AÑO 5 NO.

1
ENERO 2013

EMPRESA CERTIFICADA
INTERNACIONALMENTE
EN ISO 9001:2008

REVISTA TRIMESTRAL CIENTÍFICA,

PUBLICADA POR EL PROGRAMA DE
ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD
ENTRE LABORATORIOS

Proveedor de Ensayos de Aptitud

acreditado por ema para los alcances
indicados en el escrito con número de
acreditación PEA-CLI-04. Acreditado a
partir de 2011-05-04.

www.pacal.org Incluída en IMBIOMED, http://www.imbiomed.com

 Año 5 No. 1

CONTENIDO Editorial Medlab Pacal

Directorio En este 2013, la Revista MedLab cumple 5 años de existencia. A lo largo de este
tiempo, he tenido el privilegio de leer todos y cada uno de los texto publicados en
ella, tanto los anteriores como los presentes a mi etapa como editora. También
Dr. Sergio I. Alva Estrada
he podido constatar el crecimiento de nuestra publicación. Ahora resulta menos
Director General
difícil, aunque no menos emocionante, leer las cartas de aceptación por parte
L.A.E. Aimee Alva Martínez de investigadores de primer nivel, para escribir sobre sus trabajos con nosotros.
Directora Administrativa y de Planeación. Durante este lustro, científicos, académicos, técnicos y administrativos, relacionados
de alguna forma con el ámbito de los laboratorios clínicos, que han escrito para
Dra. en C. Patricia Flores Guzmán
nosotros, lo han hecho con el afán de enriquecer el conocimiento, de compartir sus

Salmonella:
Un importante patógeno
zoonótico.
Tinción DOMS:
Técnica para teñir bacilos
esporulados de interés médico.
Trabajo Participante 2do.
Congreso: Uso del error total como
herramienta de mejora en el control de
calidad interno en hormonas.
4
Editor
observaciones y de permitirnos crecer en nuestra profesión.
Dra. en C. Patricia Flores Guzmán
Caribel Palomar Coll Hay quién considera que el paso del tiempo significa envejecer. En lo personal,
Corrector de Estilo prefiero decir que tenemos más experiencia sobre el tipo de temas que tocamos
en la revista. Pero, realmente, el tipo de material que publicamos es derivado de
Lic. Armando Esparza Gómez
la invitación permanente que hacemos a todos y cada uno del personal, usuario o
Publicidad
dueño de un laboratorio de análisis clínicos, que tenga la inquietud de comunicar
D.C.G. Karina Montoya Becerra algo. Siempre serán bienvenidos sus comentarios o sugerencias de algún tema
Diseño Editorial que les parezca importante. Es por ello, que en este primer número del 2013, que
contiene excelentes textos, hay dos sobre los que quiero llamar primeramente la
10 Consejo Editorial
Dr. Sergio I. Alva Estrada
Dr. Sergio Alva Martínez
Dr. Francisco Durazo Quiroz
atención: el de Correspondencia a MedLab (en este caso, observaciones clínicas,
valiosas, desde mi punto de vista, porque las hace personal involucrado con el
trabajo diario) y uno de los Trabajos Participantes en nuestro 2do. Encuentro
Dr. Andrés Romero Rojas Internacional Sobre Control de Calidad en el Laboratorio Clínico. Sobre este último,
QFB Carlos Ponce Hernández fue agradable y emocionante ver la respuesta a participar por el premio al Mejor
M. en C. Rosa María Sánchez Manzano Trabajo Libre de todos los que enviaron su resumen. Muchas gracias por dejarnos
QBP Carlos Aquino Santiago
saber que hacen cada uno de ustedes en sus centros de trabajo.
QBP Mercedes Cabañas Cortez
Dra. en C. Patricia Flores Guzmán
M. en C. Vicente de María y Campos Oteguí Así mismo, siguiendo con el enfoque sobre enfermedades zoonóticas que hemos
15
Dr. Felipe García Malo Bautista manejado en los últimos números, les presentamos una excelente revisión sobre
salmonelosis, realizada por uno de los grupos de investigación más importantes del
país (si no es que el más). Esperamos les sea de utilidad así como el resto de los
REVISTA PACAL MedLab, Año 5, N° 1 Ene-Feb. trabajos e información publicada en este número.
2013, es una publicación trimestral editada por
el Programa de Evaluación de la Calidad. Alhelí Les deseamos un excelente inicio de año agradeciendo, nuevamente, el dejarnos ser
No. 78, Col. Nueva Sta, María Del. Azcapotzalco,
parte de la comunidad de los laboratorios clínicos.
C.P. 02800, Tel. 5341-3014
www.pacal.org, informacion@pacal.org
Editor responsable: Dra. en C. Patricia Flores Guz-
mán. Reservas de Derechos al Uso Exclusivo en

