Polifenoles de hojas de Cymbopogon citratus como agentes

antiinflamatorios tópicos.
Polyphenols from Cymbopogon citratus leaves as topical
anti-inflammatory agents.

OVEIMER MARTÍNEZ GONZÁLEZ

MAICOL SUÁREZ GONZÁLEZ

• ¿Qué son los polifenoles?
Los polifenoles son sustancias que se
encuentran en las plantas y determinados
alimentos como las uvas para dar olor y sabor.
La principal característica estructural de los
polifenoles es poseer uno o más grupos
hidroxilo (-OH) unidos a uno o más anillos
bencénicos.
Se ha informado que una variedad de polifenoles
vegetales tienen efectos antiinflamatorios,
frecuentemente asociados con eritema, edema,
hiperplasia, fotoenvejecimiento de la piel y
fotocarcinogénesis. Cymbopogon citratus (DC).
Stapf (Poaceae) es una planta medicinal conocida
en todo el mundo, utilizada en la medicina
tradicional en condiciones relacionadas con la
inflamación.
 Introducción.
• Eritema, edema, quemaduras solares, enzimas proinflamatorias representativas, la
hiperplasia, inmunosupresión, ciclooxigenasa-2 (COX-2) ( Kundu et al., 2008 ) y
fotoenvejecimiento cutáneo y la óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) ( Chang et
fotocarcinogénesis son algunas de las al., 2011 ), se sobreexpresan de manera aberrante en
causas de reacciones cutáneas adversas. las afecciones inflamatorias de la piel. La expresión
Todas estas condiciones patológicas anormalmente elevada de estas enzimas así como la
desencadenan a la inflamación. activación de NF-κB e IKKβ se han implicado en la
promoción de tumores de piel.

una amplia variedad de polifenoles vegetales poseen

propiedades antiinflamatorias, inmunomoduladoras y
antioxidantes y se encuentran entre el grupo más
prometedor de compuestos que pueden explotarse
como agentes quimiopreventivos, ideales para una
variedad de trastornos de la piel en general y cáncer
de piel en particular; se ha informado que
especialmente los flavonoides y taninos ejercen
efectos antiinflamatorios y anticancerígenos
pronunciados tanto in vitro como in vivo.
 Introducción.
• Cymbopogon citratus (DC). Stapf Se informa que esta planta posee actividades
(Poaceae), comúnmente conocido como antifúngicas, repelentes de mosquitos,
limoncillo, es un arbusto perenne tropical
originado en el sudeste asiático. En países insecticidas, antidiabéticos, antisépticos,
africanos y latinoamericanos, antimutagénicos y anticancerígenos, así como
antiinflamatorios

Además, recientemente divulgamos la

actividad antiinflamatoria de CcI in vivo
después de la administración oral ( García et
al., 2015 ). En los últimos años,se han identificado varios
compuestos del limoncillo como los glucósidos
Sin embargo, aún no se ha informado del de luteolina y apigenina y los taninos
efecto antiinflamatorio tópico de CcI en la condensados, respectivamente, que
piel. En el presente trabajo, hemos estudiado contribuyeron fuertemente a las propiedades
la actividad antiinflamatoria tópica in vivo de antiinflamatorias y antioxidantes de
una infusión de hojas de C. citratus y la infusión de Cymbopogon citratus (CcI)
fracciones enriquecidas con polifenoles
preparadas a partir de este extracto.
Materiales y métodos.
 Productos químicos y drogas.

