Guía de prácticas - Biología 2020-II

PRÁCTICA N° 04

MICROSCOPÍA

COMPETENCIA

 Reconoce al microscopio como un instrumento que facilita la investigación

 Identifica las partes de un microscopio
 Se familiariza con diversos tipos de microscopios.

I. INTRODUCCIÓN
El instrumento básico para el estudio de células y tejidos vegetales es el
MICROSCOPIO DE LUZ, su poder resolutivo es la capacidad de hacer que aquellos
objetos que están muy juntos aparezcan separados; para que nos demos una idea el
poder resolutivo del ojo humano es de aproximadamente 0.1 mm, de modo que si dos
líneas están separadas entre sí por menos de 0.1 mm, dichas líneas aparecerán como
una sola línea, no importa cuánto se acerque el observador a ellas; para tener un
ejemplo, la mayoría de las células tienen un diámetro inferior a 0.1 mm es decir sin
ayuda de lentes la vemos como una sola estructura.
Los microscopios empleados en microscopia común son de tipo óptico o compuesto y
el estereoscopico o de disección; se disponen de una gran variedad de modelos en su
construcción; básicamente, los microscopios ópticos se caracterizan por tener un tubo
que lleva dos sistemas de lentes: el ocular en el extremo superior y el objetivo en el
extremo inferior; la imagen se forma por el objetivo y se magnifica por el ocular. Los
microscopios equipados con un solo ocular se llaman monoculares; aquellos con dos
oculares, binoculares; dependiendo de su tipo, un microscopio puede estar equipado
con varios objetivos intercambiables, los más comunes son 2.5x(lupa), 10x, 40x y
100x.
Historia de invención del microscopio se remonta al siglo XVI. Precisamente en aquella
época fue construido el primer microscopio que en aquel entonces se componía de un
juego de lentes que permitían ver la imagen ampliada de un objeto. Pero el progreso
nunca para y en este momento existe una gran variedad de microscopios para
distintas aplicaciones. Diferencia entre ellos consiste no solamente en su destinación,
sino también en los principios de funcionamiento.
A un nivel básico podemos diferenciar los microscopios según el medio utilizado para
iluminar la muestra. El sistema más habitual es iluminar la muestra con luz visible,
dando lugar al microscopio óptico. Sin embargo, existen alternativas.
1. Microscopio óptico (www.mundomicroscopio.com/)
En el microscopio óptico la muestra es iluminada mediante luz visible. Esto
significa que existe un foco de luz apuntando hacia la muestra. Esa misma luz es
conducida a través del objetivo y del ocular hasta llegar a formar la imagen en el
ojo del observador. Este es el tipo de microscopio más habitual pero su
resolución está limitada por la difracción de la luz. El aumento máximo que se
puede obtener con este tipo de microscopio alcanza alrededor de 1500x.

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2. Microscopio electrónico (www.mundomicroscopio.com/)

En el microscopio electrónico la muestra no es iluminada con luz sino que se
utilizan electrones. Los electrones impactan contra la muestra dentro de una
cámara de vacío. Existen diferentes tipos de microscopio electrónico pero su
principio de funcionamiento se basa siempre en capturar los electrones
dispersados u omitidos por la muestra y así poder reconstruir una imagen.
La ventaja principal de este tipo de microscopio es que puede obtenerse un nivel
de aumento muy superior al del resto de microscopios. Sin embargo, es
necesario preparar la muestra y colocarla en una cámara de vacío de modo que
no es posible observar muestras biológicas vivas. Los dos tipos de microscopio
electrónicos principales son el microscopio electrónico de barrido (MEB) y el
microscopio electrónico de transmisión (MET).

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3. Microscopio de luz ultravioleta (www.mundomicroscopio.com/)