29
Correspondencia MEDLAB
Dengue, Linfocitos Reactivos,
Citometría Hemática.
Proveedor de ensayos de aptitud reconocido
por ema para los alcances indicados en el
escrito con número
PEA-CLI-04, a partir de 2011-05-04.
trámite. ISSN en trámite. Impresa Impresos Villa
Florito S.A de C.V. Laguna de Términos No. 528 Col.
ATENTAMENTE
Anáhuac Del. Miguel Hidalgo C.P. 11320.
PACAL MedLab.
Tel.: (55) 5260 4010
Este número se terminó de imprimir el 10 de
Enero del 2013 con un tiraje de 2,500 ejemplares.
Las opiniones expresadas por los autores no
necesariamente reflejan la postura del editor de
la publicación.
Queda estrictamente prohibida la reproducción
total o parcial de los contenidos e imágenes de
la publicación sin previa autorización del PACAL. Esta revista se imprimió en la Ciudad de México en los talleres de:
Impresos Villa Florito S.A de C.V. Laguna de Términos No. 528
3
Col. Anáhuac Del. Miguel Hidalgo C.P. 11320 Tel.: (55) 5260 4010
Artículo de Revisión
M. en C. Freddy Campos Tamayo1, M. en C. Mussaret Zaidi Jacobson1, 2
1
Unidad de Investigación de Enfermedades Infecciosas, Hospital Regional de Alta Especialidad
de la Península de Yucatán, Mérida, México
2
Laboratorio de Investigación en Microbiología, Hospital General O’Horan, Mérida, México
Autor para correspondencia:
M. en C. Mussaret Zaidi Jacobson, mbzaidi@prodigy.net.mx
Recibido 6 de septiembre de 2012. Aceptado 03 de octubre de 2012.
Introducción
S almonella es un patógeno zoonótico que se transmite al
ser humano por contacto directo con animales infectados
y por consumo de alimentos o productos alimenticios
derivados de animales contaminados. Su morfología y
características fisiológicas están estrechamente relacionadas
con los otros géneros de la familia Enterobacteriaceae, a la que
pertenece.
El género Salmonella está constituido por bacilos gram-
negativos, no esporulados, que son anaerobios facultativos.
Con la excepción de las serovariedades Gallinarum y
Pullorum, tienen movilidad gracias a sus flagelos perítricos.
Tienen varias características que facilitan su propagación y
colonización de nuevos huéspedes. Pueden desarrollarse en
un amplio rango de temperatura (7-48°C) y pH (4 a 8), y
resistir a la desecación durante un tiempo prolongado, tanto
en heces como en alimentos. Asimismo, tienen la capacidad
de sobrevivir en alimentos que contienen altas proporciones
www.pacal.org 4 Campos-Tamayo F y Zaidi-Jacobson M. MedLab 2013; Año 5 (1): 4-9
de estas subespecies, existen más de 2400 serovariedades
o serotipos que están definidas en función de diferentes
asociaciones de factores antigénicos somáticos O y flagelares
H. La identificación de las distintas serovariedades se realiza
mediante la serotipificación por el esquema de Kauffmann-
White. Este es un método de subtipificación fenotípica que
utiliza la presencia de antígenos somáticos O, antígenos
flagelares H y antígenos capsulares. Para el lector que
desee ahondar más en el tema, se recomienda consultar la
bibliografía recomendada al final de este artículo.
Los antígenos O están compuestos por cadenas laterales de
polisacáridos, presentes en el lipopolisacárido de envoltura
que se encuentra en todos los microorganismos gram
negativos. La cadena es un polímero de subunidades repetidas
de oligosacáridos típicamente compuestos de 4 a 6 azúcares
lineales o ramificados. La naturaleza de los grupos terminales
y el orden en que se encuentran las unidades repetidas de la
cadena determinan la especificidad antigénica somática de la
bacteria.
El antígeno H es de naturaleza proteica y está compuesto
de subunidades de flagelina. El flagelo está formado por un
cuerpo basal, un segmento de unión y un filamento; el cuerpo
basal ancla el flagelo a la célula, y el segmento de unión une
el cuerpo basal con el filamento. Para la serotipificación
solo se usa la especificidad antigénica del filamento. En
Salmonella se han encontrado más de 60 antígenos flagelares
específicos, cuya diversidad se debe a las variaciones en la
estructura primaria (contenido de aminoácidos y orden de
ubicación) de las distintas moléculas de flagelina. Unas pocas
serovariedades de Salmonella poseen una sola fase flagelar y
se denominan monofásicas, p.ej. S. Enteritidis, pero la gran
mayoría tienen dos especificidades en su antígeno flagelar,
es decir son difásicas, p. ej., S.Typhimurium y S. Hadar,
entre otras. El antígeno capsular Vi se encuentra en solo tres
serovariedades de Salmonella: Typhi, Paratyphi C y Dublin.
Métodos de subtipificación molecular
Con el advenimiento de las técnicas de biología molecular,
se han desarrollado un gran número de técnicas para la
de proteínas y grasas. Salmonella coloniza el tracto intestinal
tipificación molecular de microorganismos. Las más utilizadas
de una gran variedad de animales. Tanto los mamíferos como
los animales de sangre fría (reptiles, anfibios y peces) pueden
ser reservorios de este patógeno. Algunas serovariedades
para la subtipificación de Salmonella son la electroforesis de
campos pulsados, conocido como PFGE por sus siglas en
inglés (Pulse Field Gel Electrophoresis), y la secuenciación de
de Salmonella se adaptan mejor a una especie específica,
locus múltiples, conocido como MLST por sus siglas en inglés
mientras que otras pueden estar ampliamente distribuidas
(Multilocus Sequence Typing).
en un diverso rango de especies animales. Excluyendo
a la Salmonella Typhi y Paratyphi A y C, todas las otras
El PFGE es un método de subtipificación que utiliza enzimas de
serovariedades se pueden considerar zoonóticas; es decir,
restricción para cortar el DNA cromosómico en fragmentos,
se transmiten de los animales a seres humanos, causando
los cuales se corren en un gel que se somete a una serie de
enfermedad.
pulsos eléctricos con voltajes y en tiempos específicos. Las
enzimas de restricción utilizadas reconocen alrededor de
Nomenclatura y métodos de tipificación
20 sitios de restricción; la combinación de los fragmentos
La nomenclatura de Salmonella es compleja. Según el
genera un patrón que se utiliza como unidad específica
sistema vigente, basado en las recomendaciones del Centro
para distinguir una cepa de otra. El uso de múltiples pulsos
Colaborador de Referencia e Investigación de la Organización
eléctricos permite analizar fragmentos grandes de DNA,
Mundial de la Salud (OMS) en el Instituto Pasteur, el género
hasta 10 Mb, y por esta razón ha demostrado ser altamente
Salmonella se divide en dos especies: S. entérica y S. bongori.
discriminatorio en brotes hospitalarios y de comunidad.
S. entérica, a su vez, está dividida en seis subespecies. Dentro
También es útil para diferenciar cepas provenientes de
Campos-Tamayo F y Zaidi-Jacobson M. MedLab 2013; Año 5 (1): 4-9
animales, alimentos y humanos en infecciones esporádicas
y epidémicas por patógenos zoonóticos como Salmonella.
Este método, cuando está debidamente estandarizado y con
los adecuados controles de calidad, tiene la gran ventaja de
poder ser altamente reproducible en diferentes laboratorios.
Los resultados pueden ser analizados en los laboratorios que
lo generen o pueden ser enviados a una base de datos central
para comparar los perfiles de cepas aisladas en otros países y
regiones.
El MLST es una técnica diseñada y desarrollada para
identificar líneas clonales, fundamentalmente en poblaciones
bacterianas. Una clona se define como una célula o grupo de
células que descienden y son genéticamente idénticas a una
ancestro común. Si un conjunto de cepas ha sido obtenida
en forma independiente de una fuente, o de diferentes
localizaciones, o en periodos diferentes, pero muestran
características fenotípicas y genotípicas muy parecidas, la
explicación más lógica para esta similitud es que se originan
del mismo ancestro común. La aplicación principal del MLST
es en estudios epidemiológicos globales, variaciones de largo
plazo, y en estudios filogenéticos o evolutivos. El método
se basa en la secuenciación de fragmentos específicos de
genes constitutivos que codifican para enzimas necesarias
para el metabolismo básico de la célula, que se expresan
continuamente. Se utilizan estos genes para la prueba, ya
que no son sometidos a presión selectiva y permiten detectar
variaciones neutras que definen líneas clonales relativamente
estables. Las variaciones en el conjunto de los genes analizados
proporcionan un alto grado de discriminación. El esquema del
MLST para Salmonella involucra 7 genes. Las secuencias de los
genes analizados se comparan con una base de datos pública
(www.mlst.net), y de acuerdo a la combinación obtenida, se
le asigna una secuencia tipo, o sequence type (ST, por sus
siglas en ingles). Los aislamientos que posean alelos idénticos
en todos los genes analizados se clasifican como el mismo ST
y se consideran como una sola clona.
Un elemento clave para la detección y control de salmonelosis
y otras enfermedades transmitidas por alimentos, es la
identificación de estos patógenos en humanos, las probables
fuentes de contaminación, sus reservorios, y los cambios de
clonas específicas a través del tiempo. La importancia de
estos nuevos métodos yace en su capacidad para distinguir
entre cepas bacterianas con mayor especificidad que los
métodos fenotípicos. En el caso de Salmonella, el método
de PFGE permite discriminar entre cepas de un mismo
serotipo, para identificar la fuente de un brote o confirmar
la aparición de una clona con un nuevo patrón de resistencia
antimicrobiana. El MLST, por otro lado, puede determinar
si cepas de diferentes regiones geográficas derivaron de un
precursor común.
Epidemiologia e impacto en salud pública
Las infecciones por Salmonella causan una morbimortalidad
importante a nivel mundial. Según datos de Foodnet, la red
de vigilancia de enfermedades transmitidas por alimentos en
Estados Unidos de América (EUA), la incidencia de infecciones
por Salmonella se ha mantenido constante entre 2005 a
2010. Se calcula que en EUA ocurren anualmente entre 2 a
5 www.pacal.org
 Salmonella:
4 millones de casos de gastroenteritis por Salmonella, de los
cuales 500 fallecen. En la Unión Europea (UE), la incidencia
de salmonelosis ha disminuido en los últimos años. Los
serotipos más comunes a nivel mundial son S. Enteritidis y S.
Typhimurium.
En México, se han realizado pocos estudios sobre Salmonella
durante las últimas dos décadas. Algunos factores que
contribuyen a la escasez de datos son que el coprocultivo
se solicita en una proporción muy pequeña de los casos de
diarrea aguda, y que el país carece de un sistema de vigilancia
microbiológica. Nuestros estudios epidemiológicos muestran
que existen alrededor de unas 70 serovariedades diferentes
en cerdos, aves y bovinos a lo largo de la República Mexicana
(Tabla 1). Las serovariedades más frecuentes también
infectan al humano en forma sintomática o asintomática.
Aquellas que tienen afinidad por animales de sangre fría,
como S. entérica subsp. salamae, también se aíslan de
humanos, durante la edad adulta y la infancia, pero con
menor frecuencia que otras serovariedades.
Tabla 1. Serovariedades de Salmonella en humanos enfermos y su frecuencia en niños asintomáticos y animales destinados al
consumo humano, México 2002-2005.
Humanos enfermos* incluye a 366 aislamientos con infección enterica y 26 aislamientos con infección invasiva.
†Los datos de intestinos de animales para consumo humano y su correspondiente carne cruda han sido combinados debido a que las
serovariedades fueron similares
Tomado de: Zaidi MB, et al. Integrated food chain surveillance system for Salmonella spp. In Mexico. Emerg Infect Dis 2008; 14:429-435.
Existe el concepto, erróneo, que solo un pequeño porcentaje
de las infecciones diarreicas en México son causadas por
bacterias. De 2002 a 2006, una red de vigilancia en cuatro
estados de la República Mexicana (Michoacán, San Luís
Potosí, Sonora y Yucatán), encontró que Salmonella fue
la causa de diarrea en el 12% de los niños que acudían a un
centro hospitalario. Las serovariedades más frecuentemente
aisladas fueron Typhimurium y Enteritidis, seguido por
Agona, Muenchen y Oranienburg, todos presentes
también en animales destinados al consumo humano.
Interesantemente, se encontró que hasta 11% de los niños
www.pacal.org
Un importante
