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Artículo de investigación
Recibido: 6 de diciembre de 2012Revisado : 1 de febrero de 2013Artículo aceptado y publicado: 30 de marzo de 2013Publicado en línea en Wiley
Online Library: 29 de abril de 2013
J Chem Technol Biotechnol 2013; 88: 2176 - 2180www.soci.org Ⓧc 2013 Sociedad de la Industria Química
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www.soci.org G González-Blanco et al.
p-cresol para identificar los pasos que limitan la velocidad y estimar se determinó mediante cromatografía de gases (Varian 3350) con
los valores de las constantes cinéticas. un detector de conductividad térmica. Las temperaturas de la columna,
el inyector y el detector fueron de 50, 100 y 110◦C, respectivamente, con
helio como gas portador a un flujo constante de 16 mL min-1. La
MATERIALES Y MÉTODOS columna de acero inoxidable (Porapak Q mesh 100 - 80) tenía 1,20 m de
Estabilización de la biomasa en un reactor desnitrificante longitud y 1/8rr de diámetro. Todas las muestras líquidas se filtraron a
continuo El lodo desnitrificante utilizado para los cultivos por lotes se través de un
membrana de nylon de 0,45 m antes del análisis. El acetato se midió
produjo en un reactor de tanque agitado continuo (CSTR) de 5,0 L que
mediante cromatografía de gases (Varian Star 3400) equipada con un
funcionó durante
detector de ionización de llama (FID). La columna de acero inoxidable
±± pH 9,
un período de 1 año a 300,2◦C, 30,2 con una
era de 1,2 m de longitud y estaba empaquetada con Q Poropaq 80 - 10
hidráulica
mesh. Las temperaturas de la columna, el inyector y el detector fueron
tiempo de retención de±3,2 0,2 días. El CSTR fue alimentado con
medio mineral basal a las siguientes tasas de carga (mg L-1 día-1): de 180, 230 y 250◦C, respectivamente, con N2 como gas portador. Los
128 de NO3--N, 258 de acetato-C y 22 de NH4+-N. El medio mineral sólidos suspendidos volátiles (VSS) se determinaron de acuerdo con
basal estaba compuesto por (g L-1) K2HPO4 (4,5), KH2PO4 (3,0), y los métodos estándar para el examen del agua y las aguas residuales. 23
solución de elementos traza suministrada a 1,5 ml L-1. La solución de
oligoelementos contenía (g L-1): CaCl2-2H2O (5,54), MnCl2 (5,0),
MgCl2 (5,0), EDTA (5), CoCl2-6H2O (1,6), CuSO4-5H2O (1,57), (NH4) RESULTADOS Y DISCUSIÓN
6Mo7O24 -4H2O (1,1), FeCl36H2O (0,05). En condiciones de estado Ensayos de control
estacionario desnitrificante, las eficiencias de consumo de nitrato,
Los ensayos por lotes se evaluaron a lo largo de aproximadamente 70
acetato y amonio fueron del 100%, 76% y 89%, respectivamente, horas (Fig. 1). Los cultivos abióticos adicionados con nitrito y p-
siendo los principales productos finales el N2 y el CO2. Los lodos cresol no mostraron reacciones químicas, ya que al final de los
desnitrificantes utilizados para inocular los cultivos discontinuos se ensayos por lotes las concentraciones iniciales no cambiaron
tomaron en estado estacionario, tras 7 meses de funcionamiento significativamente. En cuanto a los controles bióticos, se evaluó el
continuo del reactor. consumo de p-Cr sin aceptor de electrones (NO2--N) y viceversa para
observar la contribución del metabolismo endógeno. Al final de los
Ensayos por lotes ensayos por lotes, el NO2--N y el p-Cr se recuperaron ∼ casi por
Los experimentos por lotes se realizaron en frascos serológicos de 160 completo (95%). Estos datos experimentales muestran que el
mL. Las incubaciones de lodos que contenían 60 mL de medio basal se consumo de ambos sustratos está asociado únicamente a la actividad
biológica desnitrificante.
