODO
concentraciones altas de transferrina. La variación día a día es
1,5,6 Rango de medida: Desde el límite de detección de 0,850 µg/dL hasta el límite de
común en poblaciones sanas .
linealidad de 1000 µg/dL.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/2 con
datos clínicos y de laboratorio. CINa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
REACTIVOS Precisión:
BSIS24-E 25/10/19 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com
IRON -FZ
Iron
FerroZine. Colorimétric
Quantitative determination of iron 5. Measure the absorbance (A) of Standard and sample against reagent
IVD blank. The colour is stable for at least 30 minutes.
Store at 2-8ºC CALCULATIONS
PRINCIPLE OF THE METHOD ((A) Sample - (A) Sample Blank) - (A) Reagent Blank
x 100 (Standard conc.) = µg/dL iron
The iron is dissociated from transferring-iron complex in weakly acid (A) Standard - (A) Reagent Blank
medium. Liberated iron is reduced into the bivalent form by means of Conversion factor: µg/dL x 0,179= µmol/L.
ascorbic acid. Ferrous ions give with FerroZine a coloured complex:
Ascorbicacid QUALITY CONTROL
Transferrin (Fe3+)2 + e- 2 Fe2++ Transferrin Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures:
FerroZine SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210).
Fe2+ Coloured complex
If control values are found outside the defined range, check the instrument,
The intensity of the color formed is proportional to the iron reagents and calibrator for problems.
concentration in the sample1,2. Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective
actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
CLINICAL SIGNIFICANCE
The iron is the component of a great number of enzymes. The myoglobin, (Note 5)
REFERENCE VALUES
muscular protein, contains iron, as well as the liver.
Iron is necessary for the hemoglobin production, molecule that transports Male 65 - 175 µg/dL 11,6 - 31,3 µmol/L(Note 5)
oxygen inside red globules. Their deficit in the last causes the ferropenic Female 40 - 150 µg/dL 7,16 - 26,85 µmol/L(Note 5)
anemia. High levels of iron are found in hemochromatosis, cirrhosis, These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its
hepatitis and in increased transferrin levels. own reference range.
The variation day to day is quite marked in healthy people 1,5,6.
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should PERFORMANCE CHARACTERISTICS
integrate clinical and other laboratory data. Measuring range: From detection limit of 0,850 µg/dL to linearity limit of 1000
µg/dL.
REAGENTS If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2 with
R1 Buffer Acetate pH 4,9 100 mmol/L NaCI 9 g/L and multiply the result by 2.
Precision:
R2 Reductant Ascorbic acid 99,7% Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
Mean (µg/dL) 113 250 111 249
R3 Color FerroZine 40 mmol/L
SD 0,89 0,72 3,51 6,29
IRON CAL Iron aqueous primary standard 100 µg/dL CV (%) 0,79 0,29 3,17 2,52
Sensitivity: 1 µg/dL = 0,00104.
PREPARATION Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents did not show systematic
Working reagent (WR): differences when compared with other commercial reagents.
- Ref: 1001247. Dissolve ( ) the contents of one tube R 2 Reductant The results obtained using 50 samples were the following:
Correlation coefficient (r)²: 0,9934
in one bottle of R 1 Buffer.
Regression equation: y= 1,0243x - 3,877.
Cap and mix gently to dissolve contents.
Stability: 3 months at 2-8ºC or 1 month at 15-25ºC. The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
INTERFERENCES
STORAGE AND STABILITY
Hemolyzed samples are rejected, since erythrocytes contain iron and therefore
All the components of the kit are stable until the expiration date on the falsely elevate the serum results1,2.
label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and A list of drugs and other interfering substances with iron determination has been
contaminations prevented during their use. reported 3,4.
Do not use reagents over the expiration date.
Signs of reagent deterioration: NOTES
- Presence of particles and turbidity. 1. IRON CAL: Proceed carefully with this product because due its nature it can
- Blank absorbance (A) at 562 nm ≥ 0,020. get contaminated easily.
2. It is recommended to use disposable material. If glassware is used the
ADDITIONAL EQUIPMENT material should be soaking for 6 h in diluted HCl (20% v/v) and then
thoroughly rinsed with distilled water and dried before use.
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 562 nm.
3. Calibration with the aqueous standard may cause a systematic error in
- Matched cuvettes 1,0 cm light path. automatic procedures. In these cases, it is recommended to use a serum
- General laboratory equipment (Note 2). Calibrator.
