Cromatografía

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Cromatógrafu de gases
Colector automáticu de fracciones y d'amueses pa la cromatografía

La cromatografía ye un métodu físicu de separación pa la carauterización d'amiestos

complexos, que tien aplicación en toles cañes de la ciencia; ye un conxuntu de
téuniques basaes nel principiu de retención selectiva, que'l so oxetivu ye dixebrar
los distintos componentes d'un amiestu, dexando identificar y determinar les
cantidaes de dichos componentes. Diferencies sutiles nel coeficiente de partición
de los compuestos dan como resultáu una retención diferencial sobre la fase
estacionaria y, poro, una separación efectiva en función de los tiempo de retención
de cada componente del amiestu.

La cromatografía puede cumplir dos funciones básiques que nun s'esclúin mutuamente:

Dixebrar los componentes del amiestu, pa llogralos más puros y que puedan ser
usaos darréu (etapa final de munches síntesis).
Midir la proporción de los componentes del amiestu (finalidá analítica). Nesti
casu, les cantidaes de material emplegaes suelen ser bien pequeñes.

Conteníu

1 Historia
2 Clasificación de los métodos de separación en cromatografía
3 Términos emplegaos en cromatografía[3]
4 Ver tamién
5 Referencies
6 Enllaces esternos

Historia

La cromatografía, como indica'l so nome (provien del griegu χρῶμα chrōma y γράφω
gráphō, que signifiquen respeutivamente "color" y "escribir, rexistrar",
lliteralmente "escritura de color", o meyor "rexistru de color") , foi emplegada
orixinalmente con sustances coloriaes.

Yá en 1850, Runge describió la formación de zones coloriaes cuando se depositaben

gotes de sustancies colorantes sobre papel secante, pero'l desenvolvimientu más
importante vinu colos esperimentos de Mijaíl Tsvet[1] (1872-1919), qu'emplegó per
primer vegada en 1906 el términu "cromatografía". A empiezos del añu 1903, Mijaíl
Tsvet, botánicu rusu, llogró dixebrar un amiestu de pigmentos de plantes
(clorofiles) nuna columna de carbonatu de calciu. Más tarde, en 1910, cromatografió
un estractu de yema de güevu nuna columna d'inulina. Les sos investigaciones,
sicasí, nun fueron utilizaes por otros investigadores hasta 1931. Esta demoranza
quiciabes se debió al fechu de que los trabayos de Tsvet fueron publicaos en rusu y
nuna revista que nun tenía amplia circulación.

El rápidu desenvolvimientu de la cromatografía como ferramienta analítico sensible

nun asocedió hasta 1931, cuando Kuhn, con Lederer y con Winterstein, emplegó la
téunica pal analís de pigmentos de plantes, confirmando los primeros trabayos de
Tsvet y la so predicción de que'l carotenu nun yera una sola sustancia, sinón un
amiestu de dellos homólogos estrechamente rellacionaos. Coles mesmes, el tamañu de
les columnes emplegaes foi aumentando pa poder recuperar los componentes separaos.
La téunica, poro, nun yera solo analítica sinón preparatoria.

La cromatografía en columna por estos tiempu tenía aplicaciones llindaes, yá que

los componentes que podíen dixebrase yeren invariablemente lípidos. Pasaron 10 años
primero que Martin y Synge desenvolvieren una téunica por aciu la cual pudieren
dixebrase compuestos aguacientos o hidrofílicos. Esto marcó un nuevu interés na
téunica y en 1944 Consden, Gordon y Martin llograron dixebrar amiestos complexos
d'aminoácidos en papel y fueron premiaos col Premiu Nobel polos sos trabayos. Al
poco tiempu, en 1947, n'Estaos Xuníos de Norteamérica, la Comisión d'Enerxía
Atómica dio a conocer información sobre l'usu de la cromatografía d'intercambiu
iónicu pa la separación de productos de fisión nuclear.