inocularon con el lodo desnitrificante producido en estado estacionario
a una concentración inicial de 2±0,01 g de VSS L-1. El espacio de cabeza
se enjuagó durante 10 minutos con helio para establecer condiciones Desnitrificación organotrófica: aspecto fisiológico
anaeróbicas. Todos los frascos se cerraron con tapones de caucho Se realizaron cultivos por lotes para evaluar el comportamiento
butílico y juntas de engarce de aluminio. Se prepararon botellas respiratorio de un lodo desnitrificante en presencia de NO2--N a
separadas para las mediciones de N2. Para descartar las reacciones varias concentraciones iniciales de p-Cr (Tabla 1). En todos los
químicas, se realizaron controles abióticos sin inóculo. También se cultivos por lotes realizados, no se detectó ni metano ni óxido nitroso,
incluyeron controles bióticos sin NO2--N o p-cresol-C (p- Cr) para y el N2 fue el único gas de nitrógeno detectado.
corregir las pérdidas de sustrato no asociadas a la desnitrificación. Todos A 10 mg p-Cr L-1, los consumos de NO2--N y p-Cr fueron del 23%
los ensayos se realizaron por duplicado a 200 rpm. ±El valor del pH y del 100%, respectivamente (Tabla 1). La baja eficiencia de
para todos los cultivos por lotes fue de 7,0 0,5. El rendimiento consumo de NO2--N se debió a la limitada concentración de
microbiano se evaluó en términos de eficiencia×de consumo (E, [g de N o donante de electrones proporcionada en estas condiciones
C consumido g-1 de N o C alimentado] 100), rendimiento de experimentales. El NO2--N se redujo completamente a N2,±con un
producción (Y, [g de N o C producido g-1 de N o C consumido]) y rendimiento de 1,0 0,01. La oxidación de p-Cr estuvo ligada a la
tasas específicas (q, [mg de sustrato o producto g-1 VSS h]). Las tasas ±
reducción de nitritos, con un rendimiento de carbono inorgánico de
específicas se calcularon mediante el modelo integrado de Gompertz. 1,0 0,15. A 15 y 30 mg de p-Cr L-1, la eficiencia de consumo de p-
21,22
Las tasas específicas de consumo de nitrito se utilizaron para cresol y los rendimientos del producto fueron también mayores. Las
estimar los parámetros cinéticos. Ks y qmax se estimaron linealizando concentraciones iniciales de compuesto fenólico mejoraron
la fase activa, mientras que Ki se estimó linealizando la fase inactiva. significativamente el consumo de nitrito, mostrando un alto
Métodos analíticos
Los compuestos fenólicos, como el p-cresol y sus intermedios, se
controlaron mediante cromatografía líquida de alto rendimiento
(HPLC) [Perkin-Elmer serie 200 UV] utilizando una columna de fase
inversa C18 y un detector UV a 280 nm. La fase móvil fue una mezcla
de acetonitrilo:agua (60:40 v/v) a 1,5 mL min-1. El NO2--N se
determinó por electroforesis capilar (Beckman Coulter, proteomeLab
PA 800). El tampón se preparó con 5 mL de Na2SO4 (0,1 mol L-
1), NaCl (10 mmol L-1) y una solución comercial CIA Pak OFM
anión-BT (Waters) más 35 mL de agua desionizada. Se utilizó un
microcapilar de sílice fundido (60 cm de longitud y 75 mm de
diámetro interno). La absorbancia se midió en la zona ultravioleta
utilizando una lámpara de mercurio a 254 nm y 25◦C. El carbono
orgánico total (COT) y el carbono inorgánico total (TIC) se midieron en
un medidor de COT (Shimadzu Co. Modelo TOC-5000 A). La
composición de los gases en el espacio de cabeza (N2, N2O y CO2)
Nitrito como poder oxidante para la eliminación de p-cresol utilizando un lodo www.soci.org
desnitrificante
Tabla 1. Rendimientos de productos y eficiencias de consumo (%E)
obtenidos a varias concentraciones iniciales de p-Cr
%
E
p-Cr
(mg L-1) NO2--N p-Cr YN2 YC- HCO3-
100
Tabla 3. Balances de electrones en los cultivos por lotes
-N y p-Cr (mg/L)
90
80 Meq* total
70 p-Cr AceptadaDonada [NO2--N →
60 (mg L-1) N2] [p-Cr → HCO3--C] Observación
Consumo de NO-
50
2
Control abiótico con NO- -N Control abiótico con p-Cr 10 4.25 ± 0.13 4.10 ± 0.18 Acoplado
40
6.36 ± 0.22 5.97 ± 0.19
2
Control biótico con NO- -N
Control biótico con p-Cr 15 Acoplado
30 30 11.36 ± 0.28 12.20 ± 0.54 Acoplado
2
Figura 1. Cultivos de lotes de control. Las barras de error representan la *meq= miliequivalentes de electrones.
