PRUEBA 2 DE LABORATORIO

Instrucciones
·           El trabajo es grupal (máximo 5 integrantes)
·           El grupo puede ser integrado por estudiantes de distinto grupo de laboratorio
·           Debe indicar en el documento claramente el nombre y la Carrera de los integrantes del grupo
·           En un solo documento (excel) debe venir todo lo solicitado
·           Un (1) integrante del grupo deberá subir el documento excel en la plataforma intranet (Laboratorio, Prueba 2
·           Fecha de entrega: 27 de mayo a las 12:00 pm (mediodía)

Pamela Aguilar - IQA

Benjamin Arredondo - IQA
Javiera Delgado - IQA
Nikol Huarachi - IQA
Alisson Salinas - IQA
os integrantes del grupo

ma intranet (Laboratorio, Prueba 2)

1. Se desea cuantificar el contenido de peróxido de hidrógeno en un extracto de tejido sometido a
estrés oxidativo. Para ello se realizó una curva de calibrado empleando un patrón de H2O2 de
0,0978 mM

Curv
[Patrón]
KI
Vol mM 0.800
Vol patrón
Tubo tampón Absorbancia 0.700 f(x)
(mL) vol .final
(mL) (mL) 0.600 R² =
(1,250 mL)
0.500

Absorbancia
B 0.000 0.250 1000 0.000 0.000 0.400
1 0.025 0.225 1000 0.002 0.084 0.300
2 0.050 0.200 1000 0.004 0.146 0.200
3 0.100 0.150 1000 0.008 0.291 0.100
4 0.150 0.100 1000 0.012 0.439 0.000
5 0.200 0.050 1000 0.016 0.580 -0.005 0.000

6 0.250 0.000 1000 0.020 0.727

Para determinar el contenido de peróxidos en la muestra problema se procedió a tomar 100 mL de

muestra, se agregaron 0,150 mL de tampón y 1 mL de KI. Luego se procedió a medir la
absorbancia de la mezcla de reacción a 340 nm, la que fue A= 0,562.

a) ¿En qué zona del espectroelectromagnético se realiza esta medición?

En la zona ultravioleta, puesto que se mide a 340 nm,

b) ¿Qué tipo de celda utilizaría? Justifique su respuesta

Celda de cuarzo fundido

c) Determinar la concentración de patrón en cada tubo (hacer la fórmula en la planilla e
d) Hacer el gráfico (título, nombre de variables en eje x, y)
e) Determinar la ecuación de la recta y el coeficiente de determinación (R2)
f) Determinar el coeficiente de extinción (ε) con su respectiva unidad.

y = 36,626x + 0,0018
ε=36,626[cm*mM]-1

g) Determinar la concentración de peróxidos en la muestra problema:

g.1) despejando la Ley de Lambert Beer (2 puntos)

Ley de Lambert- Beer:  A = ε l c
Ecuación de la recta:  y = B x + A
Abs MP = 0,562
Volumen de muestra = 0,1 mL
Volumen de ensayo = 1,350 mL

Entonces: 0,562 = 36,626 · c + 0,0018

C = (0,562 - 0,0018) /36,626

C = 0.015 mM en 1,350 mL (ensayo)

Entonces en la muestra problema:

CMP = 0,015mM*(1,350mL/0,1mL)
CMP = 0.206 Mm (muestra)

g.2) usando la función tendencia (2 puntos)

C = 0.015 mM en el ensayo

CMP = 0.204 mM en la muestra

o de tejido sometido a
n patrón de H2O2 de

Curva de calibrado del H2O2

0.800
0.700 f(x) = 36.9136358243123 x + 0.004100682593857
0.600 R² = 0.999787986750044

0.500
Absorbancia

0.400
0.300
0.200
0.100
0.000
-0.005 0.000 0.005 0.010 0.015 0.020
H2O2 mM

dió a tomar 100 mL de

ó a medir la

(1 puntos)

(2 puntos)

(2 puntos)
(3 puntos)
(2 puntos)
(2 puntos)
 2. Para cuantificar proteínas en una muestra problema por el método
del ácido bicinconínico (BCA) se procedió a realizar una curva de
calibrado de acuerdo a los siguientes datos:

Curva de calibr
Patrón
Tubo [albúmina] Absorbancia 0.9
0.8
(mg/mL) f(x) = 0.026892857142857 x
0.7
B 0 0 R² = 0.990838783617386
0.6
1 5 0.137

Absorbancia
0.5
2 10 0.249 0.4
3 15 0.395 0.3
4 20 0.476 0.2
5 25 0.652 0.1
6 30 0.836 0
0 5 10

Para determinar el contenido de proteínas en la muestra problema se

procedió a tomar 100 L de muestra y se llevó con los otros reactivos
a un volumen final de 1,0 mL. Luego se procedió a medir la
absorbancia de la mezcla de reacción a 620 nm la que fue A= 0,537.

a) ¿A qué longitud de onda se realizó la cuantificación? (2 puntos)

La cuantificación se realizó a 620 nm.

b) Explique cómo se obtiene la longitud de onda analítica (lo) (2 puntos)

Se grafica la absorbancia vs longitud de onda, más la absorbancia de la muestra problema, la cual viene dada en
a la longitud de onda teorica, es decir 595 nm.