sanos en edad preescolar, cursaban con infección asintomática
por Salmonella. En zonas rurales o en áreas con cadenas
alimentarias altamente contaminadas, se documentó la
colonización hasta en el 30 a 40% de la población. En regiones
con altos niveles de pobreza la infección por Salmonella se
adquiere por diversos modos de transmisión; además del
consumo de alimentos contaminados, se puede adquirir de
persona a persona o por el contacto con heces de animales.
En conjunto, nuestros resultados muestran que debido a la
exposición continua a Salmonella, la población mexicana
adquiere inmunidad desde temprana edad que la protege de
la enfermedad. Esta es una de las principales razones por las
que en nuestro país no se observan grandes brotes como los
que se reportan en EUA y Europa.
En un estudio reciente realizado en una comunidad agrícola
de Yucatán, demostramos que el impacto de una cadena
alimentaria, altamente contaminada con Salmonella, fue
relativamente bajo cuando la población recibía educación
sobre lavado de manos, preparación higiénica de los alimentos
y manejo apropiado de las excretas. Asimismo, se observó que
la incidencia y la severidad de las infecciones por Salmonella
en los ancianos mayores de 74 años era mucho menor que
la observada en niños menores de 3 años. Estos hallazgos
refuerzan la evidencia de una inmunidad protectora frente a
la exposición continua, que aparentemente, dura toda la vida.
Cuadro clínico
Las infecciones por Salmonella se pueden presentar como
casos aislados o en brotes, que afectan a una familia o varios
6 Campos-Tamayo F y Zaidi-Jacobson M. MedLab 2013; Año 5 (1): 4-9
patógeno zoonótico.
cientos o miles de personas. En el humano, se conocen
principalmente tres manifestaciones clínicas: 1) fiebre
entérica -también conocida como fiebre tifoidea- y que es
causada principalmente por S. Typhi, 2) gastroenteritis,
causada por una gran variedad de serovariedades, y 3)
septicemia, caracterizada por bacteremia con infecciones en
sitios específicos como meningitis y osteomielitis, entre otros.
En la gastroenteritis, la infección más común, los síntomas
aparecen alrededor de 6 a 48 horas. El cuadro clínico incluye
diarrea, dolor abdominal, náuseas y vómito. Generalmente
hay fiebre y, en casos severos, el paciente puede llegar a la
deshidratación o al choque hipovolémico. Afecta a todos
los grupos de edad, con mayor incidencia en menores de 5
años y mayores de 60 años, los grupos más vulnerables. La
diarrea puede variar en volumen e intensidad; en la mayoría
de los casos son heces blandas de volumen moderado. Puede
contener sangre y moco, dependiendo de la serovariedad. En
el Hospital General O’Horán, en Yucatán, se ha observado
que hasta el 75% de los niños con diarrea por Salmonella
Typhimurium (una serovariedad muy virulenta), tienen
sangre en las evacuaciones. En el examen microscópico,
se pueden encontrar leucocitos polimorfonucleares como
consecuencia de la invasividad del microorganismo y el
proceso inflamatorio resultante. Es importante destacar
que después de resolverse la diarrea, el paciente puede
continuar colonizado por Salmonella por semanas o meses,
dependiendo de la serovariedad y la edad del paciente. Entre
más pequeño el paciente, mayor el periodo de colonización y
de excreción del microorganismo.
Resistencia antimicrobiana
La mayoría de las infecciones por Salmonella no
Typhi son autolimitadas, por lo que no requieren de
tratamiento antimicrobiano. No obstante, en los pacientes
inmunocomprometidos o debilitados, así como en lactantes
pequeños, es necesario administrar antibióticos, ya sea para
evitar el desarrollo de infecciones sistémicas, o para curar
infecciones severas. La primera línea de antimicrobianos
recomendados para gastroenteritis incluye ampicilina,
cloranfenicol y trimetoprim/sulfametoxazol. Para infecciones
más graves se prefiere el uso de cefalosporinas de tercera
generación (también conocidos como cefalosporinas de
espectro extendido o CEE) y fluoroquinolonas. La azitromicina
también es otra excelente opción terapéutica.
En los últimos 20 años, se ha registrado un aumento
progresivo en la resistencia antimicrobiana en Salmonella. Esta
resistencia se atribuye, en gran medida, al uso desmesurado
de antibióticos en la producción pecuaria. La resistencia se
puede desarrollar por el uso del mismo antibiótico que se
utiliza en medicina humana, pero también por antibióticos
de la misma clase, con una estructura molecular común,
fenómeno denominado “resistencia cruzada”. Como ejemplo
del primer fenómeno, tendríamos que el uso de ampicilina y
Campos-Tamayo F y Zaidi-Jacobson M. MedLab 2013; Año 5 (1): 4-9
trimetoprim-sulfametoxazol en animales, selecciona cepas de
Salmonella resistentes a estos mismos antibióticos. Un ejemplo
de la resistencia cruzada es cuando los animales reciben
un antibiótico de uso exclusivo en medicina veterinaria,
como enrofloxacina (una fluoroquinolona) o ceftiofur
(una CEE). Debido a que la estructura molecular de estos
compuestos es muy parecida a los compuestos homólogos
utilizados en medicina humana, las cepas resistentes a
enrofloxacina también son resistentes a ciprofloxacina, y las
cepas resistentes a ceftiofur presentan resistencia cruzada a
ceftriaxona y cefotaxima. El uso de antibióticos en animales
lleva a la selección de microorganismos resistentes en el
intestino del animal que lo recibe. Al sacrificar a los animales, el
contenido intestinal puede contaminar la carne. Si la bacteria
no se elimina al momento de la cocción, o contamina otros
alimentos durante su preparación, esta cepa de Salmonella
resistente puede ser ingerida por una persona y desarrollar
la enfermedad. Si requiere un antibiótico y se le administra
alguno de los que ya tiene resistencia la cepa, no se logrará la
cura deseada. La falla terapéutica frecuentemente conlleva a
una mayor duración del episodio diarreico, prolongación de la
estancia intrahospitalaria y, en ocasiones, a la muerte.
Los primeros reportes mundiales de resistencia
antimicrobiana en Salmonella se publicaron hace mas de 50
años. Desde entonces, la resistencia antimicrobiana se ha
incrementado progresivamente a nivel mundial. Los años 90
se caracterizaron por la aparición de una cepa multi-resistente
de S. Typhimurium, que causó brotes severos en la Unión
Europea y los Estados Unidos. Esta cepa pertenece al fagotipo
DT104 y contiene un cassette con genes que confieren
resistencia a ampicilina, cloranfenicol, estreptomicina,
sulfisoxazol y tetraciclina. Desde su aparición se diseminó a
Canadá, Irlanda, Dinamarca, Alemania, Austria, Francia, Italia
y Suiza. Con el paso del tiempo S. Typhimurium (DT104
y las no DT104) adquirió resistencia a otros antibióticos
como trimetoprim sulfametoxazol, CEE, aminoglucósidos y
fluoroquinolonas.
Los datos de nuestra red de vigilancia mostraron que, en
México, tanto las cepas provenientes de humanos como de
7 www.pacal.org
animales, eran frecuentemente resistentes a los antibióticos.
De particular importancia fue la detección de cepas de
S. Typhimurium resistentes hasta a once antibióticos,
incluyendo los CEE. En el estado de Yucatán, estas cepas
multiresistentes se asociaron con una mayor frecuencia de
diarrea prolongada, infecciones sistémicas y mortalidad.
En todas las cepas, la resistencia a CEE era conferida por
el gen cmy-2, que se localizaba en plásmidos de diversos
tamaños. Los estudios de MLST demostraron que estas cepas
pertenecían a una nueva secuencia tipo, denominada ST213,
que habría reemplazado a la ST19, la clona predominante
antes del 2002. Las cepas de S. Typhimurium se aislaron
únicamente del intestino de cerdos, pero no de bovinos o aves.
Asimismo, los perfiles de antibiograma y PFGE de muchas de
las cepas aisladas de cerdo eran indistinguibles de las cepas
aisladas de los niños enfermos, lo que permitió identificar al
cerdo como el principal reservorio de estas cepas virulentas
y multiresistentes (Figura 1).
Figura 1. Se determinaron los patrones de electroforesis de campos
pulsados a cepas de Salmonella Typhimurium multiresistentes
productoras de betalactamasa cmy-2 procedentes de humanos,
carnes crudas y animales destinados al consumo humano aisladas en
el estado de Yucatán de 2002 a 2005. Los aislamientos se recolectaron
de niños con infecciones sistémicas (HS), gastroenteritis (HE), o
infecciones asintomáticas (HA), asi como de carne de pollo (CM),
carne de cerdo (PM), carne de res (BM) e intestino de cerdo (SI)
de 30 ciudades del estado. La resistencia a diversos antimicrobianos
se denota por un cuadro negro. AMP: ampicilina, FOX: cefoxitina,
CRO: ceftriaxona, CHL: cloranfenicol, GEN: gentamicina, KAN:
kanamicina, NAL: ácido nalidíxico, STR: estreptomicina, SSS:
sulfisoxazol, TET: tetraciclina, SXT: trimetoprim-sulfametoxazol
y TIO: ceftiofur. Los conglomerados A-H (rectángulos) muestran
cepas de humanos y carne y/o animales con patrones indistinguibles.
Casi todos los conglomerados contienen aislamientos de las mismas
ciudades o ciudades vecinas. Reproducido de: Zaidi MB, et.al. Rapid
and widespread dissemination of multidrug-resistant blaCMY-2
Salmonella Typhimiurium in Mexico. J. Antimicrob. Chemother. 2007;
60:398-401.
Conclusiones
Salmonella es un patógeno que causa morbimortalidad
importante a nivel mundial. En los países industrializados se
han implementado sistemas muy estrictos de control para
estos patógenos, los cuales requieren de infraestructura
costosa y compleja. En México existe una exposición continúa
a Salmonella desde edades tempranas que favorece la
adquisición de inmunidad protectora. Encontrar el equilibrio
entre la exposición y el desarrollo subsecuente de inmunidad
protectora por un lado y una población saludable, por el otro,
es uno de los grandes retos de la investigación futura. El control
de la Salmonella en México requiere del establecimiento de
un sistema multidisciplinario de vigilancia epidemiológica con
la colaboración activa de los sectores médico, veterinario y
pecuario. Solo así se podrán implementar intervenciones
específicas que respondan a las necesidades y realidades del
panorama nacional.
Bibliografía recomendada
1. Achtman M, et al. Multilocus sequence typing as a replacement for
serotyping in Salmonella enterica. Plos Pathog 2012; 8 (6): e1002776.
2. Centers for Disease Control and Preventions. Vital signs: Incidence
and trends of infection with pathogens transmitted commonly trough
food-foodborne disease active surveillance network, 10 U.S. sites,
1996-2010. MMWR 2011; 60: 749-55.
3. European Food Safety Authority and European Centre for Disease
Prevention and Control; The European Union Summary Report on
antimicrobial resistance in zoonotic and indicator bacteria from
humans, animals and food in 2010. EFSA Journal 2012; 10(3):2598
4. Grimont PAD, Weill FX. 2007. Antigenic formulae of the Salmonella
serovars. WHO Collaborating Centre for Reference and Research on
Salmonella, Institut Pasteur.
5. Lukinmaa S, et al. Application of molecular methods in diagnostics
and epidemiology of food-borne bacterial pathogens. APMIS; 2004;
112: 908-29.
6. Pui CF, et al. Salmonella: A foodborne pathogen 2011; 18: 465-73.
7. Riley LW. 2004. Molecular epidemiology of Infectious Diseases:
Principles and Practices. Washington D.C. American Society for
Microbiology Press.
8. Threlfall EJ. Epidemic Salmonella Typhimurium DT104-A. Truly
international multiresistant clone. J Antimicrob Chemother 2000;
46:7-10.
9. Wiesner M, et al. Association of virulence plasmid and antibiotic
resistance determinants with chromosomal multilocus genotypes
in mexican Salmonella enterica serovar Typhimurium strains. BMC
Microbiology 2009; 9:131.
10. Zaidi MB, et al. Nontyphoidal Salmonella from human clinical cases,
asymptomatic children, and raw retail meats in Yucatan, Mexico. Clin
Infect Dis 2006; 42: 21- 28.
11. Zaidi MB, et al. Rapid and widespread dissemination of multidrug-
resistant blaCMY-2 Salmonella Typhimiurium in Mexico. J Antimicrob
Chemother 2007; 60:398-401.
12. Zaidi MB, et al. Integrated food chain surveillance system for
Salmonella spp. In Mexico. Emerg Infect Dis 2008; 14:429-435.
13. Zaidi MB, et al. Burden and transmission of zoonotic foodborne
disease in a rural community in Mexico. Clin Infect Dis 2012; 55:51-60.