4. Use clean disposable pipette tips for its dispensation.
SAMPLES 5. The reference values are strongly method dependent.
Serum or heparinized plasma. 6. SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.
Fee of hemolysis and separated from cells as rapidly as possible. Instructions for many of them are available on request.
Stability of the sample: 2-8ºC for 7 days1.
BIBLIOGRAPHY
PROCEDURE 1. Perrotta G. Iron and iron-binding capacity. Kaplan A et al. Clin Chem The
1. Assay conditions: C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1063-1065.
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 562 nm (530-590) 2. Itano M M D. Cap Serum Iron Survey 1978 (70): 516-522.
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm light path 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
Temperature: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC 1995.
2. Adjust the instrument to zero with distilled water. 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
3. Pipette into a cuvette (Note 4): 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Reagent Blank Standard Sample Blank Sample 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
WR (mL) 1,0 1,0 1,0 1,0 PACKAGING
R 3 (drops) 1 1 -- 1
Distilled water (µL) 200 -- -- -- Ref: 1001247 Cont.
R1: 4 x 50 mL, R2: 4 x 500 mg, R3: 2 x 10 mL,
Standard (Note 1, 3) (µL) -- 200 -- --
CAL: 1 x 10 mL
Sample (µL) -- -- 200 200
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IRON -FZ
Fer
FerroZine. Colorimétrique
BSIS24-F 25/10/19 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) ESPAGNE
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IRON -FZ
Ferro
FerroZine. Colorimétrico
Determinação quantitativa de Ferro 4. Agitar e incubar 5 min a 37ºC ou 10 min a temperatura ambiente.
IVD 5. Lêr as absorvâncias (A) do calibrador e da amostra frente ao branco de
Conservar a 2-8ºC reagente. A coloração é estavel no mínimo por 30 minutos.
CÁLCULOS
PRINCIPIO DO METODO
O ferro dissocia-se do complexo sérico ferro-transferrina em meio ácido ((A) Amostra - (A) Branco Amostra) - (A) Branco Reagente
fraco.O ferro livre reduz-se a ião ferroso em presença do ácido x 100 (Conc. Padrão) = µg/dL de ferro
(A) Padrão - (A) Branco Reagente
ascórbico.Os iões ferrosos em presenta de ferrozine forma um complexo
com coloração : Factor de conversão: µg/dL x 0,179= µmol/L.
Ácidoascórbico
Transferrina (Fe3+)2 + e- 2 Fe2++ Transferrina CONTROLO DE QUALIDADE
FerroZine É conveniente analizar junto com as amostras os soros controlo padronizados :
Fe2+ Complejo com coloração
SPINTROL H Normal e Patológico (Ref. 1002120 e 1002210).
Se os valores determinados se encontrarem fora do intervalo de tolerância,
A intensidada da côr formada é proporcional á concentração de ferro na devem-se rever o instrumento, os reagentes e a tecnica.
amostrar testada 1,2. Cada laboratorio deve dispôr o seu próprio Controlo de qualidade e estabelecer
correcções caso os controlos não cumpram com as tolerâncias
SIGNIFICADO CLINICO
O ferro é o constituinte de um grande número de enzimas. A mioglobulina, VALORES DE REFERENCIA(Nota 5)
próteina muscular, contem ferro, assim como o fígado. Homens 65-175 µg/dL 11,6-31,3 µmol/L(Remarque 5)
O Ferro é necessário para a produção de hemoglobina, molécula que Mulheres 40-150 µg/dL 7,16-26,85 µmol/L(Remarque 5)
transporta o oxigénio para o interior dos glóbulos vermelhos. O seu défice
Estes valores são orientativos. É recomendavel que cada laboratorio estabeleça
causa anemia ferropénica. Os níveis de ferro estão elevados na
os seus próprios valores de referência
hemocromatose,cirrose,hepatite aguda e em concentrações elevadas de
transferrina. A variação diária é comum em populações sãs 1,5,6.
CARACTERISTICAS DO METODO
O diagnóstico clínico deve realizar-se considerando todos os dados
Intervalo de medida: Desde o limite de detecção de 0,850 µg/dL até ao limite de
clinicos e de laboratorio.
linearidade de 1000 µg/dL.
Se a concentração da amostra é superior ao limite de linearidade, diluir 1/2 com
REAGENTES CINa 9 g/L e multiplicar o resultado final por 2.
