Analítica y bioanalítica

Chauhan y col., J Anal Bioanal Tech 2015, 6: 1

http://dx.doi.org/10.4172/2155-9872.1000233

Técnicas

Artículo de revisión Acceso abierto

Desarrollo y validación de métodos analíticos: una revisión concisa

Ashish Chauhan 1 *, Bharti Mittu 1 y Priyanka Chauhan 2
1 SMPIC, NIPER, Mohali, Punjab, India
2 Shikhar S. Sadan Sr. Sec. Escuela, Dhampur, Bijnor, India

Resumen

El desarrollo y la validación de métodos analíticos son una tarea continua e interdependiente asociada con los departamentos de investigación y
desarrollo, control de calidad y aseguramiento de la calidad. Los procedimientos analíticos juegan un papel fundamental en la gestión y evaluación de
riesgos y equivalencia. Ayuda a establecer los criterios de aceptación específicos del producto y la estabilidad de los resultados. La validación debe
demostrar que el procedimiento analítico es adecuado para el propósito previsto. El diseño de experimentos es una herramienta poderosa para la
caracterización y validación de métodos. Los profesionales analíticos deben sentirse cómodos al usarlo para caracterizar y optimizar el método analítico.
El desarrollo de un método analítico eficaz y su validación pueden proporcionar mejoras significativas en la precisión y una reducción de los errores de
sesgo.

Palabras clave: Validación; Estabilidad; Precisión; Precisión; COMPENSACIÓN Se pueden utilizar los primeros procedimientos para orientar el desarrollo posterior.

El ciclo de vida de un método analítico es breve, como se muestra en la Figura 1. Los pasos
Introducción
comunes que se siguen en el desarrollo del método son los siguientes:
Desarrollo de métodos analíticos
1. Caracterización estándar de analitos
La Química Analítica es la rama de la ciencia que utiliza tecnologías avanzadas para
2. Requisitos del método
determinar la composición mediante técnica analítica. Podemos lograr resultados tanto
cualitativos como cuantitativos. Los instrumentos analíticos juegan un papel importante en el 3. Búsqueda de literatura
proceso para lograr datos analíticos confiables y de alta calidad. Por lo tanto, todos en el
4. Seleccionar el método
laboratorio analítico deben preocuparse por la garantía de calidad del equipo.
5. Montaje instrumental y estudios preliminares

El método analítico puede ser espectral, cromatográfico, electroquímico, con guiones
o varios. El desarrollo de un método analítico es el proceso de seleccionar un
procedimiento de ensayo preciso para determinar la composición de una formulación. Es el
proceso de demostrar que un método analítico es aceptable para su uso en laboratorio
para medir la concentración de muestras posteriores Los métodos analíticos deben usarse
en entornos GMP y GLP y deben desarrollarse utilizando los protocolos y criterios de
aceptación establecidos en las directrices ICH Q2 ( R1). Los requisitos previos para el
desarrollo de métodos son los siguientes [1-4]:
1. Instrumentos calificados y calibrados
2. Métodos documentados
3. Patrones de referencia fiables
6. Optimización de parámetros
7. Documentación de figura analítica.
8. Evaluación del desarrollo del método con la muestra.
9. Determinación del porcentaje de recuperación de la muestra.
10. Demostración de análisis cuantitativo de muestras
La capacidad de proporcionar datos precisos, fiables y consistentes es el motivo del
químico analítico. Los procedimientos de desarrollo de métodos son esfuerzos complejos,
prolongados y costosos. Un método analítico detalla los pasos y técnicas necesarios para
realizar un análisis. Esto puede incluir: preparación de muestras, estándares y reactivos;
uso de aparatos; generación de la curva de calibración, uso de fórmulas para el cálculo,
etc. Se requiere el desarrollo del método analítico para [1- 4]:

4. Analistas calificados

5. Selección e integridad de la muestra

1. Productos a base de hierbas y su potencia
6. Control de cambios
2. Nuevos procesos y reacciones
Se desarrolla un procedimiento analítico para probar una característica definida de
la sustancia contra los criterios de aceptación establecidos para esa característica. En el
desarrollo de un nuevo procedimiento analítico, la elección de la instrumentación y
metodología analíticas debe basarse en el propósito y el alcance previstos del método * Autores correspondientes: Ashish Chauhan, SMPIC, NIPER, Mohali, Punjab, India, correo electrónico: aashishchauhan26

analítico. Los parámetros importantes que pueden evaluarse durante el desarrollo del
método son la especificidad, linealidad, límites de detección (LOD) y límites de Recibió 28 de enero de 2015; Aceptado 14 de febrero de 2015; Publicado febrero
cuantificación (LOQ), rango, exactitud y precisión (Tabla 1). Durante las primeras etapas 23, 2015

del desarrollo del método, se debe evaluar la solidez de los métodos, ya que esta
característica en última instancia ayuda a decidir qué método se aprobará. El desarrollo
de procedimientos analíticos se basa principalmente en una combinación de
comprensión mecanicista de la metodología básica y experiencias previas.
Citación: Chauhan A, Bharti Mittu B, Chauhan P (2015) Desarrollo y validación de métodos analíticos:
una revisión concisa. J Anal Bioanal Tech 6: 233 doi:
10.4172 / 2155-9872.1000233
Derechos de autor: © 2015 Chauhan A, et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los
términos de la Licencia de Atribución Creative Commons, que permite el uso, distribución y reproducción sin
restricciones en cualquier medio, siempre que se acredite el autor y la fuente originales.

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Impurezas
Parámetros Identificación Ensayo
Cuantitativo Límite

Precisión - + - +
Precisión - + - +
Especificidad + + + +
Límite de detección - - + -
Límite de cuantificación - + - -
Linealidad - + - +
Abarcar - + - +
Robustez + + + +

Tabla 1: Los parámetros de un procedimiento analítico.

Desarrollo del método Reurbanización requerida debido a cambios

Validación del método Revalidación necesaria debido al cambio

Método en uso rutinario

Validado y reformado Cambiar el método Validado pero sin cambios

Figura 1: El ciclo de vida de un método analítico.

3. Desarrollo de nuevas moléculas 8. Organización Mundial de la Salud (OMS)

4. Ingredientes activos (macroanálisis) Cuando se realizan algunos cambios en los métodos no estándar validados, se debe
documentar la influencia de dichos cambios y se debe realizar una nueva validación. Si hay
5. Residuos (microanálisis)
métodos estándar disponibles para una prueba de muestra específica, se debe utilizar la
6. Perfiles de impurezas edición más reciente. La validación incluye la especificación de los requisitos, la determinación
de las características del método, una verificación de que los requisitos pueden cumplirse
7. Componente de interés en diferente proporción
utilizando el método, una declaración de validez [5-8].
8. Estudios de degradación

Necesidad de desarrollo y validación de métodos analíticos
La necesidad de validación del desarrollo y validación del método analítico surgió
debido a la competencia internacional, manteniendo el estándar de los productos en alto
valor comercial y de mercado y por razones éticas. Varias agencias reguladoras
internacionales han establecido el estándar y han fijado el protocolo para que coincida con
la referencia para otorgar aprobación, autenticación y registro. Algunas de las
organizaciones famosas que rigen los estándares de calidad son:
Para comprender completamente el efecto de los cambios en los parámetros del método en un
procedimiento analítico, adopte un enfoque sistemático para el estudio de la robustez del método
(diseño de experimentos con parámetros del método) seguido de una evaluación de riesgo inicial y
experimentos multivariados. Estos enfoques nos permiten comprender los efectos de los parámetros
sobre el rendimiento del método. La evaluación del desempeño de un método puede incluir análisis
de muestras obtenidas desde las etapas de fabricación en proceso hasta el producto terminado. La
información obtenida durante estos estudios sobre las fuentes de variación del método puede
ayudar a evaluar el rendimiento del método.

1. Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA de los Estados Unidos)

2. Regulaciones actuales de buenas prácticas de fabricación (cGMP) Validación del método

3. Normativa de Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL). La calidad de los datos está asegurada por la combinación de cuatro componentes:
calificación de instrumentos analíticos (AIQ); validación del método analítico; pruebas de
4. El Plan de cooperación en materia de inspección farmacéutica (PIC / S)
idoneidad del sistema y controles de calidad. La validación de un método analítico tiene como

5. Programa de cooperación en materia de inspección farmacéutica (PIC / S) objetivo demostrar que es adecuado para el uso previsto. Generalmente validamos el método
en las siguientes condiciones:
6. La Conferencia Internacional de Armonización (ICH)

7. Manual de calidad ISO / IEC 17025 emitido por International 1. Durante el desarrollo del método
Organización para la estandarización
2. Comprobación de la idoneidad del sistema

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3. Cambio de aplicación, entorno, analista
4. Mientras se usa después de un período prolongado de tiempo
5. Comprobación de la fiabilidad y la coherencia
El tipo de método y técnica analítica utilizados determinará la naturaleza y el alcance
de los estudios de validación requeridos. Los métodos más comunes de validación son la
identificación, el ensayo y la determinación de impurezas [5-8].
El informe de validación detalla los resultados del estudio de validación. Su propósito es
proporcionar la información sobre las características en base a las cuales fueron probadas
durante el estudio, los resultados obtenidos y la interpretación de dichos resultados. La
información típica en un informe de validación incluye:
sustancia correcta, en la cantidad correcta y en el rango apropiado para las muestras.
Permite al analista comprender el comportamiento del método y establecer los límites
de rendimiento del método [9-11].
Para realizar la validación del método, el laboratorio debe seguir un procedimiento
operativo estándar (POE) escrito que describa el proceso de realización de la validación del
método. El laboratorio debe utilizar instrumentación calificada y calibrada. Debe haber un
método de prueba bien desarrollado y documentado y un protocolo aprobado antes de la
validación. El protocolo es un plan sistemático que describe qué parámetros de rendimiento
del método deben probarse, cómo se evaluarán los parámetros con sus criterios de
aceptación. Como en el caso de los productos farmacéuticos, se necesita un API o producto
farmacéutico, placebos y estándares de referencia para realizar los experimentos de
validación.

La precisión es la proximidad de la concordancia entre los valores encontrados. El valor

1. Protocolo de validación.
aceptado como valor verdadero convencional o el valor de referencia aceptado. Se encuentran

2. Método analítico disponibles varios métodos para determinar la precisión. Se puede cribar mediante el uso de un
procedimiento analítico a un analito de pureza conocida, mediante la comparación de los
3. Los parámetros de validación
resultados del procedimiento analítico propuesto con los de un segundo procedimiento aceptado,

4. Los resultados cuya precisión se establece y se define. También se puede inferir una vez que se han establecido
la precisión, linealidad y especificidad [3-9].
5. Interpretación de los resultados

6. Información de validación relevante

La precisión de un procedimiento analítico expresa la proximidad de la concordancia

7. Detalles de los materiales de referencia entre una serie de mediciones obtenidas a partir de muestreos múltiples de la misma
muestra homogénea en las condiciones prescritas. Se puede subdividir en repetibilidad,
8. Detalles del número de lote
precisión intermedia y reproducibilidad. La desviación estándar, la desviación estándar

9. Detalles del equipo utilizado para el estudio relativa como el coeficiente de variación y el intervalo de confianza deben informarse
para cada tipo de precisión investigado.
10. Referencias a los detalles del laboratorio.

Los parámetros de validación típicos recomendados por la FDA, USP e ICH son los 1. La repetibilidad debe evaluarse utilizando un mínimo de 9
siguientes: determinaciones que cubren el rango especificado para el procedimiento mediante 3 repeticiones o 6
determinaciones al 100% de la concentración de prueba.
1. Especificidad

2. Linealidad y rango 2. La precisión inmediata depende de las circunstancias bajo

que el procedimiento está destinado a ser utilizado. El día específico, el analista que
3. Precisión realiza el equipo, son los eventos aleatorios que influyen en la precisión del
procedimiento analítico. No se considera necesario estudiar estos efectos
(A) Precisión del método (repetibilidad) (B)
individualmente. Debe fomentarse el uso de un diseño experimental.
Precisión intermedia (robustez)