www.pacal.org 8 Campos-Tamayo F y Zaidi-Jacobson M. MedLab 2013; Año 5 (1): 4-9 Campos-Tamayo F y Zaidi-Jacobson M. MedLab 2013; Año 5 (1): 4-9 99 www.pacal.org
Artículo Original

En 1922, se publica el primer método para la tinción de Para determinar la eficiencia de las modificaciones, se

Tinción DOMS
endosporas bacterianas. Esta técnica empleaba una etapa
prolongada de calentamiento, lo que dio como resultado una
tinción diferencial entre endosporas y células vegetativas en la
misma muestra, mostrando tanto endosporas como esporas
libres, que aparecían de color verde o azul, en contraste con el
tinte rojo obtenido por las células vegetativas2.
realizaron tres técnicas de la tinción:
a)Técnica original de Schaeffer-Fulton, la cual utiliza VM al
10% durante 3´ y safranina al 0.5% por 1´.
b) Técnica VMS, la cual utiliza VM al 10% durante 5´ y
Safranina al 0.5% por 1´.

Técnica para teñir bacilos El método de Schaeffer y Fulton modificó el método de

Dorner en 1933, con el propósito de hacer el proceso más
rápido, pero el calentamiento con un mechero Bunsen todavía
c) Técnica DOMS la cual utiliza VM al 10% durante 3´y
safranina al 0.05% por 15´´.

esporulados de interés médico.