El desenvolvimientu más recién nel campu de la cromatografía derivar de los

trabayos de Stahl, quien en 1956 presentó una téunica práutica por aciu la cual una
capa delgada xil xel, celulosa o alúmina yera tremada sobre una placa de vidriu.
Esta téunica, llamada cromatografía de capa fina, resultó nun analís más rápidu y
más sensible pal exame d'amiestos complexos y, en munchos casos, sustituyó a otros
métodos similares más antiguos de cromatografía en papel toche.

En 1959, Porath y Flodin introducieron una nueva téunica llamada cromatografía de

filtración de xel. Esta haise convertíu nuna poderosa y nueva ferramienta pa la
separación de sustances d'altu pesu molecular, particularmente les proteínes, y
atopó munches aplicaciones nos campos de la bioquímica, la medicina, la fisioloxía
y la bioloxía. La mayoría de les téuniques de filtración en xel utilicen columnes y
apocayá fixéronse trabayos con una combinación de filtración en xel y materiales
d'intercambiu iónicu, llogrando que les separaciones complexes sían desaxeradamente
rápides y eficientes.

Los primeros equipos de cromatografía de gases apaecieron nel mercáu a mediaos del
sieglu XX. De la mesma, la cromatografía líquida d'alta resolución (HPLC High
Performance Liquid Chromatography, n'inglés) empezó a desenvolvese nos años 1960,
aumentando la so importancia nes décades siguientes, hasta convertise na téunica
cromatográfica más emplegada. Sicasí esto dirá modificando col pasu de los años.
Clasificación de los métodos de separación en cromatografía

Les distintes téuniques cromatográfiques[2] pueden estremase según cómo tea

dispuesta la fase estacionaria:

Cromatografía plana. La fase estacionaria asítiase sobre una placa plana o

sobre un papel. Les principales téuniques son:
Cromatografía en papel
Cromatografía en capa fina
Cromatografía en columna. La fase estacionaria asítiase dientro d'una columna.
Según el fluyíu emplegáu como fase móvil estrémense:
Cromatografía de líquidos
Cromatografía de gases
Cromatografía de fluyíos supercríticos

La cromatografía de gases aplicar a numberosos compuestos orgánicos. Nel casu de

compuestos non volátiles, recurrir a procesos denominaos de "derivatización", con
cuenta de convertilos n'otros compuestos que se volatilicen nes condiciones
d'analises.

Dientro de la cromatografía líquida, destaca la cromatografía líquida d'alta

resolución (HPLC, del inglés High Performance Liquid Chromatography), que ye la
téunica cromatográfica más emplegada na actualidá, de normal na so modalidá de fase
reversa, na que la fase estacionaria tien calter non polar, y la fase móvil tien
calter polar (xeneralmente enagua o amiestos con elevada proporción de la mesma o
d'otros disolvente polares, como por casu, metanol). El nome de "reversa" vien dau
porque tradicionalmente la fase estacionaria taba compuesta de xil o alúmina, de
calter polar, y por tantu la fase móvil yera un disolvente orgánicu pocu polar. Una
serie eluotrópica ye un rangu de sustances de distintes polaridaes qu'actúen como
fase móvil y que dexen reparar un meyor desplazamientu sobre una fase estacionaria.
Separación de clorofiles por aciu cromatografía en papel
Tipos Fase móvil Fase estacionaria |----- Cromatografía en papel
Líquidu |

align="center" | Papel de celulosa.

Cromatografía en capa fina Líquidu |

align="center" | Xel de xil o alúmina.

Cromatografía de gases Gas Columnes capilares de xil fundida, con recubrimientos
internos de dellos tipos de siloxanos enllazaos, columnes empaquetadas con tierres
diatomees feches de tubos de vidriu o metal.
Cromatografía líquida
en fase reversa Líquidu (polar) Rellenu de siloxano de octilo o siloxano de
octadecilo.
Cromatografía líquida
en fase normal Líquidu
(menos polar) Rellenu de xil, alúmina o un soporte al que se xunen químicamente
grupos polares (ciano, amino, etc).
Cromatografía líquida
d'intercambiu iónicu Líquidu (polar) Resines d'intercambiu iónicu.
Cromatografía líquida
d'esclusión Líquidu |

align="center" | Rellenu de pequeñes partícules de xil o polímeros con rede de

poros uniforme.
Cromatografía líquida
de adsorción Líquidu |

align="center" | Partícules finamente estremaes de xil o d'alúmina.