4. Precisión 3. La reproducibilidad se evalúa mediante un ensayo entre laboratorios.

5. Estabilidad de la solución
6. Límite de detección (LOD)
7. Límite de cuantificación (LOQ)
8. Robustez
La validación de métodos es un área amplia que incluye muchos parámetros de
validación con diferentes enfoques para diferentes niveles de requisitos basados en el uso
previsto del método analítico. El método validado aclara el problema imprevisto o
desconocido durante el curso del uso de rutina. El método validado tiene un nivel de
confianza limitado. Después del desarrollo del método, es necesario validarlo según el
requisito que otorgue cierto nivel de confianza para el uso previsto.
Criterios de validación
Se debe considerar la reproducibilidad en caso de estandarización de un procedimiento
analítico.
4. La especificidad es la capacidad de evaluar la presencia del analito
de varios componentes que pueden estar presentes. Puede establecerse mediante varios enfoques,
según el propósito previsto del método. La capacidad del método para evaluar el analito de interés en
un producto farmacéutico se determina mediante una comprobación de la interferencia del placebo.
La especificidad se puede evaluar midiendo el API en muestras que están enriquecidas con
impurezas o degradantes. Si los compuestos relacionados con los API no están disponibles, el
fármaco se puede estresar o degradar a la fuerza para producir productos de degradación. En las
separaciones cromatográficas, la separación aparente de los degradantes puede confirmarse
mediante determinaciones de pureza de pico mediante matriz de fotodiodos, determinaciones de
pureza de masa mediante espectroscopia de masas (MS) o confirmando la eficiencia de separación
utilizando química de columna alternativa. Durante los experimentos de degradación forzada, La
degradación tiene como objetivo una degradación del API del 5 al 20%, con el fin de evitar
preocupaciones sobre la degradación secundaria. La falta de especificidad de un procedimiento

La validación de un método analítico demuestra la solidez científica de la analítico individual puede compensarse con otros procedimientos analíticos de apoyo.

medición o caracterización. Se requiere en diferentes grados a lo largo del

proceso de presentación regulatoria. La práctica de validación demuestra que un
método analítico mide la

