Obtener de manera aséptica la
cantidad precisa de sangre en un
Medio Sólido: AGAR
SANGRE, AGAR
MANITOL, AGAR
MUELLER HINTON
Pesar la cantidad de medio de
cultivo óptima y rehidratarlo con
agua destilada en un matraz de
erlenmeyer.
Autoclavar el matraz de
erlenmeyer con un tapón de
gasa sin cerrarlo totalmente
durante 30 minutos a una
presión de 121 psi.
Sacar del autoclave la preparación,
esperar que adquiera la temperatura
adecuada, aproximadamente unos
40ºC.
Realización de siembra
Siembra en medio
líquido:
Obtener con un hisopo estéril la
muestra de exudado faringeo,
misma que se lleva al tubo con
medio líquido (agitándola en el
seno del medio), tomando las
precauciones necesarias para
evitar salpicaduras.
Mezclar con cuidado el agar con
tubo completamente estéril (esto
la concentración exacta de sangre
quiere decir la concentración
evitando que se formen grumos.
exacta de 5% para el volumen de
agar preparado).
Distribuir el medio en las placas
de Petri estériles dentro de una
campana de flujo laminar o en
Para el AGAR SANGRE: las proximidades del mechero,
flameando bien la boca del
matraz de erlenmeyer para
contaminaciones.
Dejar que el medio solidifique.
Dejar que el medio solidifique.
Distribuir el medio en las placas de
Petri estériles dentro de una
campana de flujo laminar o en las NOTA: Si preparó los medios
proximidades del mechero, con anterioridad guardarlos en
flameando bien la boca del matraz una nevera a 4ºC.
de erlenmeyer para evitar
contaminaciones.
Marcar el material con el
nombre del grupo.
Realizar la siembra, como
sigue:
Siembra en placa:
Sobre el agar de la placa de petri se procede a
realizar el estriamiento de la muestra de
secreción faríngea, deslizando el asa
suavemente por su superficie en zig-zag,
iniciando con un inóculo primario como se
muestra en la figura.
 De los En primer lugar, observar a simple vista
medios diversas características como el color y el
sembrados borde de las colonias crecidas en el agar,
de 35 a 37ºC Observación así como el olor y la turbidez del medio
Incubación
hasta que de resultados ya que en algunos casos suelen ser
haya típicos de un determinado tipo de
crecimiento microorganismo y pueden servir de
bacteriano. ayuda a la hora de su identificación

Tinción

Preparar el frotis de la muestra directa, secar y fijar al calor.

Proceder a la coloración de Gram con las condiciones e indicaciones expuestas y

aprendidas en la práctica anterior.

Observación de las Tinciones

Las bacterias Gram-positivas presentarán una coloración violeta mientras que las Gram-
negativas la presentarán roja o rosa. La identificación de las bacterias Gram-positivas
puede ser problemática, solamente cuando las bacterias Gram-positivas se encuentran
en crecimiento exponencial (cultivos jóvenes) la reacción es clara; en fase estacionaria
(cultivos viejos).
Realización de pruebas bioquímicas
Realización del antibiograma
básicas

Una vez conocida de manera teórica la flora

habitual y patógena de muestras faríngeas y Una vez reconocida la o las bacterias, proceder a
observadas las características generales de las realizar el respectivo antibiograma, incluyendo los
colonias bacterianas desarrolladas, proceder a discos de antibióticos que se emplean en muestras de vías
respiratorias altas.
realizar de acuerdo a sus particularidades, las
diferentes pruebas bioquímicas que nos ayudarán
en la identificación presuntiva de los
microorganismos.
Para la colocación de los discos de sensibilidad se
usarán pinzas estériles y la distancia entre disco y
disco no deberá ser menor a 1.5 cm.
Las pruebas bioquímicas a emplearse en la práctica
incluyen métodos que permitan dar indicios sobre
qué tipo de bacteria se ha desarrollado en nuestro
cultivo, que incluyen: Prueba de la catalasa,
pruebas bioquímica de identificación para Posteriormente se llevarán las placas a incubar por
gramnegativos (si existiera desarrollo de este tipo 24 horas.
de bacterias), fermentación y crecimiento en agar
manitol salado, etc.

Al día siguiente se medirán con una regla los halos

de inhibición por la parte trasera de la placa y se
realizará la respectiva interpretación con ayuda de
las tablas, donde se determina si existe Sensibilidad
(S), Resistencia (R), Intermedio (I) al antibiótico.