Domínguez González K. G., Soria Herrera R. J., Sistos Chávez A., Molano Galdamez D. E., Hernández Ramón J. K.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA, FACULTAD DE QUÍMICO FARMACOBIOLOGÍA-UMSNH; Depto. Microbiología.
Tzintzuntzan 173, Col. Matamoros, CP: 58240, Morelia Mich., Tel: (443) 3142809. Ext. 214. Fax: (443) 3142152.
Autor para correspondencia:
K. Domínguez González, qfb.karla@gmail.com
Recibido 14 de agosto de 2012. Aceptado 20 de noviembre de 2012.
RESUMEN
La tinción de esporas bacterianas, también llamada
tinción Schaeffer-Fulton, es utilizada ampliamente para
la identificación de bacterias esporuladas, generalmente
pertenecientes a los géneros Bacillus y Clostridium, algunas
de las cuales son patógenas por naturaleza. Sin embargo,
debido a su resistencia característica, en muchos casos las
endosporas bacterianas resisten la coloración, dificultando
la percepción de las mismas. El objetivo del presente estudio
fue evaluar el efecto que produce una modificación, aplicada
en el laboratorio de microbiología de la facultad de Químico
Farmacobiología-UMSNH, a la técnica original de tinción
de esporas, tomando en cuenta la edad de los bacilos. Se
efectuó la comparación entre la técnica de tinción de esporas
bacterianas según Schaeffer-Fulton y con modificaciones de
la misma, aumentando el tiempo de exposición a verde de
malaquita y disminuyendo la concentración de safranina. Para
ello se realizaron tinciones de cultivos de 24 y 48 horas de 8
cepas de bacilos gram positivos esporulados incubadas a 37ºC,
para determinar la eficiencia de las modificaciones frente a la
técnica original. Como resultado a estas modificaciones, se
observó de manera clara, una respuesta positiva de hasta un
80% sobre los cultivos de 24 horas, mientras que en cultivos
de 48 horas la eficiencia de la técnica original aumento
hasta un valor de 90%. Con las modificaciones introducidas
a la técnica original de Schaeffer-Fulton, se facilitó la
identificación de los bacilos esporulados de interés médico,
al observar correctamente la posición y la forma de la espora
al microscopio.
INTRODUCCIÓN
Las endosporas fueron observadas y reportadas por numerosos
científicos como Perty en 1852, Pasteur en 1869, Koch en
1876 y, en 1872, por Cohn. Estas estructuras fueron descritas
solamente como cuerpos refringentes debido a que no podían
ser teñidas utilizando los compuestos acuosos típicos, como
el azul de metileno, safranina, violeta de genciana, entre
otros, que eran aplicados en los procedimientos básicos de
tinción, debido a su impermeabilidad a estos1, 4, 6.
Una vez que fue descubierto que las endosporas eran una
forma bacteriana latente, que demostraban una resistencia
única en los tratamientos con calor, los resultados de
las investigaciones hicieron hincapié en el control de las
endosporas bacterianas, consiguiendo mejorar las técnicas
de esterilización y la prevención de infecciones5.
resultaba ser un problema10. Actualmente, se han realizado
modificaciones a los métodos de Dorner y Schaeffer- RESULTADOS
Fulton con el propósito de que la tinción y la visualización Las modificaciones realizadas sobre la técnica original,
de las esporas, se produzca con mayor rapidez, menores provocaron una respuesta positiva de hasta un 80% sobre los
complicaciones y mejor contraste. cultivos de 24 horas, mientras que, en cultivos de 48 horas, la
eficiencia sobre la técnica original aumento hasta un valor de
Durante muchos años, sólo identificar la presencia 72% y 90% (Cuadro 1).
de endosporas o esporas libres resultaba suficiente.
Frecuentemente, la refractibilidad de las esporas se puso de Cuadro 1. Porcentaje de preparaciones con correcta fijación tintorial,
manifiesto por medio de tinción simple o tinción de Gram realizada con diversas condiciones.
y la caracterización e identificación del organismo podía
realizarse con otros criterios. Incluso hoy en día, la tinción
de esporas se aplica en las primeras etapas de identificación
bacteriana3.
En la actualidad, la tinción de esporas bacterianas, también
llamada tinción Schaeffer-Fulton, utilizando verde de
malaquita (VM) a una concentración de 10% (p/V) y
safranina (S) a una concentración de 0.5% (p/V), es
utilizada ampliamente para la identificación de bacterias
esporuladas, principalmente pertenecientes a los géneros
Bacillus y Clostridium, algunas de las cuales son patógenas
por naturaleza5,8. Sin embargo, debido a su resistencia
característica, en muchos casos las endosporas requieren VM: Verde Malaquita 10%; S: Safranina
ser observadas en cultivos de 48 horas o posteriores,
obstaculizando la apreciación de las mismas al microscopio9.
También es posible notar que en cultivos de 24 horas, la
MATERIALES Y METODOS técnica tradicional de tinción de esporas no mostró ser muy
efectiva, puesto que el colorante primario sólo penetró en las
En este trabajo se evaluó el efecto que produjo una
esporas del 22% de las tinciones efectuadas (Cuadro 1). En
modificación hecha en el laboratorio de microbiología, de la
facultad de Químico Farmacobiología-UMSNH, a la técnica las figuras 1 a 4 se muestran los resultados de algunas de las
preparaciones, con las distintas modificaciones a la técnica.
original de tinción de esporas sobre bacilos esporulados de
diferente edad.
Se efectuó una comparación entre la técnica de tinción de
esporas bacterianas según Schaeffer & Fulton (1933) y 2
modificaciones de la misma, utilizando para ello verde de
malaquita (Sigma-Aldrich) a una concentración del 10%,
como colorante primario. Como colorante secundario se
utilizó Safranina (Sigma-Aldrich), a una concentración
de 0.05%. Se realizaron tinciones de cultivos de 24 y 48
horas, de 6 cepas de bacilos gram positivos esporulados (B.
subtilis ATCC 6633, B. megaterium, B. cereus, B. mycoides, B.
coagulans, B. subtilis, Paenibacillus alvei) incubadas a 37ºC.

www.pacal.org 10 Domínguez-González KG, et al. MedLab 2013; Año 5 (1): 10-14 Domínguez-González KG, et al. MedLab 2013; Año 5 (1): 10-14 11
Técnica Schaeffer-Fulton Técnica DOMS
1.- Cepas teñidas con 24 horas de incubación: 1.- Cepas teñidas con 24 horas de incubación:

A B C A B C

D E F D E F
Figura 1: Resultados de la tinción de Schaeffer-Fulton en cepas teñidas después de 24 horas de incubación y observadas a Figura 3: Resultados de la tinción de DOMS en cepas teñidas después de 24 horas de incubación y observadas a 100 X:
100 X: A) Bacillus subtilis ATCC 6633, B) Bacillus cereus, C) Bacillus megaterium, D) Bacillus mycoides, E) Bacillus subtilis, A) Bacillus subtilis ATCC 6633, B) Bacillus cereus, C) Bacillus megaterium, D) Bacillus mycoides, E) Bacillus subtilis, F)
F) Bacillus coagulans. Bacillus coagulans.

2.- Cepas teñidas con 48 horas de incubación: 2.- Cepas teñidas con 48 horas de incubación:

A B C A B C

D E F D E F
Figura 2: Resultados de la tinción de Schaeffer-Fulton en cepas teñidas después de 48 horas de incubación y observadas a Figura 4: Resultados de la tinción de DOMS en cepas teñidas después de 48 horas de incubación y observadas a 100 X:
100 X: A) Bacillus subtilis ATCC 6633, B) Bacillus cereus, C) Bacillus megaterium, D) Bacillus mycoides, E) Bacillus subtilis, A) Bacillus subtilis ATCC 6633, B) Bacillus cereus, C) Bacillus megaterium, D) Bacillus mycoides, E) Bacillus subtilis, F)
F) Bacillus coagulans. Bacillus coagulans.

www.pacal.org 12
12 Domínguez-González KG, et al. MedLab 2013; Año 5 (1): 10-14 Domínguez-González KG, et al. MedLab 2013; Año 5 (1): 10-14 13 www.pacal.org