desviación estándar.
poder reductor. La oxidación de p-Cr estaba ligada a la reducción de estar asociado al transporte de sustrato. En cuanto al destino de los
nitritos con valores de rendimiento del producto cercanos a uno. Por
compuestos de carbono, las eficiencias de consumo de p-cresol
otra parte, cuando los cultivos por lotes fueron adicionados con 40 y
fueron relativamente altas, pero la vía metabólica se vio afectada
45 mg de p-Cr L-1, las eficiencias de consumo de nitrito fueron del
negativamente, ya que la mineralización disminuyó, como lo
100%. Específicamente a 45 mg L-1 de p-Cr probado, las eficiencias
de consumo para ambos sustratos fueron del 100%, siendo los demostraron los bajos rendimientos de productos obtenidos durante las
productos finales N2 y CO2. Este es un resultado interesante porque 70 h de cultivo (Tabla 1). Los intermedios carbonosos controlados,
aunque el nitrito y el p-cresol son inhibidores conocidos, podrían ser alcohol p-hidroxibencílico, p-hidroxibenzaldehído y p-
eliminados simultánea y eficientemente. Para lograrlo, el medio de hidroxibenzoato, no se detectaron durante la oxidación del p-Cr, y
cultivo debe ser equilibrado con la relación molar p-Cresol/NO2- de el grado de mineralización alcanzado (YHCO3--C) fue cercano al 50%
0,088, según las siguientes reacciones. para las tres últimas concentraciones ensayadas (Tabla 1). De
acuerdo con el balance de materia, el carbono p-cresol se recuperó
NO-2 + 4H+ + 3 e- → 0,5N2 + 2H2O (1) como dióxido de carbono y carbono orgánico residual (Tabla 2).
Tras 25 h de cultivo, el consumo de nitritos se detuvo. Sin embargo, el
p-cresol se consumió en mayor medida, identificándose como
C7H8O + 13H2O → 7CO2 + 34H+ + 34 e- (2) carbono orgánico residual, fenol y ácido acético, este último en
concentraciones tan bajas como 2 mg L-1. Estos productos finales
carbonosos sugerían la existencia de una vía fermentativa. El balance
3C7H8O + 34NO2- + 34H+ → 29H2O + 21CO2 + 17N2 (3) de electrones mostró que los electrones liberados de la oxidación del p-
cresol hasta el dióxido de carbono fueron aceptados sólo en parte
por la reducción del nitrito a N2 (Tabla 3). Así, el consumo de p-
Las eficiencias de consumo de nitrito disminuyeron
cresol no estaba totalmente acoplado a la desnitrificación, lo que indica
significativamente cuando se evaluó el lodo desnitrificante en
que el compuesto fenólico se consumía a través de dos vías
presencia de 50, 55 y 65 mg p-Cr L-1. No obstante, los
metabólicas, la desnitrificación y la fermentación, dos procesos
rendimientos de desnitrificación fueron elevados, con valores
anaeróbicos.