Los microscopios de luz ultravioleta iluminan la muestra, como el nombre indica,
con luz ultravioleta. Este tipo de luz tiene una longitud de onda más corta que la
luz visible utilizada en los microscopios ópticos. La ventaja principal de utilizar
esta técnica es que puede alcanzarse una resolución mejor que con luz visible.
Además, el contraste obtenido en la muestra es distinto que en los microscopios
ópticos. De este modo, con el microscopio de luz ultravioleta pueden observar
muestras que aparecen transparentes si son observadas con luz visible
4. Microscopio de luz polarizada (www.mundomicroscopio.com/)
También conocido como microscopio petrográfico. Este microscopio es en
realidad un tipo de microscopio óptico al que se la han añadido dos
polarizadores. Esto significa que la onda de luz utilizada para observar la
muestra tiene una dirección de oscilación concreta. Este tipo de microscopio es
muy útil para observar estructuras cristalinas de rocas y minerales.
5. Microscopio de fluorescencia (www.mundomicroscopio.com/)
Los microscopios de fluorescencia son aquellos que utilizan las propiedades de
fluorescencia para generar una imagen de la muestra. Este microscopio permite
observar sustancias que emiten luz propia cuando son iluminadas con una
longitud de onda determinada. Para ello la muestra es habitualmente iluminada
con una lámpara xenón o con una lámpara de vapor de mercurio. Estos
microscopios incorporan además filtros de luz para aislar la luz correspondiente
a la muestra

II. CARACTERÍSTICAS DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

DETERMINACIÓN DEL AUMENTO DE OBSERVACIÓN

Cuando se indica el poder de amplificación tanto en el objetivo como en el ocular,

se multiplica el aumento del ocular por el aumento del lente objetivo, en posición
de observación y el producto es el aumento total. Eje.
Ocular = 10X
Objetivo = 40X
AUMENTO 400 X

PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

El microscopio óptico consta de 3 sistemas: Mecánico, óptico e iluminación

A. EL SISTEMA MECÁNICO
CABEZAL Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser
monocular, binocular, dentro de él se encuentra el
TUBO ÓPTICO, un cilindro de metal en cuya parte
superior se encuentra colocado el ocular y en la parte
inferior el revólver, al cual se atornillan los objetivos.
BRAZO Es de metal macizo en forma de C. Por su parte
anteroposterior se une con el tubo óptico y por su
extremo inferior se conecta con la base del
microscopio o pie. En su extremo inferior se encuentra
el tornillo macrométrico y micrométrico los cuales se

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utilizan para movilizar el cabezal rápidamente

(enfoque grosero) y para movimientos lentos (Enfoque
fino), respectivamente
PLATINA Es una plataforma de forma cuadrada, rectangular o
circular que se encuentra fija en parte anterior e
inferior del brazo. Se utiliza para colocar la
preparación a observarse. Presenta una abertura
central denominada apertura de la platina, cuyo fin es
dejar pasar los rayos luminosos proyectados de la
fuente de luz, además posee presillas o pinzas que
permite sujetar la lámina o portaobjetos.
REVOLVER Es un dispositivo giratorio que está unido a la parte
inferior del tubo óptico y posee dos, tres o más roscas
donde se atornillan los objetivos. Este revólver al
hacerlo girar debe disponerse en el retén, los
objetivos, indicando que se encuentra en posición de
observación.
SISTEMAS DE Sistemas de cremalleras que permite el
DESPLAZAMIENT desplazamiento de la muestra de atrás hacia delante
O DE LA o viceversa y de derecha a izquierda o viceversa.
MUESTRA
BASE, PIE O Tiene forma de herradura o circular, y sirve de apoyo
ESTATIVO al microscopio, debiéndose colocar sobre una
superficie plana y horizontal.
TORNILLOS DE El macrométrico y el micrométrico permiten el enfoque
ENFOQUE primario con el objetivo de menor aumento de la
imagen y la focalización fina de ésta.

B. EL SISTEMA ÓPTICO
OCULARES Son cilindros cortos y huecos que se colocan en la
parte superior del tubo óptico. Interiormente poseen
dos o tres lentes, uno a cado extremo. La lente
superior se denomina lente ocular y la inferior lente de
campo. En la parte externa de estos lentes se indica
el poder de amplificación 4X, 10X, 15X, etc. Son
llamados oculares porque el ojo del observador se
coloca en este lugar.
OBJETIVOS Son tubos cortos atornillados al revolver. El objetivo
es un sistema de lentes de los cuales el que está más
cerca al objetivo se encuentra en la parte externa del
mismo: 4X, 10X, 20X, 40X 100X, etc. Este último es el
objetivo de inmersión que se usa con aceite de cedro.
A este dispositivo se le denomina lente objetivo
porque está ubicado cerca del objeto y forma una
imagen real, invertida y más grande.