DISCUSIÓN
Como observamos en el cuadro 1 y en las Figuras 1 y 2,
la tinción original de Schaeffer-Fulton, aunque es una
técnica que durante mucho tiempo sirvió como método de
identificación de bacterias generadoras de esporas, tiene
sus desventajas al utilizarla, como lo es los tratamientos
prolongados con calor 6.
En cepas jóvenes, la técnica original de Schaeffer-Fulton,
comúnmente no tiñe las endosporas, esto se pudo observar
al utilizar esta técnica en las cepas seleccionadas para este
trabajo, mientras que utilizando la técnica modificada
como se observa en las figuras 3 y 4 se obtuvieron mejores
resultados, tiñendo las endosporas de cualquiera de las
especies ensayadas probando la eficiencia de la modificación
sobre la técnica original7.
CONCLUSIÓN
La técnica original de Schaeffer-Fulton está ampliamente
difundida y empleada, sin embargo presenta limitaciones
concernientes a la capacidad del colorante primario para
penetrar en la espora bacteriana.
Una de las modificaciones realizadas a la técnica original
demostró ser adecuada para utilizarse en la identificación
y visualización de endosporas en cultivos jóvenes, lo cual
agiliza el procesamiento de muestras clínicas sospechosas de
infección por bacilos Gram positivos esporulados8.
www.pacal.org 14
14
REFERENCIAS
1. Beck RW. A chronology of microbiology in historical context.
Washington, DC, USA: ASM Press; 2000.
2. Dorner W. 1926. Un procédé simple pour la colouration des
spores. Le Lait 6:8-12.
3. Hussey MA, Zayaitz A. Endospore stain protocol. American
Society for Microbiology 2007; Disponible en URL: www.
microbelibrary.org/component/resource/laboratory-test/3112-
endospore-stain-protocol. Consultado Agosto 01, 2012.
4. Knaysi G. The endospore of bacteria. Bacteriol Rev 1948; 12
(1):19–77.
5. Koneman E, et al. 2008 Bacteriologia médica: taxonomia,
morfologia, fisiologia y virulencia. En: Koneman diagnóstico
microbiológico: texto y atlas en color. Argentina: Ed. Med.
Panamericana; p. 161-203.
6. Lechtman MD, et al. Rapid methods of staining bacterial
spores at room temperature. J Bact 1965; 89: 848–854.
7. May HO. A safe spore stain for class use. Stain Technol 1926;
1:105–106
8. Mehrotra RS, Sumbali G. 2009. Principles Of Microbiology.
New Delhi, India: McGraw Hill; p. 51-54.
9. Mormak D, Casida L. Study of Bacillus subtilis Endospores
in Soil by Use of a Modified Endospore Stain. Appl Environ
Microbiol 1985; 49 (6): 1356-1360.
10. Ragazzo JA, et al. Selección de cepas de Bacillus spp.
productoras de antibióticos aisladas de frutos tropicales. Rev
Chapingo Serie Horticultura 2011; 17 (Especial 1): 5-11.
11. Schaeffer AB, Fulton M. A simplified method of staining
endospores. Science. 1933; 77: 194.
12. Swamy PM. 2008. Laboratory Manual on Biotechnology.
India: Rastogi; p.231.
Domínguez-González KG, et al. MedLab 2013; Año 5 (1): 10-14
Artículo Original
Trabajo Participante
2do Encuentro Internacional sobre
Control de Calidad en el Laboratorio Clínico.
Uso del error total como
herramienta de mejora en el
control de calidad interno en
hormonas.
Autores:
Q.B.P. Adriana M. Carrillo Romero (*), Dr. Francisco Capelini Rodríguez
Departamento de Pruebas especiales Laboratorio Quest Diagnostics México, México D.F.
(*) Autor para correspondencia: manou579@hotmail.com
Palabras clave: Error total, calidad, hormonas.
RESUMEN
El control de calidad analítico en el laboratorio es fundamental para poder emitir resultados de
pacientes y es necesario conocer las variables del método en estudio: error sistemático o sesgo
(ES) y error aleatorio o imprecisión (EA). La integración de estos tipos de error genera el error
total del método (ET). Además de conocer el ET debemos establecer el error total permisible
(ETp), que es la tasa de error que puede ser permitida en un método analítico sin invalidar la
utilidad clínica del resultado, considerando que el ET < ETp. Es importante conocer el desempeño
analítico de las pruebas realizadas en el laboratorio clínico para destinar acciones correctivas y
de mejora que nos ayuden a eficientar dicho desempeño y a mantener un control de calidad que
asegure la confiabilidad de los resultados emitidos. El uso del Error total para complementar el
análisis estadístico de los datos del control de calidad es una herramienta que nos ayuda a mejorar
la evaluación del mismo, así como orientar futuras acciones para eliminar las variables que afectan
este proceso. Al usar los requerimientos de calidad aseguramos la utilidad clínica de los resultados
emitidos (1).
INTRODUCCION
El control de calidad analítico en el laboratorio es una actividad que realizan la mayoría de los
laboratorios como parte de su rutina diaria y es fundamental para poder emitir resultados
de pacientes; en los últimos años, la gestión de calidad total en el laboratorio ha incorporado
el aseguramiento de la calidad, que tiene como una de sus principales funciones establecer
estándares de calidad para el correcto desempeño de las diversas pruebas de laboratorio. Sin
embargo las mediciones analíticas se encuentran influenciadas por errores que pueden ser
inherentes al método en estudio: error sistemático o sesgo (ES) y los que no lo son, error aleatorio
o imprecisión (EA) (2). La integración de estos dos tipos de error genera el error total del método
(ET), el cual es el primer paso para conocer si los resultados que se emiten en un laboratorio tienen
utilidad clínica. El modelo que sigue la mayoría de los laboratorios clínicos en Estados Unidos es
el de las 3 desviaciones estándar y que se alinea con las recomendaciones de Clinical Laboratory
Improvement Amendments (CLIA); en este modelo se obtiene el ET= ES + 3(EA), consiguiendo
un tasa de error de 1,350 errores por millón. Además de conocer el ET, debemos establecer
requerimientos de calidad o error total permisible (ETp), que es la tasa de error que puede ser
permitida en un método analítico sin invalidar la utilidad clínica del resultado, considerando que
el ET < ETp. El ET debe ser lo suficientemente pequeño para minimizar la liberación de resultados
Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F.
MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28 15
15 www.pacal.org
inexactos y el ETp debe ser lo suficientemente grande para al % ET obtenido, además de verificar que fue menor al ETp
ser alcanzable analíticamente sin devengar un costo excesivo propuesto a lo largo de los 6 meses consecutivos en los que se
al laboratorio para mantener el proceso bajo control (3). ha realizado el análisis.

MATERIAL Y METODOS Los resultados de desempeño mensual en base a IDS y CVR

Se realizó el análisis retrospectivo de 6 meses del desempeño
analítico (coeficientes de variación (CV) y sesgo) de 13
hormonas en suero. Los datos fueron obtenidos de un
analizador DXI-800 de la marca Beckman Coulter que utiliza
la metodología de quimioluminiscencia y se transcribieron en
una hoja de cálculo Microsoft© Excel 2003.
se graficaron usando los criterios establecidos, encontrando
para el IDS que, un 97% de los resultados se encuentran
clasificados como desempeño aceptable, mientras que un
2% se posiciona como resultados con desempeño aceptable a
marginal y solamente un 1% es clasificado como desempeño
marginal (Gráfico 1).

Se analizaron los datos de 12 hormonas, las cuales fueron:
cortisol (CORT), hormona estimulante de la tiroides (TSH),
tiroxina total (T4), tiroxina libre (T4L), triyodotironina total
(T3), triyodotironina libre (T3L), hormona luteinizante
(LH), hormona folículo estimulante (FSH), prolactina
(PRL), testosterona (TEST), insulina (INS) y hormona de
crecimiento (HG).
Para el caso del CVR, se tiene que en el 78% de los analitos se
consigue un desempeño aceptable, mientras que el 22% se
encuentra en un desempeño de aceptable a marginal y no se
obtiene ningún analito en desempeño inaceptable (Gráfico 2).
Gráfico 1. Clasificación de analitos en base a su IDS

El material empleado para el proceso del control de calidad

interno fue: Liquicheck™ Immunoassay Plus Control, niveles
1, 2 y 3, lotes 40760 y 40780 de la marca BIO-RAD y como
estimación de la media verdadera se utilizó la media mensual
del grupo de consenso de los reportes interlaboratorio de
Unity Real Time™ de BIO-RAD.

Con la información obtenida se cuantificó el ET a un

intervalo de confianza del 95%, con la fórmula ET= sesgo
+ 1.65*CV. Los ETp fueron seleccionados del documento
Access® Immunoassay Systems Defining Performance
Goals V 1.7 Nov 2011 (4). Adicional al cálculo del ET se
analizó la influencia de la imprecisión y del sesgo en el ET
mediante el cálculo del índice de desviación estándar (IDS) y
el coeficiente de variación relativa (CVR), para poder definir
y establecer acciones correctivas. El IDS se calculó mediante
la fórmula IDS= (media mensual –media de consenso)/
desviación estándar del consenso, y utilizamos para el CVR=
(CV mensual/CV de consenso). Se tomaron los siguientes
criterios para definir IDS y CVR aceptables (5):

Valor del IDS Interpretación

≤ 1.25 Aceptable Gráfico 2. Clasificación de analitos en base a su CVR
1.25 – 1.49 De aceptable a posicionamiento marginal.
Puede ser necesario realizar investigaciones.
1.5 – 1.99 Desempeño marginal.
Se recomienda realizar investigaciones
≥2.0 Desempeño inaceptable.
Es necesario tomar medidas que lo subsanen.

Valor del CVR Interpretación
0.0 - 0.99 Aceptable
1.0 - 1.99 Desempeño marginal
≥ 2.0 Inaceptable

RESULTADOS
En las tablas 1 a la 6 (páginas siguientes) se puede observar
el desempeño mensual de los analitos seleccionados en base

Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F. Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F.

www.pacal.org 16
16 MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28 MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28 17
17 www.pacal.org
 Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F. Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F.
www.pacal.org 18
18 MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28 MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28 19 www.pacal.org
 Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F. Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F.
www.pacal.org 20
20 MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28 MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28 21
21 www.pacal.org
 Esta información se complementa con los resultados para el sesgo o porcentaje de error
sistemático y el porcentaje de error aleatorio obtenidos durante el período de prueba, Enero-
Junio del 2012 (Tablas 7, 8 y 9) para comenzar a diferenciar los analitos que tienen imprecisión
de los que presentan inexactitud.

Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F. Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F.

www.pacal.org 22 MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28 MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28 23
23 www.pacal.org
 Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F. Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F.
www.pacal.org 24
24 MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28 MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28 25
25 www.pacal.org
 En los gráficos 3, 4 y 5 se presentan los resultados de ET a lo largo del período de prueba para
los analitos probados en los 3 niveles de control. Se observa que el 100% de los analitos se
encuentra por debajo del ETp seleccionado, aunque algunos analitos se acercan demasiado
al límite (Ejemplo: T4L en mayo, T3T en mayo).