Absorbancia vs Longitud de onda

0.9
0.8

0.7
0.6
Absorbancia

0.5
0.4
0.3

0.2
0.1
0
350 400 450 500 550 600 650 700 750 800
Longitud de onda
 0.2
0.1
0
350 400 450 500 550 600 650 700 750 800
Longitud de onda

c) Haga el gráfico (título, nombre de variables en eje x, y) (3 puntos)

d) Determine la ecuación de la recta y el coeficiente de determinación
(2 puntos) (R2)
e) Determine el coeficiente de extinción (ε) con su respecti (2 puntos)

y = 0,0269x - 0,0113
ε= 0,0269[(μg/mL)⋅cm]-1

f) Determine la concentración de proteínas en la muestra problema:

f.1) despejando la Ley de Lambert Beer

Ley de Lambert- Beer:  A = ε l c

Ecuación de la recta:  y = B x + A
Abs MP = 0,537

Entonces: 0,537 = 0,0269 · c – 0,0113

C = (0,537 + 0,0113) /0,0269

C = 20.38 (μg/mL) en el ensayo

Entonces en la muestra problema:

CMP = 20,0(μg/mL)*(1mL/0,1mL)
CMP = 203.8 (μg/mL) en la muestra problema

f.2) usando la función tendencia

C = 20.34 (μg/mL) en ensayo

CMP = 203.4 (μg/mL) en muestra problema

 Curva de calibrado albúmina [mg/mL]
0.9
0.8
f(x) = 0.026892857142857 x − 0.01125
0.7 R² = 0.990838783617386
0.6
Absorbancia

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 5 10 15 20 25 30
Albúmina [mg/mL]

tra problema, la cual viene dada en el gráfico, una longitud de onda cercana a los 600 nm lo cual correspondería,

700 750 800

700 750 800
pondería,
 3. Uno de los métodos de referencia para la determinación de Fe en alimentos,
plantas y suelos es la Espectrofotometría de absorción molecular en la región visible
del espectroelectromagnético. El fundamento del método es la reacción, en medio de
ácido clorhídrico, entre el ión férrico (Fe +3) y el ión tiocianato (SCN-1) para formar
un complejo soluble rojo denominado tiocianato férrico:

Tubo Volumen Volumen Volumen Absorbancia Concen.

de Patrón de HCl de KSCN
Fe+3 0,5 (mL) (mL)
mM (mL)

0 0.00 5.00 2.5 0.000 0

1 0.25 4.75 2.5 0.303 0.017
2 0.50 4.50 2.5 0.529 0.033
3 1.00 4.00 2.5 0.862 0.067
4 1.50 3.50 2.5 1.112 0.1
5 2.00 3.00 2.5 1.158 0.133
6 2.50 2.50 2.5 1.203 0.167

C2 = (C1 * V1)/V2

Tubo Volumen Volumen Volumen Absorbancia

MP1 de solución
5.0 de HCl
0.0 de KSCN
2.5 1.160
de cenizas (mL) (mL)
MP2 (mL)5.0 0.0 2.5 0.023

a) ¿Cuál es la concentración de la muestra problema 1?

Analice la información entregada e indique o sugiera posibles cambios (fundamentados con sólidos argumentos), q

Una posibilidad de obtener una concentración certera es de la forma de adjuntar la línea de tendencia a una inters
afectara el coeficiente de correlación; ignorando completamente el patrón inicial (blanco). Todo esto ocasionara U
de igual manera, presenta un error ocasionado ocasionado por la absorbancia de 1,160.

Ecuacion: 𝑦=7,0902𝑥+0,2148
𝐶 = (1,160 −0,2148)/7,0902
A = ɛ*l*C + B
C = 0,133 mM

Básandose el factor de dilución se tiene que la concentración final es:

C2 = (C1 * V1)/V2 C = 0,199 mM

 C = 0,199 mM

b) ¿Cuál es la concentración de la muestra problema 2?

Analice la información entregada e indique o sugiera posibles cambios (fundamentados con sólidos argumentos), q
Ecuacion: 𝑦=7,0902𝑥+0,2148

A = ɛ*l*C + B 𝐶 = (0,023 −0,2148)/7,0902

C = - 0,027 mM

Entonces al considerar el factor de dilución, la concentración final sería:

C2 = (C1 * V1)/V2 C = - 0,041 mM

 Concentración Patrón mM 0,500

Cuantificación de Fe3+
1.4
f(x) = 7.09023890784983 x + 0.214815699658703
1.2 R² = 0.881988752825118

1
Absorbancia

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16 0.18
Concentración (mM)

ntados con sólidos argumentos), que debiera realizar para asegurar la calidad de los result(5 puntos)

la línea de tendencia a una intersección de 0,0. Si no fuera asi, por defecto el grafico nos Tomara un valor mas elevado y eso
l (blanco). Todo esto ocasionara Una concentración errónea. También debemos tomar en cuenta que la concentración que marca,
1,160.

(5 puntos)
ntados con sólidos argumentos), que debiera realizar para asegurar la calidad de los resultados

ncentración final sería:

or mas elevado y eso
oncentración que marca,