C. EL SISTEMA DE ILUMINACIÓN
CONDENSADOR Se encuentra debajo de la platina y tiene como
función concentrar los rayos luminosos sobre la
preparación y puede moverse acercándose o

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alejándose de ésta por medio de un tornillo.

DIAFRAGMA Ubicado en la parte inferior del condensador. Es un
disco circular que permite regular la cantidad de luz
proyectada a la apertura de la platina
LUZ La fuente de luz se encuentra instalada en el pie.

III. MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO

Se revisará las características de cada tipo de microscopio, así como las imágenes
respectivas observables.
Microscopio óptico
Características del microscopio ópticos https://www.youtube.com/watch?v=9o5Nbn1VYK4
(10 min) (universidad de Sevilla)
Características del microscopio
electrónico de Barrido (7 min) https://www.youtube.com/watch?v=Xx0PJtRTIYQ

Imágenes de los microscopio: Ópticos, https://www.youtube.com/watch?v=_69rQDaSqbY

ME transferencia, ME de Barrido
Visita a un laboratorio de microscopia de https://www.youtube.com/watch?v=uJ_oSyA-Ovw
fluorescencia UNAM (Universidad
Nacional Autónoma de México

Se revisará las características de cada tipo de microscopio, así como las imágenes
respectivas observables.

A fin de familiarizar en la identificación y uso del microscopio se visitará la plataforma

Virtual para uso de microscopio de The University of Delaware (Estados Unidos),
visitando el siguiente enlace:

http://www1.udel.edu/biology/ketcham/microscope/scope.html

1. Observación de la letra “e”

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 Luego seguir los procedimientos indicados en la casilla “getting started”

realizar las observaciones y dibujar los elementos observados
 Una vez concluido el tour de inicio elegir la lamina de la letra “e”
 Ubicar la muestra usando adecuadamente la platina y cambiar el modo de
visión a través del botón “Switch Views,” ajustar los oculares.
 Elegir el objetivo de menor aumento 4X y enfocar usando los tornillos
macrométrico y micrométrico.
 Regule el condensador para cambiar la cantidad de luz que pasa a la
muestra
 Anotar las observaciones en los recuadros para rellenar de esta práctica.
 Cambiar de aumento al objetivo 10X. Anotar las observaciones.
 Cambiar el modo de vista con “switch view”, regresar la lámina.
2. Observación de la punta de raíz de cebolla
 Colocar la lámina de raíz de cebolla, centrar en la platina.
 Enfocar la muestra con el objetivo 4X. Anotar las observaciones.
 Cambiar de aumento a 10X. Anotar las observaciones.
 Luego cambiar a 40X. Anotar las observaciones.
 Cambiar el modo de vista con (switch view) devolver la lámina.
3. Observación de bacterias
 Colocar la lámina de bacterias y siguiendo el procedimiento anterior,
observar
 con los aumentos 4X, 10X, 40X y 100X, Anotar las observaciones.
 Devolver la lámina
4. Observación de células epiteliales de raspado de la mejilla
 Siguiendo el paso anterior colocar la lámina de células epiteliales,
observar con los objetivos de 4X, 10X, 40 X y anotar las observaciones.

OBSERVACIONES
Siguiendo el paso anterior coloque la lámina de células epiteliales y observe
con los objetivos de 4X, 10X, 40X y anotar las observaciones.
AUMENTO
ELEMENTO OBSERVADO CARACTERÍSTICAS OBSERVADAS
S
(imagen)
4X
(imagen) 10X
(imagen) 40X

Observación de Células procariota y eucariota

Acceder al siguiente enlace, observar las imágenes y anotar las
observaciones:
https://microscope-microscope.org/microscope-resources/microscope-links/

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IV.

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V. CUESTIONARIO
1. A que aumento y qué tipo de microscopio sería necesario emplear para la observación de las siguientes muestras
Tipo de
Muestra Aumento Imágen Observaciones (características)
microscopio
Eritrocitos
(glóbulos rojos)
Esporas de
hongos
Traqueidas
Organelos de
una célula
animal
Cristales de
Minerales
Corte histológico
del hígado de
ratón
Un virus
Muestra 1

Muestra 2
Muestra 3

2.

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3. En un cuadro comparativo presente las características y ventajas de un

microscopio electrónico y un microscopio óptico (compare las imágenes).

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