Cromatografía de
fluyíos supercríticos Líquidu |

align="center" | Columnes abiertes de xil fundida con recubrimientos internos de

dellos tipos de siloxanos enllazaos y d'enllaces cruzaos.
Términos emplegaos en cromatografía[3]

Analito ye la sustancia que se va a dixebrar mientres la cromatografía.

Fase móvil ye la fase que se mueve nuna direición definida. Puede ser un
líquidu (cromatografía de líquidos o CEC). un gas (cromatografía de gases) o un
fluyíu supercrítico (cromatografía de fluyíos supercríticos). L'amuesa que se ta
dixebrando/analizando (formada de analito/s y el disolvente) inyectar na fase móvil
que se mueve al traviés de la columna. Nel casu de la cromatografía líquida d'alta
resolución, HPLC, la fase móvil ye un disolvente non polar como'l hexano (fase
normal) o bien dalgún disolvente polar (cromatografía de fase reversa).
Fase estacionaria ye la sustancia que ta fixa nuna posición mientres la
cromatografía. Un exemplu ye la capa de xel de xil na cromatografía en capa fina.
Cromatografía analítica emplegar pa determinar la esistencia y posiblemente
tamién la concentración d'un analito nuna amuesa.
Fase enllazada ye una fase estacionaria que se xune de forma covalente a les
partícules de soporte o a les parés internes de la columa.
Cromatograma ye la resultancia gráfica de la cromatografía. Nel casu de
separación óptima, los distintos picos o llurdios del cromatograma corresponder a
los componentes del amiestu separao.

Cromatograma con picos non resueltos (separaos) Cromatograma con dos picos
resueltos
Na exa X representa'l tiempu de retención, y na exa Y una señal (llograda, por
casu, a partir d'un espectrofotómetro, un espectrómetru de mases o cualesquier otru
de los diversos detectores) correspondiente a la respuesta creada polos distintos
analitos esistentes na amuesa. Nel casu d'un sistema óptimo, la señal ye
proporcional a la concentración del analito específicu separáu.

Cromatógrafu ye l'equipu que dexa una separación sofisticada. Por casu, un

cromatógrafu de gases o un cromatógrafu de líquidos.
Cromatografía ye'l métodu físicu de separación nel cual los componentes que se
van a dixebrar distribuyir ente dos fases, una de les cualos ye estacionaria (fase
estacionaria) mientres la otra (la fase móvil) mover nuna direición definida.
Eluyente ye la fase móvil que traviesa la columna.
Serie eluotrópica ye una llista de disolventes clasificaos según el so poder de
dilución.
Fase inmovilizada ye una fase estacionaria que ta inmovilizada sobre partícules
de soporte, o na paré interior del tubu contenedor o columna.

Cromatograma correspondiente a una cromatografía líquida en fase reversa pa

compuestos fenólicos

Cromatografía preparativa usar pa purificar abonda cantidá de sustancia pa un

usu posterior, más que p'analís.
Tiempu de retención ye'l tiempu característicu que tarda un analito particular
en pasar al traviés del sistema (dende la columna d'entrada hasta'l detector) so
les condiciones fites. Ver tamién: Índiz de retención de Kovats
Amuesa ye la materia que va ser analizada na cromatografía. Puede consistir nun
simple componente o un amiestu de dellos. Cuando l'amiestu ye tratada nel cursu del
analís, la fase o fases que contienen los analitos d'interés ye llamada igualmente
amuesa mientres el restu de sustances que la so separación nun resulta d'interés ye
llamada residuu.
Soluto ye cada unu de los componentes de l'amuesa que va ser separáu.
Disolvente ye toa sustancia capaz de solubilizar a otra,y especialmente la fase
móvil líquida en cromatografía de líquidos.
Capacidá de carga Ye la cantidá máxima d'amuesa que puede ser dixebrada nuna
sola carga.
Capacidá de fraccionamiento Ye'l númberu máximu de componentes que pueden ser
dixebraos nuna sola operación.
Selectividá Ye la capacidá de poder discriminar y estremar ente dos componentes