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5. El límite de detección de un procedimiento analítico individual es el
menor cantidad de analito en una muestra que se puede detectar. Puede
determinarse visualmente, mediante la relación señal / ruido, la desviación
estándar de la respuesta y la pendiente. El enfoque de señal de límite de
detección a ruido solo se puede aplicar a procedimientos analíticos que presentan
ruido de línea de base. Comparar las señales medidas de muestras con
concentraciones conocidas de analito con las de las muestras en blanco y
establecer la concentración mínima a la que el analito puede detectarse de forma
fiable. Una relación señal-ruido entre 3 o 2: 1 se considera generalmente
aceptable para estimar el límite de detección. El límite de detección (DL) puede
expresarse como: DL = 3,3 σ / S donde, σ es la desviación estándar de la
respuesta, S es la pendiente de la curva de calibración. La pendiente S puede
estimarse a partir de la curva de calibración del analito.
6. La linealidad de un procedimiento analítico es su capacidad para obtener pruebas
resultados que son directamente proporcionales a la concentración de analito en la muestra. Los
resultados de las pruebas deben evaluarse mediante métodos estadísticos apropiados, mediante el
cálculo de una línea de regresión como por el método de mínimos cuadrados. coeficiente de correlación,
intersección con el eje y, pendiente de la línea de regresión y suma de cuadrados residual para los cuales
se recomiendan un mínimo de cinco concentraciones.
7. El rango de un procedimiento analítico es el intervalo entre el
concentración superior e inferior de analito en la muestra para la que se ha demostrado
que el procedimiento analítico tiene un nivel adecuado de precisión, exactitud y linealidad.
8. La solidez se evalúa normalmente por el efecto de pequeños cambios.
en los métodos cromatográficos sobre los parámetros de idoneidad del sistema, como la retención
de picos, la resolución y la eficiencia. Los factores experimentales que suelen variar durante las
evaluaciones de solidez del método incluyen: (i) antigüedad de los estándares y preparaciones de
muestras (ii) tiempo de análisis de la muestra (iii) variaciones del pH de la fase móvil (iv) variación
de la composición de la fase móvil (v) temperatura de análisis ( vi) caudal (vii) fabricante de la
columna (viii) tipo y uso del filtro contra la centrifugación. Los experimentos de robustez son una
oportunidad ideal para utilizar el diseño estadístico de experimentos, proporcionando un control de
métodos basado en datos.
La guía de ICH sobre validación distingue los tipos de métodos de acuerdo con el
propósito del método y enumera el tipo de evaluación adecuado. Las pautas de la ICH sugieren
esquemas de validación detallados en relación con el propósito de los métodos. Enumera los
datos recomendados para informar para cada parámetro de validación. Los criterios de
aceptación para la validación deben basarse en las actuaciones anteriores del método, las
especificaciones del producto y la fase de desarrollo.
Como se mencionó anteriormente, el camino hacia la validación forma un continuo.
Comienza en las primeras fases de desarrollo como un conjunto de experimentos informales
que establece la solidez del método para su propósito previsto. Se amplía a lo largo del
proceso de presentación reglamentaria en un informe completamente documentado que se
requiere para la producción comercial. Se repite siempre que hay un cambio significativo en la
instrumentación, el método, las especificaciones y el proceso [1-11]
Problemas y desafíos
Para que un programa de validación y desarrollo de métodos tenga éxito, se
recomienda un enfoque holístico. Un desafío común que se encuentra durante el
desarrollo y la validación de métodos es que los métodos suelen ser desarrollados por el
departamento de investigación y desarrollo, mientras que la validación suele ser
responsabilidad de un aseguramiento y control de calidad. Es importante que todos los
grupos
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trabajar como un solo equipo. Varios grupos pueden ser responsables de asegurar la
idoneidad de los métodos para soportar las distintas fases y la fabricación comercial. La
transferencia de métodos analíticos de un grupo a otro se convierte entonces en un paso
importante para garantizar que existe la validación adecuada para justificar su uso previsto.
Porque el método será ejecutado por varios grupos durante su progreso desde el desarrollo
hasta la validación, pero el método debe ser robusto. Una debilidad común en el desarrollo y
validación de métodos es que los métodos no son lo suficientemente robustos. Si la robustez
no está incorporada en los métodos al principio del desarrollo, es probable que los resultados
carezcan de eficiencia en las pruebas de calidad y encuentren un proceso de validación largo y
complicado. Se logra mediante la realización de estudios de degradación forzada. El diseño y
ejecución de estos estudios requiere un conocimiento profundo del producto que se está
probando, así como una buena comprensión de la técnica de análisis. Se están publicando
nuevas pautas regulatorias que rigen las expectativas de las agencias reguladoras en todo el
mundo para el desarrollo y validación de métodos. Es necesario cumplir con los estándares
regulatorios actuales. Desde una simple mejora de método hasta una remodelación completa y
su posterior implementación es una tarea tediosa. Por esta razón, uno debe estar alerta a las
tendencias actuales en las pautas regulatorias y adoptar un enfoque proactivo a los cambios
que puedan afectar los programas de desarrollo y validación. Por último, uno de los requisitos
clave para la validación de métodos es que durante la validación de métodos solo se deben
utilizar materiales de referencia bien caracterizados con purezas documentadas adecuadas
[1-15].
Conclusiones
El desarrollo de métodos analíticos ayuda a comprender los parámetros críticos del
proceso y a minimizar su influencia en la exactitud y precisión. Los métodos analíticos
deben usarse siguiendo las pautas de GMP y GLP y deben desarrollarse utilizando los
protocolos y criterios de aceptación establecidos en las pautas de ICH Q2 (R1). La
validación del método ayuda a validar el método analítico para un rango de
concentraciones, de modo que el cambio en la formulación o concentración no requiera
una validación adicional. Una vez que los métodos se han desarrollado, calificado y
validado, el impacto que tienen en las tasas fuera de especificación y la capacidad del
proceso debe cuantificarse y evaluarse para determinar su efectividad para uso futuro.
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