Gráfico 3. Error total en el nivel 1 de control Ene-Jun 2012

Gráfico 4. Error total en el nivel 2 de control Ene-Jun 2012

Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F. Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F.

www.pacal.org 26
26 MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28 MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28 27 www.pacal.org

Gráfico 5. Error total en el nivel 3 de control Ene-Jun 2012
DISCUSION
En base a los resultados analizados se puede determinar
que el tipo de error que afecta en mayor cantidad al
porcentaje de ET es el error de tipo aleatorio, que a su vez
se encuentra relacionado con la imprecisión. Esta imprecisión
en la prueba puede deberse a múltiples causas como son: la
misma naturaleza del analito, el tipo de metodología usada,
estado de las pipetas o pipetores, factores inherentes al
personal como son manejo del control, manejo de reactivos,
calibraciones, capacitación en el uso de equipos e insumos,
incluso al conocimiento de conceptos relacionados con el
control de calidad y la toma de acciones correctivas en tiempo
y forma. El presente trabajo permitió conocer el desempeño
acumulado de diversos analitos en base a la imprecisión e
inexactitud que presentan, sin embargo aunque conocemos
muchos de los factores que pueden originar la imprecisión
hace falta investigar uno por uno para determinar si son
los causantes de este comportamiento, y para proceder a
tomar las acciones pertinentes que nos permitan minimizar
el impacto de los mismos en la obtención del error total; sin
embargo, la estandarización de los procesos (sobre todo los
inherentes al operador y al manejo de materiales) nos han
permitido observar mejorías en el desempeño. Sin embargo,
a pesar de encontrar imprecisión en algunas pruebas el error
total permitido nunca fue rebasado lo que nos consiente
asegurar la confiabilidad de nuestros resultados.
www.pacal.org 28
28
Es importante analizar los datos de un control de calidad
interno mes a mes, debido a que la información que
proporciona esta práctica nos permite visualizar globalmente
el comportamiento de los analitos, así como la necesidad de
tomar acciones correctivas o de mejora basándonos en qué
tipo de error afecta más a nuestro proceso.
Aunado a esto, el uso del error total junto con el error total
permitido de cada prueba nos permite saber si estamos
cumpliendo con el principal objetivo de todo laboratorio
clínico que es: emitir resultados confiables que ayuden al
médico a establecer un diagnóstico, brindar seguimiento o
reorientar una terapia.
REFERENCIAS
(1) Brooks ZC. Performance Driven Quality Control. 2001 AACC
Press USA
(2) Westgard JO. ¿Cómo hacer el control de calidad correcto de la
manera correcta? Prácticas básicas de control de la calidad. 2010, 3ª.
Ed. Capítulo 20
(3) Rhoads, DG. Validation, verification of Method comparison.
Quality management andthe role of performance standards are
explored. Advance/Laboratory July 2012. www.advanceweb.com.
Consultada en octubre 2012.
(4) Access® Immunoassay Systems Defining Performance Goals V
1.7 Nov 2011. Beckman Coulter
(5) Manual de usuario Unity Real Time 2.0. Bio-Rad
Carrillo-Romero AM y Capelini-Rodríguez F.
MedLab 2013; Año 5 (1): 15-28
T.L.Guillermo Pérez Norica.
L.Q.C. Ruth Gabriela Perez Castro.
Laboratorio De Bioanálisis
Martínez De La Torre Ver.
Autor para correspondencia:
T.L. Guillermo Pérez Norica, Memoyotzin@hotmail.com
El diagnóstico temprano del dengue es muy importante en el
control del paciente, así como en el control epidemiológico.
Los métodos para el diagnóstico de esta enfermedad viral,
varían de acuerdo al equipamiento de cada laboratorio.
a) Inmunocromatográficos.
b) ELISA.
c) Métodos de biología molecular.
d) Aislamiento viral.
Sólo los métodos Inmunocromatográficos son accesibles
a cualquier Laboratorio de rutina y, en todo caso, costosos
para el paciente. Por ello, el costo en el diagnóstico de ésta
enfermedad, es el motivo principal de éste trabajo.
En nuestro Laboratorio, a partir de una Citología Hemática
de rutina hemos estado haciendo observaciones en pacientes
sospechosos de dengue clásico, desde el año 2007. Cabe
mencionar que Martínez de la torre Ver., se encuentra en una
zona endémica para esta enfermedad. Estas observaciones
se han hecho en el extendido sanguíneo donde se hace
el recuento celular en laminillas teñidas por el método de
Wright.
Marco Teórico
Al penetrar un antígeno en el organismo se desencadena
una respuesta inmune que lleva a la producción de células
efectoras, que conlleva cambios morfológicos en los
linfocitos. Esto se traduce en la formación de precursores de
células plasmáticas sintetizadoras de Inmunoglobulinas, que
al final terminan en sangre periférica2.
El resultado de la activación son Células de aspecto inmaduro4,
que a través de la linfa llegan a sangre periférica, se conocen
desde hace muchos años y se asocian a enfermedades
virales, se conocen como virocitos. En épocas más recientes,
diferentes autores las han llamado como: linfocitos activados,
Pérez-Norica G y Pérez-Castro RG. MedLab 2013; Año 5 (1): 29-30
Correspondencia a MEDLAB
linfocitos transformados, linfocitos variantes3, linfocitos
atípicos, linfocitos monocitoides (éste nombre es el más
generalizado, por asociarse a la Mononucleosis Infecciosa).
Y sigue, también se les llama linfocitos irritativos y
linfocitos reactivos - algunos de estos nombres provienen
de la práctica- Esta multiplicidad de nombres ha creado una
verdadera confusión para el Médico que interpreta el reporte
de los diferentes Laboratorios. Lo peor de todo es que no
existe (¿?) una manera de llamarlos por su propia identidad
inmunológica, tal vez, una denominación CD.
Descripción
De acuerdo a nuestras observaciones, en muchas muestras
en el trabajo rutinario, efectuadas en una simple extensión
de sangre, sin anticoagulante, para evitar deterioro
celular, y teñido por el método de Wrigth, determinamos
que la población resultante de la activación antígenica,
aparece como células de aspecto inmaduro, de citoplasma
intensamente basófilo, grandes -aunque también las hay
de tamaño normal-, algunas con vacuolas en el citoplasma.
El núcleo celular se presenta, en la mayoría de los casos,
excéntrico y con un halo claro perinuclear; se puede observar
un nucléolo. El citoplasma suele prolongarse y acomodarse
entre los eritrocitos circundantes, como si se volviera frágil3.
Podemos distinguir dos variedades:
a) Con citoplasma hiperbasófilo, que son los que más
se observan y, según algunos autores, serían linfocitos
B activados, tal vez plasmocitos, precursores de células
sintetizadoras de inmunoglobulinas (células plasmáticas).
b) De citoplasma hialino, que serían linfocitos de estirpe T,
destinadas a ser células cooperadoras y citotóxicas. Éstas
son más pleomórficas que las primeras, las cuales varían muy
poco en su patrón morfológico, ya descrito. No se observan
gránulos en el citoplasma de ambas poblaciones.
29 www.pacal.org
Estas observaciones se han hecho en condiciones de rutina,
con un Microscopio Zeiss modelo Axiostar, usando el objetivo
de inmersión y un ocular 10x. Las laminillas se tiñeron con
colorante de la casa Merck. Pero es conveniente hacer notar
que, los contadores automatizados las detectan con alarmas
que se disparan3. En el caso del Advia 60, de Bayer, es la
alarma M2 la que aparece; otros, de mayor tecnología, como
el Advia 120, los reporta como linfocitos atípicos.
Y aquí otra observación: Cuando se maneja este tipo de
instrumentos de alta o muy alta tecnología, puede ocurrir un
exceso de confianza por parte del operador. Es muy común
que suceda así y que se reporte el resultado sin practicar la
observación microscópica de la muestra, lo que nos priva
de examinar las poblaciones celulares teñidas, pasando por
alto a estos linfocitos característicos, que aún no sabemos
cómo llamar. Y que, como dijimos anteriormente, han sido
asociadas a virosis, pero no al Dengue. Al menos nosotros no
lo encontramos en nuestra escasa literatura. Y es aquí donde
puede tener importancia su determinación.
Las pruebas rutinarias para el diagnóstico en cualquier
Laboratorio, son aceptables, pero caras. Una citometría tiene
un bajo costo y si se practica de manera automatizada, los
datos obtenidos son muy confiables. Pero como se dijo antes,
por exceso de confianza muchas veces no se observa el frotis
teñido; esto significa no enterarse de la presencia de estas
células. Es pues una buena práctica de laboratorio hacer y
teñir una laminilla, necesario para observar a los linfocitos
reactivos (como nosotros los llamamos), para anexarlo en
el algoritmo de diagnóstico del virus del dengue. En el caso
de los contadores automáticos, es clave saber interpretar
correctamente las alarmas que los diferentes instrumentos
disparan y, en caso que se disparen, se deberá hacer una
tinción de Wright. Y claro, observarla al microscopio.
Es entendido que los datos aportados por el análisis de
Laboratorio en Dengue, pueden ser: Hemoconcentración,
Trombocitopenia, Leucopenia, y/o Bandemia. Entonces,
¿podríamos incluir Linfocitos Reactivos? O mejor, ¿su nombre
CD?
Es claro que faltan muchas cosas por hacer, pero eso ya
no está al alcance de éste Laboratorio. Las observaciones
presentadas en este trabajo, producto de pruebas rutinarias,
se dan a conocer con el fin de que se establezca la identidad
inmunológica de Los “Linfocitos reactivos” que, por otro lado,
casi todos los Laboratorios conocen y reportan, aunque cada
cual, de diferente forma.
Alcanzar consensos acerca de la identidad de estas células,
podría servir:
a) Para que el personal del Laboratorio Clínico reconozca de
manera adecuada a dichas células.
www.pacal.org 30
30
b) Para que el Médico relacione a los “Linfocitos Reactivos”
(o cual sea su nombre), con dengue, de acuerdo a la historia
clínica de cada paciente, integrándolos con los demás
parámetros alterados, que pueden ser todos o solo algunos de
ellos. Es decir, emplear las observaciones morfológicas como
ayuda diagnóstica.
La detección de estas células, por supuesto, no sustituye
a otras pruebas de laboratorio, que son necesarias para el
diagnóstico definitivo. Pero aumentan el arsenal diagnóstico,
a bajo costo.
Conclusión (qué más bien es un comentario de lo que
nos sucedió en la práctica, cuando empezamos a ver estás
células).
Falta mucho por saber de estas células; lo expuesto se
desprende de nuestras observaciones. Cuando empezamos
a detectar este tipo celular, nos alarmamos, pensamos más
allá. Pero no podía ser posible que 6 u 8 pacientes recibidos
el mismo día, tuvieran problemas medulares, además que los
demás parámetros, no coincidían. Pero el aspecto inmaduro
de estos linfocitos, alarma. Entonces, nos dimos cuenta que
esos paciente llegaban con sospecha de Dengue por parte
del médico. Revisamos bibliografía y en ninguna de ellas se
relaciona a estas células con el Dengue. Entonces fue cuestión
de observación y seguimiento a pacientes conocidos,
incluso de nuestra familia. Coincidían. Luego, otro hallazgo:
Cuando hay Dengue, 3 a 5 días después del comienzo de las
manifestaciones clínicas, aparecen los “Linfocitos Reactivos”.
Por ello, empezamos a guardar laminillas teñidas, recopilando
entre 50 a 60, las más representativas del año 2007.
Actualmente, algunos Laboratorios locales reportan estas
células. Sin embargo, unos les ponen un nombre y otros, otro.
De ahí que, primero, es indispensable que alguien, con los
suficientes conocimientos y el equipo necesario, caracterice
inmunofenotípicamente a estas confusas células azules. Esto
aclara la biología de estas células además de determinar si
existe correlación con nuestras apreciaciones, de acuerdo con
los mecanismos biológicos de la respuesta inmune, llegando
quizá a la conclusión de que estas células son resultado de
dicha respuesta. Y por lo tanto, específicas de un cuadro de
Dengue.
BIBLIOGRAFÍA.
1.- Balcells A.1997. El Laboratorio y la Clínica. 17 edición.
Masson. Pag. 626.
2.- Roitt I.1997. Inmunología, fundamentos. Pag. 26-197.
3.- Gil JL. 2003. Hematología sin Microscopio. Pags. 184-185
4.- Heckner/Freund. 1997. Atlas de Hematología. 9na
edición. Marban SL. Pag. 33 fig. 27 c.
Pérez-Norica G y Pérez-Castro RG. MedLab 2013; Año 5 (1): 29-30
Las presentaciones se harán en forma de conferencias, ponencias orales y carteles.
Los autores deben indicar la forma preferida de presentación pero el Comité Científico se reserva el
derecho de tomar una decisión final.
• Normas para la preparación del Resumen:
• Se aceptan resúmenes en español o inglés.
• El formato de páginas es Carta (Letter), con márgenes superior e inferior, derecho e izquierdo de 20
mm.
• El título se escribirá comenzando a partir de la cuarta línea, alineado a la izquierda, en negritas,
tamaño 14 puntos.El texto estará justificado, tamaño 12 puntos a un espacio. La fuente a emplear será
Times New Roman.
• El nombre de los autores se ubicará en la segunda línea después del título, justificado a la izquierda,
subrayando el nombre del autor principal.
• Las afiliaciones y direcciones de correos, se escribirán en la segunda línea, después de los autores,
con margen justificado a la izquierda. Se debe incluir la dirección de correo electrónico. El resumen
tendrá como máximo 250 palabras y se podrán incluir ecuaciones, figuras y referencias actualizadas.
• La Fecha límite para el envío del resumen y del Formulario de Solicitud de Participación será el 8 de
Febrero del 2013. El envío del texto del trabajo completo se establecerá por el Comité Científico en la
próxima circular del evento, siendo de conocimiento por todos los participantes.
• El autor recibirá un mensaje por correo electrónico confirmando la recepción del Resumen y del
Formulario de Solicitud de Participación así como será notificado acerca de la aceptación final de su
trabajo.
Importante:
El Formulario de Solicitud de Participación en el Evento sin el resumen o viceversa no se considerará.
Por favor, use solamente la vía del e-mail para el envío del resumen y de los trabajos.
OTRAS INFORMACIONES
Colegiatura para profesionales y para estudiantes
El precio de inscripción para delegados será de 200 CUC y para estudiantes* será de 130 CUC.
*Postgrado en Cuba con previa presentación de docu-mentación que lo acredite como tal.
Para presentaciones de pósters electrónicos sin la pre-sencia del autor, 80 CUC.
Actividades colaterales (cursos pre-eventos)
Durante el desarrollo del Simposio se impartirán cursos pre-eventos por importantes y renombrados
especialistas en las temáticas afines del evento.
31
 V SIMPOSIO INTERNACIONAL DE
QUIMICA (SIQ’13)