R 1 Tampão Acetatp pH 4,9 100 mmol/L Precisão:
Intraserie (n=20) Interserie (n=20)
R 2 Redutor Ácido ascórbico 99,7%
Media (µg/dL) 113 250 111 249
R 3 Corante FerroZine 40 mmol/L SD 0,89 0,72 3,51 6,29
CV (%) 0,79 0,29 3,17 2,52
FERRO CAL Padrão primario aquoso de ferro 100 µg/dL Sensibilidade analítica: 1 µg/dL = 0,00104.
Exactidão: Os reagentes SPINREACT não apresentam diferenças sistemáticas
significativas quando comparados com outros reagentes comerciais.
PREPARAÇÃO Os resultados obtidos com 50 amostras foram os seguintes:
Reagente de trabalho (RT): Coeficiente de correlação (r)²: 0,9934
- Ref: 1001247. Dissolver ( ) o conteúdo de um tubo de R 2 Redutor Equação da recta de regressão: y= 1,0243x - 3,877.
num frasco de R 1 Tampão. As características do metodo podem variar dependente do analisador utilizado.
Tapar e agitar suavemente até dissolução do conteúdo.
Estabilidade: 3 meses a 2-8ºC ou 1 mês á temperatura ambiente (15- INTERFERENCIAS
25ºC). Descartar as amostras hemolizadas pois as hemácias contêm ferro e podem dar
falsos resultados positivos1,2.
CONSERVAÇÃO E ESTABILIDADE Estão descritas várias drogas e outras substâncias que interferem com a
Todos os componentes do kit são estavéis até á data de validade indicada determinação do ferro3,4.
na etiqueta desde que os frascos sejam mantidos bem fechados, a 2-8ºC,
protegidos da luz e se evite a sua contaminação. Não utilizar os reagentes
NOTAS
fora do prazo da data indicada.
1. FERRO CAL: Devido á naturaza do produto,é aconselhável tratá-lo com
Indicadores de deterioração dos reagentes :
muito cuidado uma vez que se pode contaminar com muita facilidade.
- Presença de partículas e turvação.
- Absorvância (A) do branco a 562 nm ≥ 0,020. 2. Recomenda-se a utilização de material de plástico descartable. Caso se utilize
material de vidro este deverá estar submerso durante 6h em HCL diluído
(20%, v/v), enxaguar várias vezes com água destilada e secar antes da
MATERIAL ADICIONAL
sua utilização.
- Espectrofotómetro oU analizador para leIturas a 562 nm.
- Cuvetes de 1,0 cm de feixe de luz. 3. A calibração com o padrão acuoso pode originar vários erros sistemáticos
- Equipamento habitual de laboratorio (Nota 2). em métodos automáticos. Neste caso recomenda-sea utilização de calibradores
sericos.
AMOSTRAS 4. Usar pontas de pipeta descartáveis e limpas para a sua dispensa.
Soro ou plasma heparinizado. 5. Os valores de referência são altamente dependentes do método utilizado.
Livre de hemólise. Separado o quanto antes das hemácias . 6. SPINREACT dispõe de instrucções detalhadas para a aplicação deste
Estabilidade da amostra: O ferro é estavel durante 7 dias a 2-8ºC1. reagente em diferentes analisadores.
PROCEDIMENTO BIBLIOGRAFIA
1. Condições do ensaio: 1. Perrotta G. Iron and iron-binding capacity. Kaplan A et al. Clin Chem The
Comprimento de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 562 nm (530-590) C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1063-1065.
Cuvete: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm de feixe de luz 2. Itano M M D. Cap Serum Iron Survey 1978 (70): 516-522.
Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
2. Ajustar o espectrofotómetro a zero frente a agua destilada. 1995.
3. Pipetar para uma cuvete (Nota 4): 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Branco Reagente Padrão Branco Amostra Amostra 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
RT (mL) 1,0 1,0 1,0 1,0
R3 (gotas) 1 1 -- 1 APRESENTAÇÃO
Agua destilada (µL) 200 -- -- --
Padrão (Nota 1, 3) (µL) -- 200 -- -- Ref: 1001247 Cont.
R1: 4 x 50 mL, R2: 4 x 500 mg, R3: 2 x 10 mL,
CAL: 1 x 10 mL
Amostra (µL) -- -- 200 200
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