Clase #1-Semana 1- Cultivos Celulares

Caracterización celular
Razones de la caracterización
-Demostración de la ausencia de contaminación cruzada
-Confirmación de la especie origen
-La correlación con el tejido de origen que comprende las siguientes
características:
a. Identificación de la estirpe a la que pertenece la célula
b. Posición de las células dentro de ese linaje (es decir, la madre, precursor, o el
estado diferenciado)
-La determinación de si la línea celular se transforma o no:
a. ¿Es finita línea celular o continua?
b. ¿Expresa las propiedades asociadas con malignidad?
-Indicación de si la línea celular es propensa a la inestabilidad genética y la
variación fenotípica
-Identificación de líneas de células especificas dentro de un grupo del mismo
origen, seleccionado las cepas celulares o líneas de células hibridas, todo lo cual
requiere la demostración de características únicas para que la línea celular o la
tensión de la célula.

Caracterización
1. Asignación de especie: humana, mono u otra característica
2. Asignación de linaje o marcador de tejido: pulmón, hepático, cardiaco.
3. Marcadores únicos: de cada línea celular
4. Marcadores de transformación u oncogenicidad
1.Asignación de especie: (caracterización)
-Lo mas sugerido es el cariotipo y luego isoenzimas
Cariotipo
-El cariotipo es útil para diferenciar entre especies, ya que el número
cromosomas en específico en cada especie
-De acuerdo el tipo de bandeo nos ayudara realizar el ideograma ideal
-Las células necesitan estar en división para poder obtener las metafases, de
esta manera se las fija lo cual nos ayuda poder observar los cariotipos.

Isoenzimas
-Un marcador genético que no es considerado molecular
-Enzimas que tienen la misma función, genéticamente son un poco distintas
-Isoenzimas clásicas las cuales están en el metabolismo en la mayoría de las
especies: AST, G6PD, LDH, MDH, MPI, NP, PEP B. Por lo tanto, es más fácil
identificarlas
-Son poco variables y su neutralidad puede ser cuestionable.

Isoenzima que permita diferenciar entre ratón y humano: LDH

Isoenzima que permita diferenciar entre ratón y humano: LDH

(F)Si se puede diferenciar entre ratones y humano por la posición
A
-Indica si hay contaminación cruzada.
-Cuando tengo CHO-K1 tengo una sola mancha
-Cuando tengo MRC-5 hay 4 bandas
-Indica la mezcla de las líneas celulares
B
-Aquí están por separados diferentes clones p0, p1, p2, p3, p4
-Líneas contaminadas: p2,p3
-Podemos observar 5 bandas que corresponde a ratón y hámster chino, en mezcla
como tal.
-Para diferenciar utilizaríamos la enzima Pep B

2. Asignación de linaje o marcador de tejido

-Cuando queramos marcadores de tejido lo más recomendable es utilizar marcadores
de superficie, como los marcadores de superficies en los linfocitos que me ayuda a
diferenciar las dos familias y que tipo de linfocito se trata
-Marcadores de superficie: antígenos de superficie (CD)
-También se pueden utilizar filamentos intermedios como: (estos les dan la forma
de cada una de las celulas)

 CK-epidermis
 Vim-mesodermo
 GFAP-astrocitis
-Productos diferenciados: producción fosfatasa alcalina en un tejido testicular
tumoral.
-Enzimas, medir transaminasa, GOP, GTP que se producen en el hígado
-Funciones especializadas
3. Marcadores únicos
-No son enteramente originales, pueden ser utilizados para distinguir entre las
líneas celulares a partir de los mismos tejidos, pero de distintos donantes.
-Podríamos ver:
Aberraciones cromosómicas: eliminaciones, translocaciones, polisomia.
Complejo de histocompatibilidad: que son altamente polimórficos (MHC) (por
ejemplo, HLA en humanos)
Huellas o perfil de ADN: (STRs, RFLPS) MAS UTILIZADO
Deficiencias enzimáticas: por ejemplo, la deficiencia de timidina kinasa (TK-)
Resistencia a fármacos: por ejemplo, la resistencia a vinblastina, por lo
general junto a la expresión de la glicoproteína-P por uno de los genes MDR
que codifican para el flujo proteico.
-El cariotipo lo vemos como una prueba de identificación de especie por el
numero de cromosomas, sin embargo, las aberraciones cromosómicas
generalmente de líneas tumorales o por ejemplo si una línea tumoral de
síndrome de Down va a tener el cromosoma 21 y dependiendo de lo que yo
quiera diferencia podría utilizarlo como herramienta.
-De la línea celular cáncer de pulmón A549 el cariotipo demuestra que, el
número de cromosomas en el 24% de las células va a cambiar y va a tener una
triploidia, no van haber46 cromosomas si no 66 cromosomas, se asume que
son 6 cromosomas marcadores por que incluyen translocaciones, deleciones,
características de la línea celular.
-En la línea celular CHO K-1, las líneas celulares tienen un umero de
cromosomas 2n=22
-Técnica SKIPY, CARIOTIPO TUMORAL (existen tres copias de cada cromosoma,
perdidas, monosomía, pedidas parciales, translocaciones)
STRS -Prueba de estándar o prueba de oro
-Me indica como una huella digital que tipo de celular es
-Mas utilizada, mientras se tenga la tecnología como tal
-Una de las cosas más económicas es la morfología, no es precisa, pero si te
da un indicativo de lo que está pasando con las células
-La expresión genética nos podría permitir diferenciar las líneas celulares una
con respecto a otra, pero hacer análisis de expresión genética es más costoso