PRIMERA CIRCULAR

INVITACIÓN
La Facultad de Química - Farmacia de la Universidad Central “Marta Abreu” de Las de Villas y demás
instituciones organizadoras le invitan cordialmente a asistir al Quinto Simposio Internacional de
Química, que se efectuará del 4 al 7 de junio del 2013, en el Hotel Husa Cayo Santa María, en el centro
de la isla de Cuba.

ALCANCE
Cualquier tema relevante de la Química Pura y Aplicada, las Ciencias Farmacéuticas, la Ingeniería
Química y el Medio Ambiente son importantes tópicos a tratar en este Quinto Simposio Internacional
de Química. Se aceptan, además, otras investigacio-nes que interrelacionen estas ciencias.

COMITÉ ORGANIZADOR
Presidente:
Dra. C. Neibys L. Casdelo Gutiérrez
Decana de la Facultad de Química y Farmacia
Secretaria Ejecutiva:
Dra. C. Leisy Nieto Reyes
Vicedecano de Investigación y Postgrado:
Dr. C. Luis R. Bravo Sánchez

COMITÉ ASESOR INTERNACIONAL

El Simposio posee un Comité Asesor Internacional que se constituye previo a la misma, integrado por
importantes personalidades del mundo científico y académico vinculado con estas ciencias. Este
Comité Asesor Internacional está integrado por especialistas de América Latina, Europa y de nuestro
propio país.

ORGANIZADORES DEL EVENTO

Secretaria ejecutiva del Evento:
Dra. C. Leisy Nieto Reyes / E-mail: lnieto@uclv.edu.cu
Presidente de la Sociedad de Química Villa Clara
Dr. C. Luis R. Bravo Sánchez / E-mail: lbravo@uclv.edu.cu
Oficina de Gestión de Eventos
Yldelisa Pérez González / Teléfonos: 53 42 281528 / E-mail: yldelisa@uclv.edu.cu

Facultad de Química y Farmacia, Universidad Central "Marta Abreu" de Las Villas.

Carretera a Camajuaní Km.5 ½ Santa Clara, Villa Clara C.P. 54830
Teléfonos: 53 42 281164, 53 42 211825, 53 42 211826 y Fax: 53 42 281449

32