cercanos a uno. En estas condiciones de cultivo, el donante de
Ha¨ ggblom et al. 24 mostraron que los intermediarios durante la
electrones estaba en exceso, lo suficiente para reducir
oxidación del p-cresol vía desnitrificación o metanogénesis son
completamente el nitrito a N2. A las concentraciones de p-Cr
21 probadas, las eficiencias de consumo de nitrito disminuyeron y este
inicialmente similares, ya que en ambos casos se detectaron
78 efecto negativo podría intermediarios como el alcohol p-hidroxibencílico, el p-
hidroxibenzaldehído y el p-hidroxibenzoato. Sin embargo, bajo
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Tabla 4. Tasas específicas [mg C o N g-1 VSS h-1] alcanzadas en los A 10 mg p-Cr/L 45 mg p-Cr/L
cultivos discontinuos desnitrificantes 15 mg p-Cr/L 50 mg p-Cr/L
70 30 mg p-Cr/L 55 mg p-Cr/L
40 mg p-Cr/L 65 mg p-Cr/L
40
10 3.10 ± 0.111.22 ± 0.04 2.05 ± 0.06
15 4.20 ± 0.152.18 ± 0.21 3.63 ± 0.12 30
30 5.49 ± 0.192.91 ± 0.23 4.99 ± 0.19
20
40 7.02 ± 0.233.76 ± 0.12 7.03 ± 0.23
45 6.80 ± 0.273.60 ± 0.08 6.80 ± 0.16 10
50 2.56 ± 0.071.82 ± 0.05 3.14 ± 0.09
0
55 2.17 ± 0.082.16 ± 0.09 2.22 ± 0.08
65 1.60 ± 0.052.75 ± 0.11 1.60 ± 0.05
B
100
90
80
2 (mg/L)
70
60
Producción de N
50
40
30
20
10
0
La actividad podría estar asociada a la acumulación de fenol y Adav et al. 9 estudiaron la reducción microbiana del nitrito con metanol,
propionato, como se ha señalado anteriormente. etanol y acetato como donantes externos de electrones mediante biogránulos
desnitrificantes. Las actividades desnitrificantes reportadas por los Figura 2. Curso temporal de p-Cr (A) NO2--N (B) y N2 (C) por un lodo
autores fueron de 2.07 mg NO2--N g-1 VSS h, 1.2 mg NO2--N g-1 desnitrificante, en cultivos por lotes. Los cultivos por lotes se realizaron por
VSS h y 1.6 mg NO2--N g-1 VSS h, con acetato, metanol y etanol, duplicado. Las barras de error representan la desviación estándar.
respectivamente. Tora' et al. 28 también evaluaron la actividad
desnitrificante utilizando varios compuestos orgánicos y nitrito como
aceptor de electrones, informando de tasas máximas de eliminación modelo de inhibición del sustrato. 27 Se estimaron parámetros cinéticos
específica de nitrito de como la constante de afinidad (ks), la tasa específica máxima
0,01 mg NO2--N g-1 VSS h (etanol), mientras que los valores entre ± 20,32 2,5
(qmax) y la constante de inhibición (ki). Los valores fueron
Se obtuvieron 0,0054 y 0,007 mg NO2--N g-1 VSS h utilizando mg p-Cr L-1,
±±9,48 1,3 mg NO2--N g-1 VSS h y 35,75 4,1 mg p-Cr
glicerol y lixiviado de vertedero. En el presente estudio, las tasas L-1, respectivamente. Los coeficientes de correlación fueron superiores a
específicas de consumo de nitritos fueron mayores y la actividad 0.95. A pesar de los efectos inhibidores observados, el presente estudio ha
desnitrificante encontrada fue aproximadamente 3,5 veces mayor proporcionado pruebas de las condiciones en las que un lodo
con p-cresol que con acetato. La mayor actividad de reducción de desnitrificante puede eliminar p-cresol y nitrito. Aunque los datos
nitritos reportada aquí podría estar asociada a varios factores como las experimentales obtenidos en el presente estudio proporcionan una
concentraciones iniciales de nitrito y p-cresol, la concentración de buena base para el diseño de procesos de desnitrificación que se
biomasa o el lodo producido en estado estacionario, entre otros. ocupen de la eliminación de contaminantes nitrogenados y fenólicos
El perfil cinético obtenido en el presente trabajo siguió la de las aguas residuales, es necesario realizar más estudios en reactores
ecuación de Haldane [q = (qmax*S)/(ks+S+ (1/Ki)S2)], que es una continuos para determinar las condiciones operativas adecuadas para
este tratamiento. Esta información cinética podría ser considerada
para tratar efluentes industriales en los que coexisten compuestos
fenólicos y nitritos (producidos o acumulados), como los generados en 21
el sector petroquímico y en particular 79
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8 7 Gong Y-K, Peng Y-Z, Yang Q, Wu W-M y Wang S-Y, Formación de
q NO- óxido nitroso en un gradiente de oxigenación y tasa de carga de
7 2
nitrógeno durante la desnitrificación de nitrito y nitrato. J Hazard
q p-Cr q N2
Mater 227 - 228:453 - 460 (2012).
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mg C o N/g VSS d
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