• Se adquirieron etanol, metanol y ácido fórmico de Merck®

(Darmstadt, Alemania)
• Sephadex® LH-20 se adquirió de Sigma-Aldrich® (Amersham,
Suecia).
• El propilenglicol (≥99,5%) y el ácido oleico (> 99%) se
adquirieron de Fluka® (Steinheim, Suiza).
• El ácido esteárico 70 extra puro se obtuvo de Scharlau®
(Sentmenat, España) y el glicerol (> 99,5%) de José M. Vaz
Pereira (Benavente, Portugal).
• El diclofenaco sódico se adquirió de Novartis Pharmaceuticals SA
(Barcelona, ​España).
• El κ-carragenano y la trietanolamina se obtuvieron de Sigma
Chemical Co. (St. Louis, MO, EE.UU.).
• La ketamina (Ketalar®) se adquirió de Parke-Davis, Pfizer (Seixal,
Portugal).
 Material vegetal, preparación y fraccionamiento
de extractos.
Se adquirieron hojas secas de C.
citratus de ERVITAL (Mezio,
Castro Daire, Portugal).
Se seleccionaron dos fracciones: F1
(0–120 min) y F2 (120–220 min). A
continuación, F1 y F2 se sub-
fraccionaron por separado en una
columna Sephadex® LH-20 (35 × 4
cm 2) utilizando etanol como fase
móvil. proporcionando dos fracciones
principales: fracción de flavonoides,
CcF (rendimiento 7.4%) y fracción
de taninos, CcT (rendimiento 3.8%).
Se preparó una infusión libre de lípidos y aceites esenciales
(CcI). Brevemente, se añadieron 150 ml de agua hirviendo a 5 g
de hojas secas trituradas, manteniéndose caliente la mezcla y
dejándola reposar durante 15 min. Posteriormente, se obtuvieron
las fracciones enriquecidas en polifenoles.
el CcI se fraccionó mediante un aparato Flash
Chromatography® (Buchi Labortechnik AG.
5% (0-40 min), 5-10% (40-55 min), 10% (55-85 min), 10-
15% (85-90 min), 15–25% (90–110 min), 25-50% (110–
140 min), 50% (140–160 min), 50–80% (160-180 min), 80–
100% ( 180-200 min) y 100% (200-220 min)
 Perfil fenólico.
• El análisis HPLC-PDA-ESI / MS se realizó en un cromatógrafo líquido Surveyor® unido a un
detector de matriz de fotodiodos (PDA) (Surveyor®) y un espectrómetro de masas Finnigan® LCQ
(San José, CA, EE. UU.)
• Los análisis de HPLC se realizaron en un cromatógrafo GILSON equipado con un detector de
matriz de fotodiodos (PDA) (Gilson® Electronics SA, Villiers le Bel, Francia).
 Formulaciones.
• Se utilizó una emulsión de aceite / agua para transportar el extracto y las
fracciones. Los excipientes se seleccionaron previamente (datos no mostrados)
con el fin de lograr la formulación óptima para el extracto crudo, produciendo la
siguiente fórmula final: ácido esteárico (14%, p / p), trietanolamina (1,2%, p / p),
glicerol (13,5%, p / p), propilenglicol (5%, p / p), ácido oleico (10%, p / p) y agua
(cs 100%, p / p).
• Se prepararon cinco formulaciones: placebo, diclofenaco al 1% (p / p), extracto al
4% (p / p) (CcI4%), extracto al 1% (CcI1%) y fracción enriquecida con polifenoles al
1% que contiene 0,66% (p / p ) CcF + 0,34% (p / p) CcT (CcF + CcT).
• Para verificar la estabilidad química de todas las formulaciones probadas, se
controló el pH utilizando un lector de pH Five Easy FE20 (Mettler Toledo®,
Greifensee, Suiza).
 Ensayo de edema de pata inducido por
carragenina.
• Los estudios de liberación in vitro se realizaron utilizando células
de difusión de Franz estáticas (PermeGear, Inc., PA, EE. UU.)
• Se adquirieron ratas Wistar macho que pesaban 120-220 g y
ratones macho que pesaban 20-30 g en Charles River
(Barcelona, España).
• Se usó la prueba de edema de pata de rata inducida por
carragenina (Green y Green, 1971 ) para evaluar la actividad
antiinflamatoria aguda tópica de las muestras.
• Se utilizó diclofenaco sódico como fármaco de referencia. Los
animales se dividieron en cinco grupos (n = 6): el grupo de
control de carragenina recibió una formulación de control
negativo; el grupo de control positivo recibió una formulación de
diclofenaco sódico al 1%; y los grupos de prueba recibieron CcI
4%, CcI 1% y CcF + CcT, respectivamente.
Resultados y discusión.
 Perfil fenólico.
• Para caracterizar la infusión, el perfil fenólico fue obtenido por HPLC-
PDA. (Figura 1)
• Los compuestos fenólicos detectados fueron identificados por HPLC-
PDA-ESI/MS. (Tabla 2)
• Para una mejor caracterización de la infusión y de la fracción de
flavonoides, algunos compuestos marcador fueron cuantificados.
(Tabla 3)
 Medida de pH.
• Todas las formulaciones excepto la infusión al 4 % fueron estables por
un período de 15 días.
• Todas las formulaciones exhibieron valores de pH similares a los del
placebo y fueron compatibles con una aplicación tópica sobre la piel.
• Los valores de pH obtenidos son presentados en la figura 2.
 Propiedades mecánicas.

• Son una aproximación al comportamiento de la sustancia al ser

aplicada sobre una parte del cuerpo.
• Indican, aproximadamente, qué tan fácil sería aplicar el producto y
qué tanto se adhiere a la piel.
• Los resultados se muestran en la tabla 4.
 Actividad antiinflamatoria.

• Los resultados muestran una reducción significativa diversa del

volumen del edema para los controles realizados.
• Los resultados confirman la actividad antiinflamatoria de la
formulación tópica de C. Citratus.
¡¡¡Gracias!!!